一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方法转让专利
申请号 : CN202010206676.1
文献号 : CN111514320B
文献日 : 2021-08-10
发明人 : 雷霁卿 , 王瑞 , 曹森 , 吴文能 , 吉宁 , 马超 , 巴良杰
申请人 : 贵阳学院
摘要 :
本发明提供了一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syingaepv.Actinidiae,PSA)的方法，属于猕猴桃花粉处理技术领域，所述方法包括以下步骤：1)在猕猴桃花粉脱药过程充入200～800mg/m3的臭氧；2)将脱药后的猕猴桃花粉包装，以60Co‑γ射线辐照获得灭菌花粉，所述60Co‑γ射线辐照的剂量为300～900Gry。所述方法采用60Co‑γ射线辐照结合臭氧处理，目的为去除花粉携带溃疡病致病菌，并非杀灭花粉携带的所有细菌，可以更好地保护猕猴桃花粉活性。以本发明所述方法灭菌的花粉授粉，获得猕猴桃果实商品果率、果实品质、种子数和耐储性均未受影响。
权利要求 :
1.一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方法，步骤如下：3
1)在猕猴桃花粉脱药过程充入300～500mg/m的臭氧；
2)将脱药后的猕猴桃花粉包装后，以60Co‑γ射线辐照获得灭菌花粉，所述60Co‑γ射线辐照的剂量为350～450Gry。
3
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中充入臭氧的浓度为400mg/m。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述60Co‑γ射线辐照的剂量为
380～420Gry。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述60Co‑γ射线辐照的剂量为
400Gry。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述60Co‑γ射线辐照的温度为20～30℃。
说明书 :
一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方法
技术领域
[0001] 本发明属于猕猴桃商品花粉处理技术领域，尤其涉及一种杀灭猕猴桃商品花粉中溃疡病致病菌PSA的方法。
背景技术
[0002] 猕猴桃属雌雄异株植物，是一种营养价值丰富的水果，含有丰富的维生素C、钾、钙、以及胡萝卜素等丰富的维生素，具有清理肠胃、抗衰老、调节血液循环等功效。
[0003] 猕猴桃溃疡病是一种低温、高湿性病害，是一种严重威胁猕猴桃生产的毁灭性细菌性病害，传播性和潜伏性极强，雄株难以避免感染猕猴桃溃疡病致病菌—丁香假单胞杆
菌(Pseudomonas syingae pv.Actinidiae,PSA)，而商品花粉如果未能彻底杀灭PSA，会存
在跨区域、大面积传播PSA的隐患。
菌(Pseudomonas syingae pv.Actinidiae,PSA)，而商品花粉如果未能彻底杀灭PSA，会存
在跨区域、大面积传播PSA的隐患。
[0004] 传统臭氧灭菌需平铺花粉，场地占用大，成本高；ClO2水溶液处理法仅适用于商品花粉授粉前小批量，处理结束后需要立即进行授粉，不能长期保存。
发明内容
[0005] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方60
法；所述方法采用 Co辐照结合臭氧处理猕猴桃花粉；本发明所述方法采用的辐照和臭氧处
理的剂量只针对花粉携带溃疡病致病菌，并非杀灭花粉携带的所有细菌，因此可以更好地
保护花粉活性。以本发明所述方法灭菌的花粉授粉，获得猕猴桃果实商品果率、果实品质、
种子数和耐储性均未受影响。
法；所述方法采用 Co辐照结合臭氧处理猕猴桃花粉；本发明所述方法采用的辐照和臭氧处
理的剂量只针对花粉携带溃疡病致病菌，并非杀灭花粉携带的所有细菌，因此可以更好地
保护花粉活性。以本发明所述方法灭菌的花粉授粉，获得猕猴桃果实商品果率、果实品质、
种子数和耐储性均未受影响。
[0006] 为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
[0007] 本发明提供了一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方法，包括以下步骤：
[0008] 1)在猕猴桃花粉脱药过程充入200～800mg/m3的臭氧；
