去除抗原性的I型胶原蛋白及其制备方法和应用和椰子糖及其制备方法

摘要

本发明属于功能性休闲食品领域，具体涉及一种去除抗原性的I型胶原蛋白及其制备方法和应用和椰子糖及其制备方法。去除I型胶原蛋白抗原性的方法包括：将I型胶原蛋白溶液进行动态高压微射流进行处理，得到处理后的I型胶原蛋白溶液；将处理后的I型胶原蛋白溶液与葡萄糖混合均匀，得到混合液；将混合液进行冷冻干燥，并在50‑100℃以及60‑85％的相对湿度下进行反应，以去除I型胶原蛋白抗原性。采用本发明的方法能够较好的去除I型胶原蛋白的抗原性，由此制备的胶原蛋白椰子糖能有更广泛的消费者。

权利要求

1.一种去除I型胶原蛋白抗原性的方法，其特征在于，该方法包括：（1）将I型胶原蛋白溶液进行动态高压微射流进行处理，得到处理后的I型胶原蛋白溶液；其中，所述动态高压微射流进行处理的压力为110-130MPa；

（2）将所述处理后的I型胶原蛋白溶液与葡萄糖混合均匀，得到混合液，其中，相对于

100重量份以干基计的I型胶原蛋白，葡萄糖的用量为90-110重量份；

（3）将所述混合液进行冷冻干燥，并在60-80℃以及70-80%的相对湿度下进行反应，以去除I型胶原蛋白抗原性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（1）中，所述I型胶原蛋白溶液中I型胶原蛋白的浓度为40-60重量%。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述I型胶原蛋白为来自淡水鱼的I型胶原蛋白。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述来自淡水鱼的I型胶原蛋白的制备方法包括：（i）将淡水鱼鱼皮依次进行碱浸渍、有机溶剂浸渍和酸浸渍，并将酸浸渍后的物料进行固液分离，得到液相；

（ii）将步骤（i）所得液相进行盐析，并将得到的盐析产物进行固液分离，得到固相；

（iii）将所述固相溶于酸中，然后依次在酸溶液和水中进行透析，得到所述来自淡水鱼的I型胶原蛋白。

5.权利要求1-4中任意一项所述的方法制备的去除抗原性的I型胶原蛋白。

6.权利要求5所述的去除抗原性的I型胶原蛋白在制备食品、化妆品或生物医学材料中的应用。

7.一种椰子糖，其特征在于，该椰子糖的制备原料包括权利要求5所述的去除抗原性的I型胶原蛋白、椰浆、麦芽糖、椰糖和水；

相对于100重量份的去除抗原性的I型胶原蛋白，椰浆的量为150-400重量份，麦芽糖的量为30-70重量份，椰糖的量为30-70重量份，水的量为30-70重量份。

8.一种椰子糖的制备方法，其特征在于，该方法包括：

（1）将椰浆、麦芽糖、椰糖和水混合均匀，并将混合体系升温至120-150℃；

（2）将步骤（1）的体系冷却至50-70℃，加入权利要求5所述的去除抗原性的I型胶原蛋白，冷却得到所述椰子糖；

其中，相对于100重量份的去除抗原性的I型胶原蛋白，椰浆的用量为150-400重量份，麦芽糖的用量为30-70重量份，椰糖的用量为30-70重量份，水的用量为30-70重量份。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，步骤（1）中，将所述混合体系升温至110-150℃的方法包括：先将混合体系在8-12℃/s的升温速率下升温至90-110℃，然后再在3-5℃/s的升温速率下升温至120-150℃。

说明书

去除抗原性的I型胶原蛋白及其制备方法和应用和椰子糖及

其制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于功能性休闲食品领域，具体涉及一种去除I型胶原蛋白抗原性的方法，由该方法制备的去除抗原性的I型胶原蛋白，所述去除抗原性的I型胶原蛋白在制备食品、化妆品或生物医学材料中的应用，以及一种椰子糖及其制备方法。

