一种新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒

摘要

本发明提供了一种新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，包括抗FITC抗体酶标板、FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体。本发明试剂盒与现有核酸检测试剂盒相比操作简便，高通量，高灵敏度，速度快，成本低，对实验室要求低等。

权利要求

1.一种新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：包括抗FITC抗体酶标板、FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体；其中，FITC标记新型冠状病毒抗原中的新型冠状病毒抗原包括合成多肽SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4；且4种合成多肽的质量比为1:1:1:1。

2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：所述FITC标记新型冠状病毒抗原的制备包括以下步骤，

1）将FITC与合成多肽按摩尔比1:（1-3）进行混合，避光37℃反应6-12h；

2）将上述步骤1）完成的标记液用0.01-0.05M PBS 于2-8℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。

3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：还包括TMB显色剂A液和B液、以及终止液；所述终止液为浓硫酸、盐酸、氢氧化钠中的一种。

4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：还包括稀释液，Tris 1-8g/L；MES 2-5g/L；NaCl 5-20g/L；丙三醇 20-50mL/L ；海藻糖 

5-20g/L；Tween-20 1-5mL/L； ProClinTM300 0.5-2.5mL/L；硫酸庆大霉素 2-5mL/L; pH值 

8.0±0.2。

5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于： FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的工作浓度均为0.01 0.5μg/mL。

~

6.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：抗FITC抗体酶标板的制备包括如下步骤，将抗FITC抗体用0.02-0.05M 磷酸盐缓冲液稀释至1 5μg/mL，同时加入到透明塑料酶标板中，37℃包被2-4小时；弃去孔内液体，用pH ~

7.4 PBS缓冲液洗板，然后加入含质量浓度0.5-2％ BSA 的磷酸盐缓冲液封闭微孔板，37℃封闭2-4小时；弃去孔内液体，甩干后于37℃烘干4-12 小时；装入铝箔袋，加入干燥剂，封口，贴标签，储存于2 8℃。

~

7.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法如下，A、辣根过氧化物酶活化：

1）配制5-10mg/mL HRP溶液；

2）配制10-20 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；

3）将步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比1：(1-3)混匀，2-8℃避光反应0.5-2h；

4）配制浓度为10-40μL/mL的乙二醇水溶液，与步骤3）配制的溶液以相同体积混合，常温避光反应10-30min，活化即完成；

B、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体：

1）将待标记原料装入透析袋中，用0.02-0.1 M pH8.5-10 的碳酸盐缓冲液，透析0.5-

2h；

2）将标记原料与活化的HRP按质量比1：（1-5）进行混合，之后用0.02-0.1 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析20-24h，期间换液2-3次；

3）配制浓度为2-5mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mgHRP加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应1-2h；

4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01-0.05M PBS 于2-8℃透析20-24h，加入等体积甘油，-20℃保存。

说明书

一种新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒

技术领域

[0001] 本发明属于免疫分析检测技术领域，尤其是涉及一种新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒。

背景技术

[0002] 冠状病毒属于单股正链RNA病毒，既往已知感染人的冠状病毒有 6种，即HCoV-229E、HCoV-OC43、SARSr-CoV、HCoV-NL63、HCoV-HKU1和MERSr-CoV。新型冠状病毒（2019-nCoV）属于第7种。

[0003] 新型冠状病毒肺炎是一种急性感染性肺炎，其病原体是一种先前未在人类中发现的新型冠状病毒，即2019新型冠状病毒。经呼吸道飞沫和密切接触传播是主要的传播途径，在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况中存在经气溶胶传播的可能。患者初始症状多为发热，乏力和干咳，并逐渐出现呼吸困难等严重表现。多数患者预后良好，部分严重病例可出现急性呼吸窘迫综合征或脓毒症休克，甚至死亡。

[0004] 目前临床实验室的检测方法主要依靠核酸检测，但核酸检测要在有条件和资质的实验室进行，存在检测时间长、样本采集要求高、步骤多、场地和设备要求高等不足，难以大规模开展。而用免疫测定进行抗体检测则可用于对高危人群的筛检，检测新型冠状病毒IgG抗体可用于新型冠状病毒感染肺炎原发感染中后期临床辅助诊断或者流行病学监测，如何实现这一临床辅助诊断，成为亟待解决的问题。

发明内容

[0005] 有鉴于此，本发明旨在提出一种新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，与现有核酸检测试剂盒相比具有操作简便，速度快，成本低，对实验室要求低等特点。

[0006] 为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

[0007] 一种新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，包括抗FITC抗体酶标板、FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体。

