达玛烷皂苷元衍生物和制备方法及应用转让专利
申请号 : CN202010637689.4
文献号 : CN111690033B
文献日 : 2021-05-25
发明人 : 赵余庆 , 肖圣男 , 王旭德
申请人 : 沈阳药科大学
摘要 :
本发明属于医药技术领域，涉及达玛烷皂苷元衍生物及其制备方法和应用。本发明通过将植物来源的达玛烷皂苷元与不同基团结合，得到一系列达玛烷皂苷元衍生物。本发明对该衍生物进行抗癌活性评价，以及抗癌活性的机制研究，结果表明，本发明制备得到的达玛烷皂苷元衍生物具有显著的抗癌作用，且对正常细胞无毒性作用，可以用于制备治疗癌症的药物。
权利要求 :
1.一种达玛烷皂苷元衍生物，其特征在于：达玛烷皂苷元衍生物及其药学上可接受的盐，具有以下结构通式（1）：
其中，
虚线表示单键或双键；
结构通式中：
R为 ， ， ，
， ， ， ， ，
， ， ，
， ， 或
；
R2为H，Glc(6‑1)Ara(f)，Glc，Glc(6‑1)Glc，Glc(6‑1)Ara(p)；
结构通式中R1为 ， ，
， ，
， ；
其中：
R3为H，C1‑C4烷基；
R4，R7为H，C1‑C6烷基，卤素，硝基，C1‑C4烷氧基，羧基，羟基；
R8为H，C1‑C6烷基，卤素，硝基，C1‑C4烷氧基，羧基，羟基，4‑环己基。
2.根据权利要求1所述的达玛烷皂苷元衍生物，其特征在于：R3为H，甲基或乙基；
R4为H，3‑甲基，4‑甲基，2‑氟，3‑氟，4‑氟，4‑氯，2‑溴，4‑溴，2‑硝基，3‑硝基，4‑甲氧基；
R7为H，3‑甲基，4‑甲基，2‑氟，3‑氟，4‑氟，4‑氯， 2‑溴，4‑溴，2‑硝基，3‑硝基，4‑甲氧基；
R8为H，4‑甲基，4‑氟，4‑氯，4‑溴，4碘，4‑乙基，4‑正丁基，4‑环己基。
3.如下所述的达玛烷皂苷元衍生物:
4.根据权利要求1所述的达玛烷皂苷元衍生物，其特征在于：所述的达玛烷皂苷元来自于五加科植物或葫芦科植物。
5.根据权利要求2所述的达玛烷皂苷元衍生物的制备方法，其特征在于：该衍生物制备过程包括以下步骤：
步骤1：在达玛烷人参皂苷元的二氯甲烷溶液中，分别加入氯乙酸，N' N‑二环己基碳二亚胺和4‑二甲氨基吡啶，室温反应，分离得到人参皂苷元不同取代基的氯乙酸衍生物；
步骤2：将步骤1中得到的人参皂苷元的氯乙酸衍生物溶解在丙酮溶液中，分别加入R3的三氮唑中间体、R4的三氮唑中间体，加入碳酸钾和碘化钾，回流反应，分离得到具有R3或R4的达玛烷皂苷元衍生物；
步骤3：在达玛烷人参皂苷元的二氯甲烷溶液中，加入氯铬酸吡啶盐，室温反应，得到达玛烷皂苷元羰基衍生物；将得到的达玛烷皂苷元羰基衍生物与等物质的量的硫代氨基脲，溶解在无水乙醇中，回流反应，分离得到达玛烷皂苷元不同取代基硫代氨基脲衍生物；
步骤4：将步骤3中的达玛烷硫代氨基脲衍生物与R7和R8的恶二唑中间体或氮唑酮中间体溶解在丙酮中，加入碳酸钾和碘化钾，回流反应，得到具有R7或R8的达玛烷皂苷元衍生物。
6.根据权利要求5所述的达玛烷皂苷元衍生物的制备方法，其特征在于：中间体的具体制备方法包括：
R3的三氮唑中间体：将硫代氨基脲或氨基脲加入至甲酸，乙酸或丙酸溶液中，在100‑135℃中回流反应0.5‑3h，反应结束后冷却至室温，白色固体析出，过滤得到反应中间体；将反应中间体与氢氧化钠加入至蒸馏水中，回流反应2‑4h，反应结束后冷却至室温或冷藏，析出结晶，过滤，干燥得到具有R3的三氮唑中间体；
R4的三氮唑中间体：分别将不同取代基的苯甲酸，加入至干燥二氯甲烷溶液中，加入氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺；回流反应3‑5h，减压除去溶剂不同取代基的苯甲酰氯；将苯甲酰氯加入至硫代氨基脲或氨基脲的吡啶溶液中，室温反应15‑20h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流反应3‑5h，冷却，调节pH值为6‑7，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到具有R4的三氮唑中间体；
R7的恶二唑中间体：将不同取代基的苯甲酸与等物质的量的甲醇，在硫酸催化下得到苯甲酸甲酯，加入水合肼反应得到相应的苯甲酰肼，干燥后，将苯甲酰肼溶解在三氯氧磷中，加入与苯甲酰肼等物质的量的氯乙酸，反应4‑6小时，分离得到具有R7的恶二唑中间体；
R8的氮唑酮衍生物：将不同取代基的苯胺与肼甲酸甲酯溶解在无水乙醇中，加入原甲酸三乙酯和甲醇钠进行回流反应5‑8h得到反应中间体；然后将反应中间体在碳酸钾和碘化钾的存在下，与1，2‑二溴乙烷在丙酮中回流反应4‑6h，得到具有R8的氮唑酮衍生物。
7.根据权利要求5所述的达玛烷皂苷元衍生物的制备方法，其特征在于：步骤1中的达玛烷人参皂苷元、氯乙酸、 N' N‑二环己基碳二亚胺、4‑二甲氨基吡啶的物质的量的比为1：2：1：1；达玛烷人参皂苷元与二氯甲烷比例为：1mmol：（10‑20）mL；分离条件为石油醚：乙酸乙酯的体积比=（5 15）：1或石油醚：丙酮的体积比=（10 20）：1；
~ ~
步骤2中的人参皂苷元的氯乙酸衍生物与中间体，碳酸钾以及碘化钾的物质的量的比为1：1：1：1；其中，中间体为R3的三氮唑中间体或R4的三氮唑中间体；回流反应55‑70℃，时间为2‑4h；分离条件为石油醚：乙酸乙酯的体积比=（5 15）：1，石油醚：丙酮的体积比=（10~ ~
20）：1或二氯甲烷：甲醇的体积比=（20‑10）：1；
步骤3的室温反应2‑4h，达玛烷皂苷元羰基衍生物与无水乙醇溶剂的比例为1mmol：（10‑20）mL，步骤3的回流反应为70‑80℃，18‑24h；分离条件为石油醚：乙酸乙酯的体积比=（3 6）：1；
~
步骤4中的达玛烷硫代氨基脲衍生物与R7或R8的恶二唑中间体或氮唑酮中间体，碳酸钾以及碘化钾的物质的量的比为1：1：1：1；达玛烷硫代氨基脲衍生物与丙酮比例为1mmol：（10‑20）mL；回流反应为60℃，10‑15h；分离条件为石油醚：丙酮的体积比=（8 15）：1。
~
8.根据权利要求6所述的达玛烷皂苷元衍生物的制备方法，其特征在于：R3的三氮唑中间体：硫代氨基脲或氨基脲与甲酸，乙酸或丙酸的物质的量比为1：1~2；反应中间体与氢氧化钠的物质的量比为1：1；反应中间体与蒸馏水的比例为10mmol：（15‑20）mL；
R4的三氮唑中间体：不同取代基苯甲酸与氯化亚砜的物质的量比为1：1~1.5；苯甲酸与二氯甲烷的比例为10mmol：（15‑20）mL；苯甲酰氯，硫代氨基脲或氨基脲以及氢氧化钠比例为1：1：1；硫代氨基脲或氨基脲与吡啶的比例为10mmol：（15‑20）mL；
R7的三氮唑中间体：苯甲酸甲酯与水合肼的物质的量比为1：（1~1.5）；苯甲酰肼与三氯氧磷的比例为10mmol：（5‑10）mL；
R8的三氮唑中间体：苯胺，肼甲酸甲酯，原甲酸三乙酯以及甲醇钠的物质的量比为1：1：
0.5：0.5，苯胺与无水乙醇的比例为10mmol：（15‑20）mL；反应中间体，碳酸钾，碘化钾，1，2‑二溴乙烷的物质的量比为1：1：1：1；反应中间体与丙酮的比例为5mmol：（15‑20）mL 。
9.一种药物组合物，该药物组合物的活性成分至少包含权利要求1‑3任何一项所述的达玛烷型皂苷元衍生物或其药学上可接受的盐的一种或几种，以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
10.根据权利要求1‑3任何一项所述的达玛烷皂苷元衍生物及其药学上可接受的盐或权利要求9所述的药物组合物在制备抗癌药物中的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于：所述的癌症为肝癌，肺癌，前列腺癌，乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，胃癌，神经胶质癌，黑色素瘤。
说明书 :
达玛烷皂苷元衍生物和制备方法及应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种具有抗癌作用的达玛烷皂苷元衍生物和制备方法及应用。
背景技术
[0002] 新天然产物20(S)‑25‑甲氧基‑达玛烷‑3β，12β，20‑三醇[20(S)‑25‑OCH3‑PPD]的分离，结构测定和生物学活性评估(2007)和人参果实中天然产物的体外抗癌活性与构效关
系(2007)中，本课题组首次发现两种具有抗癌活性新型人参皂苷元(25‑OCH3‑PPD(AD‑1)和
25‑OH‑PPD(AD‑2))，在对人参皂苷进行酸水解以制备AD‑1和AD‑2的过程中得到了大量的人