背景技术

[0002] 鱼类胶原蛋白是一种优质胶原蛋白的来源，但鱼类胶原蛋白中的免疫球蛋白E会引发呕吐、腹泻等过敏现象；I型胶原蛋白以被证实具有较强的过敏原性，有50％左右对鱼过敏的患者对I型胶原蛋白过敏。I型胶原蛋白由2条α1亚基和1条α2亚基组成，呈三股螺旋结构，分子质量约为300kDa；I型胶原蛋白具有良好的生物相容性、易于生物降解、无毒性、结构稳定，已经广泛应用于食品、化妆品、生物医学材料等领域。对I型胶原蛋白进行去抗原性改性，能增强I型胶原蛋白各个领域的应用。

[0003] 随着生活水平的提高，人们对美容保健品的需求性随之提高，特别各种富含胶原蛋白类的保健品，受到年轻爱美人士的青睐。现阶段在市场上常见的胶原蛋白保健品有口服液，咀嚼片和胶囊，富含胶原蛋白的休闲食品并不常见。添加到美容食品中的胶原蛋白通常为I型胶原蛋白，因为I型胶原蛋白价格较低，但I型胶原蛋白的缺点具有较强的抗原性，不能被广泛的消费者接受。因此，对I型胶原蛋白进行去抗原性处理，能增强胶原蛋白的食用安全性，降低敏感人群的食用风险，是提升胶原蛋白类保健食品品质的重要途径。

[0004] 目前，对胶原蛋白类保健品的研究多集中在产品配制方法上，而对产品进行去抗原性处理的研究还未见报道。

发明内容

[0005] 本发明的目的是为了克服现有技术中尚无针对I型胶原蛋白去除抗原性的方法，提供一种去除I型胶原蛋白抗原性的方法，由该方法制备的去除抗原性的I型胶原蛋白，所述去除抗原性的I型胶原蛋白在制备食品、化妆品或生物医学材料中的应用，以及一种椰子糖及其制备方法。采用本发明的方法能够较好的去除I型胶原蛋白的抗原性，由此制备的胶原蛋白椰子糖能有更广泛的消费者。

[0006] 本发明的发明人在研究中发现，将I型胶原蛋白先进行动态高压微射流处理，然后再在特定的温度和湿度下利用葡萄糖对其进行改性，采用该同时进行物理改性和化学改性的方法，能够有效去除I型胶原蛋白的抗原性，并且方法简单。其中，物理改性是指通过动态高压微射流的方式对胶原蛋白进行处理，高压使胶原蛋白在高速通过狭缝的过程中受到剧烈旋转、高速剪切、高频振荡等综合作用，引起致敏性免疫球蛋白的构象变化，从而降低致敏性免疫球蛋白的抗原性；化学改性是指通过葡萄糖对结构改变的I型胶原蛋白进行糖基化处理，外接的糖分子通过阻碍蛋白的线性表位对蛋白构象进行修饰，从而达到降低蛋白抗原性的目的。

[0007] 为了实现上述目的，本发明一方面提供一种去除I型胶原蛋白抗原性的方法，该方法包括：

[0008] (1)将I型胶原蛋白溶液进行动态高压微射流进行处理，得到处理后的I型胶原蛋白溶液；

[0009] (2)将所述处理后的I型胶原蛋白溶液与葡萄糖混合均匀，得到混合液；

[0010] (3)将所述混合液进行冷冻干燥，并在50-100℃以及60-85％的相对湿度下进行反应，以去除I型胶原蛋白抗原性。

[0011] 本发明第二方面提供了如上所述的方法制备的去除抗原性的I型胶原蛋白。

[0012] 本发明第三方面提供了如上所述的去除抗原性的I型胶原蛋白在制备食品、化妆品或生物医学材料中的应用。

[0013] 本发明第四方面提供了一种椰子糖，该椰子糖的制备原料包括如上所述的去除抗原性的I型胶原蛋白、椰浆、麦芽糖、椰糖和水；

[0014] 相对于100重量份的去除抗原性的I型胶原蛋白，椰浆的量为150-400重量份，麦芽糖的量为30-70重量份，椰糖的量为30-70重量份，水的量为30-70重量份。

