一种制备干酪乳杆菌菌粉的方法

摘要

本发明公开了一种制备干酪乳杆菌菌粉的方法，属于微生物技术领域。本发明提供了一种制备干酪乳杆菌菌粉的方法，此方法为先将干酪乳杆菌接种至成分包含乙二胺四乙酸二钠的培养基中培养，得到干酪乳杆菌菌体，然后将干酪乳杆菌菌体在冻干保护剂的保护下进行冷冻干燥，得到干酪乳杆菌菌粉；利用此方法制备得到的干酪乳杆菌菌粉冻干存活率高且单位质量干酪乳杆菌菌粉的活菌数高，其中，干酪乳杆菌冻干存活率高达85.28±6.86％，单位质量干酪乳杆菌活菌数高达3.8×1011CFU/g。

权利要求

1.一种制备干酪乳杆菌菌粉的方法，其特征在于，所述方法为将干酪乳杆菌接种至含有乙二胺四乙酸二钠和/或乙二胺四乙酸的培养基中进行培养，得到菌液；将菌液离心，收集菌体；将菌体进行干燥，得到干酪乳杆菌菌粉；

所述含有乙二胺四乙酸二钠和/或乙二胺四乙酸的培养基成分为：葡萄糖20g/L、酵母浸粉25g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、Tween‑80 1g/L、乙二胺四乙酸二钠和/或乙二胺四乙酸总浓度1～3g/L。

2.如权利要求1所述的一种制备干酪乳杆菌菌粉的方法，其特征在于，所述培养基的成分为20g/L葡萄糖、25g/L酵母浸粉、0.58g/L硫酸镁、0.025g/L硫酸锰、1g/L Tween‑80和3g/L乙二胺四乙酸二钠。

3.如权利要求1所述的一种制备干酪乳杆菌菌粉的方法，其特征在于，所述培养基的成分为20g/L葡萄糖、25g/L酵母浸粉、0.58g/L硫酸镁、0.25g/L硫酸锰、1g/L Tween‑80和3g/L乙二胺四乙酸。

4.一种降低干酪乳杆菌表面物质分泌量的方法，其特征在于，所述方法为将干酪乳杆菌接种至含有乙二胺四乙酸二钠和/或乙二胺四乙酸的培养基中进行培养；所述含有乙二胺四乙酸二钠和/或乙二胺四乙酸的培养基成分为：葡萄糖20g/L、酵母浸粉25g/L、硫酸镁

0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、Tween‑80 1g/L、乙二胺四乙酸二钠和/或乙二胺四乙酸总浓度1～3g/L。

5.一种用于培养干酪乳杆菌的培养基，其特征在于，所述培养基成分为：葡萄糖20g/L、酵母浸粉25g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、Tween‑80 1g/L、乙二胺四乙酸二钠和/或乙二胺四乙酸总浓度1～3g/L。

6.权利要求1‑3任一所述的一种制备干酪乳杆菌菌粉的方法，或权利要求4所述的一种降低干酪乳杆菌表面物质分泌量的方法，或权利要求5所述的一种用于培养干酪乳杆菌的培养基在制备干酪乳杆菌菌粉中的应用。

说明书

一种制备干酪乳杆菌菌粉的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种制备干酪乳杆菌菌粉的方法，属于微生物技术领域。

背景技术

[0002] 干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)属于乳杆菌属(Lactobacillus)，是革兰氏阳性菌，不 产芽孢，无鞭毛，不运动，兼性异型发酵乳糖，不液化明胶；最适生长温度为37℃，G
+C含 量为45.6％～47.2％；菌体长短不一，两端呈方形，常成链；菌落粗糙，灰白色，有时呈
微黄 色，能发酵多种糖。干酪乳杆菌存在于人的口腔、肠道内含物和大便及阴道中，也常常
出现 在牛奶和干酪、乳制品、饲料、面团和垃圾中。