参二醇(PD)。同时我们在对AD‑1进行广泛的研究中，首次在AD‑1的代谢产物中分离得到PD。
这也使PD的相关研究具有更重要的意义。
系(2007)中，本课题组首次发现两种具有抗癌活性新型人参皂苷元(25‑OCH3‑PPD(AD‑1)和
25‑OH‑PPD(AD‑2))，在对人参皂苷进行酸水解以制备AD‑1和AD‑2的过程中得到了大量的人
参二醇(PD)。同时我们在对AD‑1进行广泛的研究中，首次在AD‑1的代谢产物中分离得到PD。
这也使PD的相关研究具有更重要的意义。
[0003] 达玛烷型皂苷(元)抗肿瘤活性构效关系的研究进展(2009)中表明母核结构的变化对活性造成重大的影响，通过构效关系进行比较发现：原人参二醇型皂苷>原人参三醇型
皂苷。同时，针对抗肿瘤活性的研究中，糖配基数量对于抗肿瘤活性具有显著影响，表现为：
皂苷元>单糖苷>二糖苷>三糖苷>四糖苷。20(S)‑25‑甲氧基‑达玛烷‑3β，12β，20‑三醇，一种
用于前列腺癌治疗的新型天然产物：体内和体外活性及其作用机制(2008)和人参皂苷元
25‑OH‑PPD和25‑OCH3‑PPD对胃癌细胞的抗肿瘤活性(2015)中发现人参皂苷元AD‑1和AD‑2
能显著抑制肿瘤细胞的增殖或诱导肿瘤细胞凋亡(人肺癌细胞，人胃癌细胞，人乳腺癌细
胞，人前列腺癌细胞，人结肠癌细胞，人宫颈癌细胞，人肝癌细胞等)，且对正常细胞无毒性
作用。其他皂苷，例如PD，PPD，以及三七皂苷，绞股蓝皂苷均对肿瘤细胞具有不同程度的抑
制作用。
皂苷。同时，针对抗肿瘤活性的研究中，糖配基数量对于抗肿瘤活性具有显著影响，表现为：
皂苷元>单糖苷>二糖苷>三糖苷>四糖苷。20(S)‑25‑甲氧基‑达玛烷‑3β，12β，20‑三醇，一种
用于前列腺癌治疗的新型天然产物：体内和体外活性及其作用机制(2008)和人参皂苷元
25‑OH‑PPD和25‑OCH3‑PPD对胃癌细胞的抗肿瘤活性(2015)中发现人参皂苷元AD‑1和AD‑2
能显著抑制肿瘤细胞的增殖或诱导肿瘤细胞凋亡(人肺癌细胞，人胃癌细胞，人乳腺癌细
胞，人前列腺癌细胞，人结肠癌细胞，人宫颈癌细胞，人肝癌细胞等)，且对正常细胞无毒性
作用。其他皂苷，例如PD，PPD，以及三七皂苷，绞股蓝皂苷均对肿瘤细胞具有不同程度的抑
制作用。
[0004] 含氮杂环的基团能显著提高化合物的抗癌活性，能诱导细胞凋亡和发生转化，抑制癌细胞增殖等。我们前期对达玛烷型皂苷进行了大量的结构修饰，例如结合氨基酸，芳香
酸，脂肪酸等，虽然抗癌活性得到了提升，但还有进一步发展的空间。所以我们希望通过将
达玛烷型皂苷与不同的含氮杂环进行结合，以期望得到活性更为突出的衍生物。
酸，脂肪酸等，虽然抗癌活性得到了提升，但还有进一步发展的空间。所以我们希望通过将
达玛烷型皂苷与不同的含氮杂环进行结合，以期望得到活性更为突出的衍生物。
[0005] 因此，为了寻找发现具有更好的抗癌活性的药物。本发明在达玛烷型人参皂苷及其苷元中进一步研发其衍生物，探索一种更加有效，低毒的人参皂苷衍生物。
发明内容
[0006] 发明目的：
[0007] 本发明的目的提供一种达玛烷皂苷元衍生物及其药学上可接受的盐或异构体，该衍生物及其药学上可接受的盐或异构体具有显著的抗癌活性，且对正常细胞显示出无毒作
用。同时，本发明提供了该类衍生物的制备方法。
用。同时，本发明提供了该类衍生物的制备方法。
[0008] 技术方案：
[0009] 一种达玛烷皂苷元衍生物，达玛烷皂苷元衍生物及其药学上可接受的盐、异构体具有以下结构通式(1)：
[0010]
[0011] 其中，虚线表示单键或双键。
[0012] 结构通式中R为
[0013] 结构通式中R1为羟基、
[0014] R2为H，Glc(6‑1)Ara(f)，Glc，Glc(6‑1)Glc，Glc(6‑1)Ara(p)。
[0015] 其中：
[0016] R3为H，C1‑C4烷基；
[0017] R4，R7和R8为H，C1‑C6烷基，卤素，硝基，C1‑C4烷氧基，羧基，羟基；
[0018] R5为H，C1‑C6烷基，6‑10元芳香基，C1‑C4烷酰基，C1‑C4羟烷基，吡啶基，嘧啶基，磺酰基；
[0019] R6为C1‑C6烷基，羰基，C1‑C4羟烷基；
[0020] R9为H，卤素，C1‑C4烷基，C1‑C4羟烷基，氰基，羟基。
[0021] 进一步的，所述的达玛烷皂苷元，其中包括：
[0022] R3为H，甲基或乙基。
[0023] R4为H，3‑甲基，4‑甲基，3，5‑二甲基，2‑氟，3‑氟，4‑氟，2，4‑二氟，4‑氯，2，4‑二氯，2‑溴，4‑溴，2‑硝基，3‑硝基，4‑甲氧基。
[0024] R5为H，甲基，乙基，苯基，羟甲基，吡啶基，嘧啶基，乙酰基，磺酰基。
[0025] R6为甲基，羰基。
[0026] R7为H，3‑甲基，4‑甲基，3，5‑二甲基，2‑氟，3‑氟，4‑氟，2，4‑二氟，4‑氯，2，4‑二氯，2‑溴，4‑溴，2‑硝基，3‑硝基，4‑甲氧基。
[0027] R8为H，4‑甲基，4‑氟，4‑氯，2，3‑二氯，4‑溴，4碘，4‑乙基，4‑正丁基，4‑环己基。
[0028] R9为H，5‑氟，5‑氯，5‑溴，5‑三氟甲基，5‑氰基，5‑羟基。
[0029] 所述的达玛烷皂苷元衍生物及其药学上可接受的盐、异构体为达玛烷型皂苷及其苷元的C‑3单取代，C‑12位单取代或C‑3与C‑12的双取代衍生物。
[0030] 进一步的，所述的达玛烷皂苷元来自于五加科植物或葫芦科植物。
[0031] 该衍生物制备过程包括以下步骤：
[0032] 步骤1：在达玛烷人参皂苷元的二氯甲烷溶液中，分别加入氯乙酸，N'N‑二环己基碳二亚胺和4‑二甲氨基吡啶，室温反应，分离得到人参皂苷元不同取代基的氯乙酸衍生物；
[0033] 步骤2：将步骤1中得到的人参皂苷元的氯乙酸衍生物溶解在丙酮溶液中，分别加入R3的三氮唑中间体、R4的三氮唑中间体、R5和R6哌嗪类中间体，加入碳酸钾和碘化钾，回流
反应，分离得到具有R3，R4，R5或R6的达玛烷皂苷元衍生物；
反应，分离得到具有R3，R4，R5或R6的达玛烷皂苷元衍生物；
[0034] 步骤3：在达玛烷人参皂苷元的二氯甲烷溶液中，加入氯铬酸吡啶盐，室温反应，得到达玛烷皂苷元羰基衍生物；将得到的达玛烷皂苷元羰基衍生物与等物质的量的硫代氨基
脲，溶解在无水乙醇中，回流反应，分离得到达玛烷皂苷元不同取代基硫代氨基脲衍生物；
脲，溶解在无水乙醇中，回流反应，分离得到达玛烷皂苷元不同取代基硫代氨基脲衍生物；
[0035] 步骤4：将步骤3中的达玛烷硫代氨基脲衍生物与R7和R8的恶二唑中间体或氮唑酮中间体溶解在丙酮中，加入碳酸钾和碘化钾，回流反应，得到具有R7或R8新型达玛烷皂苷元
衍生物；
衍生物；
[0036] 步骤5：在达玛烷人参皂苷元的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量不同取代基R9的烟酸取代物，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶，室温反应，分离得到人
参皂苷元不同取代基R9的烟酸衍生物。
参皂苷元不同取代基R9的烟酸衍生物。
[0037] 进一步的，中间体的具体制备方法包括：
[0038] R3的三氮唑中间体：将硫代氨基脲或氨基脲加入至甲酸，乙酸或丙酸溶液中，在100‑135℃中回流反应0.5‑3h，反应结束后冷却至室温，白色固体析出，过滤得到反应中间
体；将反应中间体与氢氧化钠加入至蒸馏水中，回流反应2‑4h，反应结束后冷却至室温或冷
藏，析出结晶，过滤，干燥得到具有R3的三氮唑中间体；
体；将反应中间体与氢氧化钠加入至蒸馏水中，回流反应2‑4h，反应结束后冷却至室温或冷
藏，析出结晶，过滤，干燥得到具有R3的三氮唑中间体；
[0039] R4的三氮唑中间体：分别将不同取代基的苯甲酸，加入至干燥二氯甲烷溶液中，加入氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺；回流反应3‑5h，减压除去溶剂不同取代基的苯甲酰氯；
将苯甲酰氯加入至硫代氨基脲或氨基脲的吡啶溶液中，室温反应15‑20h，减压除去吡啶溶
液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流反应3‑5h，冷却，调节pH值为6‑7，过滤析出沉
淀，清洗后干燥，得到具有R4的三氮唑中间体；
将苯甲酰氯加入至硫代氨基脲或氨基脲的吡啶溶液中，室温反应15‑20h，减压除去吡啶溶