[0015] 本发明第五方面提供了一种椰子糖的制备方法，该方法包括：

[0016] (1)将椰浆、麦芽糖、麦芽糖和水混合均匀，并将混合体系升温至120-150℃；

[0017] (2)将步骤(1)的体系冷却至50-70℃，加入权利要求6所述的去除抗原性的I型胶原蛋白，冷却得到所述椰子糖；

[0018] 其中，相对于100重量份的去除抗原性的I型胶原蛋白，椰浆的用量为150-400重量份，麦芽糖的用量为30-70重量份，椰糖的用量为30-70重量份，水的用量为30-70重量份。

[0019] 本发明通过将I型胶原蛋白先进行动态高压微射流处理，然后再在特定的温度和湿度下利用葡萄糖对其进行糖基化改性，不但能够有效去除I型胶原蛋白的抗原性，并且该方法简单，省去了传统的酶处理步骤，节约了成本。

[0020] 采用本发明去除抗原性的I型胶原蛋白制备各种食品、化妆品或生物医学材料等产品，能够有效降低其导致的过敏现象，从而有更广泛的消费者。

[0021] 本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

[0022] 附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。

[0023] 图1为实施例1和对比例处理的I型胶原蛋白的抗原性去除效果。

具体实施方式

[0024] 在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

[0025] 第一方面，本发明提供一种去除I型胶原蛋白抗原性的方法，该方法包括：

[0026] (1)将I型胶原蛋白溶液进行动态高压微射流进行处理，得到处理后的I型胶原蛋白溶液；

[0027] (2)将所述处理后的I型胶原蛋白溶液与葡萄糖混合均匀，得到混合液；

[0028] (3)将所述混合液进行冷冻干燥，并在50-100℃以及60-85％的相对湿度下进行反应，以去除I型胶原蛋白抗原性。

[0029] 本发明需要说明的是，所述去除I型胶原蛋白抗原性并非意在完全去除其抗原性，只要相比于原始的I型胶原蛋白，其抗原性降低即为视为去除，在本发明中，对所述I型胶原蛋白的去除率优选至少为80％，例如，可以为80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％。

[0030] 根据本发明，步骤(1)中，所述动态高压微射流进行处理的条件可以在较宽的范围内进行改变，例如，可以按照其常规的操作条件进行，只要该操作条件能够使I型胶原蛋白的结构发生改变即可，但优选的，为了提高抗原性的去除效果，所述动态高压微射流进行处理的压力为100-150MPa，优选为110-130MPa(例如，可以为110MPa、112MPa、114MPa、115MPa、116MPa、117MPa、118MPa、119MPa、120MPa、121MPa、122MPa、123MPa、124MPa、125MPa、126MPa、
128MPa、130MPa)，可以循环2-4次。

[0031] 根据本发明，步骤(1)中，所述I型胶原蛋白溶液中I型胶原蛋白的浓度可以在较宽的范围内进行改变，为了进一步提高抗原性的去除效果，优选的，所述I型胶原蛋白溶液中I型胶原蛋白的浓度为40-60重量％，例如，可以为40重量％、42重量％、44重量％、46重量％、48重量％、50重量％、52重量％、54重量％、56重量％、58重量％、60重量％。

[0032] 根据本发明，步骤(2)中，所述葡萄糖的用量可以在较宽的范围内进行改变，只要其能够对步骤(1)得到的处理后的I型胶原蛋白进行充分糖基化即可，优选的，为了提高抗原性的去除效果，相对于100重量份以干基计的I型胶原蛋白，葡萄糖的用量为80-120重量份，优选为90-110重量份，例如，可以为90重量份、92重量份、94重量份、96重量份、98重量份、100重量份、102重量份、104重量份、106重量份、108重量份、110重量份。

[0033] 根据本发明，优选的，将所述混合液进行冷冻干燥，并在60-80℃(例如，可以为60℃、62℃、64℃、66℃、68℃、70℃、72℃、74℃、76℃、78℃、80℃)以及70-80％(例如，可以为70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％)的相对湿度下进行反应。