[0003] 干酪乳杆菌作为益生菌的一种，能够耐受有机体的防御机制，例如口腔中的酶、胃液中 的低PH值和小肠的胆汁酸等，因此，干酪乳杆菌进入人体后可以在肠道内大量存活，
起到 调节肠内菌群平衡、促进人体消化吸收等作用。除此以外，干酪乳杆菌还具有降血压、
降胆 固醇、促进细胞分裂、增强人体免疫、缓解乳糖不耐症、缓解过敏以及预防癌症等功
能。由 于具有显著的益生功效，干酪乳杆菌越来越成为人们研究、开发、生产的重点。

[0004] 干酪乳杆菌菌粉是市场上最常见的干酪乳杆菌产品，其主要是通过将干酪乳杆菌菌体进 行干燥获得的。冷冻干燥是目前干酪乳杆菌菌粉生产中最常用的干燥方法。虽然，
冷冻干燥 对干酪乳杆菌的损伤较小，但是，由于冷冻干燥过程中，干酪乳杆菌易发生低温
胁迫、冻结 应力损伤等导致的细胞膜通透性改变、蛋白质变性失活、pH动态平衡被破坏等
状况，而这些 状况都会导致干酪乳杆菌的活性降低，因此，在冷冻干燥前，需要在干酪乳杆
菌菌体中加入 特定的冻干保护剂，例如海藻糖、水苏糖、低聚异麦芽糖和/或菊粉等。

[0005] 并且，由于干酪乳杆菌在生长代谢过程中会产生表面物质(主要包括荚膜多糖及表面蛋 白)，而表面物质的存在会降低干酪乳杆菌菌体在冷冻干燥过程中的冻干存活率
(具体可见 参考文献：吴晟,崔树茂,毛丙永,唐鑫,赵建新,张灏,陈卫.干酪乳杆菌的表面
物质对其冻干存活 率的影响[J/OL].食品与发酵工业:1‑9)，并且，表面物质的存在会降低
会单位质量干酪乳杆菌 菌粉的活菌数，另外，表面物质含有多羟基结构，多羟基结构易与
水分子结合，进而导致干 酪乳杆菌培养液中干酪乳杆菌菌体收集难度增加，因此，在冷冻
干燥前，也需要尽可能的降 低干酪乳杆菌的表面物质分泌量。

[0006] 然而，现阶段并没有很好的降低干酪乳杆菌表面物质分泌量的方法，因此，急需找到一 种降低干酪乳杆菌表面物质分泌量的方法以提高干酪乳杆菌菌体在冷冻干燥过程中
的冻干存 活率，提高单位质量干酪乳杆菌菌粉的活菌数，以及，降低干酪乳杆菌培养液中
干酪乳杆菌 菌体的收集难度。

发明内容

[0007] [技术问题]

[0008] 本发明要解决的技术问题是提供一种降低干酪乳杆菌表面物质分泌量的方法。

[0009] [技术方案]

[0010] 为解决本发明的技术问题，本发明提供了一种降低干酪乳杆菌表面物质分泌量的方法， 所述方法为将干酪乳杆菌接种至含有乙二胺四乙酸二钠和/或乙二胺四乙酸的培养
基中进行 培养。

[0011] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基中，乙二胺四乙酸二钠的浓度为1～3g/L；或者， 所述培养基中，乙二胺四乙酸的浓度为1～3g/L；或者，所述培养基中，乙二胺四乙
酸二钠和 乙二胺四乙酸的总浓度为1～3g/L。

[0012] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基中，乙二胺四乙酸二钠的浓度为3g/L；或者， 所述培养基中，乙二胺四乙酸的浓度为3g/L；或者，所述培养基中，乙二胺四乙酸二钠
和乙 二胺四乙酸的总浓度为3g/L。

[0013] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含碳源和氮源；所述碳源包含葡萄糖； 所述氮源为酵母浸粉。

[0014] 在本发明的一种实施方式中，所述酵母浸粉为酵母浸粉FM528。

[0015] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基的碳氮比为4:1～4:5。

[0016] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基的碳氮比为4:5。

[0017] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含葡萄糖、酵母浸粉、硫酸镁、硫酸 锰、Tween‑80和乙二胺四乙酸二钠；或者，所述培养基的成分包含葡萄糖、酵母浸粉、
硫酸 镁、硫酸锰、Tween‑80和乙二胺四乙酸。