液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流反应3‑5h，冷却，调节pH值为6‑7，过滤析出沉
淀，清洗后干燥，得到具有R4的三氮唑中间体；
[0040] R7的恶二唑中间体：将不同取代基的苯甲酸与等物质的量的甲醇，在硫酸催化下得到苯甲酸甲酯，加入水合肼反应得到相应的苯甲酰肼，干燥后，将苯甲酰肼溶解在三氯氧
磷中，加入与苯甲酰肼等物质的量的氯乙酸，反应4‑6小时，分离得到具有R7的恶二唑中间
体；
磷中，加入与苯甲酰肼等物质的量的氯乙酸，反应4‑6小时，分离得到具有R7的恶二唑中间
体；
[0041] R8的氮唑酮衍生物：将不同取代基的苯胺与肼甲酸甲酯溶解在无水乙醇中，加入原甲酸三乙酯和甲醇钠进行回流反应5‑8h得到反应中间体；然后将反应中间体在碳酸钾和
碘化钾的存在下，与1，2‑二溴乙烷在丙酮中回流反应4‑6h，得到具有R8的氮唑酮衍生物。
碘化钾的存在下，与1，2‑二溴乙烷在丙酮中回流反应4‑6h，得到具有R8的氮唑酮衍生物。
[0042] 进一步的，步骤1中的达玛烷人参皂苷元、氯乙酸、N'N‑二环己基碳二亚胺、4‑二甲氨基吡啶的物质的量的比为1：2：1：1；达玛烷人参皂苷元与二氯甲烷比例为：1mmol：(10‑
20)mL；分离条件为石油醚：乙酸乙酯的体积比＝(5～15)：1或石油醚：丙酮的体积比＝(10
～20)：1；
20)mL；分离条件为石油醚：乙酸乙酯的体积比＝(5～15)：1或石油醚：丙酮的体积比＝(10
～20)：1；
[0043] 步骤2中的人参皂苷元的氯乙酸衍生物与中间体，碳酸钾以及碘化钾的物质的量的比为1：1：1：1；其中，中间体为R3的三氮唑中间体、R4的三氮唑中间体、R5哌嗪类中间体或
R6哌嗪类中间体；回流反应55‑70℃，时间为2‑4h；分离条件为石油醚：乙酸乙酯的体积比＝
(5～15)：1，石油醚：丙酮的体积比＝(10～20)：1或二氯甲烷：甲醇＝(20‑10)：1；
R6哌嗪类中间体；回流反应55‑70℃，时间为2‑4h；分离条件为石油醚：乙酸乙酯的体积比＝
(5～15)：1，石油醚：丙酮的体积比＝(10～20)：1或二氯甲烷：甲醇＝(20‑10)：1；
[0044] 步骤3的室温反应2‑4h，达玛烷皂苷元羰基衍生物与无水乙醇溶剂的比例为1mmol：(10‑20)mL，步骤3的回流反应为70‑80℃，18‑24h；分离条件为石油醚：乙酸乙酯＝(3
～6)：1；
～6)：1；
[0045] 步骤4中的达玛烷硫代氨基脲衍生物与R7或R8的恶二唑中间体或氮唑酮中间体，碳酸钾以及碘化钾的物质的量的比为1：1：1：1；达玛烷硫代氨基脲衍生物与丙酮比例为
1mmol：(10‑20)mL；回流反应为60℃，10‑15h；分离条件为石油醚：丙酮的体积比＝(8～15)：
1；
1mmol：(10‑20)mL；回流反应为60℃，10‑15h；分离条件为石油醚：丙酮的体积比＝(8～15)：
1；
[0046] 步骤5中的达玛烷人参皂苷元、不同取代基的R9的烟酸取代物、N'N‑二环己基碳二亚胺、4‑二甲氨基吡啶的物质的量的比为1：2：1：1；达玛烷人参皂苷元与二氯甲烷比例为：
1mmol：(10‑20)mL；室温反应3‑5h；分离条件为石油醚：乙酸乙酯的体积比＝(3～6)：1。
1mmol：(10‑20)mL；室温反应3‑5h；分离条件为石油醚：乙酸乙酯的体积比＝(3～6)：1。
[0047] 进一步的，R3的三氮唑中间体：硫代氨基脲或氨基脲与甲酸，乙酸或丙酸的物质的量比为1：1～2；反应中间体与氢氧化钠的物质的量比为1：1；反应中间体与蒸馏水的比例为
10mmol：(15‑20)mL；
10mmol：(15‑20)mL；
[0048] R4的三氮唑中间体：不同取代基苯甲酸与氯化亚砜的物质的量比为1：1～1.5；苯甲酸与二氯甲烷的比例为10mmol：(15‑20)mL；苯甲酰氯，硫代氨基脲或氨基脲以及氢氧化
钠比例为1：1：1；硫代氨基脲或氨基脲与吡啶的比例为10mmol：(15‑20)mL；
钠比例为1：1：1；硫代氨基脲或氨基脲与吡啶的比例为10mmol：(15‑20)mL；
[0049] R7的三氮唑中间体：苯甲酸甲酯与水合肼的物质的量比为1：(1～1.5)；苯甲酰肼与三氯氧磷的比例为10mmol：(5‑10)mL；
[0050] R8的三氮唑中间体：苯胺，肼甲酸甲酯，原甲酸三乙酯以及甲醇钠的物质的量比为1：1：0.5：0.5，苯胺与无水乙醇的比例为10mmol：(15‑20)mL；反应中间体，碳酸钾，碘化钾，
1，2‑二溴乙烷的物质的量比为1：1：1：1；反应中间体与丙酮的比例为5mmol：(15‑20)mL。
1，2‑二溴乙烷的物质的量比为1：1：1：1；反应中间体与丙酮的比例为5mmol：(15‑20)mL。
[0051] 一种药物组合物，该药物组合物的活性成分至少包含所述的达玛烷型皂苷元衍生物或其药学上可接受的盐、异构体的一种或几种，以及一种或多种药学上可接受的载体或
赋形剂。
赋形剂。
[0052] 所述的达玛烷皂苷元衍生物及其药学上可接受的盐、异构体或所述的药物组合物在制备抗癌药物中的应用。
[0053] 所述的癌症包括肝癌，肺癌，前列腺癌，乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，胃癌，神经胶质癌，黑色素瘤。
[0054] 优点及效果：
[0055] 本发明提供了一系列达玛烷皂苷元衍生物，该系列衍生物对癌细胞具有显著的抑制作用，且针对正常细胞表现出无毒作用。因此，本发明具有抗癌作用的达玛烷皂苷元衍生
物可以应用于制备抗癌的药物中。
物可以应用于制备抗癌的药物中。
附图说明
[0056] 图1.化合物A1与PD诱导HepG‑2细胞凋亡的形态学观察。
[0057] 图2.DAPI染色后化合物A1诱导HepG‑2细胞凋亡的形态观察。
[0058] 图3.化合物A1诱导HepG‑2细胞凋亡的作用。柱状图用于显示比较凋亡率。
[0059] 图4.化合物A1与PD作用HepG‑2细胞后的蛋白表达水平。(A)凋亡相关的蛋白表达水平。(B)和(C)化合物A1与PD蛋白表达的数据分析。
[0060] 图5.化合物A1作用HepG‑2细胞蛋白表达水平。(A)凋亡相关的蛋白表达水平。(B)Bax,Bcl‑2和p53蛋白表达数据分析。(C)Bax/Bcl‑2率的数据分析。
[0061] 图6.化合物A1作用HepG‑2细胞后Bax和Cyt c蛋白的表达。
具体实施方式
[0062] 本发明设计将不同的达玛烷型人参皂苷及其苷元与不同的基团进行结合。主要对于人参皂苷元中C‑3和C‑12位羟基通过酯化反应，取代反应等不同有机反应结合相应的小
基团，得到一种更加有效，低毒的人参皂苷衍生物。
基团，得到一种更加有效，低毒的人参皂苷衍生物。
[0063] 达玛烷皂苷元衍生物的制备方法，该衍生物制备过程包括以下步骤：
[0064] 步骤1：将硫代氨基脲或氨基脲加入至甲酸，乙酸或丙酸溶液中，在100‑135℃中回流反应0.5‑3h，反应结束后冷却至室温，白色固体析出，过滤得到中间体。将中间体与等物
质的量的氢氧化钠加入至15mL水中，回流反应2‑4h，反应结束后冷却至室温或冷藏，析出结
晶，过滤，干燥得到具有R3的三氮唑中间体。
质的量的氢氧化钠加入至15mL水中，回流反应2‑4h，反应结束后冷却至室温或冷藏，析出结
晶，过滤，干燥得到具有R3的三氮唑中间体。
[0065] 反应步骤为：
[0066]
[0067] 步骤2：分别将不同取代基的苯甲酸，加入至15‑30mL干燥二氯甲烷溶液中，加入氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3‑5h，减压除去溶剂。加入20‑30mL吡啶溶液
溶解，其中加入硫代氨基脲或氨基脲，室温反应15‑20h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入
氢氧化钠水溶液，100℃回流反应3‑5h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到具
有R4的三氮唑中间体。
溶解，其中加入硫代氨基脲或氨基脲，室温反应15‑20h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入
氢氧化钠水溶液，100℃回流反应3‑5h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到具
有R4的三氮唑中间体。
[0068] 反应步骤为：
[0069]
[0070] 步骤3：具有R5和R6的哌嗪类中间体，通过专业试剂公司购买获得不同取代基的哌嗪类中间体。