[0034] 根据本发明，步骤(3)中，所述反应的时间可以在较宽的范围内进行改变，优选为4-8小时，更优选为5-7小时。

[0035] 根据本发明，所述I胶原蛋白可以为市售的各种I型胶原蛋白，也可以为自行制备的I型胶原蛋白。根据本发明一种优选的实施方式，所述I型胶原蛋白为来自淡水鱼的I型胶原蛋白。

[0036] 根据本发明一种优选的实施方式，所述来自淡水鱼的I型胶原蛋白的制备方法包括：

[0037] (i)将淡水鱼鱼皮依次进行碱浸渍、有机溶剂浸渍和酸浸渍，并将酸浸渍后的物料进行固液分离，得到液相；

[0038] (ii)将步骤(i)所得液相进行盐析，并将得到的盐析产物进行固液分离，得到固相；

[0039] (iii)将所述固相溶于酸中，然后依次在酸溶液和水中进行透析，得到所述来自淡水鱼的I型胶原蛋白。

[0040] 结合上述优选的I型胶原蛋白的制备方法，能够进一步提高I型胶原蛋白中抗原性的去除效果。

[0041] 根据本发明，步骤(i)中，所述淡水鱼鱼皮可以为各种淡水鱼鱼皮，其可以从鱼市获得。获得所述淡水鱼鱼皮后，优选先将其进行除杂以去除其中的非鱼皮物质，例如，骨刺等，然后进行清洗。

[0042] 根据本发明，在进行碱浸渍前，还包括将所述淡水鱼鱼皮进行剪切，例如，将其剪切成0.3-0.8cm*0.3-0.8cm的碎鱼皮，以提高浸渍效率。

[0043] 根据本发明，所述碱可以为常规使用的碱。根据本发明一种优选的实施方式，所述碱为氢氧化钠溶液，其浓度可以为0.5-1.5mol/L，优选0.8-1.2mol/L。

[0044] 根据本发明，用于碱浸渍的碱液的用量可以在较宽的范围内进行改变，优选的，相对于1体积份的鱼皮，所述碱液的用量为15-25体积份。

[0045] 根据本发明，所述碱浸渍可以在常温下进行，浸渍时间可以为30-40小时，在浸渍的过程中，优选每隔4-8小时换液一次。

[0046] 通过所述碱浸渍后，能够去除鱼皮中的大部分蛋白质和色素。

[0047] 根据本发明，在进行有机溶剂浸渍前，优选对碱浸渍后的鱼皮进行水洗，直至洗出液为中性为止。

[0048] 根据本发明，在有机溶剂浸渍中，所述有机溶剂的种类可以在较宽的范围内进行选择，只要其能够对鱼皮中的脂肪有效去除即可，优选的，所述有机溶剂为醇，更优选为C2-C6的醇，进一步优选为C3-C5的醇，更进一步优选为丁醇，最优选为正丁醇。所述醇的浓度可以为5-15体积％，优选8-12体积％。

[0049] 根据本发明，所述有机溶剂的用量可以在较宽的范围内进行改变，优选的，相对于1体积份的鱼皮，所述有机溶剂的用量为15-25体积份。

[0050] 根据本发明，所述有机溶剂浸渍可以在常温下进行，浸渍时间可以为20-30小时，在浸渍的过程中，优选每隔4-8小时换液一次。

[0051] 根据本发明，在进行酸浸渍前，优选对有机溶剂浸渍后的鱼皮进行水洗，直至洗出液为不含有机溶剂为止。

[0052] 根据本发明，所述酸可以为常规使用的酸。根据本发明一种优选的实施方式，所述酸为醋酸溶液，其浓度可以为0.1-1mol/L，优选0.4-0.6mol/L。

[0053] 根据本发明，用于酸浸渍的酸液的用量可以在较宽的范围内进行改变，优选的，相对于1体积份的鱼皮，所述酸液的用量为25-35体积份。

[0054] 根据本发明，所述酸浸渍可以在常温下进行，浸渍时间可以为60-100小时，在浸渍的过程中，优选不断搅拌。

[0055] 根据本发明，所述酸浸渍后，优选对浸渍后的物料进行固液分离，例如，在6000-1000rpm下离心10-20min，获得液相。

[0056] 步骤(ii)中，用于对步骤(i)所得液相进行盐析所用的盐可以为常规的能够使蛋白进行沉淀的盐，本发明中，为了得到更加纯的I型胶原蛋白，所述盐优选为氯化钠。其中，加入的盐的量优选使得所述液相中盐的浓度为0.7-0.9mol/L，更优选为0.75-0.85mol/L。