[0008] 优选的，FITC标记新型冠状病毒抗原中的新型冠状病毒抗原包括如表1所示的4种合成多肽或包括如表1所示的4种合成多肽的氨基酸序列的重组抗原，

[0009] 表1 合成多肽的氨基酸序列

[0010]

[0011] FITC标记新型冠状病毒抗原中的新型冠状病毒抗原可以为具有如表2所示氨基酸序列：

[0012] 表2重组抗原的氨基酸系列信息

[0013]

[0014] 优选的，新型冠状病毒抗原包括4种合成多肽时，4种合成多肽的质量比为（0.5-2）：（0.5-2）：（0.5-2）：（0.5-2）；优选的，1:1:1:1。

[0015] 优选的，所述FITC标记新型冠状病毒抗原的制备包括以下步骤，

[0016] 1）将新型冠状病毒抗原装入透析袋中，用0.02-0.1M pH8.5-10的碳酸盐缓冲液，透析1-2h，当新型冠状病毒抗原为合成多肽时，省略该步骤；

[0017] 2）当新型冠状病毒抗原为重组抗原时，将FITC与新型冠状病毒抗原按摩尔（2-4）:1进行混合，之后用0.02-0.1 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析20-24h，期间换液2-3次；

[0018] 当使用新型冠状病毒合成多肽时，将FITC与合成多肽按摩尔比1:（1-3）进行混合，避光37℃反应6-12h。

[0019] 3）将上述步骤2）完成的标记液用0  .01-0.05M PBS 于2-8℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。

[0020] 优选的，还包括TMB显色剂A液和B液、以及终止液；所述终止液为浓硫酸，盐酸，氢氧化钠中的一种。

[0021] 优选的，还包括稀释液；Tris 1-8g/L；MES 2-5g/L；NaCl 5-20g/L；丙三醇 20-TM50mL/L ；海藻糖 5-20g/L；Tween-20 1-5mL/L； ProClin 300 0.5-2.5mL/L；硫酸庆大霉素 
2-5mL/L；pH值 8.0±0.20。

[0022] 优选的，FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的工作浓度均为0.01 0.5μg/mL。~

[0023] 优选的，抗FITC抗体酶标板的制备包括如下步骤，将抗FITC抗体用0.02-0.05M 磷酸盐缓冲液稀释至1 5μg/mL，同时加入到透明塑料酶标板中，37℃包被2-4小时；弃去孔内~液体，用pH7.4 PBS 缓冲液洗板，然后加入含质量浓度0.5-2％ BSA 的磷酸盐缓冲液封闭微孔板，37℃封闭2-4小时；弃去孔内液体，甩干后于37℃烘干4-12 小时；装入铝箔袋，加入干燥剂，封口，贴标签，储存于2 8℃。
~

[0024] 优选的，辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法如下，

[0025] A：辣根过氧化物酶（HRP）活化

[0026] 1）配制5-10mg/mL HRP溶液；

[0027] 2）配制10-20 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；

[0028] 3）将步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比1：1混匀，2-8℃避光反应0.5-2h；

[0029] 4）配制浓度为10-40μL/mL的乙二醇水溶液，与步骤3）配制的溶液以相同体积混合，常温避光反应10-30min，活化即完成，放-20℃保存（保存时间不超过3个月）；

[0030] B、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体

[0031] 1）将待标记原料装入透析袋中，用0.02-0.1 M pH8.5-10 的碳酸盐缓冲液，透析0.5-2h；

[0032] 2）将标记原料与活化的HRP按质量比1:（1-4）进行混合，之后用0.02-0.1 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析20-24h，期间换液2-3次；

[0033] 3）配制浓度为2-5mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mgHRP加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应1-2h；

[0034] 4）将上述步骤3）完成的标记液用0  .01-0.05M PBS 于2-8℃透析20-24h，加入等体积甘油，-20℃保存

[0035] 抗FITC抗体酶标板，酶标板的固相载体为96孔或48孔的透明微孔板，孔间平均变异不高于10%。功能性：配对其他合格组分，能确保2019-nCoV IgG抗体测定的阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出限、精密度和稳定性。储存于2 8℃。~

[0036] FITC标记新型冠状病毒抗原，需满足（1）外观：澄清，呈橙黄色，无混浊沉淀。（2）功能性：配对其他合格组分，能确保2019-nCoV IgG抗体测定的阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出限、精密度和稳定性。储存于2 8℃。~

[0037] 辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体，需满足（1）外观：澄清透明，无混浊沉淀。（2）功能性：配对其他合格组分，能确保2019-nCoV IgG抗体测定的阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出限、精密度和稳定性。储存于2 8℃。~