[0071] 步骤4：在达玛烷人参皂苷元的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷
元不同取代基的氯乙酸衍生物。
元不同取代基的氯乙酸衍生物。
[0072] 反应步骤为：
[0073]
[0074] 其中R10为羟基或
[0075] 步骤5：将步骤4中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10‑15mL丙酮溶液中，分别加入步骤1，步骤2或步骤3中得到的中间体，加入碳酸钾和碘化钾，反应2‑4h，分离，得到
具有R3，R4，R5或R6的新型达玛烷皂苷元衍生物。
具有R3，R4，R5或R6的新型达玛烷皂苷元衍生物。
[0076] 反应步骤为：
[0077]
[0078]
[0079] 步骤6：在达玛烷人参皂苷元的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯铬酸吡啶盐(PCC)，室温反应2‑4h，得到达玛烷皂苷元羰基衍生物。将得到的达玛烷皂苷元羰基衍生物
与等物质的量的硫代氨基脲，溶解在10‑15mL无水乙醇中，70‑80℃回流反应18‑24h，分离得
到达玛烷皂苷元不同取代基硫代氨基脲衍生物。
与等物质的量的硫代氨基脲，溶解在10‑15mL无水乙醇中，70‑80℃回流反应18‑24h，分离得
到达玛烷皂苷元不同取代基硫代氨基脲衍生物。
[0080] 反应步骤为：
[0081]
[0082] 步骤7：将不同取代基的苯甲酸与等物质的量的甲醇，在硫酸催化下得到苯甲酸甲酯，加入水合肼反应得到相应的苯甲酰肼，干燥后，将苯甲酰肼溶解在三氯氧磷中，加入等
物质的量的氯乙酸，反应4‑6小时，分离得到具有R7的恶二唑中间体。
物质的量的氯乙酸，反应4‑6小时，分离得到具有R7的恶二唑中间体。
[0083] 反应步骤为：
[0084]
[0085] 步骤8：将不同取代基的苯胺与肼甲酸甲酯溶解在无水乙醇中，加入原甲酸三乙酯和甲醇钠进行回流反应48h得到中间体。然后将中间体在碳酸钾和碘化钾的存在下，与1，2‑
二溴乙烷在丙酮中回流反应4‑6h，得到具有R8的氮唑酮衍生物。
二溴乙烷在丙酮中回流反应4‑6h，得到具有R8的氮唑酮衍生物。
[0086] 反应步骤为：
[0087]
[0088] 步骤9：将步骤6中的达玛烷硫代氨基脲衍生物与步骤7或步骤8中的恶二唑中间体或氮唑酮中间体溶解在10‑15mL丙酮中，加入碳酸钾和碘化钾，60℃回流反应10‑15h。得到
具有R7或R8新型达玛烷皂苷元衍生物。
具有R7或R8新型达玛烷皂苷元衍生物。
[0089] 反应步骤为：
[0090]
[0091] 步骤10：具有R9的烟酸类中间体，通过专业试剂公司购买获得不同取代基的烟酸类中间体。在达玛烷人参皂苷元的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的烟酸取代物，加入N'
N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元
不同取代基的烟酸类衍生物。
N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元
不同取代基的烟酸类衍生物。
[0092] 反应步骤为：
[0093]
[0094] 具体介绍几个化合物的详细实验操作，其余化合物均采用相同的实验方式制备。
[0095] 实施例1：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(A1)。
[0096]
[0097] 步骤1：将硫代氨基脲加入至甲酸溶液中，在100℃中回流反应0.5h，反应结束后冷却至室温，白色固体析出，过滤得到中间体。将中间体与等物质的量的氢氧化钠加入至15mL
水中，回流反应3h，反应结束后冷却至室温或冷藏，析出结晶，过滤，干燥得到三氮唑中间
体。
水中，回流反应3h，反应结束后冷却至室温或冷藏，析出结晶，过滤，干燥得到三氮唑中间
体。
[0098] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3h，分离得到PD氯乙酸C‑3单取代衍生物。
[0099] 步骤3：将步骤2中得到的PD氯乙酸衍生物溶解在15mL丙酮溶液中，分别加入步骤1得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝5：1硅胶柱分
离，得到PD三氮唑衍生物(A1)。
离，得到PD三氮唑衍生物(A1)。
[0100] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为155‑157℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.81(s,6H),0.88(s,3H),0.89(s,3H),0.98(s,3H),1.18(s,3H),1.21(s,3H),1.26(s,3H),
13
3.56(td,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.54(dd,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.49,83.26,77.36,73.41,70.24,56.09,54.83,51.39,49.97,49.23,
39.96,38.68,38.18,37.19,36.58,35.89,34.92,34.83,33.17,31.31,30.65,28.05,
27.35,25.33,23.72,19.58,18.29,17.21,16.54,16.39,16.32,15.78.HR‑MS(ESI)m/z
+
calcd for C34H55N3O4S.[M+H]602.3986,found 602.3994.
13
3.56(td,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.54(dd,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.49,83.26,77.36,73.41,70.24,56.09,54.83,51.39,49.97,49.23,
39.96,38.68,38.18,37.19,36.58,35.89,34.92,34.83,33.17,31.31,30.65,28.05,
27.35,25.33,23.72,19.58,18.29,17.21,16.54,16.39,16.32,15.78.HR‑MS(ESI)m/z
+
calcd for C34H55N3O4S.[M+H]602.3986,found 602.3994.
[0101] 实施例2：20(S)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑甲基‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(A2)。
[0102]
[0103] 步骤1：将硫代氨基脲加入至乙酸溶液中，在120℃中回流反应2h，反应结束后冷却至室温，白色固体析出，过滤得到中间体。将中间体与等物质的量的氢氧化钠加入至15mL水
中，回流反应3h，反应结束后冷却至室温或冷藏，析出结晶，过滤，干燥得到三氮唑中间体。
中，回流反应3h，反应结束后冷却至室温或冷藏，析出结晶，过滤，干燥得到三氮唑中间体。
[0104] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3h，分离得到PD氯乙酸C‑3单取代衍生物。
[0105] 步骤3：将步骤2中得到的PD氯乙酸衍生物溶解在15mL丙酮溶液中，分别加入步骤1得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝5：1硅胶柱分
离，得到PD三氮唑衍生物(A2)。
离，得到PD三氮唑衍生物(A2)。
[0106] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为156‑158℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.82(s,6H),0.87(s,3H),0.90(s,3H),0.97(s,3H),1.18(s,3H),1.22(s,3H),1.26(s,3H),
