SETD抑制剂在抗肿瘤耐药性的应用及含有其的药物

摘要

本发明公开了SETD抑制剂的用途，所述SETD抑制剂用于制备增强肿瘤细胞对药物敏感性的药物、或制备预防和/或治疗肿瘤的药物。本发明通过流式细胞术检测细胞凋亡情况，发现SETD8抑制剂UNC0379联合顺铂处理组与单独顺铂处理组比较，SETD8抑制剂UNC0379联合顺铂处理组可以显著促进宫颈癌细胞Siha的凋亡，表明UNC0379具有增强肿瘤细胞对顺铂的敏感性的作用，解决了在宫颈癌在化疗过程中存在的肿瘤耐药性的问题。

权利要求

1.一种预防和/或治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述药物包括有效量的SETD抑制剂，有效量的抗肿瘤药物及药学上可接受的载体；所述SETD抑制剂为UNC0379；所述抗肿瘤药物为顺铂；所述UNC0379的结构式如下：

当UNC0379与顺铂联合用药时，物组合为：10药μM顺铂搭配12μM UNC0379；所述肿瘤为宫颈癌。

说明书

SETD抑制剂在抗肿瘤耐药性的应用及含有其的药物

技术领域

[0001] 本发明属于生物医药技术领域，具体涉及SETD抑制剂在抗肿瘤耐药性的应用及含有其的药物。

背景技术

[0002] 宫颈癌是威胁女性健康的最严重疾病之一，是中国女性第二大常见癌症，宫颈癌的治疗仍然是一个艰巨的任务。顺铂是宫颈癌治疗中应用最广泛、最有效的抗癌药物之一，虽然顺铂对宫颈癌症治疗有明显效果，其耐药性成为临床治疗的难点。目前，本领域迫切需要寻找能够增强肿瘤细胞对肿瘤药物敏感性的方法。

[0003] 运用高通量组学寻找宫颈癌新的有效分子靶标进行靶向干预，建立新的宫颈癌治疗策略，对提高我国宫颈癌治疗水平和降低死亡率，对于改变我国宫颈癌危害的现状具有重要意义。

[0004] SETD8(又称SET8、PR-SET7、KMT5a)是现今发现唯一能够特异性单甲基化H4K20的赖氨酸甲基转移酶，仅在多细胞生物体内表达。SETD8及其催化形成的H4K20me1共同参与了细胞周期调控、染色质结构及基因转录的调节，近年来研究发现SETD8在多种肿瘤组织中高表达，参与调控体内细胞的细胞周期、增殖及凋亡等过程，涉及肿瘤的发生、生长、转移等多个环节。而目前针对SETD8 的研究主要集中在癌症的发生机制中，在正常的生理情况下，对于SETD8发挥作用的具体分子机制尚不十分明确。目前尚不明确SETD8在宫颈癌发展过程中充当的角色。

[0005] Anqi Ma等人在2014年成功合成SETD8的第一种底物竞争性抑制剂UNC0379，Veronica Veschi等研究者首次在临床前异种移植高风险神经母细胞瘤模型中，发现(UNC0379)SETD8抑制的应用组有着显著的生存优势，为SETD8 作为治疗靶标提供应用证据。

[0006] 目前，尚未有文献报道SETD8抑制剂与肿瘤耐药性的关系，更未有文献报道UNC0379与肿瘤耐药性的关系。

发明内容

[0007] 基于此，针对上述技术问题，本发明旨在寻找可以提高肿瘤对化疗药物敏感性的药物。

[0008] 本发明的发明人通过全外显子测序(whole exome sequencing，WES)对宫颈癌组织标本进行基因突变分析，将测序结果与野生型SETD8序列进行比对，找到突变型SETD8。进一步根据宫颈癌患者的化疗效果信息，将宫颈癌患者分为紫杉醇联合顺铂化疗敏感组和耐药组，根据测序找出的SETD8突变体发生在敏感组还是耐药组，统计分析数据发现93％的SETD8突变体发生在对紫杉醇联合顺铂化疗敏感的宫颈癌组织中。因此推测SETD8突变能够促进宫颈癌对化疗的敏感性。

[0009] 本发明就是基于上述背景而作出的，本发明其中一个发明目的提供了SETD 抑制剂在肿瘤耐药性中的用途，所述SETD抑制剂用于制备增强肿瘤细胞对药物敏感性的药物、或制备预防和/或治疗肿瘤的药物。

[0010] 进一步地，所述SETD抑制剂用于增强肿瘤细胞对顺铂的敏感性。更进一步地，所述SETD抑制剂为UNC0379。

[0011] UNC0379(trifluoroacetate)是一种底物竞争性的组蛋白赖氨酸甲基转移酶 SETD8的选择性抑制剂，IC50值为7.3±1.0μM，选择性高于其他15种甲基转移酶。物理性质为晶体固体，分子量413.56，可溶于DMSO，分子式为C23H35N5O2，其化学结构为：

