柯因在制备抗类过敏药物中的应用

摘要

本发明公开了柯因在制备抗类过敏药物中的应用，通过比较KU812细胞脱颗粒、足趾肿胀程度、足趾伊文斯蓝渗出程度、足部皮肤组织切片HE染色、血清组胺释放量以评价待测药物组、生理盐水对照组及正常对照组，以评价药物对类过敏性疾病的治疗效果，确定柯因能够用于类抗过敏药物的制备。柯因能够有效减轻小鼠局部及系统性类过敏反因症状；减少肥大细胞脱颗粒，对类过敏引起的症状具有显著改善作用。

权利要求

1.柯因在制备抗类过敏药物中的应用，其特征在于，所述的药物为抑制神经肽Substance P引发的KU812细胞β氨基己糖苷酶释放的药物。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为降低类过敏反应细胞脱颗粒的药物。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为降低局部皮肤类过敏反应炎性浸润的药物。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为抑制炎症因子释放的药物。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为减轻全身性过敏的药物。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物用于抑制类过敏反应时，动物给药量为5‑15mg/kg。

说明书

柯因在制备抗类过敏药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明属于抗过敏药物制备技术领域，涉及柯因在制备抗类过敏药物中的应用。

背景技术

[0002] 柯因(5,7‑二羟黄酮)，别名白杨素，是杨树型蜂胶以及许多植物(如紫葳科植物木蝴蝶)提取物中的一个主要黄酮类物质，具有诸如抗炎症、抗肿瘤、抗过敏、抗氧化、抗衰老、
抗糖尿病发生以及免疫调节等多种生物活性，如抗氧化、抗病毒、降血糖、抗焦虑等,对多种
器官(如肝脏、肾脏、结肠)具有保护效应。广泛存在于蜂蜜和蜂胶中。

[0003] 类过敏反应不是免疫应答反应，与过敏反应的病因和发生机制截然不同。免疫学中，将抗原(或半抗原)再次进入致敏的机体与其特异性抗体相结合而激发的不良反应，称
为过敏反应。过敏反应需要重复暴露于抗原中，首次暴露时，通过引起体内淋巴细胞对抗原
产生特异性IgE而完成致敏过程；当机体再次暴露于抗原时，抗原与肥大细胞表面的IgE结
合而引起过敏反应的发生，是免疫应答反应。类过敏反应的发生，不需要提前接触抗原的致
敏过程，抗体或淋巴细胞不参与反应的发生，无需IgE等免疫球蛋白介导，首次暴露于抗原
下即可迅速发生。与肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱颗粒、激活补体系统，引起释放组胺或其他
血管活性因子等生物活性介质有关。肥大细胞上MrgprX2受体，被认为是类过敏反应发生的
重要受体，可被SP、C3a、C48/80及吗啡等多种抗生素、肌松剂等物质直接激活引发类过敏反
应。因此，MrgprX2受体可以作为类过敏反应的潜在治疗靶点。

[0004] 近年来，临床上类过敏性疾病的发生愈发常见，患者血清IgE未升高且多病情危急。而目前针对此类疾病的药物均是在过敏反应机制下游的症状控制阶段作用，肥大细胞
等释放的致敏介质仍存在于体内，具有潜在毒性。长期使用上述药物会引起多种不良反应。
当前，未见到关于柯因作为抗类过敏药物的相关应用报道。

发明内容

[0005] 为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供柯因在制备抗类过敏药物中的应用。

[0006] 为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

[0007] 本发明公开了柯因在制备抗类过敏药物中的应用。

[0008] 优选地，所述的药物为降低类过敏反应细胞脱颗粒的药物。

[0009] 优选地，所述的药物为降低局部皮肤类过敏反应炎性浸润的药物。

[0010] 优选地，所述的药物为抑制炎症因子释放的药物。

[0011] 优选地，所述的药物为减轻全身性过敏的药物。

[0012] 优选地，所述的药物用于抑制类过敏反应时，动物给药量为5‑15mg/kg。

[0013] 本发明还公开了一种抗类过敏药物，该药物为柯因与可药用载体制成的片剂、膏剂、胶囊剂、喷雾剂、颗粒剂或注射剂。

[0014] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

[0015] 本发明公开了柯因对于改善类过敏性症状有明确的治疗效果，通过比较KU812细胞脱颗粒、足趾肿胀程度、足趾伊文斯蓝渗出程度、足部皮肤组织切片HE染色、血清组胺释
放量评价待测药物组、生理盐水对照组及正常对照组，以评价药物对类过敏性疾病的治疗
效果，确定柯因能够用于类抗过敏药物的制备。柯因能够有效减轻小鼠局部及系统性类过
敏反因症状；减少肥大细胞脱颗粒，对类过敏引起的症状具有显著改善作用。