13
3.53(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.54(dd,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.50,82.94,77.37,73.29,70.08,56.11,54.87,51.37,49.98,49.31,
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27.34,25.33,23.73,19.59,18.31,17.21,16.54,16.43,16.30,15.79.12.80.HR‑MS(ESI)
+
m/z calcd for C35H57N3O4S.[M+H]616.4143,found 616.4156.
13
3.53(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.54(dd,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.50,82.94,77.37,73.29,70.08,56.11,54.87,51.37,49.98,49.31,
39.98,38.69,38.19,37.20,36.61,35.91,34.94,34.65,33.18,31.29,30.71,28.03,
27.34,25.33,23.73,19.59,18.31,17.21,16.54,16.43,16.30,15.79.12.80.HR‑MS(ESI)
+
m/z calcd for C35H57N3O4S.[M+H]616.4143,found 616.4156.
[0107] 实施例3：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑乙基‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(A3)
[0108]
[0109] 步骤1：将硫代氨基脲加入至丙酸溶液中，在130℃中回流反应3h，反应结束后冷却至室温，白色固体析出，过滤得到中间体。将中间体与等物质的量的氢氧化钠加入至15mL水
中，回流反应4h，反应结束后冷却至室温或冷藏，析出结晶，过滤，干燥得到三氮唑中间体。
中，回流反应4h，反应结束后冷却至室温或冷藏，析出结晶，过滤，干燥得到三氮唑中间体。
[0110] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3h，分离得到PD氯乙酸C‑3单取代衍生物。
[0111] 步骤3：将步骤2中得到的PD氯乙酸衍生物溶解在15mL丙酮溶液中，分别加入步骤1得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝5：1硅胶柱分
离，得到PD三氮唑衍生物(A3)。
离，得到PD三氮唑衍生物(A3)。
[0112] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为158‑160℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.81(s,6H),0.87(s,3H),0.89(s,3H),0.97(s,3H),1.18(s,3H),1.21(s,3H),1.25(s,6H),
2.76(q,J1＝8.0Hz,2H,CH2),3.54(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.54(dd,J1＝8.0Hz,J2＝
13
4.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.52,82.86,76.83,73.28,70.10,56.07,
54.84,51.36,49.95,49.26,39.94,38.66,38.16,37.17,36.58,35.88,34.91,34.67,
33.17,31.26,30.68,29.84,28.03,27.32,20.61,19.57,18.29,17.18,16.54,16.40,
+
16.29,15.77,12.16.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C36H59N3O4S.[M+H] 630.4299,found
630.4315.
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13
4.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.52,82.86,76.83,73.28,70.10,56.07,
54.84,51.36,49.95,49.26,39.94,38.66,38.16,37.17,36.58,35.88,34.91,34.67,
33.17,31.26,30.68,29.84,28.03,27.32,20.61,19.57,18.29,17.18,16.54,16.40,
+
16.29,15.77,12.16.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C36H59N3O4S.[M+H] 630.4299,found
630.4315.
[0113] 实施例4：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑苯基‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B1)。
[0114]
[0115] 步骤1：将苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加入硫代
氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流反应
4h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流反应
4h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0116] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0117] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在15mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B1)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B1)。
[0118] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为154‑156℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.83(s,6H),0.87(s,3H),0.88(s,3H),0.97(s,3H),1.18(s,3H),1.21(s,3H),1.25(s,3H),
3.54(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.56(dd,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.43‑7.45(m,
13
3H),7.98‑8.00(m,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.75,129.97,128.79,126.38,
83.29,77.22,73.16,69.95,55.93,54.72,51.22,49.82,49.14,39.81,38.50,38.04,
37.03,36.45,35.75,34.77,33.03,31.14,30.54,29.71,27.94,27.16,25.17,23.61,
19.43,18.15,17.05,16.42,16.28,16.16,15.63.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H59N3O4S.