[0057] 根据本发明，将所述盐析产物进行固液分离的方法可以为常规的方法，例如，过滤、离心等。根据本发明一种优选的实施方式，所述固液分离的方式为离心，例如，在6000-10000rpm下离心10-20min。

[0058] 根据本发明，步骤(iii)中，对所述固相进行复溶的酸可以为常规的用酸，本发明优选醋酸，更优选为0.4-0.6mol/L的醋酸溶液。

[0059] 根据本发明，用于透析的所述酸溶液优选为醋酸，更优选为0.8-1.2mol/L的醋酸溶液，在所述醋酸中透析的时间可以为24-36h。

[0060] 根据本发明，优选的，在水中进行透析的时间为36-48h。

[0061] 根据本发明，优选的，所述来自淡水鱼的I型胶原蛋白的制备方法还包括将透析后的物料进行冻干。所述冻干可以采用冷冻干燥的常规工艺。

[0062] 根据本发明，制备的所述来自淡水鱼的I型胶原蛋白可以保存于-80℃冰箱备用，待使用时取出。

[0063] 第二方面，本发明提供了如上所述的方法制备的去除抗原性的I型胶原蛋白。

[0064] 第三方面，本发明提供了如上所述的去除抗原性的I型胶原蛋白在制备食品、化妆品或生物医学材料中的应用。

[0065] 其中，所述食品、化妆品和生物医学材料可以为任意的会使用到I型胶原蛋白的食品、化妆品和生物医学材料。

[0066] 第四方面，本发明提供了一种椰子糖，该椰子糖的制备原料包括如上所述的去除抗原性的I型胶原蛋白、椰浆、麦芽糖、椰糖和水；

[0067] 相对于100重量份的去除抗原性的I型胶原蛋白，椰浆的量为150-400重量份，麦芽糖的量为30-70重量份，椰糖的量为30-70重量份，水的量为30-70重量份。

[0068] 优选的，相对于100重量份的去除抗原性的I型胶原蛋白，椰浆的量为200-300重量份，麦芽糖的量为40-60重量份，椰糖的量为40-60重量份，水的量为40-60重量份。

[0069] 术语“椰浆”是椰子白肉进行研磨、压榨后得到的一种白色液体，是极好的清凉解渴的饮料。

[0070] 术语“椰糖”是将棕榈科树木上都提取出汁液过滤后熬尽水分所得到的糖，是一种天然的棕榈树糖，是原糖。大家习惯叫它"椰糖"，也叫"棕榈糖"，官方应叫做"棕榈树糖"。

[0071] 根据本发明，能够理解的是，由于所述去除抗原性的I型胶原蛋白的制备过程中还使用的葡萄糖，因此，实际上可以理解，所述椰子糖中还含有葡萄糖。

[0072] 第五方面，本发明提供了一种椰子糖的制备方法，该方法包括：

[0073] (1)将椰浆、麦芽糖、麦芽糖和水混合均匀，并将混合体系升温至120-150℃；

[0074] (2)将步骤(1)的体系冷却至50-70℃，加入如上所述的去除抗原性的I型胶原蛋白，冷却得到所述椰子糖；

[0075] 其中，相对于100重量份的去除抗原性的I型胶原蛋白，椰浆的用量为150-400重量份，麦芽糖的用量为30-70重量份，椰糖的用量为30-70重量份，水的用量为30-70重量份。

[0076] 优选的，相对于100重量份的去除抗原性的I型胶原蛋白，椰浆的用量为200-300重量份，麦芽糖的用量为40-60重量份，椰糖的用量为40-60重量份，水的用量为40-60重量份。