[0038] 可以根据需要提供参考品，包括阴性参考品，阳性参考品，最低检出限参考品，精密度参考品。

[0039] 阴性参考品，对20份阴性参考品（N1-N20）进行检测，不得出现假阳性，阴性参考品符合率20/20。制备，选取20份新型冠状病毒IgG抗体阴性血清样本，其中包含甲型流感病毒、乙型流感病毒、肺炎支原体等阳性干扰样本，灭活后经一定倍数稀释后，每份分装量为0.5mL，-20℃保存。

[0040] 阳性参考品，对10份阳性参考品（P1-P10）进行检测，不得出现假阴性，阳性参考品符合率10/10。制备，选取10份不同发病时间、发病程度及抗体不同反应强度的新型冠状病毒IgG抗体阳性血清样本，灭活后经一定倍数稀释后，每份分装量为0.5mL，-20℃保存。

[0041] 最低检出限参考品，对检出限参考品L1-L4进行检测，L1和L2应检为阳性，L3可检为阳性或阴性，L4应检出阴性。制备，选取5份不同发病时间的新型冠状病毒IgG抗体阳性血清样本，灭活后混合，按照一定比例稀释，分别得到L1-L4，每份分装量为0.5mL，-20℃保存。

[0042] 精密度参考品，检测应满足以下精密度，（1）批内精密度：检测精密度参考品，每个水平重复检测20次，计算阴性检出率、阳性检出率。依据阳性质控品测定结果（S/CO）的平均值（ ）与标准差（SD），根据公式（1）计算变异系数（CV），结果应符合以下要求 阴性质控品：阴性检出率应为100%（n=20）； 弱阳性质控品：阳性检出率应≥90%（n=20）； 阳性质控品：
阳性检出率为100%，且CV≤10%（n=20）。变异系数（CV%）＝SD/平均值×100%…………公式（1）

[0043] （2）批间精密度：计算，用三批试剂盒检测参考品中精密度阳性质控品，每批次测试20管，计算阳性检出率。同时计算60次检测结果的平均值和标准差（SD），根据公式（1）计算变异系数（CV），结果应符合以下要求：检测参考品中精密度阳性质控品，阳性检出率应为100%，且CV≤15%。

[0044] 试剂盒中还应包括阴性对照以及阳性对照试剂，其中阴性对照，制备方法：将含牛血清白蛋白的缓冲液加入体积浓度1%的ProClin TM 300。分装，贴标签，储存于2 8℃。其中~缓冲液的配方为：5-15g/L BSA，0.01-0.02mol/L PBS（pH值：7-8，有效期：14个月）[0045] 阳性对照，制备方法：取5份阳性人血清混合，经56℃热灭活45分钟，用含牛血清白蛋白的缓冲液稀释至适合的工作浓度，加入体积浓度1-5%ProClinTM 300，分装，贴标签，储存于2 8℃。其中缓冲液的配方为：5-15g/L BSA，0.01-0.02mol/L PBS（PH值：7-8，有效期：
~
14个月）。

[0046] 本发明一种新型冠状病毒（2019-nCoV）IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）采用的是酶联免疫分析（ELISA）测定系统，该系统由免疫反应系统和酶标仪测定系统组成，用酶标仪读取免疫反应后的产物与显色剂所产生OD值来指示免疫反应物的存在与否及其含量的高低，以此达到对抗原或抗体物质含量的检测。具有灵敏度高、特异性强等优点。

[0047] 本产品采用间接法原理检测人血清中的新型冠状病毒IgG抗体。将FITC标记新型冠状病毒重组抗原或合成多肽和样本加入到酶标板反应孔中，若样本中含有新型冠状病毒IgG抗体，则与以上试剂中的合成多肽或重组抗原形成复合物，结合到酶标板上，洗掉游离成分。将辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体加入反应管中，辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体作为二抗，与样本中的IgG抗体结合，并形成辣根过氧化物酶标记抗体-IgG抗体-复合物，洗掉游离成分。加入显色液A、显色液B，在37±1℃条件下反应。加入终止液，选择酶标仪450nm检测OD值。

[0048] 相对于现有技术，本发明所述的一种新型冠状病毒IgG的酶免检测试剂盒，具有以下优势：

[0049] 表3 效果对比数据

[0050]

附图说明

[0051] 图1为实施例的ROC曲线分析图。

具体实施方式

[0052] 除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

[0053] 下面结合实施例来详细说明本发明。

[0054] 一种新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，包括抗FITC抗体酶标板、FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体、参考品，阴性对照，阳性对照，底物液，浓缩洗液，生理盐水，反应管。

