一种辅助判读KI67增殖指数的标准比对卡

摘要

本发明涉及免疫组化检测领域，具体公开了一种辅助判读KI67增殖指数的标准比对卡的制备方法，包括如下步骤：1)全自动数字切片扫描系统扫描KI67免疫组织化学染色的肿瘤组织切片，得到图像数据；2)选取图像数据中的热点区域，使用计算机判读热点区域的KI67阳性细胞占热点区域内肿瘤细胞的比例，为KI67增殖指数；3)截取1个以上已知KI67增殖指数的热点区域的图片。本发明的标准比对卡准确性好，且不容易受医生资历年限的影响，能辅助医生对KI67增殖指数进行稳定的判断。

权利要求

1.一种辅助判读KI67增殖指数的标准比对卡的制备方法，包括如下步骤：

1）全自动数字切片扫描系统扫描KI67免疫组织化学染色的肿瘤组织切片，得到图像数据；

2）选取图像数据中的热点区域，使用计算机判读热点区域的KI67阳性细胞占热点区域内肿瘤细胞的比例，为KI67增殖指数；

3）截取1个以上已知KI67增殖指数的热点区域的图片；所截取的热点区域中，至少1个区域的KI67增殖指数在20%‑29%范围内；

所述热点区域指图像数据中KI67阳性细胞占比为1%‑99%的图像区域。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1）所述的肿瘤为乳腺癌。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3）所截取的热点区域中，对应的KI67增殖指数包括5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%中至少1个。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤3）所截取的热点区域中，对应的KI67增殖指数为5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%。

5.如权利要求1‑4任一所述的制备方法，其特征在于，它还包括打印步骤3）所得图片。

6.权利要求1‑5任一所述方法制备得到的辅助判读KI67增殖指数的标准比对卡。

说明书

一种辅助判读KI67增殖指数的标准比对卡

技术领域

[0001] 本发明涉及免疫组化检测领域。

背景技术

[0002] KI67是一种非组蛋白核皮质蛋白，在细胞周期G1，S，G2和M期细胞核中表达，而不在G0期(细胞静止状态)表达。因此，肿瘤细胞中检测表达KI67的细胞的比例(也称“KI67增
殖指数”)能反映肿瘤细胞中正在进行分裂的细胞的比例，经常用于判断肿瘤的恶性程度，
KI67增殖指数越高，通常恶性程度越高。

[0003] KI67增殖指数已成为乳腺癌(BC)的预测和预后因素。根据St.Gallen的指南，高增殖KI67是雌激素受体(ER)阳性HER2阴性BC复发风险增加的特征之一，间接支持了这些患者
在内分泌治疗中加入化疗的价值。2013年圣加仑共识建议在ER阳性HER2阴性BC中KI67指数
截止值为20％，而2015年大多数小组接受的阈值在20％‑29％范围内。

[0004] 目前缺乏KI67判读的标准化方法，导致不同观察者或实验室得到的KI67判读结果出现较大差别，其结果可靠性得不到保证。因此，美国临床肿瘤学会(ASC0)肿瘤标记指南和
国际KI67工作组不建议常规使用KI67作为新诊断BC患者的预后评估。

[0005] 为了降低来自观察者和实验室差异带来的主观误差，提高KI67判读结果的可信度，需要建立辅助K167标准化判读的方法。

发明内容

[0006] 本发明要解决的技术问题是，提供一种用于辅助判读乳腺癌K167增殖指数的标准比对卡。

[0007] 本发明的技术方案包括：

[0008] 一种辅助判读K167增殖指数的标准比对卡的制备方法，包括如下步骤：

[0009] 1)全自动数字切片扫描系统扫描KI67免疫组织化学染色的肿瘤组织切片，得到图像数据；

[0010] 2)选取图像数据中的热点区域，使用计算机判读热点区域的KI67阳性细胞占热点区域内肿瘤细胞的比例，为KI67增殖指数；

[0011] 3)截取1个以上已知KI67增殖指数的热点区域的图片；

[0012] 所述热点区域指图像数据中KI67阳性细胞占比为1％‑99％的图像区域。

[0013] 如前述的制备方法，步骤1)所述的肿瘤为乳腺癌。

[0014] 如前述的制备方法，步骤3)所截取的热点区域中，至少1个区域的KI67增殖指数在20％‑29％范围内。

[0015] 如前述的制备方法，步骤3)所截取的热点区域中，对应的KI67增殖指数包括5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％中至少1个。

[0016] 如前述的制备方法，步骤3)所截取的热点区域中，对应的KI67增殖指数为5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％。

[0017] 如前述的制备方法，它还包括打印步骤3)所得图片。

[0018] 前述方法制备得到的辅助判读KI67增殖指数的标准比对卡。

[0019] 本发明具有如下有益效果：

[0020] 本发明的标准比对卡相比常规判读方法，准确性更高，可重复性更高，不易受主观因素的影响。

[0021] 本发明的标准比对卡以图片方式呈现KI67的判读标准，成本低，使用方便。

[0022] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

[0023] 以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容
所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

