活性氧清除剂衍生物的制备及用途转让专利
申请号 : CN201780096041.7
文献号 : CN111278807A
文献日 : 2020-06-12
发明人 : 向家宁 , 戚祖德 , 宁德争 , 刘宪波
申请人 : 凯瑞康宁生物工程(武汉)有限公司
摘要 :
式(I)a或(I)b的化合物：包括某些醌衍生物，以及相应的药物组合物，其可以用于调节受试者的铁死亡。本文还公开了这些化合物和药物组合物的制备以及它们在制造药物中的潜在用途，所述药物用于减少细胞中的活性氧(ROS)以及用于预防、治疗、改善某些相关的病症或疾病。
权利要求 :
1.一种式(I)a或(I)b的化合物，其药学上可接受的盐，及其各个对映异构体或非对映异构体：其中z为0或1；
L不存在，或者选自由以下各项组成的组：C1-C10烷基，C1-C10烷氧基，环烷基，C1-C10烷基环烷基，杂环烷基，C1-C10烷基杂环烷基，芳基，C1-C10烷芳基，杂芳基和C1-C10烷基杂芳基，其中所述环烷基或杂环烷基具有约3至约7个环碳，并且所述芳基或杂芳基具有约5至约10个环碳；
Q选自由以下各项组成的组：
其中n是选自0至10的整数；
R1或R2是H或CH3；
R3或R4是H或C1-C5烷基；
W不存在，或是O或S；并且
i)当W不存在时，R3和R4任选地一起形成以下结构：
ii)当W是O时，OR3和OR4任选地一起形成以下结构：
PEP是具有以下结构的肽基部分：
其中*标记表示为(S)或(R)构型的手性中心并且m是选自0至10的整数；
X1选自由以下各项组成的组：H，-(C＝O)-O-Rm，-(SO)-O-Rm，-(SO2)-O-Rm，-(SO2)-N-(Rm)2和-(C＝O)-N-(Rm)2，其中Rm是C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烯基，C1-C6卤代烷基，环烷基，C1-C6烷基环烷基，杂环烷基，C1-C6烷基杂环烷基，芳基，C1-C6烷芳基，杂芳基和C1-C6烷基杂芳基，其中所述环烷基或杂环烷基具有约3至约7个环碳，并且所述芳基或杂芳基具有约5至约10个环碳；
X2、X3或X4选自由以下各项组成的组：C1-C10烷基，C1-C10烯基，芳基，C1-C6烷芳基，杂芳基，C1-C6烷基杂芳基，其中所述芳基或杂芳基具有5至6个环碳；
A不存在或者选自由以下各项组成的组：Ala，Leu，Ile，Phe，Met，Pro，Gly，Ser，Thr，Cys，Tyr，Asn，Gln，His，Lys，Arg，Asp，Glu和Val，其各自可以为D或L构型；其中所述氨基残基是未经保护的，或者通过选自由Cbz和Fmoc组成的组中的保护基保护；
G不存在，或者选自由以下各项组成的组：-O-，-S-，-NH-，-NH-(C＝O)-O-，-O-(C＝O)-NH-，-NH-(C＝O)-NH-，-NHSO2-，-SO-和-SO2-。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中L是具有1至10个碳原子的直链或支链烷基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中L是取代或未取代的具有约5至约10个碳原子的单环或双环芳基，或者具有约5至约10个环碳原子的C1-C10烷芳基。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中L是取代或未取代的具有约5至约10个碳或杂环原子的单环或双环杂芳基，或者具有约5至约10个环碳或杂环原子的C1-C10烷芳基，其中杂原子包括O、N和S；并且优选地，L是取代或未取代的吡啶。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中G不存在，优选地，G是-NHC＝O-、-NH(C＝O)-O-或-NHSO2-。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中Q是：
其中W不存在，或是O或S。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中PEP是
其中*标记表示可以为(S)或(R)构型的手性中心；
X1是氢，或者选自由以下各项组成的组：-(C＝O)-O-Rm，-(SO)-O-Rm，-(SO2)-O-Rm，-(SO2)-N-(Rm)2和-(C＝O)-N-(Rm)2，其中Rm是C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烯基，C1-C6卤代烷基，环烷基，C1-C6烷基环烷基，杂环烷基，C1-C6烷基杂环烷基，芳基，C1-C6烷芳基，杂芳基和C1-C6烷基杂芳基，其中所述环烷基或杂环烷基具有约3至约7个环碳，并且所述芳基或杂芳基具有约5至约10个环碳；
X2、X3或X4选自由以下各项组成的组：C1-C10烷基，C1-C10烯基，芳基，C1-C6烷芳基，杂芳基，C1-C6烷基杂芳基，其中所述芳基或杂芳基具有5至6个环碳；
A不存在或者选自由以下各项组成的组：Ala，Leu，Ile，Phe，Met，Pro，Gly，Ser，Thr，Cys，Tyr，Asn，Gln，His，Lys，Arg，Asp，Glu和Val，其各自可以为D或L构型；其中所述氨基残基是未经保护的，或者通过选自由Cbz和Fmoc组成的组中的保护基保护。
8.根据权利要求7所述的化合物，其中A不存在或者是缬氨酸。
9.根据权利要求7所述的化合物，其中X1不存在，或者选自由以下各项组成的组：Et-O-(C＝O)-，i-Pr-O-(C＝O)-，t-Bu-O-(C＝O)-或环丙基-CH2-O-(C＝O)-。
10.根据权利要求7所述的化合物，其中X2选自由以下各项组成的组：异丙基-CH2-，环丙基-CH2-，环戊基-CH2-或金刚烷基-CH2-。
11.根据权利要求7所述的化合物，其中X3选自由以下各项组成的组：Ph-CH2-或Pyr-CH2-。
12.根据权利要求7所述的化合物，其中X4选自由以下各项组成的组：异丙基-CH2-，环丙基-CH2-或环戊基-CH2-。
13.根据权利要求7所述的化合物，其中A不存在，X1是t-Bu-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
14.根据权利要求7所述的化合物，其中A不存在，X1是环丙基-CH2-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
15.根据权利要求7所述的化合物，其中A不存在，X1是乙基-CH2-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
16.根据权利要求7所述的化合物，其中A不存在，X1是t-Bu-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是环丙基-CH2-。
17.根据权利要求7所述的化合物，其中A不存在，X1是t-Bu-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是环戊基-CH2-。
18.根据权利要求7所述的化合物，其中A不存在，X1是t-Bu-O-(C＝O)-，X2是金刚烷基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
19.根据权利要求7所述的化合物，其中A是缬氨酸，X1是t-Bu-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
20.根据权利要求7所述的化合物，其中A是缬氨酸，X1是环丙基-CH2-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
21.根据权利要求7所述的化合物，其中A是缬氨酸，X1是环丙基-CH2-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是环丙基-CH2-。
22.根据权利要求7所述的化合物，其中A是缬氨酸，X1是环丙基-CH2-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是环戊基-CH2-。
23.根据权利要求7所述的化合物，其中A是缬氨酸，X1是t-Bu-O-(C＝O)-，X2是金刚烷基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
24.一种化合物，或其药学上可接受的盐，所述化合物选自由以下各项组成的组：
25.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的至少一种根据权利要求1至24中任一项所述的化合物。
26.根据权利要求25所述的药物组合物，所述药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、溶剂、载剂或其组合。
27.根据权利要求25所述的药物组合物，所述药物组合物还包含治疗有效量的一种或多种任选的辅助活性成分。
28.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物或根据权利要求25至27中任一项所述的药物组合物在制造药物中的用途，所述药物用于减少细胞中的活性氧。
29.根据权利要求28所述的用途，其中减少细胞中的活性氧包括使细胞与有效量的所述化合物或所述药物组合物接触。
30.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物或根据权利要求25至27中任一项所述的药物组合物在制造药物中的用途，所述药物用于预防、治疗或减轻患者的与氧化应激相关的病症或疾病。
31.根据权利要求30所述的用途，其中预防、治疗或减轻与氧化应激相关的病症或疾病包括给药治疗有效量的所述化合物或所述药物组合物。
32.一种用于预防、治疗或减轻有需要的患者的病症或疾病的方法，所述方法包括向所述患者给药治疗有效量的根据权利要求1至24中任一项所述的化合物或根据权利要求25至
27中任一项所述的药物组合物。
说明书 :
活性氧清除剂衍生物的制备及用途
发明领域
[0001] 本发明提供用于治疗或抑制与氧化应激有关的疾病、发育延迟和症状的组合物和方法。更具体地，所述组合物和方法包括给药有效量的作为铁死亡(ferroptosis，也称为细胞铁死亡)调节剂的化合物。
[0002] 发明背景
[0003] 尽管局部ROS(活性氧)对于真核细胞的生物代谢和发育是至关重要的，但是不受约束的ROS的过大通量导致细胞功能障碍和/或死亡(例如，综述：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3484374/pdf/nihms412463.pdf和http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X16317715，访问于2017年7月7日)。
[0004] 自从2012年问世以来，铁死亡已成为过大ROS通量(尤其是在线粒体中)的关键机制途径，其最终导致非凋亡性细胞死亡(例如，综述：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4764384/和https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5072448/，访问于2017年7月7日)。作为铁死亡的关键要素，谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)活性的丧失允许ROS的致死过量，其进而通过氧化应激导致细胞破坏(例如,膜的多不饱和磷脂的过氧化)(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5003261/，访问于2017年7月7日)。由于GPx4使用谷胱甘肽(GSH)作为用于清除ROS的关键辅助因子，因此GSH生产不足可以是由于其‘上游’Xc-系统(谷氨酸酯/胱氨酸抗转运蛋白)的诱导受阻(例如，经由已知的较小化合物爱拉斯汀(erastin)和过量的谷氨酸酯)。另一方面，经由铁死亡诱导过量的ROS通量可以杀死某些癌细胞(例如，综述：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5345622/pdf/JCMM-21-648.pdf，访问于2017年7月7日)。
[0005] 基于以上综述以及关于可归因于其抗铁死亡作用机制的其他一些抑制剂的参考文献(例如ferrostatins：专利申请-US 2016/0297748和WO 2013/152039，醌类如MitoQ:http://www.discoverymedicine.com/Robin-A-J-Smith/2011/02/07/mitochondria-targeted-antioxidants-as-therapies/)，小分子肽如SS-31：(https://
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4267688/，访问于2017年7月7日，和专利公开WO2004070054(A2))；氮氧化物如XJB-5-131和JP4-039类似物：(https://
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5043442/pdf/oc6b00199.pdf，访问于2017年7月7日，和专利公开WO2012112851(A2))。XJB-5-131也已应用于抑制铁死亡的应用中，其中它在铁死亡中起着线粒体内脂质过氧化的关键作用。此外，参考化合物ferrostatin-1和XJB-5-131可能享有相似的作用机制，或者这两种化合物作用于相同的信号通路。铁死亡可以与多种众所周知的疾病相关，这些疾病广义地归类为涉及非中枢神经系统(非-CNS)或CNS。
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4267688/，访问于2017年7月7日，和专利公开WO2004070054(A2))；氮氧化物如XJB-5-131和JP4-039类似物：(https://
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5043442/pdf/oc6b00199.pdf，访问于2017年7月7日，和专利公开WO2012112851(A2))。XJB-5-131也已应用于抑制铁死亡的应用中，其中它在铁死亡中起着线粒体内脂质过氧化的关键作用。此外，参考化合物ferrostatin-1和XJB-5-131可能享有相似的作用机制，或者这两种化合物作用于相同的信号通路。铁死亡可以与多种众所周知的疾病相关，这些疾病广义地归类为涉及非中枢神经系统(非-CNS)或CNS。
[0006] 非-CNS：心血管疾病(例如，动脉粥样硬化，高血压性心肌病，充血性心力衰竭，中风等)，代谢性疾病(例如，糖尿病及其相关并发症如神经病，高脂血症等)，泌尿系统疾病(例如，急性肾损伤(AKI))，与年龄相关的疾病(例如，骨骼肌萎缩和干性老年性黄斑变性(干性-AMD，https://en.m.wikipedia.org/wiki/Macular degeneration，访问于2017年7月7日)和创伤(例如，放射性损伤，诱发性横纹肌溶解，创伤性脑损伤，重大手术等)。以AKI为例(https://en.m.wikipedia.org/wiki/Acute_kidney_injury，访问于2017年7月7日)，美国FDA至今也没有批准一种药物来专门治疗这种疾病，其尤其影响在重症监护病房中住院的～30％的美国患者。当AKI不幸发展到晚期/慢性阶段时，血液透析和最终的肾脏移植成为主要的剩余治疗选择。
[0007] CNS：神经运动性疾病(例如，帕金森病，亨廷顿病，肌萎缩性侧索硬化症，癫痫等)和认知性疾病(例如，阿尔茨海默症(例如，https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4679930/pdf/fnins-09-00469.pdf，访问于2017年7月7日))。以全球范围内影响超过5000万人的癫痫病为例，相当一部分(20-30％)患者对超过20种目前批准的药物具有耐药性或变得具有耐药性(例如，https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5068473/pdf/ndt-12-2605.pdf，访问于2017年7月7日)。毫无疑问地，自铁死亡2012年问世以来，正在进行的研究可能会将更多由于铁死亡所致的疾病和更多铁死亡的抑制剂联系起来。因此，如通过AKI和癫痫所例示的，将来与铁死亡有关的一些其他疾病也迫切需要更好的(可能是新型的)药物。
发明内容
[0008] 以下仅是本发明的一些方面的概述，但本发明不限于此。本说明书的所有参考文献通过引用以其整体并入本文。当本说明书的公开内容与引文不同时，以本说明书的公开内容为准。本发明提供化合物和药物组合物，其调节受试者的铁死亡；包括某些醌衍生物，以及提供它们的制备以及相应的药物组合物。本发明的化合物和/或药物组合物可以潜在地用于制造用来预防、治疗、改善患者的某些病症或疾病的药物。
[0009] 本发明的一个方面是提供下式(I)a或(I)b的化合物、其药学上可接受的盐以及各个对映异构体或非对映异构体。
[0010]
[0011] 其中z为0或1；
[0012] L不存在，或者选自由以下各项组成的组：C1-C10烷基，C1-C10烷氧基，环烷基，C1-C10烷基环烷基，杂环烷基，C1-C10烷基杂环烷基，芳基，C1-C10烷芳基，杂芳基和C1-C10烷基杂芳基，其中所述环烷基或杂环烷基具有约3至约7个环碳，并且所述芳基或杂芳基具有约5至约10个环碳；
[0013] Q选自由以下各项组成的组：
[0014]
[0015] 其中n是选自0至10的整数；
[0016] R1或R2是H或CH3；
[0017] R3或R4是H或C1-C5烷基；
[0018] W不存在，或是O或S；并且
[0019] i)当W不存在时，R3和R4可以任选地一起形成以下结构：
[0020]
[0021] ii)当W是O时，OR3和OR4可以任选地一起形成以下结构：
[0022]
[0023] PEP是具有以下结构的肽基部分：
[0024]
[0025] 其中*标记表示为(S)或(R)构型的手性中心并且m是选自0至10的整数；
[0026] X1选自由以下各项组成的组：H，-(C＝O)-O-Rm，-(SO)-O-Rm，-(SO2)-O-Rm，-(SO2)-N-(Rm)2和-(C＝O)-N-(Rm)2，其中Rm是C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、C1-C6卤代烷基、环烷基、C1-C6烷基环烷基、杂环烷基、C1-C6烷基杂环烷基、芳基、C1-C6烷芳基、杂芳基和C1-C6烷基杂芳基，其中所述环烷基或杂环烷基具有约3至约7个环碳，并且所述芳基或杂芳基具有约5至约10个环碳；
[0027] X2、X3或X4选自由以下各项组成的组：C1-C10烷基，C1-C10烯基，芳基，C1-C6烷芳基，杂芳基，C1-C6烷基杂芳基，其中所述芳基或杂芳基具有5至6个环碳；
[0028] A不存在或者选自由以下各项组成的组：Ala，Leu，Ile，Phe，Met，Pro，Gly，Ser，Thr，Cys，Tyr，Asn，Gln，His，Lys，Arg，Asp，Glu和Val，其各自可以为D或L构型；其中所述氨基残基是未经保护的，或者通过选自由Cbz和Fmoc组成的组中的保护基保护；
[0029] G不存在，或者选自由以下各项组成的组：-O-，-S-，-NH-，-NH-(C＝O)-O-，-O-(C＝O)-NH-，-NH-(C＝O)-NH-，-NHSO2-，-SO-和-SO2-。
[0030] 本发明的另一个方面是提供上述式(I)a或(I)b的化合物，其中PEP优选是[0031]
[0032] 其中*标记表示可以为(S)或(R)构型的手性中心；
[0033] X1选自由以下各项组成的组：H，-(C＝O)-O-Rm，-(SO)-O-Rm，-(SO2)-O-Rm，-(SO2)-N-(Rm)2和-(C＝O)-N-(Rm)2，其中Rm是C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、C1-C6卤代烷基、环烷基、C1-C6烷基环烷基、杂环烷基、C1-C6烷基杂环烷基、芳基、C1-C6烷芳基、杂芳基和C1-C6烷基杂芳基，其中所述环烷基或杂环烷基具有约3至约7个环碳，并且所述芳基或杂芳基具有约5至约10个环碳；
[0034] X2、X3或X4选自由以下各项组成的组：C1-C10烷基，C1-C10烯基，芳基，C1-C6烷芳基，杂芳基，C1-C6烷基杂芳基，其中所述芳基或杂芳基具有5至6个环碳。
[0035] A不存在或者选自由以下各项组成的组：Ala，Leu，Ile，Phe，Met，Pro，Gly，Ser，Thr，Cys，Tyr，Asn，Gln，His，Lys，Arg，Asp，Glu和Val，其各自可以为D或L构型；其中所述氨基残基是未经保护的，或者通过选自由Cbz和Fmoc组成的组中的保护基保护。
[0036] 在另一个方面，本发明涉及药物组合物，其各自包含有效量的至少一种式(I)a或(I)b的化合物或者式(I)a或(I)b的化合物的药学上可接受的盐，及其各个对映异构体和非对映异构体。根据本发明的药物组合物可以进一步包含至少一种药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、溶剂、载剂或它们的组合，并且可以进一步包含治疗有效量的一种或多种任选的辅助活性成分。
[0037] 在本发明的又一个方面，式(I)a或(I)b的化合物或者式(I)a或(I)b的化合物的药学上可接受的盐，及其各个对映异构体和非对映异构体可用作铁死亡调节剂。因此，本发明涉及有效量的至少一种上述式(I)a或(I)b的化合物或者式(I)a或(I)b的化合物的药学上可接受的盐，及其各个对映异构体和非对映异构体在制备药物中的用途，所述药物在用于减少细胞中的ROS(活性氧)的方法中使用，该方法包括使细胞与有效量的作为铁死亡调节剂的所述化合物接触。
[0038] 在本发明的又一个方面，涉及一种用于调节受试者的铁死亡的方法，该方法包括将受试者暴露于有效量的至少一种式(I)a或(I)b的化合物或者式(I)a或(I)b的化合物的药学上可接受的盐，及其各个对映异构体和非对映异构体，以及至少一种药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、溶剂、载剂或它们的组合，以及另外的治疗有效量的一种或多种任选的辅助活性成分。
[0039] 本发明的另一方面涉及药物组合物在制造药物中的用途，所述药物组合物各自包含有效量的至少一种式(I)a或(I)b的化合物或者式(I)a或(I)b的化合物的药学上可接受的盐，及其各个对映异构体和非对映异构体，以及至少一种药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、溶剂、载剂或它们的组合，以及另外的治疗有效量的一种或多种任选的辅助活性成分，所述药物通过给药治疗有效量的所述化合物或所述药物组合物作为铁死亡调节剂来预防、治疗或减轻患者的与氧化应激相关的病症或疾病。
[0040] 在又一个方面，本发明涉及一种通过对患者给药治疗有效量的上述药物组合物来调节所述患者的某些铁死亡过程来预防、治疗或减轻患者的与氧化应激相关的病症或疾病的方法，所述药物组合物各自包含有效量的至少一种式(I)a或(I)b的化合物或者式(I)a或(I)b的化合物的药学上可接受的盐，及其各个对映异构体和非对映异构体，以及至少一种药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、溶剂、载剂或它们的组合，以及另外的治疗有效量的一种或多种任选的辅助活性成分。
[0041] 在又一个方面，本发明涉及制备式(I)a或(I)b的化合物及其药学上可接受的盐的方法。
[0042] 在本发明的化合物、药物组合物和方法的某些实施方案中，式(I)a或(I)b的化合物是选自在以下详述中描述或例示的那些种类的化合物，或者是这样的化合物的药学上可接受的盐。
[0043] 另一个优选的实施方案，本发明涉及制备药物组合物的方法，所述药物组合物各自包含有效量的至少一种式(I)a或(I)b的化合物，或者式(I)a或(I)b的化合物的药学上可接受的盐，及另外的其各个对映异构体和非对映异构体。如上所述的，根据本发明的药物组合物可以进一步包含至少一种药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、溶剂、载剂或其组合，并且还包含治疗有效量的一种或多种任选的辅助活性成分。
[0044] 如果配制成固定剂量，则这样的组合产品采用本文所述的(或本领域技术人员已知的)剂量范围内的本发明的化合物以及在其剂量范围内的其他药学活性剂或治疗剂。例如，已经发现CDC2抑制剂奥罗莫星(olomucine)在诱导细胞凋亡中与已知的细胞毒性剂协同作用(J.CellSci.,(1995)108,2897)。当组合调配物(formulation)不合适时，本发明的化合物也可以与已知的抗癌剂或细胞毒性剂顺序给药。在任何组合治疗中，本发明不限于给药顺序；式(I)a或(I)b的化合物可以在已知的抗癌剂或细胞毒性剂给药之前或之后给药。例如，细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂夫拉平度(flavopiridol)的细胞毒活性受抗癌剂的给药顺序影响(Cancer Research,(1997)57,3375)。这样的技术在本领域技术人员以及主治医师的技术范围内。
[0045] 上述方法中的任何一种可以通过给药流体(如水)、髓袢利尿剂、一种或多种化疗剂或抗肿瘤剂(如亚叶酸钙(leucovorin)和氟尿嘧啶(fluorouracil))和辅助化疗剂(如非格司亭(filgrastim，也称为惠尔血)和促红细胞生成素(erythropoietin))或前述的任何组合来增强。
[0046] 又一个实施方案是一种向有需要的受试者(例如，人)给药本发明的化合物的方法，其通过向所述受试者给药本发明的药物调配物进行。