[0009] 2)将脱药后的猕猴桃花粉包装后，以60Co‑γ射线辐照获得灭菌花粉，所述60Co‑γ射线辐照的剂量为300～900Gry。
[0010] 优选的，步骤1)中充入臭氧的浓度为300～500mg/m3。
[0011] 优选的，步骤1)中充入臭氧的浓度为400mg/m3。
[0012] 优选的，步骤2)中所述60Co‑γ射线辐照的剂量为350～450Gry。
[0013] 优选的，步骤2)中所述60Co‑γ射线辐照的剂量为380～420Gry。
[0014] 优选的，步骤2)中所述60Co‑γ射线辐照的剂量为400Gry。
[0015] 优选的，所述60Co‑γ射线辐照的温度为20～30℃。
[0016] 本发明的有益效果：本发明提供的杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方法，采60
用 Co‑γ射线辐照结合臭氧处理，在花粉脱药过程中吹入低浓度臭氧，解决传统臭氧灭菌
60
只能平铺处理的缺陷；脱药后的花粉进行小剂量 Co‑γ射线辐照处理；此方法可去除花粉
携带溃疡病致病菌，并非杀灭花粉携带所有细菌，可以更好地保护猕猴桃花粉活性。以本发
明所述方法灭菌的花粉授粉，获得猕猴桃果实商品果率、果实品质、种子数和耐储性均未受
影响。
用 Co‑γ射线辐照结合臭氧处理，在花粉脱药过程中吹入低浓度臭氧，解决传统臭氧灭菌
60
只能平铺处理的缺陷；脱药后的花粉进行小剂量 Co‑γ射线辐照处理；此方法可去除花粉
携带溃疡病致病菌，并非杀灭花粉携带所有细菌，可以更好地保护猕猴桃花粉活性。以本发
明所述方法灭菌的花粉授粉，获得猕猴桃果实商品果率、果实品质、种子数和耐储性均未受
影响。
[0017] 本发明所述方法利于大批量生产去除PSA商品花粉，成本低廉，可操作性高，农户购买到花粉后可直接使用。
具体实施方式
[0018] 本发明提供了一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方法，包括以下步骤：1)3
在猕猴桃花粉脱药过程充入200～800mg/m 的臭氧；2)将脱药后的猕猴桃花粉包装后，以
60 60
Co‑γ射线辐照获得灭菌花粉，所述 Co‑γ射线辐照的剂量为300～900Gry。
在猕猴桃花粉脱药过程充入200～800mg/m 的臭氧；2)将脱药后的猕猴桃花粉包装后，以
60 60
Co‑γ射线辐照获得灭菌花粉，所述 Co‑γ射线辐照的剂量为300～900Gry。
[0019] 本发明在猕猴桃花粉脱药过程充入200～800mg/m3的臭氧。在本发明中，所述花粉脱药过程优选的在脱药机中进行，本发明对所述脱药机没有特殊限定，采用本领域常规的
3
花粉脱药机即可。在本发明中，所述充入臭氧的浓度优选为300～500mg/m ，更优选为
3
400mg/m 。本发明对所述臭氧的来源没有特殊限定，采用臭氧发生器制备臭氧即可。在本发
明中，所述充入臭氧的浓度优选的采用臭氧监测仪检测。本发明将脱药后的猕猴桃花粉包
60 60
装后，以 Co‑γ射线辐照获得灭菌花粉。在本发明中，所述 Co‑γ射线辐照的剂量优选为
350～450Gry，更优选为380～420Gry，最优选为400Gry。本发明对所述包装没有特殊限定，
60
采用本领域常规的商品包装即可。在本发明中，所述 Co‑γ射线辐照委托商业辐照公司进
60
行。在本发明中，所述 Co‑γ射线辐照的温度优选为20～30℃，更优选为25℃。
3
花粉脱药机即可。在本发明中，所述充入臭氧的浓度优选为300～500mg/m ，更优选为
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400mg/m 。本发明对所述臭氧的来源没有特殊限定，采用臭氧发生器制备臭氧即可。在本发
明中，所述充入臭氧的浓度优选的采用臭氧监测仪检测。本发明将脱药后的猕猴桃花粉包
60 60
装后，以 Co‑γ射线辐照获得灭菌花粉。在本发明中，所述 Co‑γ射线辐照的剂量优选为
350～450Gry，更优选为380～420Gry，最优选为400Gry。本发明对所述包装没有特殊限定，
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采用本领域常规的商品包装即可。在本发明中，所述 Co‑γ射线辐照委托商业辐照公司进
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行。在本发明中，所述 Co‑γ射线辐照的温度优选为20～30℃，更优选为25℃。
[0020] 在本发明中，所述灭菌花粉在授粉前，于20～25℃放置2～4h，然后与石松子粉混合后进行授粉。在本发明中，优选的将灭菌花粉放置3h；所述灭菌花粉和石松子粉混合的质
量比优选为1:1～1:0.4。本发明对所述授粉的具体操作没有特殊限定，采用本领域常规的