[0077] 根据本发明，为了进一步改善所制备的椰子糖的口感和风味，优选的，将所述混合体系升温至120-150℃的方法包括：先将混合体系在8-12℃/s优选9-11℃/s(例如，可以为9℃/s、9.2℃/s、9.4℃/s、9.6℃/s、9.8℃/s、10℃/s、10.2℃/s、10.4℃/s、10.6℃/s、10.8℃/s、11℃/s)的升温速率下升温至90-110℃，然后再在3-5℃/s优选3.5-4.5℃/s(例如，可以为3.5℃/s、3.6℃/s、3.7℃/s、3.8℃/s、3.9℃/s、4℃/s、4.1℃/s、4.2℃/s、4.3℃/s、4.4℃/s、4.5℃/s)的升温速率下升温至120-150℃。

[0078] 根据本发明，将步骤(1)的体系冷却至50-70℃的方法优选为自然冷却。

[0079] 根据本发明，所述椰子糖的制备方法还包括，将加入所述去除抗原性的I型胶原蛋白后，将所得混合物料快速倒入模具中，冷却脱模，得到去抗原性的胶原蛋白椰子糖。

[0080] 以下将通过实施例对本发明进行详细描述。

[0081] 制备例

[0082] 本制备例用于说明I型胶原蛋白的制备方法

[0083] (1)将淡水鱼鱼皮去杂并清洗后剪成0.5cm*0.5cm的碎鱼皮，加入20倍体积的0.1mol/L NaOH溶液，搅拌，浸提36h，每6h换液1次，去除杂蛋白和色素；

[0084] (2)用蒸馏水反复清洗碱浸渍后的鱼皮，直至洗出液为中性；

[0085] (3)沥干后加入20倍体积的10体积％的正丁醇，搅拌，浸提24h，每6h换液一次，去除鱼皮中的脂肪；

[0086] (4)用蒸馏水反复清洗鱼皮，沥干后加入30倍体积的0.5mol/L的醋酸溶液，搅拌，浸提72h后，8000rmp离心15min，取上清液；

[0087] (5)加入预先研磨好的NaCl粉末进行盐析，搅拌，直至最终盐浓度为0.8mol/L，盐析接受后于8000rmp离心15min，取沉淀。

[0088] (6)沉淀复溶于0.5mol/L醋酸，然后依次在外液为0.1mol/L醋酸溶液中透析36小时和蒸馏水中透析48小时，冻干得到淡水鱼I型胶原蛋白，保存于-80℃冰箱备用。