[0047] 又一个实施方案是一种制备本发明的药物调配物的方法，其通过将至少一种本发明的药学上可接受的化合物和任选的一种或多种药学上可接受的添加剂或赋形剂混合来进行。
[0048] 为了由本发明所描述的化合物制备药物组合物，惰性的药学上可接受的载体可以是固体或液体。固体形式的制剂(preparation)包括粉剂、片剂、可分散颗粒剂、胶囊剂、珠剂(bead)、扁囊剂和栓剂。粉剂和片剂可以包含约5％至约95％的活性成分。合适的固体载体为本领域已知的，例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖或乳糖。片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊剂可以用作适合口服给药的固体剂型。药学上可接受的载体和用于各种组合物的制造方法的示例可以在A.Gennaro(编辑),Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版,(1990),Mack Publishing Co.,Easton,Pa.中找到。
[0049] 液体形式的制剂包括溶液、混悬剂和乳剂。作为示例，可以提及用于肠胃外注射的水或水-丙二醇溶液或者添加甜味剂和遮光剂用于口服溶液、混悬剂和乳剂。液体形式的制剂还可以包括用于鼻内给药的溶液。
[0050] 适用于吸入的气雾剂制剂可以包括溶液和粉末形式的固体，它们可以与药学上可接受的载体如惰性压缩气体(例如氮气)相结合。
[0051] 还包括意图在使用前不久转化为用于口服或肠胃外给药的液体形式制剂的固体制剂。这样的液体形式包括溶液、混悬剂和乳剂。
[0052] 本发明的化合物也可以经皮递送。经皮组合物可以采用霜剂、洗剂、气雾剂和/或乳剂的形式，并且可以如本领域中常规用于此目的那样被包括在基质或储存型的经皮贴剂中。
[0053] 本发明的化合物也可以皮下递送。
[0054] 优选地，化合物经口服或静脉内或者经由滴眼剂或玻璃体内注射给药。
[0055] 优选地，药物制剂为单位剂型。以这样的形式，将制剂细分为适当大小的含有适当量的活性成分(例如，达到所需目的的有效量)的单位剂量。
[0056] 所采用的实际剂量可以根据患者的需求和所治疗病症的严重性而变化。确定用于特定情形的合适剂量方案在本领域的技术范围内。为方便起见，可以根据需要将每日总剂量分成多个部分，并在一天内分次给药。本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐的给药量和给药频率将根据主治医生的判断(考虑诸如患者的年龄、状况和大小以及所治疗症状的严重性等因素)来调节。
[0057] 只要彼此不矛盾，本文中公开的任何实施方案可以与其他实施方案组合，即使这些实施方案是在本发明的不同方面进行描述的。另外，只要彼此不矛盾，一个实施方案中的任何技术特征可以适用于其他实施方案中的相应技术特征，即使这些实施方案是在本发明的不同方面进行描述的。
[0058] 前述内容仅概述了本文中公开的某些方面，并且本质上不意图是限制性的。根据以下详细描述以及通过本发明的实践，本发明的这些方面和其他方面以及另外的实施方案、特征和优点将变得明显。
[0059] 详细描述和具体实施方案
[0060] 为简洁起见，本说明书中所引用的包括专利和专利申请在内的出版物的公开内容通过引用以其整体并入本文。
[0061] 大多数化学名称在本文中是使用IUPAC命名法生成的。一些化学名称是使用本领域已知的不同命名法或者替代名称或商业名称生成的。在名称和结构之间存在冲突的情况下，以结构为准。
[0062] 定义和一般术语
[0063] 现在将详细参考本发明的某些实施方案，其实施例伴随结构和式子来说明。本发明旨在涵盖可能包括在如权利要求所限定的本发明范围内的所有替代、修改和等同方案。本领域技术人员会识别出与本文描述的方法和材料相似或等同的许多方法和材料，其可以用于实践本发明。本发明决不限于本文所述的方法和材料。在所结合的文献、专利和类似材料中的一个或多个与本申请不同或与本申请相矛盾(包括但不限于所定义的术语、术语用法、所描述的技术等)的情况下，以本申请为准。
[0064] 还应当理解的是，为清楚起见在分开的实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征也可以组合提供在单个实施方案中。相反，为简洁起见，在单个实施方案的上下文中描述的本发明的各个特征也可以单独地或以任何合适的子组合提供。
[0065] 除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常所理解的相同含义。本文所提及的所有专利和出版物均通过引用以其整体并入。
[0066] 如本文所使用的，除非另外指明，否则应适用以下定义。为了本发明的目的，根据元素周期表CAS版本以及化学和物理手册(Handbook of Chemistry and Physics)第75版(1994年)确定化学元素。此外，有机化学的一般原理描述于“Organic Chemistry”,Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito:1999以及Michael B.Smith和Jerry March的“March’s Advanced Organic Chemistry”,John Wiley&Sons,New York:2007中，将它们的整个内容通过引用结合于此。
[0067] 如上文所使用的，以及在整个本公开内容中，除非另外指明，否则以下术语应理解为具有以下含义。如果缺少定义，则以本领域技术人员已知的常规定义为准。如果本文提供的定义与任何引述的出版物中提供的定义冲突或不同，则以本文提供的定义为准。
[0068] 如本文所使用的，术语“包括”、“含有”和“包含”以其开放的、非限制性的意义使用。
[0069] 如本文所使用的，除非上下文另外明确指明，否则单数形式“一个”、“一种”、“该”和“所述”包括复数指代物。
[0070] 为了提供更简洁的描述，本文给出的一些量的表述没有用术语“约”限定。应当理解，无论是否明确使用术语“约”，本文给出的每个量均意指实际给出值，并且其还意指基于本领域的普通技术知识可以合理推断的该给出值的近似值，包括由于用于该给出值的实验和/或测量条件所致的等效值和近似值。当收率以百分比给出时，这样的收率是指给出收率的实体的质量相对于在特定化学计量条件下可以获得的同一实体的最大量。除非另有指明，否则以百分比给出的浓度是指质量比。
[0071] 化学定义
[0072] 如本文所使用的，“烷基”是指具有1至12个碳原子的饱和的、直链或支链烃基基团。代表性的烷基基团包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、2-甲基-1-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-3-丁基、2,2-二甲基-1-丙基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,
2-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基等，以及更长的烷基基团，如庚基、辛基等。如本文所使用的，“低级烷基”是指具有1至6个碳原子的烷基。
2-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基等，以及更长的烷基基团，如庚基、辛基等。如本文所使用的，“低级烷基”是指具有1至6个碳原子的烷基。
[0073] 如本文所使用的，术语“烷基氨基”表示如本文所定义的氨基基团，其中氨基基团的一个氢原子被如本文所定义的烷基基团替代。氨基烷基基团可以由以下通式定义：-NH-烷基。该通式包括以下通式的基团：-NH-C1-C10烷基和-NH-C1-C6烷基。氨基烷基基团的实施例包括但不限于氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、氨基丁基。
[0074] 如本文所使用的，术语“烷氧基”包括-O-(烷基)，其中烷基如上所定义。
[0075] 如本文所使用的，“烷氧基烷基”是指-(亚烷基)-O-(烷基)，其中每个“烷基”独立地是以上定义的烷基基团。
[0076] 如本文所使用的，术语“胺”是指-NH2基团。
[0077] “芳基”是指单环、双环或三环芳族基团，其中该基团的所有环都是芳族的。对于双环或三环体系，各个芳族环彼此稠合。示例性的芳基基团包括但不限于苯基、萘和蒽。
[0078] 如本文所使用的，“芳氧基”是指-O-(芳基)基团，其中芳基如上所定义。
[0079] 如本文所使用的，“芳烷基”是指-(亚烷基)-(芳基)基团，其中亚烷基和芳基如上所定义。芳烷基的非限制性实施例包括低级烷基基团。合适的芳烷基基团的非限制性实施例包括苄基、2-苯乙基和萘基甲基。
[0080] 如本文所使用的，“芳基烷氧基”是指-O-(亚烷基)-芳基基团，其中亚烷基和芳基如上所定义。
[0081] 如本文所使用的，术语“氘”、“氘代”是指具有一个质子和一个中子的氢的稳定同位素，被具有一个质子和一个中子的氢的稳定同位素取代。
[0082] 如本文所使用的，术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。术语“卤代”表示氯代、氟代、溴代或碘代。
[0083] 术语“卤代烷基”表示如上所定义的烷基基团，其中烷基基团中的一个或多个氢原子，例如一个、两个或三个氢原子被卤素原子取代，例如氟代、溴代或氯代，特别是氟代。卤代烷基的实施例包括但不限于单氟代-、二氟代-或三氟代-甲基、-乙基或-丙基，例如3,3,3-三氟丙基、2-氟乙基、2,2,2-三氟乙基、氟甲基、二氟甲基或三氟甲基，或者溴乙基或氯乙基。类似地，术语“氟代烷基”是指被一个或多个，例如一个、两个或三个氟原子取代的如上所定义的烷基基团。
[0084] 如本文所使用的，术语“卤代烷氧基”是指-O-(卤代烷基)基团，其中卤代烷基如上所定义。示例性的卤代烷氧基基团为溴乙氧基、氯乙氧基、三氟甲氧基和2,2,2-三氟乙氧基。
[0085] 术语“羟基”是指-OH基团。
[0086] 术语“羟烷基”表示被至少一个羟基基团，例如一个、两个或三个羟基基团取代的烷基基团。羟烷基基团的烷基部分提供与分子其余部分的连接点。羟烷基基团的实施例包括但不限于羟甲基、羟乙基、1-羟丙基、2-羟基异丙基、1,4-二羟基丁基等。
[0087] 术语“氧代(oxo)”意指＝O基团并且可以与碳原子或硫原子连接。术语“N-氧化物”是指氮原子的氧化形式。
[0088] 如本文所使用的，术语“环烷基”是指具有3至12个环碳原子的饱和或部分饱和的、单环、稠合多环、桥接多环或螺环(spiro)多环的碳环。环烷基基团的非限制性类别为具有3至6个碳原子的饱和或部分饱和的单环碳环。环烷基基团的说明性实施例包括但不限于以下部分：
[0089]
[0090] 术语“环烷氧基”是指-O-(环烷基)基团。
[0091] 如本文所使用的，术语“杂芳基”是指具有3至15个选自碳、氧、氮、硒和硫的环原子的单环或稠合多环的芳族杂环。合适的杂芳基基团不包括必须带电荷才成为芳族的环体系，例如吡喃鎓。一些合适的5元杂芳基环(作为单环杂芳基或作为多环杂芳基的一部分)具有一个氧、硫或氮原子，或者一个氮加一个氧或硫原子，或者2、3或4个氮原子。一些合适的6元杂芳基环(作为单环杂芳基或作为多环杂芳基的一部分)具有1、2或3个氮原子。杂芳基基团的实施例包括但不限于吡啶基，咪唑基，咪唑并吡啶基，嘧啶基，吡唑基，三唑基，吡嗪基，四唑基，呋喃基，噻吩基，异噁唑基，噻唑基，噁唑基，异噻唑基，吡咯基，喹啉基，异喹啉基，吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基，噌啉基，吲唑基，吲哚嗪基，酞嗪基，哒嗪基，三嗪基，异吲哚基，蝶啶基(pteridinyl)，嘌呤基，噁二唑基，三唑基，噻二唑基，呋咱基，苯并呋咱基，苯并噻吩基，苯并噻唑基，苯并噁唑基，喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基和呋喃并吡啶基。
[0092] 本领域技术人员将认识到，上面列出或说明的杂芳基和环烷基基团的种类不是穷举的，并且还可以选择这些定义的术语的范围内的其他种类。
[0093] 如本文所述的，本文公开的化合物可以任选地被一个或多个取代基取代，或者如本发明的特定类别、子类别和种类所例示的。
[0094] 如本文所使用的，术语“取代”是指指定的基团或部分带有一个或多个合适的取代基。如本文所使用的，术语“未取代”是指指定的基团不带有取代基。如本文所使用的，术语“任选取代”是指指定的基团未被取代或被指定数量的取代基取代。在使用术语“取代”来描述结构体系时，取代意指发生在体系上的任何化合价所允许的位置处。
[0095] 如本文所使用的，表述“一个或多个取代基”表示可以在体系上的任何化合价所允许的位置处发生的一个到最大可能数量的取代基。在某个实施方案中，一个或多个取代基是指1、2、3、4或5个取代基。在另一个实施方案中，一个或多个取代基是指1、2或3个取代基。
[0096] 本文中用不饱和化合价表示的任何原子被假设为具有足够数量的氢原子以满足该原子的化合价。
[0097] 当任何变量(例如烷基，亚烷基，杂芳基，R1，R2或Ra)出现在本文所提供的任何式子或描述中的一个以上位置时，该变量在每个发生处的定义均独立于其在每个其他发生处的定义。
[0098] 如本文所使用的，数值范围旨在包括连续的整数。例如，表示为“0至4”或“0-4”的范围包括0、1、2、3和4，而表示为“10-20％”的范围包括10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％和20％。类似地，数值范围也旨在包括连续的小数整数。例如，表示为“1-2％”的范围将包括1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、
1.9％和2.0％。
1.9％和2.0％。
[0099] 当显示多功能部分时，与核心连接的点用线或连字符表示。例如，芳氧基-是指其中氧原子是与核心分子连接的点而芳基与氧原子连接的部分。
[0100] 其他定义
[0101] 如本文所使用的，术语“受试者”涵盖哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的实施例包括但不限于哺乳动物类别的任何成员：人类；非人灵长类动物，如黑猩猩，以及其他猿类和猴类；农畜，如牛、马、绵羊、山羊、猪；家畜，如兔、狗和猫；以及实验室动物，包括啮齿动物如大鼠、小鼠和豚鼠等。非哺乳动物的实施例包括但不限于鸟类、鱼类等。在本发明的一个实施方案中，哺乳动物是人。
[0102] “患者”包括人类和动物二者。
[0103] 术语“抑制剂”是指阻断或以其他方式干扰特定生物活性的分子，如化合物、药物、酶活化剂或激素。
[0104] 术语“调节剂”是指增加或降低或者以其他方式影响给定蛋白质、受体和/或离子通道的活性的分子，如本发明的化合物。
[0105] 术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以提供所需的生物学结果的试剂的量。该结果可以是疾病和医学病况的病征、症状或病因的减少和/或减轻，或者生物系统的任何其他所需变化。例如，用于治疗用途的“有效量”是提供疾病状态、症状或医学病况的临床相关变化所需的化合物的量或包含该化合物的组合物的量。在任何个体情况下，本领域普通技术人员可以使用常规实验确定适当的“有效”量。因此，表述“有效量”通常是指活性物质具有治疗所需效果的量。
[0106] 如本文所使用的，术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”涵盖“预防性”和“治愈性”治疗。“预防性”治疗意指表示延迟疾病、疾病的症状或医学病况的发展，抑制可能出现的症状，或降低疾病或症状的发展或复发的风险。“治愈性”治疗包括降低现有疾病、症状或病况的严重性或抑制其恶化。因此，治疗包括改善现有疾病症状或预防现有疾病症状的恶化，防止其他症状出现，改善或预防症状的潜在代谢病因，抑制病症或疾病，例如，阻止病症或疾病的发展，缓解病症或疾病，使病症或疾病消退，缓解由疾病或病症引起的病况，或终止疾病或病症的症状。
[0107] 如本文所使用的，术语“给药(administration)”和“给药(administerning)”化合物应被理解为是指向有需要的个体提供本发明的化合物、包含本发明的化合物或本发明的化合物的前药的药物组合物。应认识到，非限制性领域的技术人员可以用有效量的本发明化合物来治疗目前患有相关疾病或病症的患者，或者预防性地治疗患有所述疾病或病症的患者。
[0108] 如本文所使用的，术语“组合物”旨在涵盖包含指定量的指定成分的产物，以及由指定量的指定成分的组合直接或间接地产生的任何产物。这样的与药物组合物有关的术语旨在涵盖包含一种或多种活性成分和构成载体的一种或多种惰性成分的产物，以及由任何两种以上成分的组合、复合或聚集所直接或间接地产生的任何产物，或者由引起一种或多种成分解离的其他类型的反应或相互作用所直接或间接地产生的任何产物。因此，本发明的药物组合物涵盖通过混合本发明的化合物和药学上可接受的载体制成的任何组合物。
[0109] 其他化学说明
[0110] 本文给出的任何式子旨在表示具有由该结构式以及某些变体或形式所描绘的结构的化合物。例如，本文给出的任何式子的化合物可以具有不对称或手性中心，并且因此以不同的立体异构形式存在。通式化合物的所有立体异构体，包括旋光异构体、对映异构体和非对映异构体，及其混合物都被认为落入该式的范围内。此外，某些结构可能以几何异构体(即顺式异构体和反式异构体)、互变异构体或阻转异构体的形式存在。所有这样的异构体形式及其混合物在本文中均被视为本发明的一部分。因此，本文给出的任何式子旨在表示外消旋体、一种或多种对映异构体形式、一种或多种非对映异构体形式、一种或多种互变异构体或阻转异构体形式及其混合物。
[0111] “立体异构体”是指具有相同化学组成但原子或基团在空间中的排列不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何(顺/反)异构体、阻转异构体等。
[0112] “手性”是指具有镜像伴侣(mirror image partner，或称为镜像配偶体)的不可重叠性的分子，而术语“非手性”是指可以与其镜像伴侣重叠的分子。
[0113] “对映异构体”是指化合物的两种为彼此的不可重叠的镜像的立体异构体。
[0114] “非对映异构体”是指具有两个以上手性中心并且其分子不是彼此的镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱性质或生物学活性。非对映异构体的混合物可以在高分辨率分析方法(如电泳和色谱法,如HPLC)中分开。
[0115] 本文所使用的立体化学定义和规定通常遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；以及Eliel,E.和Wilen,S.,“Stereochemistry of Organic Compounds”,John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994。
[0116] 许多有机化合物以旋光形式存在，即它们具有旋转偏振光的平面的能力。在描述旋光活性化合物时，前缀D和L或R和S用于表示分子关于其手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)用来表示通过化合物使平面偏振光旋转的符号，其中(-)或l是指该化合物是左旋的。带有前缀(+)或d的化合物是右旋的。特定的立体异构体可以称为对映异构体，并且将这样的立体异构体的混合物称为对映异构体混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，它们可能发生在化学反应或过程中没有立体选择或立体特异性的情况下。
[0117] 本文公开的化合物的任何不对称原子(例如，碳等)可以是外消旋的或富含对映异构体的，例如为(R)-、(S)-或(R,S)-构型。在某些实施方案中，每个不对称原子在(R)-或(S)-构型方面具有至少50％的对映异构体过量，至少60％的对映异构体过量，至少70％的对映异构体过量，至少80％的对映异构体过量，至少90％的对映异构体过量，至少95％的对映异构体过量，或至少99％的对映异构体过量。
[0118] 根据原料和程序的选择，化合物可以以可能的立体异构体之一的形式或以其混合物的形式(如外消旋体和非对映异构体混合物)存在，这取决于不对称碳原子的数量。旋光(R)-和(S)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术拆分。如果化合物含有双键，则取代基可以为E或Z构型。如果化合物含有二取代的环烷基，则环烷基取代基相对于同一环烷基框架的另一个取代基可以具有顺式或反式-构型。
[0119] 基于成分的物理化学差异可以例如通过色谱法和/或分级结晶将任何所得的立体异构体混合物分离为纯的或基本上纯的几何异构体、对映异构体、非对映异构体。通过本领域技术人员已知的方法，例如通过分离其非对映异构体的盐，可以将最终产物或中间体的任何所得的外消旋体拆分成旋光对映体。外消旋产物也可以通过手性色谱法，例如使用手性吸附剂的高效液相色谱法(HPLC)进行拆分。优选的对映异构体也可以通过不对称合成制备。参见，例如，Jacques等人,Enantiomers,Racemates and Resolutions(Wiley Interscience,New York,1981)；Principles of Asymmetric Synthesis(第二版，Robert E.Gawley,Jeffrey Aubé,Elsevier,Oxford,UK,2012)；Eliel,E.L.Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw-Hill,NY,1962)；Wilen,S.H.Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions,第268页(E.L.Eliel,Ed.,Univ.of Notre Dame Press,Notre Dame,IN 1972)；Chiral Separation Techniques:APractical Approach(Subramanian,G.Ed.,Wiley-VCH Verlag GmbH&Co.KGaA,Weinheim,Germany,2007)。
[0120] 非对映异构体混合物可以基于其物理化学差异，通过本领域技术人员公知的方法，如例如通过色谱法和/或分级结晶，被分离为它们各自的非对映异构体。对映异构体可以通过以下方式分离：通过与合适的旋光化合物(例如，手性助剂，如手性醇或莫舍酰氯(Mosher's acid chloride)，或形成非对映异构体的盐的混合物)反应而将对映异构体混合物转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构体并将各个非对映异构体转化(例如水解或脱盐)为相应的纯对映异构体。对映异构体也可以通过使用手性HPLC柱进行分离。
[0121] 本发明的化合物可以形成药学上可接受的盐，其也在本发明的范围内。“药学上可接受的盐”是指式(I)a或(I)b的化合物的游离酸或碱的盐，该盐是无毒的、是生理学上可耐受的、与其所配制的药物组合物是相容的，并且在其他方面适合于配制和/或给药于受试者。除非另外指明，否则本文中对化合物的提及应理解为包括提及所述化合物的药学上可接受的盐。
[0122] 化合物的盐包括与无机和/或有机酸形成的酸性盐，以及与无机和/或有机碱形成的碱性盐。另外，在给定的化合物同时含有碱性部分(例如但不限于吡啶或咪唑)和酸性部分(例如但不限于羧酸)的情况下，本领域技术人员将理解该化合物可能以两性离子(“内盐”)的形式存在；这样的盐包括在本文所使用的术语“盐”的范围内。本发明的化合物的盐可以例如通过使化合物与一定量的合适的酸或碱(如当量)，在诸如盐在其中发生沉淀的介质中或在水性介质中反应，然后冻干来制备。
[0123] 示例性的盐包括但不限于硫酸盐，柠檬酸盐，乙酸盐，草酸盐，氯化物，溴化物，碘化物，硝酸盐，硫酸氢盐，磷酸盐，酸性磷酸盐，异烟酸盐，乳酸盐，水杨酸盐，酸性柠檬酸盐，酒石酸盐，油酸盐，丹宁酸盐，泛酸盐，酒石酸氢盐，抗坏血酸盐，琥珀酸盐，马来酸盐，龙胆酸盐(gentisinate)，富马酸盐，葡糖酸盐，葡糖醛酸盐，蔗糖盐，甲酸盐，苯甲酸盐，谷氨酸盐，甲磺酸盐(methanesulfonate)(“甲磺酸盐(mesylate)”)，乙磺酸盐，苯磺酸盐，对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即，1,1’-亚甲基-双(2-羟基-3-萘甲酸盐))。药学上可接受的盐可以涉及包含另一种分子如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其他反离子。反离子可以是使母体化合物上的电荷稳定的任何有机或无机部分。此外，药学上可接受的盐在其结构中可以具有一个以上带电荷的原子。其中多个带电荷的原子是药学上可接受的盐的一部分的情形可以具有多个反离子。因此，药学上可接受的盐可具有一个或更多个带电荷的原子和/或一个或多个反离子。
[0124] 示例性的酸加成盐包括乙酸盐，抗坏血酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，硫酸氢盐，硼酸盐，丁酸盐，柠檬酸盐，樟脑酸盐(camphorate)，樟脑磺酸盐，富马酸盐，盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，乳酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐，萘磺酸盐，硝酸盐，草酸盐，磷酸盐，丙酸盐，水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐，甲苯磺酸盐(toluenesulfonate)(也称为甲苯磺酸盐(tosylate))等。