附图说明

[0016] 图1为柯因对SP引发的KU812细胞脱颗粒的抑制结果图；

[0017] 图2为柯因对SP引发的KU812细胞释放TNF‑α的抑制结果图；

[0018] 图3为柯因对SP引发的C57小鼠足趾肿胀的抑制结果图；

[0019] 图4为柯因对SP引发的C57小鼠足趾伊文思蓝渗出的抑制结果图；

[0020] 图5为柯因对SP引发的C57小鼠足部皮肤血管舒张和通透性增加的抑制HE染色结果图；

[0021] 图6为柯因对SP引发的C57小鼠血清组胺含量的抑制结果图。

具体实施方式

[0022] 为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是
本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人
员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范
围。

[0023] 需要说明的是，本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用
的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或
描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆
盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于
清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品
或设备固有的其它步骤或单元。

[0024] 下面结合附图对本发明做进一步详细描述：

[0025] 实施例1柯因抑制SP引发的KU812细胞β氨基己糖苷酶释放

[0026] 1、实验材料

[0027] SP(购于MCE公司)，KU812细胞，RPMI1640培养基(含有青霉素100U/mL，链霉素0.1mg/mL，20％FBS)，台氏液，柯因(购于成都普菲德公司)，0.1M Na2CO3，0.1M NaHCO3，β氨
基己糖苷酶，0.1M柠檬酸，0.1M柠檬酸钠。

[0028] 所用的SP(Substance P)是指由Von Euler和Gaddum于1931发现的神经肽，序列为Arg‑Pro‑Lys‑Pro‑Gln‑Gln‑Phe‑Phe‑Gly‑Leu‑Met‑NH2，分子量为1340。

[0029] 进一步，SP的纯度≥97％。

[0030] 2、实验方法

[0031] 将KU812细胞接种于96孔板中(1×105个/孔)，离心弃培养基。用无菌台氏液配制柯因溶液(浓度分别为0μM，25μM，50μM，100μM和200μM)，分别加入对应的孔板中，并设置空
白对照组。药物孵育30min。用含有30μg/mLSP的台氏液配置上述浓度柯因溶液，并加入相应
孔板内。激动30min。离心，每孔取50μL上清，分别加入干净孔中。将空白对照组孔中的上清
完全移除，每孔加入100μL 0.1％Triton，反复吹打，用于裂解细胞。离心，取50μL裂解液上
清，加入干净孔中。向所有孔中均加入50μLβ氨基己糖溶液，37℃孵育1.5小时。0.1M 
NaHCO3：0.1M Na2CO3(1：9)用于中止反应。405nm波长测吸光度。

[0032]

[0033] 3、实验结果

[0034] 结果参见图1，图1中，横坐标为浓度，纵坐标为β氨基己糖苷酶释放百分比；从图1中可以看出，相对于空白对照组，30μg/mL的SP可以显著性引起KU812细胞脱颗粒，释放β氨
基己糖苷酶，且随着浓度增大，柯因可以剂量依赖性地抑制KU812释放β氨基己糖苷酶。

[0035] 实施例2柯因抑制SP引起的小鼠足趾肿胀和渗出

[0036] 1、实验材料

[0037] SP(购于MCE公司)，KU812细胞，RPMI1640培养基(含有青霉素100U/mL，链霉素0.1mg/mL，20％FBS)，台氏液，柯因(购于成都普菲德公司)，人TNF‑αELISA试剂盒(购于北京
易翘神州公司)

[0038] 所用的SP(Substance P)是指由Von Euler和Gaddum于1931发现的神经肽，序列为Arg‑Pro‑Lys‑Pro‑Gln‑Gln‑Phe‑Phe‑Gly‑Leu‑Met‑NH2，分子量为1340。