+
[M+H]678.4299,found 678.4323.
3.54(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.56(dd,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.43‑7.45(m,
13
3H),7.98‑8.00(m,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.75,129.97,128.79,126.38,
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37.03,36.45,35.75,34.77,33.03,31.14,30.54,29.71,27.94,27.16,25.17,23.61,
19.43,18.15,17.05,16.42,16.28,16.16,15.63.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H59N3O4S.
+
[M+H]678.4299,found 678.4323.
[0119] 实施例5：20(S)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[3‑甲基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B2)。
[0120]
[0121] 步骤1：将3‑甲基苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加
入硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回
流反应4h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
入硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回
流反应4h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0122] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0123] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在15mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B2)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B2)。
[0124] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为155‑157℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.82(s,3H),0.83(s,3H),0.87(s,6H),0.97(s,3H),1.17(s,3H),1.20(s,3H),1.24(s,3H),
1.25(s,3H),3.55(td,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.56(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),
7.22‑7.24(m,1H),7.32(t,J1＝16.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.75(d,J1＝4.0Hz,1H),7.81(s,
13
1H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.60,138.56,130.79,128.68,128.47,127.10,
123.42,83.09,77.22,73.19,70.03,55.92,54.69,51.22,49.80,49.11,39.80,38.49,
38.02,37.02,36.45,35.75,34.75,33.01,31.13,30.48,29.70,27.93,27.16,25.17,
23.61,21.37,19.44,18.14,17.04,16.41,16.26,16.15,15.63.HR‑MS(ESI)m/z calcd for
+
C41H61N3O4S.[M+H]692.4456,found 691.4478.
1.25(s,3H),3.55(td,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.56(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),
7.22‑7.24(m,1H),7.32(t,J1＝16.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.75(d,J1＝4.0Hz,1H),7.81(s,
13
1H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.60,138.56,130.79,128.68,128.47,127.10,
123.42,83.09,77.22,73.19,70.03,55.92,54.69,51.22,49.80,49.11,39.80,38.49,
38.02,37.02,36.45,35.75,34.75,33.01,31.13,30.48,29.70,27.93,27.16,25.17,
23.61,21.37,19.44,18.14,17.04,16.41,16.26,16.15,15.63.HR‑MS(ESI)m/z calcd for
+
C41H61N3O4S.[M+H]692.4456,found 691.4478.
[0125] 实施例6：20(S)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[4‑甲基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B3)。
[0126]
[0127] 步骤1：将4‑甲基苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加
入硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回
流反应4h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
入硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回
流反应4h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0128] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0129] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在15mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B3)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B3)。
[0130] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为156‑161℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.81(s,3H),0.82(s,3H),0.87(s,6H),0.97(s,3H),1.17(s,3H),1.20(s,3H),1.25(s,6H),
3.55(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.56(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.23(d,J1＝
13
8.0Hz,2H),7.84(d,J1＝8.0Hz,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.75,129.65,126.45,
83.22,77.37,73.31,70.13,56.06,54.84,51.36,49.95,49.27,39.95,38.64,38.17,
37.16,36.60,35.89,34.90,33.16,31.27,30.64,29.84,28.06,27.31,25.31,23.74,
21.60,19.58,18.28,17.19,16.54,16.41,16.29,15.77.HR‑MS(ESI)m/z calcd for
+
C41H61N3O4S.[M+H]692.4456,found 691.4478.
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13
8.0Hz,2H),7.84(d,J1＝8.0Hz,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.75,129.65,126.45,
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37.16,36.60,35.89,34.90,33.16,31.27,30.64,29.84,28.06,27.31,25.31,23.74,
21.60,19.58,18.28,17.19,16.54,16.41,16.29,15.77.HR‑MS(ESI)m/z calcd for
+
C41H61N3O4S.[M+H]692.4456,found 691.4478.
[0131] 实施例7：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[3,5‑二甲基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B4)。
[0132]
[0133] 步骤1：将3,5‑二甲基苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其
中加入硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100
℃回流反应4h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
中加入硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100
℃回流反应4h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0134] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0135] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在15mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B4)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B4)。
[0136] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为157‑159℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.81(s,3H),0.83(s,3H),0.87(s,6H),0.97(s,3H),1.17(s,3H),1.20(s,3H),1.24(s,3H),
3.55(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.56(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.06(s,1H),
13
7.61(s,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.47,138.51,131.95,127.79,124.24,83.06,
77.22,73.21,70.06,55.92,54.69,51.22,49.80,49.09,39.80,38.49,38.01,37.01,
36.44,35.74,34.76,34.73,33.01,31.13,30.45,27.93,27.16,25.17,23.60,21.25,
19.44,18.14,17.04,16.41,16.25,16.15,15.62.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C42H63N3O4S.
+
[M+H]706.4612,found 706.4645.
3.55(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.56(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.06(s,1H),
13
7.61(s,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.47,138.51,131.95,127.79,124.24,83.06,
77.22,73.21,70.06,55.92,54.69,51.22,49.80,49.09,39.80,38.49,38.01,37.01,
36.44,35.74,34.76,34.73,33.01,31.13,30.45,27.93,27.16,25.17,23.60,21.25,
19.44,18.14,17.04,16.41,16.25,16.15,15.62.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C42H63N3O4S.
+
[M+H]706.4612,found 706.4645.
[0137] 实施例8：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[2‑氟基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B5)。
[0138]
[0139] 步骤1：将2‑氟苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加入
硫代氨基脲，室温反应17h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
硫代氨基脲，室温反应17h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0140] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0141] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B5)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B5)。
[0142] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为161‑163℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.82(s,3H),0.86(s,3H),0.88(s,6H),0.96(s,3H),1.17(s,3H),1.20(s,3H),1.26(s,3H),
3.52(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.55(dd,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.19‑7.24(m,
13
1H),7.29(t,J1＝8.0Hz,1H),7.45(q,1H),8.21(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H)；C‑NMR
(CDCl3,100MHz,ppm):167.94,131.21,131.12,128.80,124.16,115.14,114.93,81.63,
76.20,72.09,68.85,54.92,53.70,50.18,48.79,48.14,38.79,37.49,36.99,36.00,
35.43,34.73,33.76,33.44,32.00,30.10,29.53,26.85,26.13,24.14,22.58,18.40,
+
17.13,16.02,15.36,15.26,15.12,14.61.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H58FN3O4S.[M+H]
696.4205,found 696.4236.
3.52(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.55(dd,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.19‑7.24(m,
13
1H),7.29(t,J1＝8.0Hz,1H),7.45(q,1H),8.21(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H)；C‑NMR
(CDCl3,100MHz,ppm):167.94,131.21,131.12,128.80,124.16,115.14,114.93,81.63,
76.20,72.09,68.85,54.92,53.70,50.18,48.79,48.14,38.79,37.49,36.99,36.00,
35.43,34.73,33.76,33.44,32.00,30.10,29.53,26.85,26.13,24.14,22.58,18.40,
+
17.13,16.02,15.36,15.26,15.12,14.61.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H58FN3O4S.[M+H]
696.4205,found 696.4236.
[0143] 实施例9：20(S)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[3‑氟基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B6)。
[0144]
[0145] 步骤1：将3‑氟苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加入
硫代氨基脲，室温反应17h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
硫代氨基脲，室温反应17h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0146] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0147] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B6)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B6)。
[0148] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为158‑160℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.82(s,3H),0.84(s,3H),0.88(s,6H),0.98(s,3H),1.18(s,3H),1.20(s,3H),1.25(s,3H),
3.58(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.56(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.10(td,J1＝
13
8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.39(q,1H),7.74(d,J1＝12.0Hz,1H),7.83(d,J1＝8.0Hz,1H)；C‑
NMR(CDCl3,100MHz,ppm):168.62,129.36,121.09,115.74,115.53,112.60,112.37,82.43,
76.20,72.26,69.10,54.91,53.66,50.22,48.79,48.04,38.78,37.47,37.01,36.00,
35.42,34.72,33.85,33.73,32.00,30.13,29.45,26.94,26.15,24.15,22.59,18.41,
+
17.12,16.02,15.39,15.22,15.15,14.60.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H58FN3O4S.[M+H]
696.4205,found 696.4236.