授粉操作即可。
量比优选为1:1～1:0.4。本发明对所述授粉的具体操作没有特殊限定，采用本领域常规的
授粉操作即可。
[0021] 下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
[0022] 实施例1
[0023] 猕猴桃花粉生产脱药过程中通入臭氧(400mg/m3)进行臭氧灭菌，花粉装入商品包60
装后，采用 Co‑γ射线辐照(400Gry)灭菌。
装后，采用 Co‑γ射线辐照(400Gry)灭菌。
[0024] 对灭菌花粉进行PCR扩增检测PSA：
[0025] 灭菌花粉前处理：采用灭菌花粉提取基因组DNA，以提取的基因组DNA作为模板进行PCR扩增。扩增程序如下：
[0026] 预变性94℃、5min；采用变性94℃、60s，退火48℃、60s，延伸72℃、60s的扩增程序，循环30次。
[0027] PCR引物
[0028] PsaF3：5’‑ACCTTGGTGAAGTTGGTCAGAGC‑3’(SEQ ID No.1)
[0029] PsaR4：5’‑CGCACCCTTCAATCAGGATG‑3’(SEQ ID No.2)
[0030] PCR扩增体系：
[0031] PCR扩增程序：
[0032] 将PCR扩增后的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，未出现170bp特异扩增条带，检测结果为阴性。
[0033] 对灭菌花粉进行花粉活力检测
[0034] 花粉活力检测方法：离体萌发法，参考以下文献中记载的方法进行：Vanneste J L,Giovanardi D,Yu J,et al.Detection of Pseudomonas syringae pv.actinidiae in
kiwifruit pollen samples[J].New Zealand Plant Protection,2011,64:246‑251.
kiwifruit pollen samples[J].New Zealand Plant Protection,2011,64:246‑251.
[0035] 检测结果：灭菌花粉的平均花粉活力为62.3％；未进行灭菌的花粉的平均活性为68.5％。
[0036] 实施例2
[0037] 不同灭菌方法PSA检测结果、不同灭菌方法对花粉活力的影响
[0038] PSA检测和花粉活力检测方法同实施例1。
[0039] PSA检测结果如表1。
[0040] 表1不同灭菌方法PSA的检测结果
[0041]
[0042] 花粉活力检测结果如表2所示。
[0043] 表2不同灭菌方法花粉活力检测结果
[0044]
[0045] 实施例3
[0046] 猕猴桃种植园内选择五年生健康、无病害、树势相近的‘贵长’猕猴桃果树20棵，每60
10棵数为一个实验组，实验组间间隔一亩地，采用实施例1中的 Co‑γ射线辐照(400Gry)+
3
臭氧(400mg/m)灭菌生产的商品花粉于盛花期进行授粉。对照包括不进行灭菌处理的猕猴
3 3
桃花粉(空白)、“400Gry+600mg/m”灭菌处理的猕猴桃花粉和“400Gry+800mg/m”灭菌处理
的猕猴桃花粉。
10棵数为一个实验组，实验组间间隔一亩地，采用实施例1中的 Co‑γ射线辐照(400Gry)+
3
臭氧(400mg/m)灭菌生产的商品花粉于盛花期进行授粉。对照包括不进行灭菌处理的猕猴
3 3
桃花粉(空白)、“400Gry+600mg/m”灭菌处理的猕猴桃花粉和“400Gry+800mg/m”灭菌处理
的猕猴桃花粉。
[0047] 授粉后一个月调查座果率可知，实验组与对照组相比座果率提高5％。
[0048] 十月初猕猴桃成熟后每棵树随机采摘30个猕猴桃果实，调查果实品质可知，与对照组相比，实验组果重与对照组相比无统计学差异、果实纵径增加、横径减小、果形指数减
小；实验组种子数量、种子总重量、单粒种子重量，可溶性固形物、干物质、酸度、维生素C含
量均无统计学差异(P＜0.05)，果实营养品质无变化；实验组乙烯生成速率与对照组无差
异，果皮硬度增加，耐贮性更好。具体的结果见表3。
小；实验组种子数量、种子总重量、单粒种子重量，可溶性固形物、干物质、酸度、维生素C含
量均无统计学差异(P＜0.05)，果实营养品质无变化；实验组乙烯生成速率与对照组无差
异，果皮硬度增加，耐贮性更好。具体的结果见表3。
[0049] 表3不同灭菌方法获得的灭菌花粉授粉后的果实品质数据对比
[0050]
[0051]
[0052] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应
视为本发明的保护范围。
视为本发明的保护范围。