[0018] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含20g/L葡萄糖、25g/L酵母浸粉、 0.058g/L硫酸镁、0.025g/L硫酸锰、1g/L Tween‑80和3g/L乙二胺四乙酸二钠；或者，所
述 培养基的成分包含20g/L葡萄糖、25g/L酵母浸粉、0.58g/L硫酸镁、0.25g/L硫酸锰、1g/L
Tween‑80和3g/L乙二胺四乙酸。

[0019] 在本发明的一种实施方式中，所述培养的温度为30～37℃、时间为10～14h、pH为5～6。

[0020] 在本发明的一种实施方式中，所述培养的温度为37℃、时间为12h、pH为5。

[0021] 本发明还提供了一种制备干酪乳杆菌菌粉的方法，所述方法为将干酪乳杆菌接种至含有 乙二胺四乙酸二钠和/或乙二胺四乙酸的培养基中进行培养，得到菌液；将菌液离
心，收集菌 体；将菌体进行干燥，得到干酪乳杆菌菌粉。

[0022] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基中，乙二胺四乙酸二钠的浓度为1～3g/L；或者， 所述培养基中，乙二胺四乙酸的浓度为1～3g/L；或者，所述培养基中，乙二胺四乙
酸二钠和 乙二胺四乙酸的总浓度为1～3g/L。

[0023] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基中，乙二胺四乙酸二钠的浓度为3g/L；或者， 所述培养基中，乙二胺四乙酸的浓度为3g/L；或者，所述培养基中，乙二胺四乙酸二钠
和乙 二胺四乙酸的总浓度为3g/L。

[0024] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含碳源和氮源；所述碳源包含葡萄糖； 所述氮源为酵母浸粉。

[0025] 在本发明的一种实施方式中，所述酵母浸粉为酵母浸粉FM528。

[0026] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基的碳氮比为4:1～4:5。

[0027] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基的碳氮比为4:5。

[0028] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含葡萄糖、酵母浸粉、硫酸镁、硫酸 锰、Tween‑80和乙二胺四乙酸二钠；或者，所述培养基的成分包含葡萄糖、酵母浸粉、
硫酸 镁、硫酸锰、Tween‑80和乙二胺四乙酸。

[0029] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含20g/L葡萄糖、25g/L酵母浸粉、 0.058g/L硫酸镁、0.025g/L硫酸锰、1g/L Tween‑80和3g/L乙二胺四乙酸二钠；或者，所
述 培养基的成分包含20g/L葡萄糖、25g/L酵母浸粉、0.58g/L硫酸镁、0.25g/L硫酸锰、1g/L
Tween‑80和3g/L乙二胺四乙酸。

[0030] 在本发明的一种实施方式中，所述培养的温度为30～37℃、时间为10～14h、pH为5～6。

[0031] 在本发明的一种实施方式中，所述培养的温度为37℃、时间为12h、pH为5。

[0032] 在本发明的一种实施方式中，所述干燥为冷冻干燥。

[0033] 在本发明的一种实施方式中，所述方法为将干酪乳杆菌接种至含有乙二胺四乙酸二钠和/ 或乙二胺四乙酸的培养基中进行培养，得到菌液；将菌液离心，收集菌体；将菌体
重悬于冷 冻保护剂中，得到重悬液；将重悬液进行冷冻干燥，得到干酪乳杆菌菌粉。

[0034] 在本发明的一种实施方式中，所述冷冻保护剂为水苏糖溶液。

[0035] 在本发明的一种实施方式中，所述水苏糖溶液浓度为200g/L。

[0036] 本发明还提供了一种培养基，所述培养基的成分包含葡萄糖、酵母浸粉、硫酸镁、硫酸 锰、Tween‑80和乙二胺四乙酸二钠；或者，所述培养基的成分包含葡萄糖、酵母浸粉、
硫酸 镁、硫酸锰、Tween‑80和乙二胺四乙酸。