[0089] 实施例1-1

[0090] 本实施例用于说明I型胶原蛋白抗原性的去除方法

[0091] (1)将100重量份的制备例制备的I型胶原蛋白，与100重量份去离子水进行混合，磁力搅拌至充分溶解；

[0092] (2)将步骤(1)的溶液用动态高压微射流进行处理，在120MPa压力下，循环3次；

[0093] (3)在步骤(2)的溶液中加入100重量份葡萄糖，磁力搅拌至充分溶解；

[0094] (4)将步骤(3)的溶液冷冻干燥后，于70℃75％相对湿度下反应6h，得到去除抗原性的I型胶原蛋白。

[0095] 实施例1-2

[0096] 本实施例用于说明I型胶原蛋白抗原性的去除方法

[0097] (1)将100重量份的制备例制备的I型胶原蛋白，与67重量份去离子水进行混合，磁力搅拌至充分溶解；

[0098] (2)将步骤(1)的溶液用动态高压微射流进行处理，在110MPa压力下，循环3次；

[0099] (3)在步骤(2)的溶液中加入90重量份葡萄糖，磁力搅拌至充分溶解；

[0100] (4)将步骤(3)的溶液冷冻干燥后，于65℃70％相对湿度下反应7h，得到去除抗原性的I型胶原蛋白。

[0101] 实施例1-3

[0102] 本实施例用于说明I型胶原蛋白抗原性的去除方法

[0103] (1)将100重量份的制备例制备的I型胶原蛋白，与150重量份去离子水进行混合，磁力搅拌至充分溶解；

[0104] (2)将步骤(1)的溶液用动态高压微射流进行处理，在130MPa压力下，循环3次；

[0105] (3)在步骤(2)的溶液中加入110重量份葡萄糖，磁力搅拌至充分溶解；

[0106] (4)将步骤(3)的溶液冷冻干燥后，于80℃80％相对湿度下反应5h，得到去除抗原性的I型胶原蛋白。

[0107] 实施例1-4

[0108] 本实施例用于说明I型胶原蛋白抗原性的去除方法

[0109] (1)将100重量份的制备例制备的I型胶原蛋白，与100重量份去离子水进行混合，磁力搅拌至充分溶解；

[0110] (2)将步骤(1)的溶液用动态高压微射流进行处理，在100MPa压力下，循环3次；

[0111] (3)在步骤(2)的溶液中加入80重量份葡萄糖，磁力搅拌至充分溶解；

[0112] (4)将步骤(3)的溶液冷冻干燥后，于55℃60％相对湿度下反应6h，得到去除抗原性的I型胶原蛋白。

[0113] 实施例1-5

[0114] 本实施例用于说明I型胶原蛋白抗原性的去除方法

[0115] (1)将100重量份的制备例制备的I型胶原蛋白，与100重量份去离子水进行混合，磁力搅拌至充分溶解；

[0116] (2)将步骤(1)的溶液用动态高压微射流进行处理，在150MPa压力下，循环3次；

[0117] (3)在步骤(2)的溶液中加入120重量份葡萄糖，磁力搅拌至充分溶解；

[0118] (4)将步骤(3)的溶液冷冻干燥后，于90℃85％相对湿度下反应6h，得到去除抗原性的I型胶原蛋白。

[0119] 实施例1-6

[0120] 本实施例用于说明I型胶原蛋白抗原性的去除方法

[0121] 按照实施例1-1的方法进行I型胶原蛋白抗原性的去除，不同的是，所述I型胶原蛋白为购自武汉华翔科洁生物技术有限公司，货号为鱼胶原蛋白I型9007-34-5。

[0122] 对比例1-1

[0123] 本制备例用于说明参比的I型胶原蛋白抗原性的去除方法

[0124] 按照实施例1-1的方法进行I型胶原蛋白抗原性的去除，不同的是，不包括步骤(3)，也即，直接将步骤(2)所得物料冻干后于70℃、75％相对湿度下反应6h，得到处理的I型胶原蛋白。

[0125] 对比例1-2

[0126] 本制备例用于说明参比的I型胶原蛋白抗原性的去除方法

[0127] 按照实施例1-1的方法进行I型胶原蛋白抗原性的去除，不同的是，不包括步骤(3)，而是直接向步骤(2)所得物料中加入葡萄糖，将物料冻干后于70℃、75％相对湿度下反应6h，得到处理的I型胶原蛋白。

[0128] 对比例1-3

[0129] 本制备例用于说明参比的I型胶原蛋白抗原性的去除方法

[0130] 按照实施例1-1的方法进行I型胶原蛋白抗原性的去除，不同的是，不包括步骤(2)和(3)，而是直接向步骤(1)的I型胶原蛋白溶液中加入葡萄糖，将物料冻干后于70℃、75％相对湿度下反应6h，得到处理的I型胶原蛋白。

[0131] 对比例1-4

[0132] 本制备例用于说明参比的I型胶原蛋白抗原性的去除方法

[0133] 按照实施例1-1的方法进行I型胶原蛋白抗原性的去除，不同的是，不将步骤(3)溶液冻干，而是直接将步骤(3)的溶液于70℃75％相对湿度下反应6h，得到处理的I型胶原蛋白。