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[0013] 本发明的发明人经体外细胞试验证明，通过流式细胞术检测细胞凋亡情况，发现SETD8抑制剂UNC0379联合顺铂DDP处理组与单独DDP处理组比较，可以显著促进宫颈癌细胞Siha的凋亡效果，进一步证实了UNC0379具有增强肿瘤细胞对顺铂的敏感性的作用。

[0014] 进一步地，所述肿瘤为宫颈癌、肺癌、肝癌、子宫癌或卵巢癌。

[0015] 进一步地，所述肿瘤为宫颈癌。

[0016] 本发明其中一个发明目的提供了一种预防和/或治疗肿瘤的药物，所述药物包括有效量的SETD抑制剂、有效量的抗肿瘤药物及药学上可接受的载体。

[0017] 进一步地，所述SETD抑制剂为UNC0379。进一步地，所述抗肿瘤药物为顺铂。具体地，当两者联合用药时，优选按顺铂：UNC0379＝1：0.1～1的浓度比，更优选地的药物组合为:10uM DDP搭配12uM UNC0379，治疗效果最好。

[0018] 本发明中分别检测过DDP(uM)：UNC0379(uM)的浓度配比为10：0， 10：2，10：4，10：6，10：8，10：10，10：12，10：14，发现10：12的细胞毒性效果最好。

[0019] 本发明其中一个发明目的提供了一种增强肿瘤细胞对药物敏感性的药物，所述药物包括有效量的SETD抑制剂及药学上可接受的载体。

[0020] 进一步地，所述SETD抑制剂为UNC0379。

[0021] 进一步地，所述增强肿瘤细胞对药物敏感性的药物还可以包括任选的具有增强肿瘤对化疗药物敏感性的药物。

[0022] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

[0023] 本发明揭示了SETD抑制剂与肿瘤耐药性的关系，发现了UNC0379可以增强肿瘤细胞对药物的敏感性，克服了在宫颈癌在化疗过程中存在的肿瘤耐药性的问题。

具体实施方式

[0024] 以下通过实施例形式的具体实施方法，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。

[0025] 实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

[0026] 实施例一

[0027] 本实施例中以0,0.01,0.1,1,10,20,40,60,80,100uM的DDP浓度梯度，分别配比不同浓度的UNC0379，通过细胞杀伤效果，绘制细胞存活率曲线，计算各UNC0379浓度处理后对应的DDP的IC50值，通过IC50值变化程度反映DDP 敏感性变化程度。结果发现，UNC0379为12uM时，DDP的IC50值最低，因此选用DDP(uM)：UNC0379(uM)为10：12配比。

[0028] 表1 DDP浓度梯度与不同浓度UNC0379配比的IC50值

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[0031] 实施例二、细胞凋亡实验

[0032] 消化宫颈癌SiHa细胞，接种于6孔板中，每孔细胞5×105个；细胞贴壁后分别加入不同的药物(对照组，12uM UNC0379组，10uM DDP组，10uM DDP+12uM UNC0379组)，孵育48小时后，消化细胞后收集于4ml EP管中，1000r/min离心5min，弃去培养液。使用冷的PBS缓冲液洗细胞两次后，再用 1×Binding Buffer缓冲液制成1×106/ml细胞悬液。在细胞悬液中分别依次加入 5μl的Annexin V-FITC和PI，轻轻混匀，室温避光处放置15分钟。1小时内上流式细胞仪测定结果，FITC最大激发波长为488nm，最大发射波长525nm； PI-DNA复合物的最大激发波长为535nm，最大发射波长为615nm。以FITC为横坐标，PI为纵坐标绘制散点图，结果如图1～2所示。

[0033] 从图1中可看出，统计分析显示，与Mock组比较，UNC0379组，Mock+DDP 组，UNC0379+DDP组的P值分别为0.0029，0.0322，<0.0001，细胞凋亡率均有显著性差异。UNC0379+DDP组与UNC0379组，Mock+DDP组相比较，P值分别为0.0002，<0.0001，细胞凋亡率均有显著性差异，证明UNC0379+DDP可以显著增强细胞凋亡。

[0034] 从图2中可看出，通过流式细胞术检测细胞凋亡情况，发现SETD8抑制剂 UNC0379联合顺铂DDP处理组与单独DDP处理组比较，可以显著促进宫颈癌细胞Siha的凋亡效果，证明，SETD8抑制剂UNC0379可以提高宫颈癌细胞Siha 对顺铂的敏感性。

[0035] 上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所述技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。