[0037] 在本发明的一种实施方式中，所述酵母浸粉为酵母浸粉FM528。

[0038] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基的碳氮比为4:1～4:5。

[0039] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基的碳氮比为4:5。

[0040] 在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含20g/L葡萄糖、25g/L酵母浸粉、 0.058g/L硫酸镁、0.025g/L硫酸锰、1g/L Tween‑80和3g/L乙二胺四乙酸二钠；或者，所
述 培养基的成分包含20g/L葡萄糖、25g/L酵母浸粉、0.58g/L硫酸镁、0.25g/L硫酸锰、1g/L
Tween‑80和3g/L乙二胺四乙酸。

[0041] 本发明还提供了上述降低干酪乳杆菌表面物质分泌量的方法或上述制备干酪乳杆菌菌粉 的方法或上述培养基在制备干酪乳杆菌菌粉中的应用。

[0042] [有益效果]

[0043] (1)本发明提供了一种降低干酪乳杆菌表面物质分泌量的方法，此方法可显著降低干酪 乳杆菌表面物质的分泌量，进而降低干酪乳杆菌培养液中干酪乳杆菌菌体的收集
难度；利用 此方法将干酪乳杆菌接种至成分包含乙二胺四乙酸二钠的培养基中进行培养
‑10
获得的干酪乳杆 菌菌体表面的荚膜多糖分泌量仅有0.93×10 mg/CFU，表面蛋白的分泌
‑10
量仅有1.01×10  mg/CFU。

[0044] (2)本发明提供了一种制备干酪乳杆菌菌粉的方法，此方法为先将干酪乳杆菌接种至成 分包含乙二胺四乙酸二钠的培养基中培养，得到干酪乳杆菌菌体，然后将干酪乳杆
菌菌体在 冻干保护剂的保护下进行冷冻干燥，得到干酪乳杆菌菌粉；利用此方法制备得到
的干酪乳杆 菌菌粉冻干存活率高且单位质量干酪乳杆菌菌粉的活菌数高，其中，干酪乳杆
11
菌冻干存活率 高达85.28±6.86％，单位质量干酪乳杆菌活菌数高达3.8×10 CFU/g。

[0045] (3)本发明提供了一种培养基，此培养基可显著降低干酪乳杆菌表面物质的分泌量，进 而降低干酪乳杆菌培养液中干酪乳杆菌菌体的收集难度；将干酪乳杆菌接种至此培
‑10
养基中进 行培养获得的干酪乳杆菌菌体表面的荚膜多糖分泌量仅有0.93×10 mg/CFU，
‑10
表面蛋白的分 泌量仅有1.01×10 mg/CFU。

具体实施方式

[0046] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步的阐述。

[0047] 下述实施例中涉及的乙二胺四乙酸二钠购自国药集团；下述实施例中涉及的酵母浸粉 FM528购自安琪酵母股份有限公司；下述实施例中涉及的干酪乳杆菌CCFM30购自中国
典型 培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M208200；下述实施例中涉及的干酪乳杆菌 
CCFM1038、干酪乳杆菌CCFM1059、干酪乳杆菌CCFM1071均购自广东省微生物菌种保藏 中
心，保藏编号分别为GDMCC No.60489、GDMCC No.60669、GDMCC No.60745。

[0048] 下述实施例中涉及的培养基如下：

[0049] MRS固体培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉 5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐 温
801mL/L、琼脂20g/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L。

[0050] MRS液体培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉 5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐 温
80 1mL/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L。

[0051] 下述实施例中涉及的检测方法如下：

[0052] 干酪乳杆菌活菌数的检测方法：采用国标《GB 4789.35‑2016食品安全国家标准食品微 生物学检测乳酸菌检测》。

[0053] 干酪乳杆菌菌体表面的表面蛋白含量的测定方法：采用凯氏定氮法测定，具体可见参考 文献：林艺华.硫酸蒽酮法测定风柜斗草粗多糖含量[J].福建分析测试,2017,26
(06):52‑55.。

[0054] 干酪乳杆菌菌体表面的荚膜多糖含量的测定方法：采用硫酸‑蒽酮比色法进行测定，具体 可见参考文献：丁立人.凯氏定氮仪测定饲料中粗蛋白含量误差因素分析[J].农
业与技术, 2018,38(21):17‑19.。