[0125] 示例性的碱性盐包括铵盐，碱金属盐(如钠、锂和钾盐)，碱土金属盐(如钙和镁盐)，与有机碱(例如有机胺，如二环己基胺，叔丁基胺)的盐，以及与氨基酸(如精氨酸，赖氨酸等)的盐。碱性含氮基团可以与诸如低级烷基卤化物(例如，甲基、乙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯，硫酸二乙酯和硫酸二丁酯)、长链卤化物(例如，癸基、月桂基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如苄基和苯乙基溴化物)等的试剂进行季铵化。
[0126] 另外，通常被认为适合于由药物化合物形成药学上有用的盐的酸和碱例如由P.Stahl等人,Camille G.(eds.)Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties,Selection and Use.(2002)Zurich:Wiley-VCH；S.Berge等人,Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould,International J.of
Pharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson等人,The Practice of Medicinal Chemistry(1996),Academic Press,New York；和在The Orange Book(Food&Drug Administration,MD，可得自FDA)中进行了讨论。将这些公开内容通过引用并入本文。
Pharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson等人,The Practice of Medicinal Chemistry(1996),Academic Press,New York；和在The Orange Book(Food&Drug Administration,MD，可得自FDA)中进行了讨论。将这些公开内容通过引用并入本文。
[0127] 另外，本文中描述的任何化合物还旨在涉及该化合物的任何未溶剂化形式或水合物、溶剂化物或多晶型物及其混合物，即使未明确列出这样的形式。“溶剂化物”是指本发明化合物与一种或更多种溶剂分子的物理缔合。这种物理缔合涉及不同程度的离子和共价键合，包括氢键合。在某些情况下，例如当一种或多种溶剂分子结合到结晶固体的晶格中时，溶剂化物将能够分离。“溶剂化物”涵盖溶液相和可分离的溶剂化物。合适的溶剂化物包括与药学上可接受的溶剂如水、乙醇等形成的那些溶剂化物。在一些实施方案中，溶剂是水并且溶剂化物是水合物。
[0128] 一种或更多种本发明的化合物可以任选地转化为溶剂化物。用于制备溶剂化物的方法通常是已知的。因此，例如，M.Caira等人,J.Pharmaceutical Sci.,93(3),601-611(2004)描述了在乙酸乙酯中以及从水中制备抗真菌氟康唑的溶剂化物。溶剂化物、半溶剂化物、水合物等的类似制备由E.C.van Tonder等人,AAPS PharmSciTech.,5(1),article 12(2004)；和A.L.Bingham等人,Chem.Commun.,603-604(2001)描述。典型的非限制性方法涉及在高于环境温度下将本发明的化合物溶解在适当量的溶剂(有机溶剂或水或它们的混合物)中，并以足以形成晶体的速率冷却溶液，然后通过标准方法分离所述晶体。分析技术如例如红外光谱法显示溶剂(或水)在晶体中以溶剂化物(或水合物)存在。
[0129] 本发明还涉及式(I)a或(I)b的化合物的药学活性代谢物，以及这样的代谢物在本发明方法中的用途。“药学活性代谢物”是指式(I)a或(I)b的化合物或其盐在体内代谢的药理学活性产物。化合物的活性代谢物可以使用本领域已知或可用的常规技术确定。参见，例如，Bertolini等人,J.Med.Chem.1997,40,2011-2016；Shan等人,J.Pharm.Sci.1997,86(7),765-767；Bagshawe,Drug Dev.Res.1995,34,220-230；Bodor,Adv.Drug Res.1984,13,255-331；Bundgaard,Design of Prodrugs(Elsevier Press,1985)；和Larsen,Design and Application of Prodrugs,Drug Design and Development(Krogsgaard-Larsen等人,eds.,Harwood Academic Publishers,1991)。
[0130] 本文给出的任何式子也旨在代表化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有由本文给出的式子所描绘的结构，不同之处在于一个或更多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子替代。可以纳入本发明化合物中的同位素的实施例包括2 3 11 13 14 15 18 17 31 32 35
氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，如分别是 H、H、C、C、C、N、O、O、P、P、S、18F、36Cl和125I。这样的同位素标记的化合物可用于代谢研究(例如利用14C)、反应动力学研究(例如利用2H或3H)、检测或成像技术(如正电子发射断层成像(PET)或单光子发射计算机断层成像(SPECT)，包括药物或基质组织分布测定，或者可用于患者的放射性治疗。特别地
18 11
，F或 C标记的化合物可能特别适用于PET或SPECT研究。此外，用较重的同位素如氘(即，
2H)取代可以由于更高的代谢稳定性而提供某些治疗优势，例如增加体内半衰期或降低剂量需求。本发明的同位素标记的化合物通常可以通过实施以下所述的方案或实施例和制备中公开的程序通过用现成的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来制备。
氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，如分别是 H、H、C、C、C、N、O、O、P、P、S、18F、36Cl和125I。这样的同位素标记的化合物可用于代谢研究(例如利用14C)、反应动力学研究(例如利用2H或3H)、检测或成像技术(如正电子发射断层成像(PET)或单光子发射计算机断层成像(SPECT)，包括药物或基质组织分布测定，或者可用于患者的放射性治疗。特别地
18 11
，F或 C标记的化合物可能特别适用于PET或SPECT研究。此外，用较重的同位素如氘(即，
2H)取代可以由于更高的代谢稳定性而提供某些治疗优势，例如增加体内半衰期或降低剂量需求。本发明的同位素标记的化合物通常可以通过实施以下所述的方案或实施例和制备中公开的程序通过用现成的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来制备。
[0131] 术语“盐”、“溶剂化物”、“多晶型物”等关于本文所述化合物的使用旨在等同地适用于本发明化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、阻转异构体和外消旋体的盐、溶剂化物和多晶型物形式。
[0132] 缩写：
[0133] EA 乙酸乙酯
[0134] DCM 二氯甲烷
[0135] THF 四氢呋喃
[0136] TBAF 四丁基氟化铵
[0137] PE 石油醚
[0138] i-PrOH 异丙醇
[0139] PivCl 新戊酰氯
[0140] TEA 三乙胺
[0141] DIEA N-乙基二异丙胺
[0142] n-BuLi 正丁基锂
[0143] (Boc)2O 二碳酸二叔丁酯
[0144] HMDS 六甲基二硅叠氮化物
[0145] BnBr 苄基溴
[0146] HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸酯
[0147] 4-AT (2,2,6,6-四甲基-1-氧基-4-哌啶基)胺
[0148] MTBE 甲基叔丁基醚
[0149] KHMDS 双(三甲基硅烷基)氨基钾
[0150] TFA 三氟乙酸
[0151] T3P 2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧三磷酸-2,4,6-三氧化物(2,4,6-tripropyl-1,3,5,2,4,6-trioxatriphosphorinane-2,4,6-trioxide)
[0152] DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯
[0153] m-CPBA 间氯过氯苯甲酸
[0154] CbzCl 氯甲酸苄酯
[0155] Cbz 苄氧羰基(Carbobenzyl)
[0156] Fmoc 9-芴基甲氧羰基
[0157] Boc 叔丁氧基羰基
[0158] Bn 苄基
[0159] DMF N,N’-二甲基甲酰胺
[0160] DMAP 4-(二甲氨基)吡啶
[0161] DMSO 二甲亚砜
[0162] DBU 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
[0163] CAN 硝酸铈铵
[0164] HPLC 高效液相色谱
[0165] J 耦合常数(在NMR中)
[0166] min 分钟
[0167] h 小时
[0168] NMR 核磁共振
[0169] prep 制备型
[0170] t-Bu 叔丁基
[0171] iPr 异丙基
[0172] TLC 薄层色谱
[0173] Ala 丙氨酸
[0174] Leu 精氨酸
[0175] Ile 异亮氨酸
[0176] Phe 苯丙氨酸
[0177] Met 蛋氨酸
[0178] Pro 脯氨酸
[0179] Gly 甘氨酸
[0180] Ser 丝氨酸
[0181] Thr 苏氨酸
[0182] Cys 半胱氨酸
[0183] Tyr 酪氨酸
[0184] Asn 天冬酰胺
[0185] Gln 谷氨酰胺
[0186] His 组氨酸
[0187] Lys 赖氨酸
[0188] Arg 精氨酸
[0189] Asp 天冬氨酸
[0190] Glu 谷氨酸
[0191] 本发明化合物的描述
[0192] 本发明涉及特定的分子及其药学上可接受的盐或异构体。本发明还涉及可用于调节谷氨酸传递功能失调的分子及其药学上可接受的盐、溶剂化物、酯或异构体。
[0193] 本发明涉及本文所述的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物、酯或异构体，以及包含一种或多种本文所述的化合物及其药学上可接受的盐或异构体的药物组合物。本发明的一个方面是提供用于调节哺乳动物中的谷氨酸传递的化合物、组合物、试剂盒和解毒剂，其具有式(I)a或(I)b的化合物、其药学上可接受的盐及其各个对映异构体和非对映异构体。
[0194]
[0195] 其中z为0或1；
[0196] L不存在，或者选自由以下各项组成的组：C1-C10烷基，C1-C10烷氧基，环烷基，C1-C10烷基环烷基，杂环烷基，C1-C10烷基杂环烷基，芳基，C1-C10烷芳基，杂芳基和C1-C10烷基杂芳基，其中所述环烷基或杂环烷基具有约3至约7个环碳，并且所述芳基或杂芳基具有约5至约10个环碳；
[0197] Q选自由以下各项组成的组：
[0198]
[0199] 其中n是选自0至10的整数；
[0200] R1或R2是H或CH3；
[0201] R3或R4是H或C1-C5烷基；
[0202] W不存在，或是O或S；并且
[0203] i)当W不存在时，R3和R4可以任选地一起形成以下结构：
[0204]
[0205] ii)当W是O时，OR3和OR4可以任选地一起形成以下结构：
[0206]
[0207] PEP是具有以下肽基结构的部分：
[0208]
[0209] 其中*标记表示可以为(S)或(R)构型的手性中心并且m是选自0至10的整数；
[0210] X1选自由以下各项组成的组：H，-(C＝O)-O-Rm，-(SO)-O-Rm，-(SO2)-O-Rm，-(SO2)-N-(Rm)2和-(C＝O)-N-(Rm)2，其中Rm是C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、C1-C6卤代烷基、环烷基、C1-C6烷基环烷基、杂环烷基、C1-C6烷基杂环烷基、芳基、C1-C6烷芳基、杂芳基和C1-C6烷基杂芳基，其中所述环烷基或杂环烷基具有约3至约7个环碳，并且所述芳基或杂芳基具有约5至约10个环碳；
[0211] X2、X3或X4选自由以下各项组成的组：C1-C10烷基，C1-C10烯基，芳基，C1-C6烷芳基，杂芳基，C1-C6烷基杂芳基，其中所述芳基或杂芳基具有5至6个环碳；
[0212] A不存在，或者选自由以下各项组成的组：Ala，Leu，Ile，Phe，Met，Pro，Gly，Ser，Thr，Cys，Tyr，Asn，Gln，His，Lys，Arg，Asp，Glu和Val，其各自可以为D或L构型；其中氨基残基是未经保护的，或者通过选自由Cbz和Fmoc组成的组中的保护基保护；
[0213] G不存在，或者选自由以下各项组成的组：-O-，-S-，-NH-；-NH-(C＝O)-O-，-O-(C＝O)-NH-，-NH-(C＝O)-NH-，-NHSO2-，-SO-和-SO2-。
[0214] 在一些实施方案中，其中化合物具有通式(I)a或(I)b，其中L是具有约1至约10个碳原子的直链或支链烷基。
[0215] 在一些实施方案中，其中化合物具有通式(I)a或(I)b，其中L是取代或未取代的具有约5至约10个环碳原子的单环或双环芳基，或者具有约5至约10个环碳原子的C1-C10烷芳基。
[0216] 在一些实施方案中，其中化合物具有通式(I)a或(I)b，其中L是取代或未取代的具有约5至约10个碳或杂环原子的单环或双环杂芳基，或者具有约5至约10个环碳或杂环原子的C1-C10烷芳基，其中杂原子包括O、N和S；并且优选地，L是取代或未取代的吡啶。
[0217] 在其他实施方案中，提供了具有通式(I)a或(I)b的化合物，其中G不存在，或优选是-NHC＝O-，-NH(C＝O)-O-或-NHSO2-。
[0218] 在其他实施方案中，提供了具有通式(I)a或(I)b的化合物，其中W不存在，或是O或S；
[0219] 在其他实施方案中，其中化合物具有通式(I)a或(I)b，其中PEP优选是
[0220]
[0221] 其中*标记表示可以为(S)或(R)构型的手性中心；
[0222] X1是氢，或者选自由以下各项组成的组：-(C＝O)-O-Rm，-(SO)-O-Rm，-(SO2)-O-Rm，-(SO2)-N-(Rm)2和-(C＝O)-N-(Rm)2，其中Rm是C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、C1-C6卤代烷基、环烷基、C1-C6烷基环烷基、杂环烷基、C1-C6烷基杂环烷基、芳基、C1-C6烷芳基、杂芳基和C1-C6烷基杂芳基，其中所述环烷基或杂环烷基具有约3至约7个环碳，并且所述芳基或杂芳基具有约5至约10个环碳；
[0223] X2、X3或X4选自由以下各项组成的组：C1-C10烷基，C1-C10烯基，芳基，C1-C6烷芳基，杂芳基，C1-C6烷基杂芳基，其中所述芳基或杂芳基具有5至6个环碳；
[0224] A不存在，或者选自由以下各项组成的组：Ala，Leu，Ile，Phe，Met，Pro，Gly，Ser，Thr，Cys，Tyr，Asn，Gln，His，Lys，Arg，Asp，Glu和Val，其各自可以为D或L构型；其中氨基残基是未经保护的，或者通过选自由Cbz和Fmoc组成的组中的保护基保护。
[0225] 本发明的另一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，A优选不存在或者是缬氨酸。
[0226] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，X1优选不存在，或者选自由以下各项组成的组：Et-O-(C＝O)-，i-Pr-O-(C＝O)-，t-Bu-O-(C＝O)-或环丙基-CH2-O-(C＝O)-。
[0227] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，X2优选选自由以下各项组成的组：异丙基-CH2-，环丙基-CH2-，环戊基-CH2-或金刚烷基-CH2-。
[0228] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，X3优选选自由以下各项组成的组：Ph-CH2-或Pyr-CH2-。
[0229] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，X4优选选自由以下各项组成的组：异丙基-CH2-，环丙基-CH2-或环戊基-CH2-。
[0230] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，A不存在，X1是t-Bu-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
[0231] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，A不存在，X1是环丙基-CH2-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
[0232] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，A不存在，X1是乙基-CH2-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
[0233] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，A不存在，X1是t-Bu-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是环丙基-CH2-。
[0234] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，A不存在，X1是t-Bu-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是环戊基-CH2-。
[0235] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，A不存在，X1是t-Bu-O-(C＝O)-，X2是金刚烷基-CH2-；X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
[0236] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，A是缬氨酸，X1是t-Bu-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
[0237] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，A是缬氨酸，X1是环丙基-CH2-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
[0238] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，A是缬氨酸，X1是环丙基-CH2-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是环丙基-CH2-。
[0239] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，A是缬氨酸，X1是环丙基-CH2-O-(C＝O)-，X2是异丙基-CH2-，X3是Ph-CH2-，X4是环戊基-CH2-。
[0240] 本发明的又一个实施方案提供了一种化合物，其中各个部分是独立选择的，A是缬氨酸，X1是t-Bu-O-(C＝O)-，X2是金刚烷基-CH2-；X3是Ph-CH2-，X4是异丙基-CH2-。
[0241] 在某些实施方案中，式(I)a或(I)b的化合物还通过由以下各项组成的化合物组例示：
[0242]
[0243]
[0244]
[0245]
[0246]
[0247]
[0248]
[0249]
[0250]
[0251] 其药学上可接受的盐。
[0252] 本发明的一个方面涉及本文公开的化合物。
[0253] 本发明的一个方面涉及是或可以是铁死亡的调节剂的化合物。
[0254] 本发明的一个方面涉及本文公开的化合物在制备用于治疗、预防、抑制或消除肿瘤的药物中的用途。
[0255] 本发明的一个方面涉及本文公开的化合物作为铁死亡的调节剂用于制备药物的用途，所述药物用于通过调节患者的铁死亡来治疗、预防、抑制或消除所述患者的病症或疾病或医学病况。
[0256] 本发明还描述了一种或多种合成本发明的化合物的方法。
[0257] 本发明还描述了本发明的化合物的一种或多种用途。
[0258] 本发明还描述了本发明的化合物与辅助剂一起的一种或多种用途。
[0259] 本发明还描述了一种或多种制备包含本发明的化合物的多种药物组合物的方法。
[0260] 本发明还描述了本发明的多种药物组合物在制备药物中的一种或多种用途，所述药物用于通过调节患者的铁死亡来治疗、预防、抑制或消除所述患者的病症或疾病或医学病况。
[0261] 本发明化合物的药物组合物及其制备和给药
[0262] 本发明提供了药物组合物，其包含本发明的化合物，例如示例性化合物。根据本发明的具体实施例，药物组合物可以进一步包含药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、溶剂及其组合。
[0263] 本发明提供了一种治疗、预防或改善疾病或病症的方法，其包括给药安全且有效量的含有本发明化合物的药物组合物与任选的一种或多种辅助治疗活性剂。本文公开的药物组合物的化合物的量是指能够有效检测到调节生物样品和患者中的铁死亡的量。可以在治疗持续时间内以给药途径将活性成分给药至需要该治疗的受试者，给药计量为提供最佳药物功效的剂量，所述药物功效不限于期望的治疗效果。根据疾病的性质和严重程度、患者的体重、患者随后所遵循的特殊饮食、同时用药以及本领域技术人员将认识到的其他因素，剂量将因患者不同而异。
[0264] 所采用的实际剂量可以根据患者的需求和所治疗病况的严重性而变化。为特定情况确定合适的剂量方案在本领域技术范围内。为了方便起见，可以根据需要将每日总剂量分成多个部分，并在一天内分次给药。本发明化合物和/或其药学上可接受的盐的给药量和给药频率将根据主治医生的判断来调节，其中要考虑诸如患者的年龄、状况和大小以及所治疗症状的严重性等因素。
[0265] 还将理解的是，本发明的某些化合物可以以游离形式存在以用于治疗，或在适当的情况下以其药学上可接受的衍生物或前药存在。药学上可接受的衍生物包括药学上可接受的盐、酯、该酯的盐或任何其他加合物或衍生物，其在向有需要的患者给药后直接或间接地提供如本文其他方面所述的化合物或者其治疗有效的代谢物或残余物。
[0266] 本发明的药物组合物可以以散装形式制备和包装，其中可以提取安全且有效量的本文公开的式(I)a或(I)b的化合物，然后与粉剂或糖浆剂一起给予患者。通常，每天向患者给药0.0001至10mg/kg体重的剂量水平，以获得对谷氨酸传递功能失调的有效调节。可选地，本发明的药物组合物可以以单位剂型制备和包装，其中每个物理上独立的单元含有安全且有效量的本文公开的式(I)a或(I)b的化合物。
[0267] 当本发明的药物组合物除了本发明的化合物之外还含有一种或更多种其他活性成分时，本发明的化合物与第二活性成分的重量比可以变化并且取决于每种成分的有效剂量。因此，例如，当本发明的化合物与另一种试剂组合时，本发明的化合物与另一种试剂的重量比通常在约1000:1至约1:1000，如约200:1至1:200的范围内。本发明化合物和其他活性成分的组合通常也在上述范围内，但在每种情况下，应使用组合中的每种活性成分的有效剂量。
[0268] 如本文所使用的，“药学上可接受的赋形剂”是指赋予药物组合物以形式或一致性所涉及的药学上可接受的材料、组合物或媒介物(vehicle)。当混合时，每种赋形剂需要与药物组合物的其他成分相容，否则当给药至患者时相互作用将会显著降低本发明化合物的功效并且将会产生药学上不可接受的组合物。另外，每种赋形剂当然需要具有足够高的纯度以使其是药学上可接受的。
[0269] 合适的药学上可接受的赋形剂将根据所选的特定剂型而变化。另外，合适的药学上可接受的赋形剂可以针对它们在组合物中可以发挥的特定功能进行选择。例如，某些药学上可接受的赋形剂可能由于其促进产生均匀剂型的能力而被选择。某些药学上可接受的赋形剂可能由于其促进产生稳定剂型的能力而被选择。某些药学上可接受的赋形剂可能由于其促进将本发明的化合物在给药至患者后从身体的一个器官或部分携带或运送至身体的另一器官或部分的能力而被选择。某些药学上可接受的赋形剂可能由于其增强患者的依从性而被选择。
[0270] 合适的药学上可接受的赋形剂包括以下类型的赋形剂：稀释剂，填充剂，粘合剂，崩解剂，润滑剂，助流剂，制粒剂，包衣剂，润湿剂，溶剂，助溶剂，助悬剂，乳化剂，甜味剂，调味剂，掩味剂，着色剂，防结块剂，保湿剂，螯合剂，增塑剂，增粘剂，抗氧化剂，防腐剂，稳定剂，表面活性剂和缓冲剂。技术人员可以理解的是，某些药学上可接受的赋形剂可以发挥一种以上的功能，并且可以发挥替代功能，这取决于调配物中存在多少赋形剂以及调配物中存在什么其他成分。
[0271] 技术人员具有本领域的知识和技能，使得他们能够选择合适量的合适药学上可接受的赋形剂以用于本发明。另外，存在一些本领域技术人员可以获得的资源，其描述了药学上可接受的赋形剂，并且可以用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实施例包括Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company),The Handbook of Pharmaceutical Additives(Gower Publishing Limited),and The Handbook of Pharmaceutical Excipients(the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press)。