[0055] 抗FITC抗体酶标板的制备方法为：将抗FITC抗体用0.02M 磷酸盐缓冲液稀释至1-5μg/mL，同时加入到96 孔透明塑料酶标板中，4℃包被16-24小时；弃去孔内液体，用pH7.4PBS 缓冲液洗板，然后加入含0.5％ BSA ，2%的海藻糖的磷酸盐缓冲液封闭微孔板，4℃封闭16-24小时；弃去孔内液体，甩干后于37℃烘干20-24 小时；装入铝箔袋，加入干燥剂，封口，贴标签，储存于2 8℃。
~

[0056] 所述FITC标记新型冠状病毒抗原的制备包括以下步骤，

[0057] 1） 将FITC与新型冠状病毒合成多肽按摩尔比1:1进行混合，避光37℃反应12h。

[0058] 2）将上述步骤1）完成的标记液用0 .01M PBS 于4℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。

[0059] 其中，新型冠状病毒抗原为4种合成多肽按相同质量比混合；4种合成多肽的氨基酸序列如表1所示。

[0060] 需要说明的是，本申请使用的FITC标记的新型冠状病毒合成多肽可为以上方法合成，也可以通过其他现有的常规方式合成，只要能够达到将FITC与新型冠状病毒合成多肽连接就可以。

[0061] 20倍浓缩洗液包括58g/L 磷酸氢二钠，5.92g/L磷酸二氢钠，180g/L NaCl，10mL/L Tween-20和质量浓度2% Proclin300。

[0062] 阴性对照以及阳性对照试剂，其中阴性对照，制备方法：将含牛血清白蛋白的缓冲液加入1%体积浓度的ProClin TM 300。分装，贴标签，储存于2 8℃。其中缓冲液的配方为：~
10g/L BSA，0.02mol/L PBS（pH值：7-8，有效期：14个月）

[0063] 阳性对照，制备方法：取5份阳性人血清混合，经56℃热灭活45分钟，用含牛血清白蛋白的缓冲液稀释至工作浓度，加入ProClinTM 300，分装，贴标签，储存于2 8℃。其中缓冲~液的配方为：10g/L BSA，0.02mol/L PBS（pH值：7-8，有效期：14个月）。

[0064] TMB显色剂A液和B液；所述终止液为浓硫酸。

[0065] 稀释液的制备包括如下步骤，在1.7L工艺用水中，加入3.02g Tris、5.34gMES、29.25g NaCl，搅拌至完全溶解；再加入50mL丙三醇、20g 海藻糖搅拌过夜至完全溶解；再加入2.0mLTween-20、1.5 mL ProClinTM300、5mL硫酸庆大霉素，搅拌30分钟。用纯化水定容至
2L，用pH计测定其pH值，用6M HCl 或2M NaOH 调整pH值在8.0±0.20范围内的要求。

[0066] 采用改良高碘酸钠氧化法将鼠抗人IgG单克隆抗体与辣根过氧化物酶进行偶联后，储存于2 8℃；~

[0067] 改良过碘酸钠氧化法步骤包括：

[0068] A：辣根过氧化物酶（HRP）活化

[0069] 1）配制10mg/mL HRP溶液；

[0070] 2）配制12 .8 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；

[0071] 3）将上述1）和2）配制溶液按体积比1：1混匀，室温避光反应30min；

[0072] 4）配制浓度为40μL/mL的乙二醇水溶液，与上述溶液3）以相同体积混合，常温避光反应30min，活化即完成，放-20℃保存（保存时间不超过3个月）；

[0073] B、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体

[0074] 1）将待标记原料装入透析袋中，用0 .05 M pH9 .6 的碳酸盐缓冲液，透析30min；

[0075] 2）将标记原料与活化的HRP按质量比1:2进行混合，之后用0 .05M碳酸盐缓冲液于4℃透析24h（期间换液2-3次）；

[0076] 3）配制浓度为2mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mgHRP加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于4℃避光反应2h；

[0077] 4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01M PBS 于4℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。

[0078] 本发明试剂盒的反应步骤：

[0079] 1、将试剂盒各组分在室温（18～25℃）下平衡30分钟。

[0080] 2、配液：用纯化水将20倍浓缩洗液按1:20稀释（475mL纯化水加25mL浓缩洗液）。若浓缩洗液有结晶，可将浓缩洗液置于室温或37℃待结晶溶解后再进行稀释。