[0055] 实施例1：干酪乳杆菌菌粉的制备

[0056] 具体步骤如下：

[0057] 用接种环蘸取保菌管中的干酪乳杆菌CCFM30菌液在MRS固体培养基上划线，于37℃ 恒温培养36h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃恒温培养12h，得 
到种子液；将种子液按2％(v/v)的接种量接种至培养基A中，37℃、pH为5的条件下分别 恒
温培养6h、9h、12h，得到培养液A1、A2、A3；将培养液A1、A2、A3离心，收集菌体 A1、A2、A3；

[0058] 其中，培养基A的成分为：葡萄糖20g/L、酵母浸粉FM528 25g/L、硫酸镁0.58g/L、 硫酸锰0.25g/L、Tween‑80 1g/L和乙二胺四乙酸二钠3g/L。

[0059] 取部分菌体A1、A2、A3并检测菌体A1、A2、A3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量(检 测结果见表1)。

[0060] 取1g菌体A1、A2、A3分别重悬于1mL浓度为200g/L的水苏糖溶液中，得到重悬液 A1、A2、A3；将重悬液A1、A2、A3冻干，得到干酪乳杆菌菌粉A1、A2、A3；

[0061] 其中，冻干工艺：将重悬液A1、A2、A3置于‑50℃环境，维持4h；一次干燥，‑30℃及 200μbar，保持30h；二次干燥，25℃及0μbar，保持20h。

[0062] 检测干酪乳杆菌菌粉A1、A2、A3中干酪乳杆菌的活菌数，并且，计算干酪乳杆菌菌粉 A1、A2、A3中干酪乳杆菌的冻干存活率(检测结果见表2)；

[0063] 其中，冻干存活率的计算公式为：

[0064] 由表1‑2可知，菌体A1、A2、A3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量均较低，并且，干 酪乳杆菌菌粉A1、A2、A3中干酪乳杆菌的活菌数和冻干存活率均很高。

[0065] 表1菌体A1、A2、A3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量

[0066] 组别 表面蛋白含量 荚膜多糖含量‑10 ‑10
菌体A1 1.85×10 mg/CFU 0.98×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体A2 2.15×10 mg/CFU 0.90×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体A3 1.01×10 mg/CFU 0.93×10 mg/CFU

[0067] 表2干酪乳杆菌菌粉A1、A2、A3中干酪乳杆菌的活菌数和冻干存活率

[0068] 组别 活菌数 冻干存活率11
干酪乳杆菌菌粉A1 2.2×10 CFU/g 53.02±6.28％
11
干酪乳杆菌菌粉A2 2.8×10 CFU/g 58.04±5.32％
11
干酪乳杆菌菌粉A3 3.8×10 CFU/g 85.28±6.86％

[0069] 实施例2：干酪乳杆菌菌粉的制备

[0070] 具体步骤如下：

[0071] 在实施例1的基础上，将干酪乳杆菌CCFM30分别替换为干酪乳杆菌CCFM1038、干酪 乳杆菌CCFM1059、干酪乳杆菌CCFM1071，得到菌体B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、 D3和干酪乳杆
菌菌粉B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3。

[0072] 检测菌体B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量(检 测结果见表3)，检测干酪乳杆菌菌粉B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3中干酪乳杆菌 的活菌数，并
且，计算干酪乳杆菌菌粉B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3中干酪乳杆菌 的冻干存活率(检测结
果见表4)。

[0073] 由表3‑4可知，培养9h及以上时，菌体B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3表面的 表面蛋白含量和荚膜多糖含量均较低，并且，干酪乳杆菌菌粉B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、 D2、D3中干酪乳
杆菌的活菌数和冻干存活率均很高。

[0074] 表3菌体B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量

[0075]组别 表面蛋白含量 荚膜多糖含量
‑10 ‑10
菌体B1 3.80×10 mg/CFU 0.12×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体B2 2.11×10 mg/CFU 0.25×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体B3 1.38×10 mg/CFU 0.36×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体C1 3.48×10 mg/CFU 1.02×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体C2 3.05×10 mg/CFU 1.28×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体C3 1.84×10 mg/CFU 1.94×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体D1 4.18×10 mg/CFU 0.18×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体D2 3.25×10 mg/CFU 0.59×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体D3 1.54×10 mg/CFU 0.75×10 mg/CFU