[0024] 图1为基线与各医生第一、二、三遍判读所得KI67增殖指数散点图。

[0025] 图2为第一、二、三遍判读中各医生所得KI67增殖指数两两比较的散点图。

具体实施方式

[0026] 实施例1本发明的标准比对卡的制作和使用方法

[0027] 使用PRECICE 600系列型号全自动数字切片扫描系统扫描KI67免疫组织化学染色的乳腺癌肿瘤切片，并转换成整个载玻片图像数据。选择KI67阳性细胞比例最高的区域作
为“热点”区域，由计算机判读热点区域的KI67阳性细胞占热点区域内肿瘤细胞的比例，为
KI67增殖指数，选取KI67增殖指数分别为5％，10％，15％，20％，30％，40％，50％，60％，
70％，80％的区域，截取该图片的区域，彩色打印，即得。

[0028] 使用时，只需对比待检的乳腺癌KI67免疫组化染色切片与各标准比对卡进行比较，寻找最接近的标准比对卡，待检样本的KI67增殖指数即处于最接近标准比对卡对应
KI67增殖指数左右。

[0029] 实施例2本发明的标准比对卡的制作和使用方法

[0030] 使用PRECICE 600系列型号全自动数字切片扫描系统扫描KI67免疫组织化学染色的乳腺癌肿瘤切片，并转换成整个载玻片图像数据。选择KI67阳性细胞比例最高的区域作
为“热点”区域，由计算机判读热点区域的KI67阳性细胞占热点区域内肿瘤细胞的比例，为
KI67增殖指数，选取KI67增殖指数分别为15％，20％，30％，50％，80％的区域，截取该图片
的区域，彩色打印，即得10张不同的标准卡片。

[0031] 使用时，只需对比待检的乳腺癌K167免疫组化染色切片与各标准比对卡进行比较，寻找最接近的标准比对卡，待检样本的KI67增殖指数即处于最接近标准比对卡对应
KI67增殖指数左右。

[0032] 本发明的标准比对卡所对应KI增殖指数并不限于实施例中所列举的KI67增殖指数，该增殖指数可根据实际情况、实际需求设置。

[0033] 以下将用实验例的形式对本发明的有益效果进一步说明。

[0034] 实验例1本发明的标准比对卡的效果验证

[0035] 本实验例的目的是比较使用常规判读方法(方法1)、使用常规标准比对卡的方法(方法2)和本发明标准比对卡的方法(方法3)受判读人员的影响的大小。

[0036] 所述方法1为：病理医师日常工作中，无任何辅助工具，通过显微镜下选取KI67免疫组织化学染色载玻片中一个热点区域，人工判读KI67阳性细胞占比，即为乳腺癌KI67增
殖指数；

[0037] 所述方法2是在实施例1的基础上，将计算机判读KI67增殖指数，改为人工计数，具体为：

[0038] 使用PRECICE 600系列型号全自动数字切片扫描系统扫描KI67免疫组织化学染色的载玻片并转换成整个载玻片图像数据，选取KI67免疫组织化学染色载玻片中一个热点区
域，人工计数，得每500个细胞里KI67阳性细胞的比例，即为KI67增殖指数，将KI67增殖指数
分别为5％，10％，15％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％的区域截图，彩色打印，即
得10张常规标准比对卡。使用时，对比待检的乳腺癌KI67免疫组化染色切片与各标准比对
卡进行比较，寻找最接近的标准比对卡，待检样本的KI67增殖指数即处于最接近标准比对
卡对应KI67增殖指数左右。

[0039] 所述方法3同实施例1。

[0040] 1.方法

[0041] 1)选取乳腺浸润性癌标本100例经过KI67免疫组化染色，由5名年资不同病理医师判读，从A医生到E医生分别参加工作5年，3年，2年，1年，＜1年。

[0042] 这100例标本均被各个医师判读3次，第一遍使用方法1，第二遍使用方法2，第三遍使用方法3；第一、二、三遍判读的时间间隔为1周。

[0043] 2)在计算机图像上人工计数每张切片上所有肿瘤细胞，计算阳性细胞数/肿瘤细胞总数，以此作为基线。

[0044] 3)使用计算机程序SPSS(社会科学统计软件包)版本16对判读所得KI67增殖指数进行分析，判断每位病理医生每次判读结果与基线的一致性，以及各医生判断结果两两对
比的一致性，然后分别计算3次的kappa值。

[0045] Kappa值被解释如下：＜0时，完全没有一致性；0‑0.20时，一致性较差；0.21‑0.40时，一致性一般；0.41‑0.60时，一致性中等；0.61‑0.8时，一致性较强；0.80‑1.00一致性强。

[0046] 2.结果

[0047] 如图1所示，各医生在第一、二、三遍判读的KI67值与基线线性相关性逐渐增强，也说明判读准确性增强。

[0048] 如表1所示，三次判读中，第三遍与基线的kappa值最高，即一致性更高。

[0049] 表1三次判读结果与基线的一致性(kappa值)

[0050]

[0051] 如表2和图2所示，各医生两两对比的结果中，第三遍判读的一致性相比其余两遍判读明显更高。

[0052] 表2医生两两对比的Kappa值

[0053]

[0054] 综上，本发明的标准比对卡准确性好，且不容易受医生资历年限的影响，能辅助医生对KI67增殖指数进行稳定的判断。