[0134] 对比例1-5

[0135] 本制备例用于说明参比的I型胶原蛋白抗原性的去除方法

[0136] 按照实施例1-1的方法进行I型胶原蛋白抗原性的去除，不同的是，将葡萄糖替换为低聚半乳糖。

[0137] 测试例1

[0138] 本测试例用于测试制得的I型胶原蛋白的抗原性

[0139] 采用酶联免疫吸附测定法对实施例和对比例制备的I型胶原蛋白进行抗原性分析。用包被缓冲液将实施例和对比例制备的I型胶原蛋白稀释至5μg/ml，酶标℃板每孔加入100μl，4℃包被过夜。去除包被液后每孔加入200μl PBST(PBS+吐温20)，清洗5次，每次
1min，去除洗涤液后拍干。每孔加入200μl封闭液(PBS+3％BSA)，37℃下封闭2h。去除封闭液，用洗涤液清洗5次，拍干。每孔加入100μl Anti-Collagen I抗体(稀释倍数4000)，37℃下孵育1.5h。去除酶标板中的液体，用PBST清洗5次，拍干。每孔加入100μl HRP标羊抗兔IgG抗体(稀释倍数6000)，37℃下孵育1.5h。去除酶标板中的液体，用PBST清洗5次，拍干。每孔加入100μl TMB显色液，37℃下避光孵育20min。每孔加入50μl 2mol/L H2SO4终止反应，测定每孔在450nm波长处的OD值，以OD450nm表示各组I型胶原蛋白的抗原性，同时以未经任何处理的(制备的I型胶原蛋白或购自武汉华翔科洁生物技术有限公司，货号为鱼胶原蛋白I型
9007-34-5)的I型胶原蛋白为对照，计算抗原性去除率＝(对照样本-测试样本)/对照样本，结果如表1所示，其中，实施例1和对比例的OD值结果如图1所示。

[0140] 表1

[0141]  OD值 去除率(％)
实施例1-1 0.08 90.59％
实施例1-2 0.05 94.11％
实施例1-3 0.07 91.76％
实施例1-4 0.1 88.23％
实施例1-5 0.12 85.88％
实施例1-6 0.15 82.35％
对比例1-1 0.2 76.47％
对比例1-2 0.25 70.59％
对比例1-3 0.35 58.82％
对比例1-4 0.3 64.71％

[0142] 由表1可以看出，采用本发明的方法在简化操作的同时能够有效的去除抗原性，在优选的配比下，去除效果更佳。

[0143] 实施例2-1

[0144] 本实施例用于说明本发明提供的椰子糖及其制备方法

[0145] (1)将250重量份的椰浆(佳乐，印尼)、50重量份的麦芽糖、50重量份的椰糖(更家椰糖，泰国)和50重量份的水混合均匀，以10℃/s的升温速率加热并不停搅拌，当加热到100℃时，改用4℃/s的升温速率继续加热到130℃，停止加热。

[0146] (2)待步骤(1)的糖浆自然冷却到60℃，将步骤(4)的粉末快速混合均匀；

[0147] (3)将步骤(2)的糖液快速倒入模具中，冷却脱模，得到去抗原性的胶原蛋白椰子糖。

[0148] 实施例2-2

[0149] 本实施例用于说明本发明提供的椰子糖及其制备方法

[0150] 按照实施例2-1的方法进行椰子糖的制备，不同的是，以8℃/s的升温速率加热并不停搅拌，当加热到100℃时，改用5℃/s的升温速率继续加热到130℃，停止加热。

[0151] 实施例2-3

[0152] 本实施例用于说明本发明提供的椰子糖及其制备方法

[0153] 按照实施例2-1的方法进行椰子糖的制备，不同的是，以12℃/s的升温速率加热并不停搅拌，当加热到100℃时，改用3℃/s的升温速率继续加热到130℃，停止加热。

[0154] 实施例2-4

[0155] 本实施例用于说明本发明提供的椰子糖及其制备方法

[0156] 按照实施例2-1的方法进行椰子糖的制备，不同的是，以12℃/s的升温速率加热并不停搅拌，当加热到100℃时，改用5℃/s的升温速率继续加热到130℃，停止加热。

[0157] 测试例2

[0158] 用安东帕流变仪(MCR102,Anton Paar,Graz,Austria)对椰子糖的粘度进行测量，结果如表2所示。选择直径为60mm的不锈钢锥平板(角度:1°，间隙0.1667mm))对乳液进行测量，设置剪切速率的范围为0.1-100,1/s,应变为1％，测量温度为25℃。

[0159] 表2

[0160]  粘度(mPa·s)
实施例2-1 364
实施例2-2 463
实施例2-3 481
实施例2-4 553

[0161] 由此可见，采用本发明的方法制备的椰子糖性能更佳。

[0162] 以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。