[0076] 表4干酪乳杆菌菌粉B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3中干酪乳杆菌的活菌数和冻干 存活率

[0077] 组别 活菌数 冻干存活率11
干酪乳杆菌菌粉B1 1.4×10 CFU/g 51.72±8.24％
11
干酪乳杆菌菌粉B2 2.8×10 CFU/g 68.04±8.59％
11
干酪乳杆菌菌粉B3 3.3×10 CFU/g 79.46±2.34％
11
干酪乳杆菌菌粉C1 1.8×10 CFU/g 18.25±3.28％
11
干酪乳杆菌菌粉C2 2.0×10 CFU/g 45.66±4.38％
11
干酪乳杆菌菌粉C3 3.4×10 CFU/g 82.25±3.84％
11
干酪乳杆菌菌粉D1 1.5×10 CFU/g 15.42±3.58％
11
干酪乳杆菌菌粉D2 2.8×10 CFU/g 43.25±3.59％
11
干酪乳杆菌菌粉D3 3.8×10 CFU/g 81.82±6.04％

[0078] 实施例3：干酪乳杆菌菌粉的制备

[0079] 具体步骤如下：

[0080] 在实施例1的基础上，将培养基A中的乙二胺四乙酸二钠的含量替换为0g/L、1g/L、3 g/L，得到菌体E1、E2、E3和干酪乳杆菌菌粉E1、E2、E3，并且，37℃、pH为5的条件下恒 温培养
12h。

[0081] 检测菌体E1、E2、E3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量(检测结果见表5)，检测干 酪乳杆菌菌粉E1、E2、E3中干酪乳杆菌的活菌数，并且，计算干酪乳杆菌菌粉E1、E2、E3中干酪
乳杆菌的冻干存活率(检测结果见表6)。

[0082] 由表1‑2和表5‑6可知，乙二胺四乙酸二钠的添加与否和添加量对菌体表面的表面蛋白 含量和荚膜多糖含量，以及，干酪乳杆菌菌粉中干酪乳杆菌的活菌数和冻干存活率影
响很大， 将乙二胺四乙酸二钠的添加量控制为3g/L效果最佳。

[0083] 表5菌体E1、E2、E3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量

[0084] 组别 表面蛋白含量 荚膜多糖含量‑10 ‑10
菌体E1 1.80×10 mg/CFU 2.84×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体E2 1.48×10 mg/CFU 1.68×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体E3 1.01×10 mg/CFU 0.93×10 mg/CFU

[0085] 表6干酪乳杆菌菌粉E1、E2、E3中干酪乳杆菌的活菌数和冻干存活率

[0086] 组别 活菌数 冻干存活率11
干酪乳杆菌菌粉E1 2.2×10 CFU/g 23.02±4.36％
11
干酪乳杆菌菌粉E2 2.6×10 CFU/g 56.28±4.26％
11
干酪乳杆菌菌粉E3 3.8×10 CFU/g 85.28±6.86％

[0087] 实施例4：干酪乳杆菌菌粉的制备

[0088] 具体步骤如下：

[0089] 在实施例1的基础上，将培养基A中的酵母浸粉FM528分别替换为牛肉膏(购自国药 集团公司)、胰蛋白胨(购自OXOID公司)、大豆蛋白胨(购自安琪酵母有限公司)，得 到菌体
F1、F2、F3和干酪乳杆菌菌粉F1、F2、F3。

[0090] 检测菌体F1、F2、F3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量(检测结果见表7)，检测干 酪乳杆菌菌粉F1、F2、F3中干酪乳杆菌的活菌数，并且，计算干酪乳杆菌菌粉F1、F2、F3中 干酪
乳杆菌的冻干存活率(检测结果见表8)。

[0091] 由表1‑2和表7‑8可知，氮源的选择对菌体表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量，以及， 干酪乳杆菌菌粉中干酪乳杆菌的活菌数和冻干存活率影响很大，使用实施例1中的
酵母浸粉 FM528效果最佳。