3.58(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.56(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.10(td,J1＝
13
8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.39(q,1H),7.74(d,J1＝12.0Hz,1H),7.83(d,J1＝8.0Hz,1H)；C‑
NMR(CDCl3,100MHz,ppm):168.62,129.36,121.09,115.74,115.53,112.60,112.37,82.43,
76.20,72.26,69.10,54.91,53.66,50.22,48.79,48.04,38.78,37.47,37.01,36.00,
35.42,34.72,33.85,33.73,32.00,30.13,29.45,26.94,26.15,24.15,22.59,18.41,
+
17.12,16.02,15.39,15.22,15.15,14.60.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H58FN3O4S.[M+H]
696.4205,found 696.4236.
[0149] 实施例10：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[4‑氟基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B7)。
[0150]
[0151] 步骤1：将4‑氟苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加入
硫代氨基脲，室温反应17h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
硫代氨基脲，室温反应17h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0152] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0153] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B7)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B7)。
[0154] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为162‑164℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.81(s,3H),0.83(s,3H),0.87(s,6H),0.97(s,3H),1.18(s,3H),1.20(s,3H),1.24(s,3H),
3.58(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.56(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.11‑7.15(m,
13
2H),8.06(s,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):168.47,127.69,127.60,114.99,114.78,
82.37,76.20,72.30,69.15,54.93,53.65,50.23,48.79,48.01,38.78,37.49,37.01,
36.00,35.41,34.72,33.94,33.73,32.01,30.13,29.43,26.97,26.18,24.16,22.59,
18.43,17.12,16.04,15.40,15.21,15.17,14.61；HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H58FN3O4S.
+
[M+H]696.4205,found 696.4236.
3.58(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.56(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.11‑7.15(m,
13
2H),8.06(s,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):168.47,127.69,127.60,114.99,114.78,
82.37,76.20,72.30,69.15,54.93,53.65,50.23,48.79,48.01,38.78,37.49,37.01,
36.00,35.41,34.72,33.94,33.73,32.01,30.13,29.43,26.97,26.18,24.16,22.59,
18.43,17.12,16.04,15.40,15.21,15.17,14.61；HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H58FN3O4S.
+
[M+H]696.4205,found 696.4236.
[0155] 实施例11：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[2,4‑二氟基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B8)。
[0156]
[0157] 步骤1：将2，4‑二氟苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中
加入硫代氨基脲，室温反应17h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃
回流反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
加入硫代氨基脲，室温反应17h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃
回流反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0158] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0159] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B8)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B8)。
[0160] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为163‑165℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.81(s,6H),0.86(s,3H),0.88(s,3H),0.96(s,3H),1.17(s,3H),1.21(s,3H),1.25(s,3H),
3.52(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.53(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),6.96(td,J1＝
13
12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.02(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),8.20(q,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):167.98,130.14,111.79,111.58,103.54,103.59,103.33,81.73,76.20,
72.11,68.88,54.91,53.69,50.18,48.79,48.12,38.78,37.49,36.99,36.00,35.43,
34.73,33.75,33.45,31.99,30.10,29.50,26.86,26.12,24.14,22.57,18.40,17.13,
16.02,15.37,15.25,15.13,14.16；HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H57F2N3O4S(M+H)
714.4111,found 714.4124.
3.52(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.53(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),6.96(td,J1＝
13
12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.02(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),8.20(q,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):167.98,130.14,111.79,111.58,103.54,103.59,103.33,81.73,76.20,
72.11,68.88,54.91,53.69,50.18,48.79,48.12,38.78,37.49,36.99,36.00,35.43,
34.73,33.75,33.45,31.99,30.10,29.50,26.86,26.12,24.14,22.57,18.40,17.13,
16.02,15.37,15.25,15.13,14.16；HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H57F2N3O4S(M+H)
714.4111,found 714.4124.
[0161] 实施例12：20(S)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[4‑氯基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B9)。
[0162]
[0163] 步骤1：将4‑氯苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加入
硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0164] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0165] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B9)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B9)。
[0166] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为150‑152℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.80(s,3H),0.82(s,3H),0.87(s,6H),0.97(s,3H),1.18(s,3H),1.19(s,3H),1.24(s,3H),
3.59(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.53(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.39(d,J1＝
13
8.0Hz,2H),7.99(d,J1＝8.0Hz,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.46,135.98,129.02,
127.87,83.39,77.22,73.33,70.20,55.94,54.66,51.26,49.81,49.02,39.80,38.49,
38.02,37.02,36.42,35.73,34.87,34.74,33.01,31.15,30.44,27.95,27.18,25.17,
23.59,19.44,18.13,17.05,16.40,16.22,16.18,15.62；HR‑MS(ESI)m/z calcd for
+
C40H58ClN3O4S.[M+H]712.3909,found 712.3914.
3.59(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.53(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.39(d,J1＝
13
8.0Hz,2H),7.99(d,J1＝8.0Hz,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.46,135.98,129.02,
127.87,83.39,77.22,73.33,70.20,55.94,54.66,51.26,49.81,49.02,39.80,38.49,
38.02,37.02,36.42,35.73,34.87,34.74,33.01,31.15,30.44,27.95,27.18,25.17,
23.59,19.44,18.13,17.05,16.40,16.22,16.18,15.62；HR‑MS(ESI)m/z calcd for
+
C40H58ClN3O4S.[M+H]712.3909,found 712.3914.
[0167] 实施例13：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[2,4‑二氯基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B10)。
[0168]
[0169] 步骤1：将2，4‑氯苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加
入硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回
流反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
入硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回
流反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0170] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0171] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B10)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B10)。
[0172] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为152‑154℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.80(s,6H),0.86(s,6H),0.96(s,3H),1.17(s,3H),1.19(s,3H),1.24(s,3H),3.54(td,J1
＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.53(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.33(dd,J1＝8.4Hz,J2＝
13
2.0Hz,1H),7.47(d,J1＝1.6Hz,1H),8.02(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.01,136.46,132.35,130.37,128.32,127.68,126.90,82.83,77.26,
73.20,70.05,55.91,54.69,51.22,49.80,49.08,39.79,38.51,38.00,37.01,36.44,
35.73,34.76,34.62,33.00,31.13,30.47,27.90,27.15,25.16,23.59,20.45,19.43,
18.14,17.04,16.41,16.25,16.16,15.63.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H57Cl2N3O4S.[M+
+
H]746.3520,found 746.3538.
＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.53(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.33(dd,J1＝8.4Hz,J2＝
13
2.0Hz,1H),7.47(d,J1＝1.6Hz,1H),8.02(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.01,136.46,132.35,130.37,128.32,127.68,126.90,82.83,77.26,
73.20,70.05,55.91,54.69,51.22,49.80,49.08,39.79,38.51,38.00,37.01,36.44,
35.73,34.76,34.62,33.00,31.13,30.47,27.90,27.15,25.16,23.59,20.45,19.43,
18.14,17.04,16.41,16.25,16.16,15.63.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H57Cl2N3O4S.[M+
+
H]746.3520,found 746.3538.