[0039] 进一步，SP的纯度≥97％。

[0040] 2、实验方法

[0041] 将KU812细胞接种于96孔板中(1×105个/孔)，离心弃培养基。用无菌台氏液配制柯因溶液(浓度分别为0μM，25μM，50μM，100μM和200μM)，分别加入对应的孔板中，并设置空
白对照组。药物孵育30min。用含有30μg/mLSP的台氏液配置上述浓度柯因溶液，并加入相应
孔板内。激动30min。离心，取上清。

[0042] 按照试剂盒说明书实施对各组上清液中TNF‑α含量的检测。

[0043] 3、实验结果

[0044] 结果参见图2，图2中，横坐标为浓度，纵坐标为TNF‑α释放量；从图2中可以看出，相对于空白对照组，30μg/mL的SP可以显著性引起KU812细胞激活，释放TNF‑α，且随着浓度增
大，柯因可以剂量依赖性地抑制KU812释放TNF‑α。

[0045] 实施例3柯因抑制SP引起的小鼠足趾肿胀、渗出及足趾HE染色

[0046] 1、实验材料

[0047] SP(购于MCE公司)，6‑8周龄雄性C57小鼠(购于西安交通大学实验动物中心)，柯因(购于成都普菲德)，0.4％伊文思蓝溶液，3.5％水合氯醛溶液，PBS溶液，生理盐水，丙酮。

[0048] 2、实验方法

[0049] 将小鼠分为空白对照组、阳性对照组和各浓度的柯因给药组。用生理盐水配制不同浓度的柯因溶液(分别为3.7mg/kg，7.5mg/kg，15mg/kg)腹腔注射。30min后，3.5％的水合
氯醛溶液麻醉小鼠，尾静脉注射0.4％伊文思蓝溶液。测量各组小鼠左右脚掌的厚度，随后
用微量注射器在左脚掌皮下5μL浓度为30μg/mL的SP溶液，右脚掌皮下等体积的PBS溶液。15
分钟后，处死小鼠。再次测量各组小鼠脚掌厚度。剪下小鼠足部，烘干，称量重量。破碎足趾，
用丙酮：生理盐水(7：3)溶解足趾中的伊文思蓝，并在620nm处测量吸光度，计算单位体积吸
光度。

[0050] 另取小鼠，分为空白对照组、阳性对照组和各浓度的柯因给药组。30min后，3.5％的水合氯醛溶液麻醉小鼠。随后用微量注射器在左脚掌皮下5μL浓度为30μg/mL的SP溶液。
15分钟后，处死小鼠。取各组小鼠左脚掌处皮肤组织，切片，并进行HE染色，显微镜下观察。

[0051] 3、实验结果

[0052] 结果参见图3、4、5。图3、4中，横坐标为浓度，纵坐标为组织肿胀百分比或伊文思蓝渗出程度；相对于空白对照组，30μg/mL的SP可以显著性引起C57小鼠足趾肿胀及伊文思蓝
渗出，随着浓度增大，柯因可以剂量依赖性地抑制C57小鼠足趾局部类过敏性反应。

[0053] 图5可见，相对于空白对照组，30μg/mL的SP可以引起C57小鼠足部皮肤血管舒张及通透性增加；柯因可以抑制C57小鼠足部皮肤血管的舒张和通透性增加。

[0054] 实施例4柯因抑制SP引起的小鼠血清组胺含量升高

[0055] 1、实验材料

[0056] SP(购于MCE公司)，6‑8周龄雄性C57小鼠(购于西安交通大学实验动物中心)，柯因(购于成都普菲德)，PBS溶液。

[0057] 2、实验方法

[0058] 将小鼠分为空白对照组、阳性对照组和各浓度的柯因给药组。用生理盐水配制不同浓度的柯因溶液(分别为3.7mg/kg，7.5mg/kg，15mg/kg)腹腔注射。30min后，尾静脉注射
30μg/mLSP溶液，空白对照组注射等体积生理盐水。1h后，取血，10000g 10min离心，取血清。

[0059] 质谱内标法测定血清内组胺含量。

[0060] 3、实验结果

[0061] 结果参见图6，图6中，横坐标为浓度，纵坐标为血清组胺释放量，相对于空白对照组，30μg/mL的SP可以显著性引起C57小鼠血清组胺释放，柯因可以剂量依赖性地抑制C57小
鼠血清组胺释放。

[0062] 以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书
的保护范围之内。