[0092] 表7菌体F1、F2、F3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量

[0093] 组别 表面蛋白含量 荚膜多糖含量‑10 ‑10
菌体F1 1.85×10 mg/CFU 2.58×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体F2 2.08×10 mg/CFU 1.44×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体F3 1.11×10 mg/CFU 1.01×10 mg/CFU

[0094] 表8干酪乳杆菌菌粉F1、F2、F3中干酪乳杆菌的活菌数和冻干存活率

[0095] 组别 活菌数 冻干存活率11
干酪乳杆菌菌粉F1 1.0×10 CFU/g 24.02±5.38％
11
干酪乳杆菌菌粉F2 1.5×10 CFU/g 48.26±6.86％
11
干酪乳杆菌菌粉F3 2.1×10 CFU/g 64.25±7.69％

[0096] 实施例5：干酪乳杆菌菌粉的制备

[0097] 具体步骤如下：

[0098] 在实施例1的基础上，将培养基A的碳氮比分别替换为4:1(葡萄糖100g/L、酵母浸粉 FM528 25g/L)、4:3(葡萄糖33.3g/L、酵母浸粉FM528 25g/L)、4:5(葡萄糖20g/L、酵 母
浸粉FM528 25g/L)，得到菌体G1、G2、G3和干酪乳杆菌菌粉G1、G2、G3。

[0099] 检测菌体G1、G2、G3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量(检测结果见表9)，检测干 酪乳杆菌菌粉G1、G2、G3中干酪乳杆菌的活菌数，并且，计算干酪乳杆菌菌粉G1、G2、G3中干酪
乳杆菌的冻干存活率(检测结果见表10)。

[0100] 由表1‑2和表9‑10可知，碳氮比对菌体表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量，以及，干 酪乳杆菌菌粉中干酪乳杆菌的活菌数和冻干存活率影响很大，使用实施例1中的碳
氮比效果 最佳。

[0101] 表9菌体G1、G2、G3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量

[0102]组别 表面蛋白含量 荚膜多糖含量
‑10 ‑10
菌体G1 4.10×10 mg/CFU 2.95×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体G2 2.38×10 mg/CFU 1.74×10 mg/CFU
‑10 ‑10
菌体G3 1.01×10 mg/CFU 0.93×10 mg/CFU

[0103] 表10干酪乳杆菌菌粉G1、G2、G3中干酪乳杆菌的活菌数和冻干存活率

[0104]组别 活菌数 冻干存活率
11
干酪乳杆菌菌粉G1 1.8×10 CFU/g 20.05±1.49％
11
干酪乳杆菌菌粉G2 2.5×10 CFU/g 50.25±2.35％
11
干酪乳杆菌菌粉G3 3.8×10 CFU/g 85.28±6.86％

[0105] 实施例6：干酪乳杆菌菌粉的制备

[0106] 具体步骤如下：

[0107] 在实施例1的基础上，将乙二胺四乙酸二钠替换为乙二胺四乙酸，得到菌体H和干酪乳 杆菌菌粉H。

[0108] 检测菌体H表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量(检测结果见表11)，检测干酪乳杆菌 菌粉H中干酪乳杆菌的活菌数，并且，计算干酪乳杆菌菌粉H中干酪乳杆菌的冻干存活
率(检 测结果见表12)。

[0109] 由表1‑2和表11‑12可知，使用乙二胺四乙酸的效果与使用乙二胺四乙酸二钠的效果相差 无几。

[0110] 表11菌体H表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量

[0111]组别 表面蛋白含量 荚膜多糖含量
‑10 ‑10
菌体H 1.25×10 mg/CFU 0.89×10 mg/CFU

[0112] 表12干酪乳杆菌菌粉H中干酪乳杆菌的活菌数和冻干存活率

[0113] 组别 活菌数 冻干存活率11
干酪乳杆菌菌粉H 3.6×10 CFU/g 79.44±5.88％

[0114] 虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人， 在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护
范围应该以 权利要求书所界定的为准。