[0272] 在Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st edition,2005,ed.D.B.Troy,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia和Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,eds.J.Swarbrick and J.C.Boylan,1988-1999,Marcel Dekker,New York(将其每一个的内容通过引用并入本文)中，公开了用于配制药学上可接受的组合物的各种载体及其已知的制备技术。除非任何常规载体介质与本发明化合物不相容，如通过产生任何不希望的生物学作用或在其他方面以有害的方式与药学上可接受的组合物的任何其他组分相互作用，否则其使用被认为在本发明的范围内。
[0273] 使用本领域技术人员已知的技术和方法来制备本发明的药物组合物。Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)中描述了本领域中常用的一些方法。
[0274] 因此，本发明的另一方面涉及一种制备药物组合物的方法。药物组合物含有本文公开的化合物和药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、媒介物或其组合，所述方法包括混合各个成分。含有本文公开的化合物的药物组合物可以例如在正常环境温度和压力下制备。
[0275] 本发明的化合物典型地将被配制成适合通过所需给药途径给药至患者的剂型。例如，剂型包括适合于以下给药途径的那些剂型：(1)口服给药，如片剂，胶囊剂，囊片，丸剂，锭剂，粉剂，糖浆剂，酏剂，混悬剂，溶液，乳剂，药囊和扁囊剂；(2)肠胃外给药，如无菌溶液，混悬剂和用于重构的粉剂；(3)经皮给药，如经皮贴剂；(4)直肠给药，如栓剂；(5)吸入给药，如气雾剂、溶液和干粉；和(6)局部给药，如霜剂，软膏剂，洗剂，溶液，糊剂，喷雾剂，泡沫剂和凝胶剂。
[0276] 本文提供的药物组合物可以以压制片剂、研制锭剂(tablet triturates)、可咀嚼锭剂、速溶片剂、多次压制片剂或肠溶衣片剂、糖包衣或薄膜包衣片剂提供。肠溶衣片剂是用抗胃酸作用但在肠中溶解或崩解的物质包衣的压制片剂，从而保护活性成分不受胃的酸性环境的影响。肠溶衣包括但不限于脂肪酸、脂肪、水杨酸苯酯、蜡、虫胶、氨化虫胶和邻苯二甲酸醋酸纤维素。糖包衣片剂是被糖衣包围的压制片剂，其可以有益于掩盖令人讨厌的味道或气味并保护片剂免于氧化。薄膜包衣片剂是用水溶性材料的薄层或薄膜覆盖的压制片剂。薄膜包衣包括但不限于羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇4000和邻苯二甲酸醋酸纤维素。薄膜包衣具有与糖包衣相同的一般特性。多次压制片剂是通过一个以上压制循环制成的压制片剂，包括分层片剂以及压制包衣或干包衣片剂。
[0277] 片剂剂型可以由粉末状、结晶或颗粒形式的活性成分单独地或与本文所述的一种或更多种载体或赋形剂(包括粘合剂，崩解剂，控释聚合物，润滑剂，稀释剂和/或着色剂)组合地制备。调味剂和甜味剂尤其可用于可咀嚼片剂和锭剂的形成。
[0278] 本文提供的药物组合物可以作为软胶囊或硬胶囊提供，其可以由明胶、甲基纤维素、淀粉或藻酸钙制成。硬明胶胶囊(也称为干填充胶囊(DFC))由两部分组成，一个部分套在另一个部分上，从而完全包封活性成分。软弹性胶囊(SEC)是柔软的球形外壳，如明胶外壳，其通过添加甘油、山梨糖醇或类似的多元醇进行增塑。软明胶外壳可以含有防腐剂以防止微生物的生长。合适的防腐剂是如本文所述的那些，包括对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯以及抗坏血酸。本文提供的液体、半固体和固体剂型可以被封装在胶囊中。合适的液体和半固体剂型包括在碳酸丙二酯、植物油或甘油三酸酯中的溶液和混悬剂。含有这样的溶液的胶囊可以如美国专利号4,328,245、4,409,239和4,410,545中所述制备。胶囊也可以如本领域技术人员已知的进行包衣以改变或维持活性成分的溶解。
[0279] 本文提供的药物组合物可以以液体和半固体剂型(包括乳剂，溶液，混悬剂，酏剂和糖浆剂)提供。乳剂是两相体系，其中一种液体以小液滴的形式分散在另一种液体中，其可以是水包油型或油包水型。乳剂可以包括药学上可接受的非水性液体或溶剂、乳化剂和防腐剂。混悬剂可以包括药学上可接受的悬浮剂和防腐剂。水性醇溶液可以包括药学上可接受的缩醛，如低级烷基醛的二(低级烷基)缩醛，例如乙醛二乙基缩醛(acetaldehyde diethyl acetal)；以及与水混溶的具有一个或多个羟基基团的溶剂，如丙二醇和乙醇。酏剂是清澈的、增甜性的且是水醇性溶液。糖浆剂是糖例如蔗糖的浓缩水溶液，并且还可以含有防腐剂。对于液体剂型，例如，在聚乙二醇中的溶液可以用足量的药学上可接受的液体载体例如水进行稀释以方便测量进行给药。
[0280] 其他有用的液体和半固体剂型包括但不限于以下那些，其含有本文提供的活性成分和二烷基化的单-或多-亚烷基二醇，二烷基化的单-或多-亚烷基二醇包括1,2-二甲氧基甲烷，二甘醇二甲醚，三甘醇二甲醚，四乙二醇二甲醚，聚乙二醇-350-二甲醚，聚乙二醇-550-二甲醚，聚乙二醇-750-二甲醚，其中350、550和750是指聚乙二醇的近似平均分子量。
这些调配物还可以包含一种或更多种抗氧化剂，如丁羟甲苯(BHT)，丁基羟基茴香醚(BHA)，没食子酸丙酯，维生素E，对苯二酚，羟基香豆素，乙醇胺，卵磷脂，脑磷脂，抗坏血酸，苹果酸，山梨糖醇，磷酸，亚硫酸氢盐，焦亚硫酸钠，硫代二丙酸及其酯以及二硫代氨基甲酸酯。
这些调配物还可以包含一种或更多种抗氧化剂，如丁羟甲苯(BHT)，丁基羟基茴香醚(BHA)，没食子酸丙酯，维生素E，对苯二酚，羟基香豆素，乙醇胺，卵磷脂，脑磷脂，抗坏血酸，苹果酸，山梨糖醇，磷酸，亚硫酸氢盐，焦亚硫酸钠，硫代二丙酸及其酯以及二硫代氨基甲酸酯。
[0281] 在适当的情况下，可以将用于口服给药的剂量单位调配物微胶囊化。调配物还可以制备成延长或维持释放，例如通过将颗粒材料包覆或包埋在聚合物、蜡等中。
[0282] 本文提供的用于口服给药的药物组合物也可以以脂质体、胶束、微球或纳米体系的形式提供。胶束剂型可以如美国专利号6,350,458中所述制备。
[0283] 本文提供的药物组合物可以以非泡腾或泡腾的颗粒剂和粉剂的形式提供，以重构为液体剂型。非泡腾颗粒剂或粉剂中使用的药学上可接受的载体和赋形剂可以包括稀释剂、甜味剂和润湿剂。泡腾颗粒剂或粉剂中使用的药学上可接受的载体和赋形剂可以包括有机酸以及二氧化碳源。
[0284] 着色剂和调味剂可以在所有以上剂型中使用。
[0285] 本文公开的化合物也可以偶联至作为靶向药物载体的可溶性聚合物。这样的聚合物可以涵盖被棕榈酰基取代的聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺基苯酚、聚羟乙基天冬酰胺基苯酚(polyhydroxyethylaspartamidophenol)或聚环氧乙烷聚赖氨酸(polyethylene oxide polylysine)。此外，化合物还可以偶联至适合于实现药物的受控释放的一类可生物降解聚合物，例如聚乳酸聚-ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二羟基吡喃、聚氰基丙烯酸酯以及水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。
[0286] 本文提供的药物组合物可以配制成即释或调释剂型，包括延迟-、持续、脉冲-、受控、靶向-和程序化-释放剂型。
[0287] 本文提供的药物组合物可以与不损害期望的治疗作用的其他活性成分或者与补充期望的作用的物质共同配制。
[0288] 本文提供的药物组合物可以通过注射、输注或植入进行肠胃外给药以局部或全身给药。如本文所使用的，肠胃外给药包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内、滑膜内和皮下给药。
[0289] 本文提供的药物组合物可以以适合于肠胃外给药的任何剂型(包括溶液、混悬剂、乳剂、胶束、脂质体、微球、纳米体系)以及适合于在注射前在液体中形成溶液或混悬剂的固体形式进行配制。这样的剂型可以根据药物科学领域的技术人员已知的常规方法进行制备(参见，Remington:The Science and Practice of Pharmacy，同上)。
[0290] 用于肠胃外给药的药物组合物可以包含一种或多种药学上可接受的载体和赋形剂，包括但不限于水性媒介物，水混溶性媒介物，非水性媒介物，防止微生物生长的抗微生物剂或防腐剂，稳定剂，溶解度增强剂，等渗剂，缓冲剂，抗氧化剂，局部麻醉剂，悬浮剂和分散剂，润湿剂或乳化剂，络合剂，螯合剂(sequestering agent)或钳合剂(chelating agent)，冷冻保护剂，冻干保护剂，增稠剂，pH调节剂和惰性气体。
[0291] 合适的水性媒介物包括但不限于水，盐水，生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)，氯化钠注射液，林格氏注射液，等渗右旋糖注射液，无菌水注射液，右旋糖和乳酸林格氏注射液。非水性媒介物包括但不限于植物来源的固定油，蓖麻油，玉米油，棉籽油，橄榄油，花生油，薄荷油，红花油，芝麻油，大豆油，氢化植物油，氢化大豆油，以及椰子油的中链甘油三酸酯和棕榈籽油。水混溶性媒介物包括但不限于乙醇，1,3-丁二醇，液体聚乙二醇(例如聚乙二醇300和聚乙二醇400)，丙二醇，甘油，N-甲基-2-吡咯烷酮，N,N-二甲基乙酰胺和二甲亚砜。
[0292] 合适的抗微生物剂或防腐剂包括但不限于苯酚，甲酚，汞制剂，苄醇，氯丁醇，对羟基苯甲酸甲酯(methyl p-hydroxybenzoate)和对羟基苯甲酸丙酯(propyl p-hydroxybenzoate)，硫柳汞，苯扎氯铵(例如苄索氯铵)，对羟基苯甲酸甲酯(methyl-paraben，也称为尼泊金甲酯)和对羟基苯甲酸丙酯(propyl-parabens，也称为尼泊金丙酯)，以及山梨酸。合适的等渗剂包括但不限于氯化钠、甘油和右旋糖。合适的缓冲剂包括但不限于磷酸盐和柠檬酸盐。合适的抗氧化剂是本文所述的那些，包括亚硫酸氢盐和焦亚硫酸钠。合适的局部麻醉剂包括但不限于盐酸普鲁卡因。合适的悬浮剂和分散剂是本文所述的那些，包括羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。合适的乳化剂包括本文所述的那些，包括聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯
80和油酸三乙醇胺。合适的螯合剂或钳合剂包括但不限于EDTA。合适的pH调节剂包括但不限于氢氧化钠、盐酸、柠檬酸和乳酸。合适的络合剂包括但不限于环糊精，包括α-环糊精，β-环糊精，羟丙基-β-环糊精，磺基丁基醚-β-环糊精和磺基丁基醚7-β-环糊精CyDex，Lenexa，Kans)。
80和油酸三乙醇胺。合适的螯合剂或钳合剂包括但不限于EDTA。合适的pH调节剂包括但不限于氢氧化钠、盐酸、柠檬酸和乳酸。合适的络合剂包括但不限于环糊精，包括α-环糊精，β-环糊精，羟丙基-β-环糊精，磺基丁基醚-β-环糊精和磺基丁基醚7-β-环糊精CyDex，Lenexa，Kans)。
[0293] 本文提供的药物组合物可以配制用于单剂量或多剂量给药。单剂量调配物包装在安瓿瓶、小瓶或注射器中。多剂量肠胃外调配物需要含有抑制细菌或抑制真菌浓度的抗微生物剂。如本领域已知和实践的，所有肠胃外调配物需要是无菌的。
[0294] 在一个实施方案中，药物组合物作为即用型无菌溶液提供。在另一个实施方案中，药物组合物作为在使用前用无菌媒介物重构的无菌干燥可溶性产品(包括冻干粉剂和皮下注射片剂)提供。在又一个实施方案中，药物组合物作为即用型无菌混悬剂提供。在又一个实施方案中，药物组合物作为在使用前用媒介物重构的无菌干燥不溶性产品提供。在仍然另一个实施方案中，药物组合物作为即用型无菌乳剂提供。
[0295] 药物组合物可以配制成混悬剂、固体、半固体或触变液体，以作为植入的贮库(implanted depot)来给药。在一个实施方案中，本文提供的药物组合物分散在固体内部基质中，该固体内部基质被不溶于体液但允许药物组合物中的活性成分扩散通过的外部聚合物膜包围。
[0296] 合适的内部基质包括聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸丁酯、增塑或未增塑的聚氯乙烯、增塑的尼龙、增塑的聚对苯二甲酸乙二醇酯、天然橡胶、聚异戊二烯、聚异丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、硅橡胶、聚二甲基硅氧烷、有机硅碳酸酯共聚物(silicone carbonate copolymer)、亲水性聚合物如丙烯酸和甲基丙烯酸的酯的水凝胶、胶原蛋白、交联的聚乙烯醇和交联的部分水解的聚乙酸乙烯酯。
[0297] 合适的外部聚合物膜包括聚乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯共聚物、硅橡胶、聚二甲基硅氧烷、氯丁橡胶、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、氯乙烯与乙酸乙烯酯、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯的共聚物，离聚物聚对苯二甲酸乙二醇酯、丁基橡胶、表氯醇橡胶、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三元共聚物和乙烯/乙烯氧基乙醇共聚物。
[0298] 在另一方面，本发明的药物组合物被制备成适于通过吸入给药至患者的剂型，该剂型例如作为干粉、气雾剂、混悬剂或溶液组合物。在一个实施方案中，本发明涉及一种剂型，该剂型适于作为干粉通过吸入给药至患者。在一个实施方案中，本发明涉及一种剂型，该剂型适于作为干粉通过吸入给药至患者。用于通过吸入递送至肺的干粉组合物典型地包含作为细分粉末的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种作为细分粉末的药学上可接受的赋形剂。特别适合用于干粉的药学上可接受的赋形剂是本领域技术人员已知的，并且包括乳糖、淀粉、甘露醇和单糖、二糖和多糖。可以通过例如微粉化和研磨来制备细分粉末。通常，尺寸减小的(例如微粉化的)化合物可以通过约1至约10微米的D50值(例如，如使用激光衍射测量的)来定义。
[0299] 气雾剂可以通过将本文公开的化合物或其药学上可接受的盐悬浮或溶解在液化推进剂中来形成。合适的推进剂包括卤代烃、烃和其他液化气体。代表性的推进剂包括：三氯氟甲烷(推进剂11)，二氯氟甲烷(推进剂12)，二氯四氟乙烷(推进剂114)，四氟乙烷(HFA-134a)，1,1-二氟乙烷(HFA-152a)，二氟甲烷(HFA-32)，五氟乙烷(HFA-12)，七氟丙烷(HFA-
227a)，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，丁烷，异丁烷和戊烷。包含式(I)a或(I)b的化合物或其药学上可接受的盐的气雾剂典型地将经由剂量计量吸入器(MDI)给药至患者。这样的装置是本领域技术人员已知的。
227a)，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，丁烷，异丁烷和戊烷。包含式(I)a或(I)b的化合物或其药学上可接受的盐的气雾剂典型地将经由剂量计量吸入器(MDI)给药至患者。这样的装置是本领域技术人员已知的。
[0300] 气雾剂可以含有典型地与MDI一起使用的另外的药学上可接受的赋形剂如表面活性剂、润滑剂、助溶剂和其他赋形剂，以改善调配物的物理稳定性、改善阀性能、改善溶解性或改善味道。
[0301] 适用于经皮给药的药物组合物可以作为独立贴剂呈现，其旨在与患者的表皮保持紧密接触较长时间。例如，活性成分可以通过如在Pharmaceutical Research,3(6),318(1986)中一般描述的离子透入从贴剂递送。
[0302] 适用于局部给药的药物组合物可以配制成软膏剂、霜剂、混悬剂、洗剂、粉剂、溶液、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。软膏剂、霜剂和凝胶剂可以例如用水性或油性基材进行配制，其中添加合适的增稠剂和/或胶凝剂和/或溶剂。因此，这样的基材可以例如包括水和/或油，如液体石蜡或植物油，如花生油或蓖麻油，或溶剂如聚乙二醇。可以根据基材的性质使用的增稠剂和胶凝剂包括软石蜡、硬脂酸铝、十六十八醇、聚乙二醇、羊毛脂、蜂蜡、聚羧乙烯(carboxypolymethylene)和纤维素衍生物，和/或单硬脂酸甘油酯和/或非离子乳化剂。
[0303] 洗剂可以用水性或油性基材进行配制，并且通常还含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂或增稠剂。
[0304] 用于外部施用的粉剂可以借助任何合适的粉末基质例如滑石、乳糖或淀粉来形成。滴剂可以用还包含一种或多种分散剂、增溶剂、悬浮剂或防腐剂的水性或非水性基材进行配制。
[0305] 每天可以经由一次或多次施用将局部制剂给药至患病区域；在皮肤区域上，可以有利地使用封闭敷料。可以经由粘合剂储库系统实现连续或延长的递送。
[0306] 本发明的化合物和组合物的用途
[0307] 本文公开的本发明的化合物或药物组合物可以以能够有效检测到调节生物样品中的铁死亡，或者调节受试者的相关病症或疾病的量使用。这样的用途可以包括在制造用于治疗、预防、改善或减轻受试者的病症或疾病的药物以及用于调节铁死亡的其他药物中，并且本发明的化合物具有优异的药代动力学和药效学性质和较小的毒副作用。
[0308] 具体地，本发明的组合物的化合物的量可以显示为有效地和可检测地调节生物样品中的铁死亡，或者调节受试者的相关病症或疾病。本发明的化合物或药物组合物可以用于预防、治疗或减轻患者的与铁死亡有关的疾病。
[0309] 在一个实施方案中，本文公开的疗法包括向有需要的患者给药安全且有效量的本发明的化合物或包含本发明的化合物的药物组合物。本文公开的每个实施例包括治疗上述疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者给药安全且有效量的本发明的化合物或含有本发明的化合物的药物组合物。
[0310] 在一个实施方案中，本发明的化合物或其药物组合物可以通过任何合适的给药途径进行给药，既包括全身给药也包括局部给药。全身给药包括口服给药、肠胃外给药、经皮给药和直肠给药。肠胃外给药是指除肠内或经皮以外的给药途径，并且典型地通过注射或输注。肠胃外给药包括静脉内、肌内和皮下注射或输注。局部给药包括施用于皮肤以及眼内、阴道内、吸入和鼻内给药。在一个实施方案中，本发明的化合物或其药物组合物可以口服给药。在另一个实施方案中，本发明的化合物或其药物组合物可以通过吸入给药。在另一个实施方案中，本发明的化合物或其药物组合物可以鼻内给药。
[0311] 在一个实施方案中，本发明的化合物或其药物组合物可以一次给药或根据用药方案给药，其中多个剂量在给定的时间段内以不同的时间间隔给药。例如，剂量可以每天给药一次、两次、三次或四次。在一个实施方案中，剂量每天给药一次。在另一个实施方案中，剂量每天给药两次。可以给药剂量直至达到期望的治疗效果或者无限期地给药以维持期望的治疗效果。用于本发明的化合物或其药物组合物的合适用药方案取决于该化合物的药代动力学性质，例如其吸收、分布以及代谢和消除的半衰期，这可以由技术人员确定。另外，用于本发明的化合物或其药物组合物的合适用药方案(包括该方案给药的持续时间)取决于所治疗的病症、所治疗的病症的严重程度、所治疗患者的年龄和身体状况、所治疗患者的病史、并行疗法的性质、所需的治疗效果等因素，这在技术人员的知识和专长范围内。这样的技术人员将进一步理解的是，鉴于个体患者对用药方案的耐受性或个体患者的需求随时间的变化，合适的用药方案可能需要进行调整。
[0312] 本发明的化合物可以与一种或多种其他治疗剂同时或在其之前或之后给药。本发明的化合物可以通过相同或不同的给药途径单独给药，或与其他药剂在相同的药物组合物中一起给药。
[0313] 对于约50-70kg的受试者，本发明的药物组合物或组合的单位剂量可以为约1-1000mg的活性成分，优选约1-500mg或约1-250mg或约1-150mg或约0.5-100mg或约1-50mg的活性成分。化合物、药物组合物或其组合的治疗有效剂量取决于受试者的种类、体重、年龄和个体状况、所治疗的病症或疾病或其严重性。普通技能的医师、临床医生或兽医可以容易地确定预防、治疗或抑制病症或疾病发展所需的每种活性成分的有效量。
[0314] 上述剂量特性可以与有利地利用哺乳动物，例如小鼠、大鼠、狗、非人灵长类动物，如猴子，或其分离的器官、组织及制剂进行的体外和体内试验相关。本发明的化合物可以以溶液(例如优选水溶液)的形式体外施用，以及可以例如以混悬剂或水溶液的形式经由局部、吸入、肠内或胃肠外(有利地静脉内)体内施用。
[0315] 在一个实施方案中，本文公开的化合物的治疗有效剂量为每天约0.1mg至约1,000mg。药物组合物应提供约0.1mg至约1,000mg化合物的剂量。在一个特定的实施方案中，制备药物剂量单位形式以使每个剂量单位形式提供约1mg至约1,000mg、约10mg至约500mg、约20mg至约200mg、约25mg至约100mg或约30mg至约60mg的活性成分或必要成分的组合。在一个特定的实施方案中，制备药物剂量单位形式以提供约1mg、5mg、10mg、20mg、25mg、50mg、
100mg、250mg、500mg、1000mg的活性成分。
100mg、250mg、500mg、1000mg的活性成分。
[0316] 本发明的优选实施方案
[0317] 一般合成程序
[0318] 提供以下实施例以便可以更充分地理解本发明。然而，应当理解，这些实施方案仅提供了实施本发明的方法，并且本发明不限于这些实施方案。
[0319] 通常，本文公开的化合物可以通过本文描述的方法制备，其中除非另有说明，取代基为如以上针对式(I)a或(I)b所定义的。提供以下非限制性方案和实施例以进一步举例说明本发明。
[0320] 本领域技术人员将认识到，所描述的化学反应可以容易地被改编以制备本文公开的许多其他化合物，并且用于制备本文公开的化合物的替代方法被认为在本文公开的范围内。本领域技术人员将认识到，可以改变起始原料，并采用额外的步骤来产生本发明所涵盖的化合物，如以下实施例所示。在某些情况下，可能需要保护某些反应性官能团以实现某些上述转化。通常，对于有机合成领域的技术人员而言，对保护基的这种需要以及连接和去除该基团所需的条件将是清楚的。例如，可以通过本领域技术人员所清楚的一些的修改，如通过适当地保护干扰基团、通过利用除所述的那些以外的本领域已知的其他合适试剂和/或通过对反应条件进行常规改变，来成功地进行根据本发明的非示例性化合物的合成。可选地，本发明公开的已知的反应条件或反应将被认为对制备本文公开的其他化合物具有适用性。
[0321] 在以下描述的实施例中，除非另有说明，否则所有温度均以摄氏度表示。试剂购自商业供应商，如Aldrich Chemical Company、Arco Chemical Company和Alfa Chemical Company，并且未经进一步纯化即使用，除非另有说明。
[0322] 化合物的制备
[0323] 本发明的化合物，包括其盐、酯、水合物或溶剂化物可以利用任何已知的有机合成技术来制备，以及可以根据许多可能的合成路线中的任何一种路线来合成。
[0324] 用于制备本发明化合物的反应可以在合适的溶剂中进行，所述溶剂可以由有机合成领域的技术人员容易地选择。合适的溶剂可以在进行反应的温度下，例如可以在溶剂的冻结温度到溶剂的沸腾温度范围内的温度下，与起始材料(反应物)、中间体或产物基本上不反应。给定的反应可以在一种溶剂或一种以上溶剂的混合物中进行。根据特定的反应步骤，技术人员可以选择用于特定反应步骤的合适溶剂。
[0325] 可以根据本领域已知的任何合适方法来监测反应。例如，可以通过光谱手段，如核磁共振光谱法(例如1H或13C)、红外光谱法、分光光度法(例如紫外-可见光)、质谱法，或通过色谱方法如高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱(LCMS)或薄层色谱法(TLC)来监测产物形成。化合物可以由本领域技术人员通过多种方法纯化，包括高效液相色谱(HPLC)(“Preparative LC-MS Purification:Improved Compound Specific Method Optimization”Karl F.Blom,Brian Glass,Richard Sparks,Andrew P.Combs J.Combi.Chem.2004,6(6),874-883，将其通过引用整体并入本文)和使用硅胶的大气压柱色谱法。
[0326] 可以利用以下描述的方法，以及合成有机化学领域中已知的合成方法，或者如本领域技术人员所理解的其变形来合成本发明的化合物。优选的方法包括但不限于以下描述的那些方法。具体地，式(I)a或(I)b的本发明化合物可以遵循以下列出的示例性一般合成方案中概述的步骤进行合成，并且合成方案中包括的反应物或反应物的化学基团的缩写在实施例中定义。
[0327] 方案1：以下反应序列用于合成结构A1和A2的化合物
[0328]
[0329] 对于结构A1的合成可以根据参考文献中公开的相关程序进行(1，Journal of the American Chemical Society,2005,127,12460-12461；2，Organic Letter,2011,13,2318–2321；Journal of Organic Chemistry,2010,75,941–944)，但不限于这些公开的程序。在Cp2ZrHCl的存在下，磺酰胺衍生物1与化合物2缩合，得到对映异构体化合物3，将其进一步去除保护基并氧化为酸化合物4。借助于Evans手性助剂，将另一个手性中心添加到化合物4上以提供结构A1。