[0081] 样品分析过程：

[0082] 1、样本处理：取1mL生理盐水，加入20μL样本，混匀，用漩涡混匀仪混匀5秒，静止15分钟后开始实验。

[0083] 2、根据实验需要取出适量的包被板条。设置阳性对照、阴性对照各2孔，空白孔1孔，其余为待检样本孔。每孔先加入50μL FITC标记新型冠状病毒抗原(合成多肽)，用盖板膜将板孔盖好，在37℃下反应15分钟。

[0084] 3、揭去盖板膜，吸出或倒出反应液后，加入洗液洗一次，洗液量每次每孔不少于300μL，浸泡时间10秒，吸出或倒出洗液后拍干。也可用洗板机洗涤。

[0085] 4、加入50μL 处理后样本或阴性、阳性对照、预留空白对照。

[0086] 5、手工或机器轻轻振荡10秒混匀，用盖板膜将板孔盖好，在37℃下反应30分钟。

[0087] 6、揭去盖板膜，吸出或倒出反应液后，加入洗液洗五次，洗液量每次每孔不少于300μL，浸泡时间10秒，吸出或倒出洗液后拍干。也可用洗板机洗涤。

[0088] 7、加入50μL 辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体。

[0089] 8、手工或机器轻轻振荡10秒混匀，用盖板膜将板孔盖好，在37℃下反应15分钟。

[0090] 9、揭去盖板膜，吸出或倒出反应液后，加入洗液洗五次，洗液量每次每孔不少于300μL，浸泡时间10秒，吸出或倒出洗液后拍干。也可用洗板机洗涤。

[0091] 10、每孔加入显色液A、显色液B各50μL，在37±1℃条件下反应15分钟。

[0092] 11、每孔加入50μL终止液，选择酶标仪450nm检测OD值。

[0093] 该产品临床试验以《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》明确的疾病确诊/排除标准为对比，选取684例病例，其中确诊病例282例，排除病例402例。

[0094] 该实施例制备的试剂盒检测效果评价如下：

[0095] 以下检测使用的仪器是：酶标仪 型号：HBS-1101；生产厂家：南京德铁实验设备有限公司

[0096] 1、稳定性

[0097] 1.1设计要求：试剂盒37±1℃放置7天，外观、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出限、精密度检测结果均应符合设计要求。

[0098] 1.2试验方法：将试剂盒在37℃存放7天后取出，检测参考品。

[0099] 1.3试验结果

[0100] 表4稳定性试验结果

[0101]

[0102] 表5 具体检测数据

[0103]

[0104]

[0105]

[0106]

[0107] 2.精密度

[0108] 2.1设计要求

[0109] 2.1.1批内精密度：检测参考品中3个不同水平精密度参考品，应符合以下要求[0110] 2.1.1.1精密度参考品N：阴性检出率应为100%（n=20）；

[0111] 2.1.1.2精密度参考品L：阳性检出率应≥90%（n=20）；

[0112] 2.1.1.3精密度参考品CV：阳性检出率为100%，且CV≤10%（n=20）。

[0113] 2.1.2批间精密度：检测参考品中精密度参考品CV，阳性检出率应为100%，且CV≤15%。

[0114] 2.2试验方法

[0115] 2.2.1批内精密度：检测精密度参考品，每个水平重复检测20次，计算阴性检出率、阳性检出率。依据测定结果（S/CO）的平均值与标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.1要求。

[0116] 变异系数（CV%）＝SD/平均值×100%…………公式（2）

[0117] 2.2.2批间精密度：用三批试剂盒检测参考品中精密度参考品CV，每批次测试20管，计算阳性检出率。同时计算60次检测结果的平均值和标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.2要求。

[0118] 2.3精密度参考品测定结果

[0119] 表6 精密度测定结果

[0120]

[0121]

[0122] 3、灵敏度以及特异性

[0123] 表7 排除2019-nCoV感染的部分检测结果

[0124]

[0125]

[0126] 表8 确诊2019-nCoV感染的部分检测结果

[0127]

[0128] 根据检验结果使用SPSS软件进行ROC曲线分析，具体结果如下表所示，ROC曲线分析图如图1所示。

[0129] 表9 曲线下的面积

[0130]

[0131] 样本S/CO ≥ 1，检测结果判为阳性；样本S/CO < 1，检测结果判为阴性。其中S/CO值为检测样本的OD值/cutoff值。通过ROC曲线确定试剂盒在不同cutoff值的情况下，试剂盒灵敏度及特异性的表现，筛选出最优的cutoff值，其值为0.1。

[0132] ROC曲线分析结果显示曲线下面积为0.971，表明本发明所述试剂盒在临床诊断中的准确性较高。

[0133] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。