[0330] 结构A2也可以根据参考文献中公开的相关程序根据替代合成路线进行合成(Journal of Organic Chemistry,2012,77,6358-6364；Organic Process Research&Development 2010,14,441–458；Journal of Organic Chemistry,1994,59,1139-1148)，但不限于这些公开的程序。在化合物5借助于Evans手性助剂，将手性中心添加到化合物6上，化合物6进一步氧化成醛7。经由Julia烯化反应机理，化合物7与化合物4缩合，得到化合物9，其进一步氧化为结构A2。
[0331] 方案2：以下反应序列用于合成结构B的化合物。
[0332]
[0333] 对于结构B的合成可以根据参考文献中公开的相关程序进行(Bulletin of the Chemical Society of Japan,1993,66,3113-3115；US7528174B2)，但不限于这些公开的程序。
[0334] 方案3：以下反应序列用于合成结构C的化合物。
[0335]
[0336] 对于结构C的合成可以根据参考文献中公开的相关程序进行(ACS Central Science,2016,2(9),pp 653–659；Journal of Medicinal Chemistry,1986,959-971；Journal of Medicinal Chemistry,1984,27,684-691)，但不限于这些公开的程序。
[0337] 方案4：以下反应序列用于合成结构D的化合物。
[0338]
[0339] 对于结构D的合成可以根据参考文献中公开的相关程序进行(US2007161573A1；US2009042808A1；Journal of Medicinal Chemistry,1984,27,1351-1354)，但不限于这些公开的程序。
[0340] 方案5：以下反应序列用于合成结构E的化合物。
[0341]
[0342] 对于结构E的合成可以根据参考文献中公开的相关程序进行(US2007161573A1；US2009042808A1；Journal of the American Chemical Society,2005,127,5742-5743；
Journal of Organic Chemistry,2004,69,7851–7859)，但不限于这些公开的程序。
Journal of Organic Chemistry,2004,69,7851–7859)，但不限于这些公开的程序。
[0343] 方案6：当A的PEP(参见定义)是缬氨酸时，以下反应序列用于合成结构F的化合物。
[0344]
[0345] 对于结构F的合成可以根据参考文献中公开的相关程序进行(US2007161573A1；Journal of the American Chemical Society,2005,127,5742-5743；International Journal of Peptide and Protein Research,1996；47,460–466)，但不限于这些公开的程序。
[0346] 方案7：当A的PEP是缬氨酸时，以下反应序列用于合成结构H的化合物。
[0347]
[0348] 对于结构H的合成可以根据参考文献中公开的相关程序进行(US2007161573A1；Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics,2007,320,1050-1060)，但不限于这些公开的程序。
[0349] 示例性化合物的制备和表征
[0350] 本公开涵盖的化合物可以经由不同的方案制备。下文描述了经由各种方案制备那些示例性化合物的详细过程，并列出了表征结果。
[0351] 除非另有说明，所有试剂均购自商业供应商而未经进一步纯化。必要时采用标准方法进行溶剂干燥。用于薄层色谱(TLC)的板是预先涂在铝板上的E.Merck硅胶60F254(0.24nm厚)，然后在UV光(365nm和254nm)下或通过用5％的十二钼磷酸的乙醇溶液染色随后加热而可视。柱色谱法使用购自商业供应商的硅胶(200-400目)进行。在室温下在Agilent 400-MR NMR光谱仪(400.00MHz用于1H)上记录1H NMR光谱。溶剂信号用作1H NMR的参照(CDCl3，7.26ppm；CD3OD，3.31ppm；DMSO-d6，2.50ppm；D2O，4.79ppm)。使用以下NMR首字母缩略词和缩写用于解释多重性：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，br.s.＝宽单峰，dd＝双重双峰，td＝三重双峰，dt＝双重三峰，dq＝双重四峰，m＝多重峰。实施例
[0352] 应当注意，以下详细描述的本发明的实施方案仅是示例性的用于解释本发明，而不应解释为限制本发明的范围。没有特定技术或条件的实施例可以根据本领域文献中记载的技术或条件或根据产品说明来实施。没有制造商的试剂或仪器可通过常规购买获得。本领域技术人员将认识到，可以改变起始原料，以及采用额外的步骤来制备本发明所涵盖的化合物，如以下实施例所示。
[0353]
[0354] 实施例1：((4S,7S,E)-7-苄基-8-((S)-2-(((S)-6-(3-(4,5-二甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙酰氨基)-1-(异丙氨基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基)氨基甲酸叔丁酯(I)，
[0355] N-[(4S,5E,7S)-7-苄基-8-[(2S)-2-{[(1S)-5-({[3-(4,5-二甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙氧基]羰基}氨基)-1-[(丙-2-基)氨基甲酰基]戊基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-2-甲基-8-氧代-辛-5-烯-4-基]氨基甲酸叔丁酯(II)
[0356] N-[(4S,5E,7S)-7-苄基-8-[(2S)-2-{[(1S)-5-[({[10-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)癸基]氧基}羰基)氨基]-1-[(丙-2-基)氨基甲酰基]戊基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基]氨基甲酸叔丁酯(III)[0357]
[0358] 步骤1：合成(S)-(6-(异丙氨基)-6-氧代己烷-1,5-二基)二氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基叔丁基酯(52)
[0359] 在0℃下向化合物51(500mg，1.07mmol)和丙-2-胺(76mg，1.28mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入T3P(714mg，1.28mmol)和DIEA(165mg，1.28mmol)。将反应混合物温热至25℃并搅拌16h。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(20mL)猝灭，并用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层用(5％)NaHCO3水溶液、HCl水溶液(10mL，1M)、盐水溶液(3×10mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。将剩余物在真空中浓缩，得到产物52(480mg，88％)，为白色泡沫。
[0360] MS(ESI)：[M+H+]＝496.2。
[0361] 步骤2：合成(S)-(5-氨基-6-(异丙氨基)-6-氧代己基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(53)
[0362] 将化合物52(480mg，0.94mmol)在MeOH中的HCl(10mL，3M)中的溶液在25℃下搅拌2h，然后将溶剂在真空中除去，得到产物53(384mg，100％)，为白色泡沫。
[0363] MS(ESI)：[M+H+]＝396.1。
[0364] 步骤3：合成(S)-2-(((R)-6-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-1-(异丙氨基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(54)
[0365] 在0℃下向化合物53(384mg，0.94mmol)和(S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-甲酸(243mg，1.1.13mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入T3P(720mg，1.13mmol)和DIEA(146mg，1.13mmol)。将反应混合物温热至25℃并搅拌16h。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(10mL)猝灭，并用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层用(5％)NaHCO3水溶液(10mL)、HCl水溶液(2×
10mL，1M)、饱和盐水溶液(3×10mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。将有机层在真空中浓缩，得到产物54(530mg，87％)，为白色泡沫。
10mL，1M)、饱和盐水溶液(3×10mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。将有机层在真空中浓缩，得到产物54(530mg，87％)，为白色泡沫。
[0366] MS(ESI)：[M+H+]＝593.4。
[0367] 步骤4：合成((S)-6-(异丙氨基)-6-氧代-5-((S)-吡咯烷-2-酰氨基)己基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(55)
[0368] 将化合物54(250mg，0.41mmol)在MeOH中的HCl(10mL，3M)中的溶液在25℃下搅拌2h，然后在真空中浓缩，得到产物55(207mg，100％)，为白色泡沫。
[0369] MS(ESI)：[M+H+]＝493.3。
[0370] 步骤5：合成N-[(5S)-5-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-苄基-5-{[(丁氧基)羰基]氨基}-7-甲基辛-3-烯酰基]吡咯烷-2-基]甲酰氨基}-5-[(丙-2-基)氨基甲酰基]戊基]氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(56)
[0371] 在0℃下向化合物55(207mg，0.41mmol)和(2S,5S,E)-2-苄基-5-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-甲基辛-3-烯酸(70，结构A1(X3＝苄基)，合成自Journal of the American Chemical Society,2005,127,12460-12461；2，和Organic Letter,2011,13,2318–2321)(177mg，0.49mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入T3P(340mg，0.53mmol)和DIEA(106mg，0.82mmol)。将反应混合物温热至25℃并搅拌16h。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(10mL)猝灭，并用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有机层用HCl水溶液(2×10mL，1M)、饱和盐水溶液(3×10mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。将有机层在真空中浓缩并且将剩余物通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1至1:1)纯化，得到产物56(308mg，89％)，为白色泡沫。
[0372] MS(ESI)：[M+H+]＝836.5。
[0373] 步骤6：合成((4S,7S,E)-8-((S)-2-(((S)-6-氨基-1-(异丙氨基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-7-苄基-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基)氨基甲酸叔丁基酯(57)
[0374] 在25℃下向化合物56(308mg，0.36mmol)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中加入DBU(164mg，1.08mmol)并将混合物搅拌30min。然后将溶剂在真空中浓缩，得到产物57(225mg，100％)，为黄色油状物。
[0375] MS(ESI)：[M+H+]＝493.3。
[0376] 步骤7：合成1,4-二甲氧基-2,3,5-三甲基苯(59)
[0377] 向化合物58(10g，66mmol)在丙酮(100mL)中的溶液中加入Me2SO4(21.0g，165mmol)和K2CO3(36.0g，264mmol)。在将反应混合物在60℃下搅拌16小时后，接着在真空中浓缩。向烧瓶中加入饱和盐水溶液(200mL)并将所得的混合物用EtOAc(3×50mL)萃取。合并的有机层用水(2×50mL)洗涤并用Na2SO4干燥。将溶剂在真空中浓缩并且使剩余物经过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至10:1)，得到产物59(7.2g，61％)，为白色固体。
[0378] 步骤8：合成2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯甲醛(60)
[0379] 将化合物59(7.2g，40mmol)溶解在TFA(50mL)中，然后向上述溶液中加入六亚甲基四胺(6.2g，44mmol)。将反应混合物在干燥条件下回流2小时。将TFA的溶剂在减压下蒸发，并将剩余物溶解在EtOAc(50mL)中并将有机溶液用水(3×50mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将有机层在真空中浓缩并且使剩余物经过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至10:1)，得到产物60(4.5g，54％)，为白色固体。
[0380] 步骤9：合成3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙烯酸乙酯(61)
[0381] 在0℃下向2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(3.4g，15mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入NaH(600mg，15mmol)，在将反应混合物在0℃下搅拌15min之后，接着加入化合物60(2.1g，10mmol)在THF(10mL)中的溶液。将反应混合物搅拌1h，然后用水(40mL)猝灭并用EtOAc(50mL)萃取。将有机层用水(2×50mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。将有机层在真空中浓缩并使剩余物在硅胶上进行柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至10:1)，得到产物61(2.2g，79％)，为白色固体。
[0382] MS(ESI)：[M+H+]＝278.9。
[0383] 步骤10：合成3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙酸乙酯(62)
[0384] 将化合物61(2.2g，7.9mmol)溶解在甲醇(20mL)中，然后向上述溶液中加入Pd/C(50mg，10％w/w)。将反应混合物在室温下在氢气氛中搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在真空中浓缩，得到产物62(2.2g，100％)，为黄色油状物。
[0385] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.17-3.14(dd,J＝4.0Hz,2H),3.68(s,3H),3.65(s,3H),2.93-2.95(m,2H),2.46-2.49(m,2H),2.23(s,3H),2.20(s,6H),2.25-2.28(t,J＝4.0,
8.0Hz,3H)。
8.0Hz,3H)。
[0386] 步骤11：合成3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙-1-醇(63)
[0387] 将化合物62(500mg，1.8mmol)溶解在THF(10mL)中，接着在0℃下将LiAlH4(80mg，2.1mmol)加入到所得的溶液中。在0℃下将反应混合物搅拌1h，然后相继地用水(0.81mL)、NaOH水溶液(0.81mL，10％)和水(0.81mL)猝灭。将混合物用EtOAc(20mL)稀释并用MgSO4干燥。将混合物搅拌10min，过滤并将滤液在真空中浓缩，得到产物63(320mg，75％)，为黄色油状物。
[0388] MS(ESI)：[M+H+]＝238.9。
[0389] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.68(s,3H),3.65(s,3H),3.49(s,2H),2.76-2.71(m,3H),2.22(s,3H),2.18(s,6H),1.76-1.74(m,2H)。
[0390] 步骤12：合成2-(3-羟丙基)-3,5,6-三甲基环己-2,5-二烯-1,4-二酮(64)[0391] 将化合物63(320mg，1.3mmol)在THF(10mL)中的溶液用水(5mL)稀释，并在0℃下加入硝酸铈铵(CAN)(1.4g，2.6mmol)在5mL水中的过量溶液。将混合物在室温下搅拌2h。将THF在真空下除去并且粗制混合物用三份EtOAc(20mL)萃取。将有机层用饱和盐水溶液(2×20mL)洗涤直至水洗达到pH 7.0-7.4，然后用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1至2:1)纯化，得到产物64(210mg，78％)，为黄色固体。
[0392] MS(ESI)：[M+H+]＝208.9。
[0393] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.58-3.56(m,2H),2.60-2.57(m,2H),2.12(s,1H),2.04-2.01(m,9H),1.70-1.67(m,2H)。
[0394] 步骤13：合成氯甲酸3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙酯(65)
[0395] 在0℃下向碳酸双(三氯甲基)酯(324mg，1.1mmol)在甲苯(10mL)中的溶液中加入吡啶(100mg，15mmol)并搅拌30min。然后，加入化合物64(200mg，0.85mmol)在甲苯(2mL)中的溶液，接着将反应在0℃下搅拌30min，用水(10mL)稀释并用EtOAc(10mL)萃取。将有机层用水(2×20mL)洗涤并用Na2SO4干燥。将有机层在减压下浓缩并且使剩余物经过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至10:1)，得到产物65(140mg，61％)，为红色油状物。
[0396] MS(ESI)：[M+H+]＝271.2。
[0397] 步骤14：合成3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙酸(66)
[0398] 将化合物62(500mg，1.8mmol)在THF/MeOH(4.0/1.0mL)中的溶液用LiOH.H2O(152mg，3.6mmol，在0.5mL水中)处理。将反应混合物在25℃下搅拌2h，然后将溶剂在真空中除去并将所得的混合物用EtOAc(20mL)和HCl水溶液(1M)粉碎直至pH 3。将有机相与水相分离并且将水相用EtOAc(2×10mL)萃取。合并的有机层用饱和盐水溶液(2×10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并在真空中浓缩，得到产物66(430mg，95％)，其未经纯化用于下一步骤。
[0399] MS(ESI)：[M+H+]＝252.9。
[0400] 步骤15：合成3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙酸(67)[0401] 将化合物66(430mg，1.7mmol)在THF(8mL)中的溶液用水(2mL)稀释，并在0℃下加入硝酸铈铵(CAN，1.9g，3.4mmol)在5mL水中的过量溶液。将混合物在室温下搅拌2h。将THF在真空下除去并且粗制混合物用三份EtOAc(20mL)萃取。合并的有机层用饱和盐水溶液(20mL)洗涤直至水洗达到pH～7.0，然后用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1至2:1)纯化，得到产物67(300mg，80％)，为红色油状物。
[0402] MS(ESI)：[M+H+]＝223.3。
[0403] 步骤16：合成((4S,7S,E)-7-苄基-8-((S)-2-(((S)-6-(3-(4,5-二甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙酰氨基)-1-(异丙氨基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基)氨基甲酸叔丁酯(I)
[0404] 在0℃下向化合物57(150mg，0.24mmol)和67(59mg，0.26mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入T3P(198mg，0.31mmol)和DIEA(40mg，0.31mmol)。将反应混合物温热至25℃并搅拌2h。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液猝灭，并用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有机层用(5％)NaHCO3水溶液、饱和盐水溶液(3×10mL)洗涤并用Na2SO4干燥。在减压下浓缩之后，将剩余物通过prep-HPLC(Venusil XBP C18(5μm，30×250mm)，洗脱剂中的0.1％HCl)纯化，得到产物I(40mg，20％)，为黄色固体。
[0405] MS(ESI)：[M+H+]＝832.5。
[0406] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.24-7.12(m,5H),6.74-6.73(m,1H),6.32-6.39(m,2H),5.41-5.55(m,2H),5.06(s,1H),4.39-4.41(m,2H),4.06-4.08(m,2H),3.19-3.39(m,6H),
2.76-2.79(m,3H),2.28-2.29(m,2H),1.18-2.05(m,37H),0.85-0.87(m,6H)。
2.76-2.79(m,3H),2.28-2.29(m,2H),1.18-2.05(m,37H),0.85-0.87(m,6H)。
[0407] 步骤17：合成N-[(4S,5E,7S)-7-苄基-8-[(2S)-2-{[(1S)-5-({[3-(4,5-二甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙氧基]羰基}氨基)-1-[(丙-2-基)氨基甲酰基]戊基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基]氨基甲酸叔丁酯(II)
[0408] 在0℃下向化合物57(320mg，0.51mmol)和化合物65(165mg，0.61mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入DIEA(79mg，0.61mmol)。将反应混合物温热至25℃并搅拌2h。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(20mL)猝灭，并用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有机层用饱和盐水溶液(3×10mL)洗涤并用Na2SO4干燥。将在减压下浓缩后的剩余物通过prep-HPLC(Venusil XBP C18(5μm，30×250mm)，洗脱剂中的0.1％HCl)纯化，得到产物II(70mg，16％)，为黄色固体。
[0409] MS(ESI)：[M+H+]＝862.6。
[0410] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.24-7.12(m,5H),6.8-6.70(m,1H),6.25-6.26(m,1H),5.39-5.57(m,2H),5.03(s,1H),4.40-4.41(m,2H),4.01-4.07(m,3H),3.11-3.38(m,5H),
2.50-2.54(m,2H),1.17-2.00(m,43H),0.84-0.87(m,6H)。
2.50-2.54(m,2H),1.17-2.00(m,43H),0.84-0.87(m,6H)。
[0411] 步骤17：合成N-[(4S,5E,7S)-7-苄基-8-[(2S)-2-{[(1S)-5-[({[10-(4,5-二甲氧基-2-甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)癸基]氧基}羰基)氨基]-1-[(丙-2-基)氨基甲酰基]戊基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基]氨基甲酸叔丁酯(III)
[0412] 在0℃下向化合物57(110mg，0.18mmol)和化合物69(77mg，0.2mmol，通过与化合物65类似的方法合成)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入DIEA(47mg，0.36mmol)。将反应混合物温热至25℃并搅拌2h。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(20mL)猝灭，并用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有机层用饱和盐水(3×10mL)水溶液洗涤并用Na2SO4干燥。将在减压下浓缩后的剩余物通过prep-HPLC(Venusil XBP C18(5μm，30×250mm)，洗脱剂中的0.1％HCl)纯化，得到产物III(40mg，22％)，为黄色固体。
[0413] MS(ESI)：[M+H+]＝992.7。
[0414] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.24-7.12(m,5H),6.71-6.69(m,1H),6.30-6.28(m,1H),5.58-5.57(m,1H),5.44-5.39(m,1H),5.07(s,1H),4.41-4.40(m,2H),4.07-3.97(m,9H),
3.38-3.11(m,6H),2.72-2.68(m,2H),2.44-2.43(m,2H),2.02-1.17(m,50H),0.86-0.84(m,
6H)。
3.38-3.11(m,6H),2.72-2.68(m,2H),2.44-2.43(m,2H),2.02-1.17(m,50H),0.86-0.84(m,
6H)。
[0415] 实施例2：((4S,7S,E)-7-苄基-8-((S)-2-(((S)-6-(3-(4,5-二甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙酰氨基)-1-(异丙氨基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基)氨基甲酸叔丁酯(IV)和合成N-[(4S,5E,7S)-7-苄基-8-[(2S)-2-{[(1S)-5-({[3-(4,5-二甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙氧基]羰基}氨基)-1-[(丙-2-基)氨基甲酰基]戊基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基]氨基甲酸叔丁酯(V)
[0416]
[0417] 步骤1：合成1,4-二甲氧基-2,3-二甲基苯(72)
[0418] 向化合物71(5g，36.2mmol)在丙酮(100mL)中的溶液中加入Me2SO4(18.2g，144.8mmol)和K2CO3(25g，181mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌16小时，然后将溶剂在真空中浓缩。向烧瓶中加入饱和盐水溶液(200mL)并将所得的混合物用EtOAc(3×50mL)萃取。合并的有机层用水(2×50mL)洗涤并用Na2SO4干燥。将溶剂在减压下蒸发并且使剩余物经过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至10:1)，得到产物72(5.5g，92％)，为白色固体。
[0419] 步骤2：合成2,5-二甲氧基-3,4-二甲基苯甲醛(73)
[0420] 将化合物72(5g，30.1mmol)溶解在TFA(50mL)中并向所得的溶液中加入六亚甲基四胺(4.7g，33.1mmol)。将反应混合物在干燥条件下回流2小时。将TFA在减压下蒸发并将剩余物溶解在EtOAc(100mL)中。并将所得的有机溶液用水(3×50mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将溶剂有机相在真空中蒸发浓缩并且使剩余物经过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至
10:1)，得到产物73(3.1g，53％)，为白色固体。
10:1)，得到产物73(3.1g，53％)，为白色固体。
[0421] 步骤3：合成3-(2,5-二甲氧基-3,4-二甲基苯基)丙烯酸乙酯(74)
[0422] 在0℃下向2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(3.1g，16mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入NaH(660mg，16mmol)，并将反应混合物在0℃下搅拌15min，然后加入73(2.2g，10.2mmol)在THF(10mL)中的溶液。将反应混合物搅拌10min，加入水(40mL)并将所得物用EtOAc(50mL)萃取。将有机层用水(2×50ml)洗涤并用Na2SO4干燥。将有机层中的溶剂在减压下蒸发并使剩余物经过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至10:1)，得到产物74(3.4g，
81％)，为白色固体。
81％)，为白色固体。
[0423] 步骤4：合成3-(2,5-二甲氧基-3,4-二甲基苯基)丙酸乙酯(75)
[0424] 将化合物74(3.4g，7.9mmol)溶解在甲醇(20mL)中，然后向上述溶液中加入Pd/C(50mg，10％w/w)。将反应混合物在室温下在氢气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在真空中浓缩，得到产物75(3.4g，100％)，为黄色油状物。
[0425] MS(ESI)：[M+H+]＝266.9。
[0426] 步骤5：合成3-(2,5-二甲氧基-3,4-二甲基苯基)丙-1-醇(76)
[0427] 将化合物75(500mg，1.9mmol)溶解在THF(10mL)中，然后在0℃下向所得的溶液中加入LiAlH4(80mg，2.1mmol)。在0℃下将反应混合物搅拌1h，然后相继用水(0.81mL)、NaOH水溶液(0.81mL，10％)和水(0.81mL)猝灭。向混合物加入EtOAc(10mL)进行稀释并用MgSO4干燥。将混合物搅拌10min并过滤。并将滤液在真空中浓缩，得到产物76(350mg，82％)，为黄色油状物。
[0428] 步骤6：合成5-(3-羟丙基)-2,3-二甲基环己-2,5-二烯-1,4-二酮(77)
[0429] 将化合物76(350mg，1.6mmol)在THF(10mL)中的溶液用水(5mL)稀释，并在0℃下加入硝酸铈铵(CAN，1.8g，3.2mmol)在5mL水中的过量溶液。将混合物在室温下搅拌2h。反应的进展通过TLC进行监测。在完成之后，将THF在真空下除去并且将粗制混合物用三份EtOAc(3×20mL)萃取。合并的有机层用饱和盐水溶液洗涤，然后用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1至2:1)纯化，得到产物77(210mg，68％)，为黄色固体。
[0430] MS(ESI)：[M+H+]＝194.8。
[0431] 步骤7：合成氯甲酸3-(4,5-二甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙酯(78)[0432] 在0℃下向碳酸双(三氯甲基)酯(210mg，1.1mmol)在甲苯(10mL)中的溶液中加入吡啶(100mg，15mmol)并搅拌30min。然后，在0℃下向反应中加入化合物7(200mg，0.85mmol)在甲苯(2mL)中的溶液。将反应混合物在0℃下搅拌30min，用水(40mL)稀释并用EtOAc(50mL)萃取。将有机层用水(2×50mL)洗涤并用Na2SO4干燥。将有机层在真空中浓缩并使剩余物经过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至10:1)，得到产物78(140mg，50％)，为红色油状物。
[0433] MS(ESI)：[M+H+]＝256.8。
[0434] 步骤8：合成3-(2,5-二甲氧基-3,4-二甲基苯基)丙酸(79)
[0435] 在0℃下将化合物75(500mg，1.9mmol)在THF/MeOH(4.0/1.0mL)中的溶液用LiOH.H2O(152mg，3.8mmol，在0.5mL水中)处理。然后，将反应混合物在25℃下搅拌2h，并将溶剂在真空中浓缩并将所得的混合物用EtOAc(20mL)和HCl水溶液(1M)粉碎直至pH 3。将有机相与水相分离。将水相用EtOAc(2×10mL)萃取，并将合并的有机层用饱和盐水溶液(2×10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并在真空中浓缩，得到产物79(380mg，84％)，其未经纯化作为粗制品被携带用于下一步骤。
[0436] MS(ESI)：[M+H+]＝238.9。
[0437] 步骤9：合成3-(4,5-二甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙酸(80)[0438] 将化合物79(380mg，1.6mmol)在THF(8mL)中的溶液用水(2mL)稀释，并且在0℃下加入硝酸铈铵(CAN)(1.9g，3.4mmol)在5mL水中的过量溶液。将混合物在室温下搅拌2h。反应的进展通过TLC监测。在完成之后，将THF在真空下除去并将粗制剩余物用三份EtOAc(3×20mL)萃取。合并的有机层用饱和盐水溶液(20mL)洗涤，然后用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1至2:1)纯化，得到产物80(110mg，
33％)，为红色油状物。
33％)，为红色油状物。
[0439] MS(ESI)：[M+H+]＝208.8。
[0440] 步骤10：合成((4S,7S,E)-7-苄基-8-((S)-2-(((S)-6-(3-(4,5-二甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙酰氨基)-1-(异丙氨基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基)氨基甲酸叔丁酯(IV)
[0441] 在0℃下向化合物6757(150mg，0.24mmol)和化合物80(54mg，0.26mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入T3P(198mg，0.31mmol)和DIEA(40mg，0.31mmol)。将反应混合物温热至25℃并搅拌2h。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(20mL)猝灭，并用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层用(5％)NaHCO3水溶液(20mL)、盐水(3×10mL)洗涤并用Na2SO4干燥。将剩余物在减压下蒸发并通过prep-HPLC(Venusil XBP C18(5μm，30×250mm)，洗脱剂中的0.1％HCl)纯化，得到产物IV(42mg，21％)，为黄色固体。
[0442] MS(ESI)：[M+H+]＝818.6。
[0443] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.24-7.00(m,6H),6.64(s,1H),6.33-6.31(m,1H),5.62-5.56(m,1H),5.44-5.41(m,1H),4.80(s,1H),4.42-4.40(m,2H),4.08-4.05(m,2H),3.41-
3.07(m,5H),2.77-2.41(m,3H),2.07-1.17(m,37H),0.88-0.86(m,6H)。
3.07(m,5H),2.77-2.41(m,3H),2.07-1.17(m,37H),0.88-0.86(m,6H)。
[0444] 步骤2：合成N-[(4S,5E,7S)-7-苄基-8-[(2S)-2-{[(1S)-5-({[3-(4,5-二甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙氧基]羰基}氨基)-1-[(丙-2-基)氨基甲酰基]戊基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基]氨基甲酸叔丁酯(V)
[0445] 在0℃下向化合物67(320mg，0.51mmol)和化合物88(156mg，0.61mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入DIEA(79mg，0.61mmol)。将反应混合物温热至25℃并搅拌2h。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液猝灭，并用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层用盐水(3×10mL)洗涤并用Na2SO4干燥。将剩余物在真空中浓缩并通过pre-HPLC(Venusil XBP C18(5μm，30×250mm)，洗脱剂中的0.1％HCl)纯化，得到产物V(45mg，10％)，为黄色固体。
[0446] MS(ESI)：[M+H+]＝848.5。
[0447] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.24-7.13(m,5H),6.77-6.48(m,2H),5.62-5.56(m,1H),5.44-5.41(m,1H),5.39-5.20(m,1H),4.41-4.33(m,2H),4.08-4.05(m,3H),3.73-3.11(m,
7H),2.79-2.47(m,2H),2.01-1.17(m,39H),0.87-0.85(m,6H)。
7H),2.79-2.47(m,2H),2.01-1.17(m,39H),0.87-0.85(m,6H)。
[0448] 实施例3：((4S,7S,E)-7-苄基-8-((S)-2-(((S)-1-(异丙氨基)-1-氧代-6-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)己-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-2-甲基-
8-氧代辛-5-烯-4-基)氨基甲酸叔丁酯(VI)
8-氧代辛-5-烯-4-基)氨基甲酸叔丁酯(VI)
[0449]
[0450] 步骤1：合成(S)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-苄基2-叔丁基酯(92)
[0451] 向化合物91(1g，5.4mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入NaH(238mg，5.95mmol，在油中的60％)，然后将混合物在25°下搅拌30min，随后向上述混合物中加入CbzCl(1.02g，5.95mmol)并且继续搅拌另外20h。将溶液在真空中浓缩，向剩余物中加入饱和NH4Cl水溶液(100mL)并用EtOAc(2×100mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将粗产物在硅胶柱上(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化，得到标题化合物92(1g，58％)，为无色油状物。
[0452] MS(ESI)：[M+H+]＝319.9。
[0453] 步骤2：合成(S)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-5-羟基戊酸叔丁酯(93)
[0454] 向化合物92(1g，3.13mmol)、KH2PO4(3.2g，23.5mmol)在MeOH(25mL)和H2O(5mL)中的溶液中加入NaBH4(893mg，23.5mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h，然后将有机溶液在真空中浓缩。向剩余物中加入EtOAc(100mL)并用H2O(3×50mL)洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩，得到标题化合物93(1g，100％)，为无色油状物。
[0455] MS(ESI)：[M+H+]＝324.0。
[0456] 步骤3：合成(S)-5-(苯并[d]噻唑-2-基硫代)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)戊酸叔丁酯(94)
[0457] 在0℃下向化合物93(1g，3.13mmol)、苯并[d]噻唑-2-硫醇(620mg，3.7mmol)、Ph3P(969mg，3.7mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入DIAD(747mg，3.7mmol)。将混合物在0℃下搅拌3h，然后将有机溶液在真空中浓缩。向剩余物中加入EtOAc(100mL)并用H2O(3×50mL)洗涤。将有机相浓缩并在硅胶柱上(石油醚/EtOAc＝5:1)纯化，得到标题化合物94(1.33g，90％)，为无色油状物。
[0458] MS(ESI)：[M+H+]＝473.1。
[0459] 步骤4：合成(S)-5-(苯并[d]噻唑-2-基磺酰基)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)戊酸叔丁酯(95)
[0460] 向化合物94(1.33g，2.8mmol)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中加入m-CPBA(1.07g，6.2mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h，然后将有机溶液在真空中浓缩。向剩余物中加入EtOAc(100mL)并用水中的2N Na2CO3(3×50mL)洗涤。将有机相浓缩并通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1)纯化，得到标题化合物95(930mg，66％)，为无色油状物。
[0461] MS(ESI)：[M+H+]＝505.1。
[0462] 步骤5：合成(S,Z)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-6-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)己-5-烯酸叔丁酯(96)
[0463] 在N2气氛下在-78℃下向化合物95(930mg，1.85mmol)在THF(25mL)中的溶液中加入KHMDS(6.1mL，6.1mmol，THF中的1M)。将混合物在-78℃下搅拌30min，然后加入在THF(5mL)中的2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯甲醛(384mg，1.85mmol)并在-78℃下搅拌3h，然后温热至0℃并搅拌另外0.5h。将混合物用H2O(50mL)猝灭并用EtOAc(50mL)萃取。将有机相用盐水(3×50mL)洗涤，浓缩并通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1)纯化，得到标题化合物96(443mg，48％)，为橙色油状物。
[0464] MS(ESI)：[M+H+]＝498.2。
[0465] 步骤6：合成(S,Z)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-6-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)己-5-烯酸(97)
[0466] 向化合物96(443mg，0.89mmol)在CH2Cl2(25mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。将混合物在25℃下搅拌18h，然后在真空中浓缩，得到标题化合物97(393mg，100％)，为黄色固体。
[0467] MS(ESI)：[M+H+]＝442.0。
[0468] 步骤7：合成(S,Z)-(6-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)-1-(异丙氨基)-1-氧代己-5-烯-2-基)氨基甲酸苄酯(98)
[0469] 向化合物97(393mg，0.89mmol)、丙-2-胺(158mg，2.7mmol)、DIEA(344mg，2.7mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入T3P(736mg，1.2mmol)。将混合物在25℃下搅拌12h，然后将有机溶液在真空中浓缩。向剩余物中加入EtOAc(100mL)并用H2O(3×50mL)洗涤。收集有机相并在真空中浓缩，得到标题化合物98(430mg，100％)，为黄色固体。
[0470] MS(ESI)：[M+H+]＝483.1。
[0471] 步骤8：合成(S)-2-氨基-6-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)-N-异丙基己酰胺(99)
[0472] 向化合物98(430mg，0.89mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入Pd/C(50mg，10％)。将混合物在25℃下在H2气氛下搅拌12h，过滤，并将固体用MeOH(5mL)洗涤。将有机滤液合并并在真空中浓缩，得到标题化合物99(311mg，100％)，为黄色固体。
[0473] MS(ESI)：[M+H+]＝351.0。
[0474] 步骤9：合成(S)-(6-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)-1-(异丙氨基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100)
[0475] 向化合物99(311mg，0.89mmol)、Et3N(180mg，1.78mmol)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入Boc2O(215mg，0.98mmol)。将混合物在25℃下搅拌3h，然后将有机溶液浓缩。向剩余物中加入EtOAc(100mL)并用H2O(3×50mL)洗涤。收集有机相并浓缩，得到标题化合物100(401mg，100％)，为黄色固体。
[0476] MS(ESI)：[M+H+]＝451.2。
[0477] 步骤10：合成(S)-(1-(异丙氨基)-1-氧代-6-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)己-2-基)氨基甲酸叔丁酯(101)
[0478] 向化合物100(401mg，0.89mmol)在CH3CN(10mL)和H2O(10mL)中的溶液中加入CAN(975mg，1.78mmol)。将混合物在25℃下搅拌3h，然后将有机溶液在真空中浓缩。向剩余物中加入EtOAc(100mL)并用H2O(3×50mL)洗涤。将有机相浓缩并通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1)纯化，得到标题化合物101(104mg，28％)，为黄色固体。
[0479] MS(ESI)：[M+H+]＝421.1。
[0480] 步骤11：合成(S)-2-氨基-N-异丙基-6-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)己酰胺(102)
[0481] 向EtOAc(5mL)中的化合物101(104mg，0.25mmol)中加入MeOH中的HCl(5mL，3M)，然后将混合物在25℃下搅拌1h。将有机溶液在真空中浓缩，得到标题化合物102(79mg，100％)，为黄色固体。
[0482] MS(ESI)：[M+H+]＝321.0。
[0483] 步骤12：合成(S)-2-(((S)-1-(异丙氨基)-1-氧代-6-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)己-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(103)
[0484] 向化合物102(79mg，0.25mmol)、(S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸(81mg，0.38mmol)、DIEA(97mg，0.75mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入T3P(206mg，0.33mmol)。
将混合物在25℃下搅拌12h，然后将混合物在真空中浓缩。向剩余物中加入EtOAc(100mL)并用H2O(3×50mL)洗涤。收集有机相并在真空中浓缩，得到标题化合物103(129mg，100％)，为黄色固体。
将混合物在25℃下搅拌12h，然后将混合物在真空中浓缩。向剩余物中加入EtOAc(100mL)并用H2O(3×50mL)洗涤。收集有机相并在真空中浓缩，得到标题化合物103(129mg，100％)，为黄色固体。
[0485] MS(ESI)：[M+H+]＝510.2。
[0486] 步骤13：合成(S)-N-((S)-1-(异丙氨基)-1-氧代-6-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)己-2-基)吡咯烷-2-甲酰胺(104)
[0487] 向化合物103(129mg，0.25mmol)中加入MeOH中的HCl(3mL，3M)和EtOAc(3mL)，然后将混合物在25℃下搅拌1h。将有机溶液在真空中浓缩，得到标题化合物104(104mg，100％)，为黄色固体。
[0488] MS(ESI)：[M+H+]＝418.1。
[0489] 步骤14：合成((4S,7S,E)-7-苄基-8-((S)-2-(((S)-1-(异丙氨基)-1-氧代-6-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)己-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基)氨基甲酸叔丁酯(VI)
[0490] 向化合物104(104mg，0.25mmol)、(2S,5S,E)-2-苄基-5-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-甲基辛-3-烯酸(70，90mg，0.25mmol)、DIEA(97mg，0.75mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入T3P(206mg，0.33mmol)。将混合物在25℃下搅拌2h并在真空中浓缩。向剩余物中加入EtOAc(50mL)并用H2O(3×50mL)洗涤。将有机相浓缩并通过prep-HPLC(Durashell C18(10μm，30×250mm)，洗脱剂中的0.5％NH3.H2O)纯化，得到标题化合物VI(52mg，27％)，为黄色固体。
[0491] MS(ESI)：[M+H+]＝761.5。
[0492] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.26-7.24(m,2H),7.14-7.13(m,2H),6.64(d,1H),6.37(d,1H),5.61-5.57(m,1H),5.46-5.43(m,1H),5.24(d,1H),4.42(s,1H),4.32(s,1H),4.08-4.06(m,2H),3.56(s,1H),3.38-3.37(m,1H),3.23-3.22(m,1H),3.16-3.12(m,1H),2.78-
2.75(m,1H),2.44-2.39(m,2H),1.98-1.85(m,16H),1.50(s,1H),1.41-1.24(m,12H),1.21-
1.18(m,8H),0.86-0.83(m,6H)。
2.75(m,1H),2.44-2.39(m,2H),1.98-1.85(m,16H),1.50(s,1H),1.41-1.24(m,12H),1.21-
1.18(m,8H),0.86-0.83(m,6H)。
[0493] 实施例4：((4S,7S,E)-7-苄基-8-((S)-2-(((S)-1-(异丙氨基)-1-氧代-6-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)己-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷1-基)-2-甲基-
8-氧代辛-5-烯-4-基)氨基甲酸乙酯(VII)
8-氧代辛-5-烯-4-基)氨基甲酸乙酯(VII)
[0494]
[0495] 步骤1：合成(S)-1-((2S,5S,E)-5-氨基-2-苄基-7-甲基辛-3-烯酰基)-N-((S)-1-(异丙氨基)-1-氧代-6-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)己-2-基)吡咯烷-2-甲酰胺(108)
[0496] 向50-mL单颈烧瓶中加入化合物VI(15mg，0.02mmol)和MeOH中的HCl(5mL，3N)，然后将混合物在25℃下搅拌1h。将有机溶液在真空中浓缩，得到标题化合物108(13mg，100％)。
[0497] MS(ESI)：[M+H+]＝661.3。
[0498] 步骤2：合成((4S,7S,E)-7-苄基-8-((S)-2-(((S)-1-(异丙氨基)-1-氧代-6-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)己-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷1-基)-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基)氨基甲酸乙酯(VII)
[0499] 向108(13mg，0.02mmol)和DIEA(5mg，0.04mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入氯甲酸乙酯(2mg，0.02mmol)，然后将反应在25℃下搅拌0.5h。向混合物中加入DCM(50mL)并用H2O(3×50mL)洗涤。将有机相在真空中浓缩并通过prep-HPLC(Durashell C18(10μm，30×250mm)，洗脱剂中的0.5％NH3.H2O)纯化，得到标题化合物VII(9mg，60％)，为黄色固体。
[0500] MS(ESI)：[M+H+]＝733.4。
[0501] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.23-7.13(m,5H),5.63-5.57(m,1H),5.43-5.33(m,2H),4.44-4.33(m,1H),4.14-4.04(m,3H),3.56-3.12(m,4H),2.79-2.74(m,1H),2.45-2.38(m,
1H),2.08-2.01(m,1H),1.99(s,9H),1.94-1.84(m,2H),1.52-1.15(m,24H),0.87-0.84(m,
6H)。
1H),2.08-2.01(m,1H),1.99(s,9H),1.94-1.84(m,2H),1.52-1.15(m,24H),0.87-0.84(m,
6H)。
[0502] 实施例5：N-[(4S,5E,7S)-7-苄基-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-{[(1S)-4-({[3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙氧基]羰基}氨基)-1-[(丙-2-基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基]氨基甲酸叔丁酯(VIII)
[0503]
[0504] 步骤1：合成N-[(4S,5E,7S)-7-苄基-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-{[(1S)-4-({[3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙氧基]羰基}氨基)-1-[(丙-2-基)氨基甲酰基]-丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基]氨基甲酸叔丁酯(VIII)
[0505] 向56(160mg，0.17mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入DBU(130mg，0.86mmol)。将反应在25℃下搅拌15min，然后加入氯甲酸3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙酯(110，56mg，0.19mmol)并将混合物在25℃下搅拌30min。向混合物中加入DCM(50mL)并用H2O(3×
50mL)洗涤。将有机相在真空中浓缩并通过prep-HPLC(Durashell C18(10μm，30×250mm)，洗脱剂中的0.5％NH3.H2O)纯化，得到标题化合物VIII(20mg，12％)，为白色固体。
50mL)洗涤。将有机相在真空中浓缩并通过prep-HPLC(Durashell C18(10μm，30×250mm)，洗脱剂中的0.5％NH3.H2O)纯化，得到标题化合物VIII(20mg，12％)，为白色固体。
[0506] MS(ESI)：[M+H+]＝977.7。
[0507] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.23-7.13(m,5H),6.82(d,1H),6.53(d,1H),5.63-5.34(m,2H),4.90-4.69(m,1H),4.42-4.03(m,6H),3.62(s,6H),3.60-3.14(m,6H),2.76-2.62(m,3H),2.30-2.26(m,1H),2.16(s,9H),2.04-0.84(m,43H)。
[0508] 实施例6：N-[(4S,5E,7S)-7-苄基-2-甲基-8-氧代-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-[(丙-2-基)氨基甲酰基]-5-({[3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙氧基]羰基}氨基)戊基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]辛-5-烯-4-基]氨基甲酸环丙基甲酯(IX)
[0509]
[0510] 步骤1：合成氯甲酸环丙基甲酯(112)
[0511] 在0℃下向碳酸双(三氯甲基)酯(10.6g，36.1mmol)在甲苯(50mL)中的溶液中加入吡啶(2.6g，33.4mmol)，并将混合物搅拌30min。然后，加入111(2.0g，27.8mmol)在甲苯(5mL)中的溶液。将反应搅拌30min，加入水(40mL)并用EA(50mL)萃取。将有机层用水(2×50mL)洗涤并用Na2SO4干燥。将溶剂在真空中浓缩并使剩余物在硅胶上进行柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至10:1)，得到标题化合物112(2.9g，78％)，为油状物。
[0512] 步骤2：合成((S)-5-((S)-1-((2S,5S,E)-5-氨基-2-苄基-7-甲基辛-3-烯酰基)吡咯烷-2-酰氨基)-6-(异丙氨基)-6-氧代己基)氨基甲酸3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙酯(113)
[0513] 将化合物IV(20mg，0.02mmol)在MeOH中的HCl(5mL，4N)中的溶液在25℃下搅拌2h，然后将溶剂在真空中浓缩，得到标题产物113(15mg，100％)，为白色泡沫。
[0514] MS(ESI)：[M+H+]＝762.4。
[0515] 步骤3：合成N-[(4S,5E,7S)-7-苄基-2-甲基-8-氧代-8-[(2S)-2-{[(1S)-1-[(丙-2-基)氨基甲酰基]-5-({[3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙氧基]羰基}氨基)戊基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]辛-5-烯-4-基]氨基甲酸环丙基甲酯(IX)[0516] 在0℃下向化合物113(15mg，0.02mmol)和化合物112(4mg，0.24mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入DIEA(5mg，0.04mmol)。将反应混合物温热至25℃并搅拌2h。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(10mL)猝灭，并通过EA(3×10mL)萃取。将有机层用盐水(20mL)洗涤并用Na2SO4干燥。将剩余物在减压下浓缩并通过prep-HPLC(Durashell C18(10μm，30×250mm)，洗脱剂中的0.1％NH3.H2O)纯化，得到产物IX(9mg，53％)，为黄色固体。
[0517] MS(ESI)：[M+H+]＝860.6。
[0518] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.23-7.13(m,5H),6.78-6.76(m,1H),6.30-6.29(m,1H),5.60-5.33(m,2H),4.42-3.81(s,4H),3.58-3.13(m,4H),2.72-2.68(m,1H),2.55-2.53(m,
1H),2.01-1.83(m,40H),0.88-0.86(m,6H),0.542-0.52(m,2H),0.25-0.24(m,2H)。
1H),2.01-1.83(m,40H),0.88-0.86(m,6H),0.542-0.52(m,2H),0.25-0.24(m,2H)。
[0519] 实施例7：((4S,7S,E)-7-苄基-8-((S)-2-(((S)-1-(异丙氨基)-1-氧代-3-(4-(3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙氧基)苯基)丙-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基)氨基甲酸叔丁酯(X)
[0520]
[0521] 步骤1：合成(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-羟基苯基)丙酸(122)
[0522] 在0℃下向化合物121(2.0g，11.0mmol)在二氧六环/H2O(20/10mL)中的溶液中加入Na2CO3(3.5g，33.0mmol)和Boc2O(3..5g，16.5mmol)。将反应混合物温热至25℃并搅拌16h，然后在真空下除去。向混合物中加入水(20mL)，并通过EA(10mL)萃取。水层加入HCl(4M，在水中)直至pH＝2-3并通过EA(3×10mL)萃取。合并的有机层用盐水水溶液(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥并在真空中浓缩，得到标题产物122(2.8g，90％)，为黄色固体。
[0523] MS(ESI)：[M+H+]＝281.9。
[0524] 步骤2：合成(S)-(3-(4-羟基苯基)-1-(异丙氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(123)
[0525] 在0℃下向化合物122(2.8g，9.9mmol)和丙-2-胺(0.88g，14.9mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入DIEA(2.6g，19.8mmol)，缓慢地加入T3P(50％，在EA中，9.4g，14.9mmol)，并将反应混合物温热至25℃并搅拌18h。将反应混合物用5％Na2CO3水溶液(10mL)和水(20mL)洗涤，并且将有机层用MgSO4干燥并在真空中浓缩。将剩余的半固体在真空下干燥，得到固体产物123(2.8g，88％)。
[0526] MS(ESI)：[M+H+]＝322.9。
[0527] 步骤3：合成4-甲基苯磺酸3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙酯(129)[0528] 向化合物110(3.0g，12.6mmol)在10mL DMF中的溶液中加入对甲苯磺酰氯(2.87g，15.1mmol)，并将混合物在0℃下搅拌10min。然后，向混合物中缓慢地加入DIEA(1.9g，
15.1mmol)，将反应在25℃下搅拌5h，使用TLC来监测反应进展。反应通过水(10mL)猝灭，通过EA(3×20mL)萃取。合并的有机层用5％NaHCO3水溶液(20mL)、饱和盐水水溶液(3×20mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。将溶剂在真空中浓缩，得到油状产物129(3.0g，收率60％，纯度
80％)。
15.1mmol)，将反应在25℃下搅拌5h，使用TLC来监测反应进展。反应通过水(10mL)猝灭，通过EA(3×20mL)萃取。合并的有机层用5％NaHCO3水溶液(20mL)、饱和盐水水溶液(3×20mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。将溶剂在真空中浓缩，得到油状产物129(3.0g，收率60％，纯度
80％)。
[0529] 步骤4：合成(S)-(3-(4-(3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙氧基)苯基)-1-(异丙氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(124)
[0530] 在100℃下向化合物123(0.5g，1.56mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中加入K2CO3(650mg，4.68mmol)和4-甲基苯磺酸3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙酯(129，733mg，1.9mmol)。将反应混合物搅拌16h，然后向混合物中加入水并通过EA(2×10mL)萃取。
合并层用盐水水溶液(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥并在真空中浓缩。使剩余物在硅胶上进行柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1至2:1)，得到标题产物124(350mg，41％)，为油状物。
合并层用盐水水溶液(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥并在真空中浓缩。使剩余物在硅胶上进行柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1至2:1)，得到标题产物124(350mg，41％)，为油状物。
[0531] MS(ESI)：[M+H+]＝543.2。
[0532] 步骤5：合成(S)-2-氨基-3-(4-(3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙氧基)苯基)-N-异丙基丙酰胺(125)
[0533] 将化合物124(350mg，0.64mmol)在MeOH中的HCl(10mL，4M)中的溶液在25℃下搅拌2h，然后将溶剂在真空中浓缩，得到标题产物125(283mg，100％)，为油状物。
[0534] MS(ESI)：[M+H+]＝443.2。
[0535] 步骤6：合成(S)-2-(((S)-3-(4-(3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙氧基)苯基)-1-(异丙氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(126)
[0536] 在0℃下向化合物125(283mg，0.64mmol)和(S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸(70)(165mg，0.77mmol)在DCM(10mL)中的溶液中逐滴加入DIEA(248mg，1.92mmol)和T3P(EA中的50％，9.4g，14.9mmol)，并将反应混合物温热至25℃并搅拌16h。将反应混合物用5％Na2CO3水溶液(10mL)和水(40mL)洗涤，并将有机层用MgSO4干燥并在真空中浓缩，得到固体产物126(290mg，71％)。
[0537] MS(ESI)：[M+H+]＝640.3。
[0538] 步骤7：合成(S)-2-(((S)-1-(异丙氨基)-1-氧代-3-(4-(3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙氧基)苯基)丙-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(127)
[0539] 将化合物126(290mg，0.45mmol)在THF(8mL)中的溶液用水(2mL)稀释，并在0℃下加入硝酸铈铵(CAN)(543mg，0.99mmol)在5mL水中的过量溶液。将混合物在室温下搅拌2h。反应的进展通过TLC监测。在完成之后，THF在真空下除去并将粗制混合物用三份EA(3×
20mL)萃取。合并的有机层用盐水水溶液(20mL)洗涤，然后用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1至2:1)纯化，得到标题产物127(160mg，
58％)，为黄色油状物。
20mL)萃取。合并的有机层用盐水水溶液(20mL)洗涤，然后用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1至2:1)纯化，得到标题产物127(160mg，
58％)，为黄色油状物。
[0540] MS(ESI)：[M+H+]＝610.2。
[0541] 步骤8：合成(S)-N-((S)-1-(异丙氨基)-1-氧代-3-(4-(3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙氧基)苯基)丙-2-基)吡咯烷-2-甲酰胺(128)
[0542] 将化合物127(160mg，0.26mmol)在MeOH中的HCl(10mL，4M)中的溶液在25℃下搅拌2h，然后浓缩，得到标题产物128(132mg，100％)，为油状物。
[0543] MS(ESI)：[M+H+]＝510.1。
[0544] 步骤9：合成((4S,7S,E)-7-苄基-8-((S)-2-(((S)-1-(异丙氨基)-1-氧代-3-(4-(3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙氧基)苯基)丙-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-2-甲基-8-氧代辛-5-烯-4-基)氨基甲酸叔丁酯(X)
[0545] 在0℃下向化合物128(132mg，0.26mmol)和(2S,5S,E)-2-苄基-5-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-甲基辛-3-烯酸(70，113mg，0.31mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入DIEA(74mg，0.57mmol)和T3P(EA中的50％，248mg，0.39mmol)，并将反应混合物温热至25℃并搅拌16h。将反应混合物用5％Na2CO3(10mL)和水(20mL)洗涤，并将有机层用MgSO4干燥并在真空中浓缩。将剩余物通过pre-HPLC(Durashell C18(10μm，30×250mm)，洗脱剂中的0.1％NH3.H2O)纯化，得到黄色固体产物X(42mg，19％)。
[0546] MS(ESI)：[M+H+]＝853.4。
[0547] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.24-7.06(m,7H),6.76-6.62(m,2H),5.669-5.31(m,3H),4.43-4.39(m,2H),4.15-3.88(s,3H),3.45-3.34(m,2H),3.14-3.09(m,2H),2.95-2.90(m,
2H),2.72-2.63(m,2H),2.00-0.87(m,43H)。
2H),2.72-2.63(m,2H),2.00-0.87(m,43H)。
[0548] 实施例8：N-[(4S,5E,7S)-7-苄基-2-甲基-8-[(2S)-2-{[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-1-[(丙-2-基)氨基甲酰基]-4-({[3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙氧基]羰基}氨基)丁基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-8-氧代辛-5-烯-4-基]氨基甲酸叔丁酯(XI)
[0549]
[0550] 步骤1：合成(S)-(5-(异丙氨基)-5-氧代戊烷-1,4-二基)二氨基甲酸叔丁基(3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙基)酯(133)
[0551] 在0℃下向52(500mg，1.01mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入DBU(768mg，5.05mmol)，将反应混合物搅拌30min并温热至25℃，然后加入化合物110(364mg，1.21mmol)和DIEA(291mg，1.52mmol)。30min之后，向混合物中加入水(20mL)，并通过DCM(2×10mL)萃取。合并的有机层用盐水水溶液(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1至2:1)纯化，得到标题产物133(420mg，77％)，为黄色固体。
[0552] MS(ESI)：[M+H+]＝538.2。
[0553] 步骤2：合成(S)-(4-氨基-5-(异丙氨基)-5-氧代戊基)氨基甲酸3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙酯(134)
[0554] 将化合物133(420mg，0.78mmol)在MeOH中的HCl(10mL，4M)中的溶液在25℃下搅拌2h，然后将溶剂在真空中浓缩，得到标题产物134(341mg，100％)，为油状物。
[0555] MS(ESI)：[M+H+]＝438.2。
[0556] 步骤3：合成(S)-(4-氨基-5-(异丙氨基)-5-氧代戊基)氨基甲酸3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙酯(135)
[0557] 在0℃下向化合物134(420mg，0.78mmol)和(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸(203mg，0.93mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入DIEA(221mg，1.72mmol)和T3P(EA中的50％，744mg，1.17mmol)，并且将反应混合物温热至25℃并搅拌16h。将反应混合物用5％Na2CO3水溶液(10mL)和水(20mL)洗涤，并将有机层用MgSO4干燥并在真空中浓缩，得到固体产物135(420g，85％)。
[0558] MS(ESI)：[M+H+]＝637.2。
[0559] 步骤4：合成((S)-4-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)-5-(异丙氨基)-5-氧代戊基)氨基甲酸3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙酯(136)
[0560] 将135(420mg，0.66mmol)在MeOH中的HCl(10mL，4M)中的溶液在25℃下搅拌2h，然后在真空中浓缩，得到标题化合物136(354mg，100％)，为油状物。
[0561] MS(ESI)：[M+H+]＝537.3。
[0562] 步骤5：合成(S)-2-(((S)-1-(((S)-5-(((3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙氧基)羰基)氨基)-1-(异丙氨基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(137)
[0563] 在0℃下向化合物136(354mg，0.66mmol)和(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸(212mg，0.99mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入DIEA(187mg，1.45mmol)和T3P(EA中的50％，630mg，0.99mmol)，并将反应混合物温热至25℃并搅拌16h。将反应混合物用5％Na2CO3水溶液(10mL)和水(20mL)洗涤，并且将有机层用MgSO4干燥并在真空中浓缩，得到固体产物
137(350mg，72％)。
137(350mg，72％)。
[0564] MS(ESI)：[M+H+]＝734.3。
[0565] 步骤6：合成(2S)-2-(((2S)-1-(((2S)-1-(异丙氨基)-1-氧代-5-(((3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1-烯-1-基)丙氧基)羰基)氨基)戊-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(138)
[0566] 将化合物138(350mg，0.48mmol)在THF(8mL)中的溶液用水(2mL)稀释，并在0℃下加入硝酸铈铵(CAN)(580mg，1.05mmol)在5mL水中的过量溶液。将混合物在室温下搅拌2h。反应的进展通过TLC监测。在完成之后，将THF溶剂在真空下除去并将粗制混合物用三份EA(3×20mL)萃取。将有机萃取物用盐水水溶液(2×20mL)洗涤，然后用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1至2:1)纯化，得到标题产物138(190mg，56％)，为黄色油状物。
[0567] MS(ESI)：[M+H+]＝704.4。
[0568] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.13-6.56(m,3H),5.03(s,1H),4.44-3.99(m,6H),3.75-3.44(m,5H),2.54-0.88(m,44H)。
[0569] 步骤7：合成((S)-5-(异丙氨基)-4-((S)-3-甲基-2-((S)-吡咯烷-2-酰氨基)丁酰氨基)-5-氧代戊基)氨基甲酸3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙酯(139)
[0570] 将化合物138(190mg，0.27mmol)在MeOH中的HCl(10mL，4M)中的溶液在25℃下搅拌2h，然后在真空中浓缩，得到标题产物138(162mg，100％)，为油状物。
[0571] MS(ESI)：[M+H+]＝604.3。
[0572] 步骤8：合成N-[(4S,5E,7S)-7-苄基-2-甲基-8-[(2S)-2-{[(1S)-2-甲基-1-{[(1S)-1-[(丙-2-基)氨基甲酰基]-4-({[3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙氧基]羰基}氨基)丁基]氨基甲酰基}丙基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-8-氧代辛-
5-烯-4-基]氨基甲酸叔丁酯(XI)
5-烯-4-基]氨基甲酸叔丁酯(XI)
[0573] 在0℃下向化合物139(162mg，0.27mmol)和(2S,5S,E)-2-苄基-5-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-甲基辛-3-烯酸(70，113mg，0.31mmol)在DCM(10mL)中的溶液中缓慢地加入DIEA(74mg，0.57mmol)、T3P(EtOAc中的50％，248mg，0.39mmol)，并将反应混合物温热至25℃并搅拌16h。将反应混合物用5％Na2CO3水溶液(10mL)和水(20mL)洗涤，并且将有机层用MgSO4干燥并在真空中浓缩。将剩余物通过prep-HPLC(Durashell C18(10μm，30×250mm)，洗脱剂中的0.1％NH3.H2O)纯化，得到黄色固体产物XI(45mg，18％)。
[0574] MS(ESI)：[M+H+]＝947.6。
[0575] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.24-7.13(m,5H),6.79-6.33(m,2H),5.63-5.27(m,3H),4.79-4.03(m,6H),3.57-2.50(m,7H),2.00-0.85(m,55H)。
[0576] 实施例9：N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-苄基-5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-7-甲基辛-3-烯酰基]吡咯烷-2-基]甲酰氨基}-4-(环丙基氨基甲酰基)丁基]氨基甲酸3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙酯(XII)
[0577]
[0578] 步骤1：合成(S)-(5-(环丙氨基)-5-氧代戊烷-1,4-二基)二氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基叔丁基酯(142)
[0579] 在0℃下向化合物141(0.5g，1.1mmol)和环丙胺(94g，1.7mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入DIEA(220mg，1.7mmol)、T3P(EA中的50％，1.1g，1.7mmol)，并将反应混合物温热至25℃并搅拌16h。将反应混合物用5％Na2CO3水溶液和水洗涤，并且将有机层用MgSO4干燥并在真空中浓缩，得到固体产物142(480mg，89％)。
[0580] MS(ESI)：[M+H+]＝494.2。
[0581] 步骤2：合成(S)-(4-氨基-5-(环丙氨基)-5-氧代戊基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(143)
[0582] 将化合物142(480mg，0.98mmol)在MeOH中的HCl(10mL，4M)中的溶液在25℃下搅拌2h，然后在真空中浓缩，得到产物143(385mg，100％)，为油状物。
[0583] MS(ESI)：[M+H+]＝394.0。
[0584] 步骤3：合成(S)-2-(((S)-5-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-1-(环丙氨基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(144)
[0585] 在0℃下向化合物143(385mg，0.98mmol)和(S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸(316mg，1.47mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入DIEA(278mg，2.2mmol)、T3P(EA中的50％，934mg，1.47mmol)，并将反应混合物温热至25℃并搅拌16h。将反应混合物用5％Na2CO3水溶液(20mL)洗涤，并且将有机层用MgSO4干燥并在真空中浓缩，得到固体产物144(390mg，
68％)。
68％)。
[0586] MS(ESI)：[M+H+]＝591.2。
[0587] 步骤4：合成(S)-2-(((S)-1-(环丙氨基)-5-(((3-(2,5-二甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)丙氧基)羰基)氨基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(146)[0588] 在0℃下向化合物144(390mg，0.67mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入DBU(510mg，3.35mmol)。将反应混合物温热至25℃并搅拌30min，然后加入化合物110(240mg，0.8mmol)和DIEA(110mg，0.8mmol)。向混合物中加入水，并将混合物通过DCM(2×10mL)萃取。合并的层用盐水水溶液(3×10mL)洗涤，用Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将剩余物经由柱(硅胶，PE/EA＝3:1至1:1)纯化，得到产物146(340mg，75％)，为黄色固体。
[0589] MS(ESI)：[M+H+]＝633.4。
[0590] 步骤5：合成(S)-2-(((S)-1-(环丙氨基)-1-氧代-5-(((3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙氧基)羰基)氨基)戊-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(147)
[0591] 将化合物146(340mg，0.5mmol)在THF(8mL)中的溶液用水(2mL)稀释，并在0℃下加入硝酸铈铵(CAN)(602mg，1.1mmol)在5mL水中的过量溶液。将混合物在室温下搅拌2h。反应的进展通过TLC监测。在完成之后，将THF在真空下除去并将粗制混合物用三份EA(3×20mL)萃取。将有机萃取物用盐水水溶液(3×20mL)洗涤，然后用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将粗产物在硅胶上通过硅胶柱色谱(PE/EA＝3:1至1:1)纯化，得到产物147(180mg，44％)，为黄色油状物。
[0592] MS(ESI)：[M+H+]＝603.2。
[0593] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.26-6.77(m,2H),4.93(s,1H),4.44-4.10(m,4H),3.66-3.63(m,6H),3.49-3.3.45(m,4H),2.68-2.64(m,3H),2.20-1.25(m,28H),0.72-0.53(m,
4H)。
4H)。
[0594] 步骤6：合成((S)-5-(环丙氨基)-5-氧代-4-((S)-吡咯烷-2-酰氨基)戊基)氨基甲酸3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙酯(148)
[0595] 将化合物147(180mg，0.22mmol)在MeOH中的HCl(10mL，4M)中的溶液在25℃下搅拌2h，然后将溶剂在真空中浓缩，得到产物148(110mg，100％)，为油状物。
[0596] MS(ESI)：[M+H+]＝503.2。
[0597] 步骤7：合成N-[(4S)-4-{[(2S)-1-[(2S,3E,5S)-2-苄基-5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-7-甲基辛-3-烯酰基]吡咯烷-2-基]甲酰氨基}-4-(环丙基氨基甲酰基)丁基]氨基甲酸3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1-基)丙酯(XII)
[0598] 在0℃下向化合物148(110mg，0.22mmol)和(2S,5S,E)-2-苄基-5-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-甲基辛-3-烯酸(70，95mg，0.26mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入DIEA(62mg，0.48mmol)、T3P(EA中的50％，210mg，0.33mmol)，并将反应混合物温热至25℃并搅拌16h。将反应混合物用5％Na2CO3水溶液(20mL)和水(20mL)洗涤，并且将有机层用MgSO4干燥并在真空中浓缩。将剩余物通过prep-HPLC(Durashell C18(10μm，30×250mm)，洗脱剂中的0.1％NH3.H2O)纯化，得到黄色固体产物XII(15mg，8％)。
[0599] MS(ESI)：[M+H+]＝846.5。
[0600] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.25-7.09(m,8H),5.61-5.27(m,3H),4.33(s,2H),4.02(s,2H),3.60-2.75(m,12H),1.98-0.58(m,39H)。
[0601] 实施例10.通过铁死亡测定进行初步筛选
[0602] 细胞系和培养基：HT-1080(纤维肉瘤)细胞获自美国典型培养物保藏中心(American TypeCulture Collection)。细胞在EMEM培养基、10％热灭活的FBS和青霉素-链霉素混合物(Invitrogen)中生长。将细胞在37℃和5％CO2下保持在组织培养温育箱中。
[0603] 细胞活力测定.用195μL生长培养基将HT-1080细胞按10,000个细胞/孔接种在黑色且底部透明的96-孔板(Cat#Corning3904)中，并使细胞粘附过夜。第二天，用含有400μM爱拉斯汀(Erastin)的培养基将测试化合物按2倍稀释稀释成12个点。将5μL化合物溶液转移到孔中的生长培养基中，一式三份。在30小时后，根据生产协议添加Cell 发光细胞活力测定试剂(Cat#，Promega G8081)以测量HT-1080细胞活力。简言之，吸出100μL培养基，并向每个孔中添加50μL 发光试剂，并在室温下温育30分钟以使发光信号稳定。将板密封并以1,000rpm离心1分钟以除去气泡。在轨道振荡器上将板振荡1分钟。利用EnSpire多模式读板器(PerkinElmer)读板以检测发光信号。使用剩余活性％来评价爱拉斯汀诱导的HT-1080细胞中的铁死亡，并表示为下式：
[0604] ％剩余活性＝100x[(样品-背景平均值)/(媒介物-背景平均值平均值)]
[0605] 样品：从测试化合物中读出
[0606] 媒介物：从媒介物样品中读出
[0607] 背景：从仅处理的爱拉斯汀中读出
[0608] 通过使用XLFit(Excel插件软件)中的非线性回归分析(公式方程201)绘制三次试验的平均剩余活性％的剂量响应曲线，然后计算EC50值。在该抗铁死亡测定中，包括了ferrostatin-1和XJB-5-131作为参照。基于历史结果设定接受标准，在对数标度上，平均值±2.58*SD，同时Z’>0.5。
[0609] 表1.实施例化合物对于HT-1080细胞中的铁死亡的抑制的总结。
[0610] 实施例ID EC50/nMI 118.98
II 32.96
III 34.57
IV 24.38
V 196.06
VI 39.06
VII 80.55
VIII >6000
IX 49.29
X 56.86
XI 47.01
XII 148.72
II 32.96
III 34.57
IV 24.38
V 196.06
VI 39.06
VII 80.55
VIII >6000
IX 49.29
X 56.86
XI 47.01
XII 148.72
[0611] 实施例11.细胞凋亡测定
[0612] 细胞系和培养基.3T3-L1细胞获自美国典型培养物保藏中心。细胞在DMEM完全培养基、10％FBS和青霉素-链霉素混合物(Invitrogen)中生长。将细胞在37℃和5％CO2下保持在组织培养温育箱中。
[0613] 细胞凋亡测定.Promega的 检测使用了含有DEVD序列的发光底物，该底物已显示对半胱天冬酶-3和-7具有选择性。我们使用该检测以筛选我们的化合物对细胞凋亡抑制。简言之，在384孔板的每孔中接种40μL的3000个3T3-L1细胞，使细胞粘附过夜。第二天，将放线菌素D作为细胞凋亡诱导剂制备成100μM DMSO储液(stock)。将测试化合物制备成10mM DMSO储液。用DMSO进行3倍稀释以将化合物连续稀释成10个点。通过使用声学流体传输将40nL的系列浓度储液转移到孔(一式三份)中，来用测试化合物对3T3-L1细胞进行预处理，温育2小时。然后使用声学流体传输将40nL的100μM放线菌素D(终浓度为
100nM)转移到指定的孔中。将测定板在37℃、5％CO2、95％湿度的温育箱中温育48小时。对于半胱天冬酶测定，将20μL/孔的 3/7试剂(Promega)加入测试孔中。在室温下温育30分钟以使发光信号稳定。利用EnSpire多模式读板器(PerkinElmer)读板。使用XLFit(Excel插件软件)的公式方程201计算EC50值：y＝(A+((B-A)/(1+((x/C)^D))))，其中[0614] A：媒介物样品的平均值
100nM)转移到指定的孔中。将测定板在37℃、5％CO2、95％湿度的温育箱中温育48小时。对于半胱天冬酶测定，将20μL/孔的 3/7试剂(Promega)加入测试孔中。在室温下温育30分钟以使发光信号稳定。利用EnSpire多模式读板器(PerkinElmer)读板。使用XLFit(Excel插件软件)的公式方程201计算EC50值：y＝(A+((B-A)/(1+((x/C)^D))))，其中[0614] A：媒介物样品的平均值
[0615] B：用100nM AcD处理的细胞的平均值
[0616] C：EC50
[0617] D：斜率(hillslope)
[0618] Z’因子用于描述筛选测定性能。在所有测试板中Z’因子值为>0.5，这表明该测定合格，并且对于所有测试化合物，IC50值均是可靠的。
[0619] 表2.实施例化合物对于由放线菌素D诱导的3T3-L1细胞的细胞凋亡的抑制的总结。
[0620]实施例化合物 EC50/μM
I 1.152
II 0.808
II 1.566
IV 0.702
V 2.745
VI 7.317
I 1.152
II 0.808
II 1.566
IV 0.702
V 2.745
VI 7.317
[0621] 实施例12.用于评价化合物的脂质ROS测定
[0622] DCFDA-使用来自Abcam的细胞活性氧检测试验试剂盒(ab113851)来检测由爱拉斯汀诱导的HT-1080细胞中的细胞(脂质)ROS。
[0623] DCFDA-细胞ROS检测试验试剂盒(ab113851)使用细胞渗透试剂2’,7’–二氯荧光素二乙酸酯(DCFDA)，其是一种测量细胞内的羟基、过氧化氢和其他活性氧(ROS)活性的荧光染料。在扩散进入细胞后，DCFDA通过细胞酯酶脱乙酰化为非荧光化合物，随后被ROS氧化为2’,7’–二氯荧光素(DCF)。DCF是一种高荧光化合物，其可以通过荧光光谱法检测到，其中最大激发和发射光谱分别为495nm和529nm。
[0624] 脂质ROS测定.将25000个HT-1080细胞接种到黑色且底部透明的96-孔板中，使HT-1080细胞粘附过夜。第二天，用细胞毒性剂(爱拉斯汀，50μM)处理细胞，并用测试化合物(10个点，3倍系列稀释)温育24小时。根据生产协议(Ab113851)在1×PBS中洗涤细胞，并在37℃温育箱中用DCFDA试剂对细胞染色30-45分钟。使用EnSpire多模式读板仪(PerkinElmer)测量测定板中的荧光(Ex/Em＝485/535nM)。将ROS变化确定为在扣除背景后的对照的百分比。
通过使用XLFit软件中的非线性回归分析绘制两次试验的ROS变化平均值％的剂量响应曲线，并计算EC50值。此外，脂质ROS也可以通过流式细胞仪使用FL1通道(绿色荧光)或通过荧光显微镜进行测量。可以通过使用适合于绿色荧光的激发和发射波长来检测荧光。
通过使用XLFit软件中的非线性回归分析绘制两次试验的ROS变化平均值％的剂量响应曲线，并计算EC50值。此外，脂质ROS也可以通过流式细胞仪使用FL1通道(绿色荧光)或通过荧光显微镜进行测量。可以通过使用适合于绿色荧光的激发和发射波长来检测荧光。
[0625] 使用实施例化合物来测试对脂质ROS测定的抑制能力，大多数实施例对脂质ROS具有抑制能力，其中IC50小于1mM。
[0626] 实施例13a.缺血再灌注(IR)诱发的急性肾损伤(AKI)动物模型
[0627] 将小鼠用5％水合氯醛(400mg/kg 5％水合氯醛)麻醉。通过在左肾蒂和右肾蒂二者周围应用非创伤性微血管钳，来诱发双侧肾缺血。通过肾脏变白来确认缺血。在缺血30分钟后，取下所述钳并且目视确认再灌注。假手术动物不经历缺血。在缺血间隔期间，将动物用腹膜内滴注的生理盐水保持水分，并保持在温暖的加热垫上以维持体温。
[0628] 将动物随机分配至以下的组：假手术组，用盐水进行IR的组或用测试物(5.0mg/kg，15mg/kg)进行IR的组。在缺血开始前2小时、在再灌注开始时和再灌注后2小时皮下地施用治疗。在24小时时收集血清和尿液样品，并在-20℃下储存直至分析。在再灌注开始后24小时在不同时间收获肾脏，以通过光学和电子显微镜评估氧化标志物和组织病理学。
[0629] 实施例化合物的作用不仅将肌酐和BUN降低至正常水平，而且还显示出在肾脏IR中对肾脏组织学损伤的保护。
[0630] 实施例13b.叶酸诱发的急性肾损伤(AKI)动物模型
[0631] 将小鼠分为四组，即假对照组，叶酸治疗组，叶酸治疗组包括以下子组：物品1治疗组，物品2治疗组，和DMSO(媒介物对照)组。在FA注射前30分钟，对小鼠腹膜内给药物品1、物品2或DMSO(媒介物)。对三个叶酸治疗组给药在0.3mol/L碳酸氢钠中的250mg/kg的FA(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)单次腹膜内注射剂。在治疗后48小时处死动物。
[0632] 在实施安乐死时采集血浆样品。肾脏在摘除前用冷盐水原位灌注。将一个肾脏在液氮中速冻以进行RNA和蛋白质研究，而将另一个肾脏固定并石蜡包埋以存档用于组织病理学分析。
[0633] 实施例化合物的作用通过将肌酐和BUN降低至正常功能以及相比于媒介物对照肾脏损伤很小而显示出在FA诱发的AKI模型中的功效。从分子信号途径，实施例化合物可有效降低RIPK3和MLKL的表达，其与肾脏炎症有关。
[0634] 最后，应注意，存在实施本发明的其他方式。因此，本发明的实施方案旨在作为实施例进行描述，但是本发明不限于所描述的内容，在本发明的范围内或在权利要求书中添加的等同方案内可以做出进一步的修改。
[0635] 本文引用的所有出版物或专利均通过引用并入本发明。
[0636] 在整个说明书中，对“实施方案”、“一些实施方案”、“一个实施方案”，“另一个实施例”，“一个实施例”，“具体实施例”或“一些实施例”的提及意指关于该实施方案或实施例描述的特定特征、结构、材料或特性包括在本公开的至少一个实施方案或实施例中。因此，在本说明书通篇的多个地方出现的短语如“在一些实施方案中”、“在一个实施方案中”、“在实施方案中”，“在另一实施例中”，“在一个实施例中”，“在具体实施例中”或“在一些所述例中”不必是指本公开的同一实施方案或实施例。此外，特定的特征、结构、材料或特性可以以任何合适的方式结合在一个或多个实施方案或实施例中。
[0637] 尽管已经示出和描述了说明性实施方案，但是本领域技术人员将理解的是，以上实施方案不能解释为限制本公开，并且在不脱离本公开的精神、原理和范围的情况下可以对这些实施方案中进行改变、替代和修改。