[0173] 实施例14：20(S)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[2‑溴基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B11)。
[0174]
[0175] 步骤1：将2‑溴苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加入
硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0176] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0177] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B11)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B11)。
[0178] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为156‑158℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.81(s,6H),0.86(s,6H),0.96(s,3H),1.16(s,3H),1.19(s,3H),1.24(s,3H),3.52(td,J1
＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.52(dd,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.30(t,J1＝4.0Hz,1H),
13
7.41(t,J1＝8.0Hz,1H),7.65(d,J1＝8.0Hz,1H),8.04(d,J1＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.08,133.91,132.09,131.39,127.85,120.57,82.76,77.23,73.16,
69.96,55.92,54.70,51.21,49.80,49.11,39.80,38.61,38.01,37.01,36.44,35.74,
34.77,34.59,33.01,31.12,30.50,27.91,27.15,25.16,23.59,19.42,18.14,17.04,
+
16.42,16.28,16.16,15.63.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H58BrN3O4S.[M+H] 756.3404,
found 756.3430.
＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.52(dd,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.30(t,J1＝4.0Hz,1H),
13
7.41(t,J1＝8.0Hz,1H),7.65(d,J1＝8.0Hz,1H),8.04(d,J1＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.08,133.91,132.09,131.39,127.85,120.57,82.76,77.23,73.16,
69.96,55.92,54.70,51.21,49.80,49.11,39.80,38.61,38.01,37.01,36.44,35.74,
34.77,34.59,33.01,31.12,30.50,27.91,27.15,25.16,23.59,19.42,18.14,17.04,
+
16.42,16.28,16.16,15.63.HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H58BrN3O4S.[M+H] 756.3404,
found 756.3430.
[0179] 实施例15：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[4‑溴基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B12)。
[0180]
[0181] 步骤1：将4‑溴苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加入
硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0182] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0183] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B12)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B12)。
[0184] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为161‑163℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.81(s,3H),0.82(s,3H),0.87(s,6H),0.97(s,3H),1.18(s,3H),1.20(s,3H),1.24(s,3H),
3.56(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.56(dd,J1＝10.4Hz,J2＝6.4Hz,1H),7.54(d,J1＝
13
8.0Hz,2H),7.88(d,J1＝8.0Hz,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):168.63,130.85,127.46,
126.94,122.93,82.33,76.20,72.23,69.08,54.90,53.66,50.22,48.79,48.06,38.78,
37.48,37.01,36.00,35.42,34.72,33.78,33.72,31.99,30.12,29.45,26.91,26.15,
24.15,22.58,18.42,17.12,16.03,15.38,15.23,15.15,14.61；HR‑MS(ESI)m/z calcd for
+
C40H58BrN3O4S.[M+H]756.3404,found756.3430.
3.56(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.56(dd,J1＝10.4Hz,J2＝6.4Hz,1H),7.54(d,J1＝
13
8.0Hz,2H),7.88(d,J1＝8.0Hz,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):168.63,130.85,127.46,
126.94,122.93,82.33,76.20,72.23,69.08,54.90,53.66,50.22,48.79,48.06,38.78,
37.48,37.01,36.00,35.42,34.72,33.78,33.72,31.99,30.12,29.45,26.91,26.15,
24.15,22.58,18.42,17.12,16.03,15.38,15.23,15.15,14.61；HR‑MS(ESI)m/z calcd for
+
C40H58BrN3O4S.[M+H]756.3404,found756.3430.
[0185] 实施例16：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[2‑硝基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B13)。
[0186]
[0187] 步骤1：将2‑硝基苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加
入硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回
流反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
入硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回
流反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0188] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0189] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B13)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B13)。
[0190] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为165‑167℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.81(s,3H),0.82(s,3H),0.87(s,6H),0.97(s,3H),1.17(s,3H),1.20(s,3H),1.24(s,3H),
3.57(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.54(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.53(t,J1＝
13
8.0Hz,1H),7.62(t,J1＝8.0Hz,1H),7.75(d,J1＝8.0Hz,1H),7.94(d,J1＝8.0Hz,1H)；C‑
NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.21,148.99,131.98,131.07,130.10,123.84,83.37,77.23,
73.36,70.21,55.91,54.65,51.26,49.80,49.01,39.80,38.51,38.00,37.03,36.43,
35.74,34.93,34.75,32.98,31.17,30.46,27.95,27.14,25.17,23.57,19.41,18.13,
+
17.05,16.41,16.23,16.19,15.63；HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H58N4O6S.[M+H]
723.4150,found 723.4168.
3.57(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.54(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.53(t,J1＝
13
8.0Hz,1H),7.62(t,J1＝8.0Hz,1H),7.75(d,J1＝8.0Hz,1H),7.94(d,J1＝8.0Hz,1H)；C‑
NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.21,148.99,131.98,131.07,130.10,123.84,83.37,77.23,
73.36,70.21,55.91,54.65,51.26,49.80,49.01,39.80,38.51,38.00,37.03,36.43,
35.74,34.93,34.75,32.98,31.17,30.46,27.95,27.14,25.17,23.57,19.41,18.13,
+
17.05,16.41,16.23,16.19,15.63；HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H58N4O6S.[M+H]
723.4150,found 723.4168.
[0191] 实施例17：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[3‑硝基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B14)。
[0192]
[0193] 步骤1：将3‑硝基苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加
入硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回
流反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
入硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回
流反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0194] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0195] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B14)。
5：1硅胶柱分离，得到PD三氮唑衍生物(B14)。
[0196] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为154‑156℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.80(s,3H),0.84(s,3H),0.88(s,6H),0.98(s,3H),1.18(s,3H),1.21(s,3H),1.25(s,3H),
3.62(td,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.55(dd,J1＝8.0Hz,J1,2＝4.0Hz,1H),7.59(t,J1＝
13
8.0Hz,1H),8.22(d,J1＝8.0Hz,1H),8.41(d,J1＝8.0Hz,1H),8.91(s,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.16,148.58,132.19,131.78,129.65,123.97,121.38,83.44,76.87,
73.46,70.38,55.92,54.64,51.29,49.82,48.96,39.80,38.51,38.00,37.03,36.42,
35.72,34.97,34.73,33.00,31.18,30.43,29.70,27.95,27.17,25.18,23.61,19.43,
+
18.13,17.05,16.39,16.21,15.62；HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H58N4O6S.[M+H]
723.4150,found 723.4168.
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13
8.0Hz,1H),8.22(d,J1＝8.0Hz,1H),8.41(d,J1＝8.0Hz,1H),8.91(s,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.16,148.58,132.19,131.78,129.65,123.97,121.38,83.44,76.87,
73.46,70.38,55.92,54.64,51.29,49.82,48.96,39.80,38.51,38.00,37.03,36.42,
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+
18.13,17.05,16.39,16.21,15.62；HR‑MS(ESI)m/z calcd for C40H58N4O6S.[M+H]
723.4150,found 723.4168.
[0197] 实施例18：20(S)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[5‑[4‑甲氧基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯(B15)。
[0198]
[0199] 步骤1：将4‑甲氧基苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应4h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中
加入硫代氨基脲，室温反应18h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃
回流反应4h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
加入硫代氨基脲，室温反应18h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃
回流反应4h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0200] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0201] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到PD唑衍生物(B15)。
5：1硅胶柱分离，得到PD唑衍生物(B15)。
[0202] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为158‑160℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.79(s,3H),0.82(s,3H),0.85(s,3H),0.87(s,3H),0.96(s,3H),1.17(s,3H),1.19(s,3H),
1.23(s,3H),3.56(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),3.84(s,3H,OCH3),4.52(dd,J1＝
13
12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),6.94(d,J1＝8.0Hz,2H),7.95(d,J1＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.30,128.25,120.31,114.32,107.36,83.04,77.61,73.25,70.15,55.91,
55.43,54.66,51.24,49.79,49.05,39.78,38.47,37.99,36.99,36.42,35.73,34.74,
33.01,31.13,30.44,29.70,27.93,27.18,25.17,23.57,19.44,18.12,17.04,16.40,
+
16.23,16.16,15.61；HR‑MS(ESI)m/z calcd for C41H61N3O5S.[M+H] 708.4326,found
708.4339.
1.23(s,3H),3.56(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),3.84(s,3H,OCH3),4.52(dd,J1＝
13
12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),6.94(d,J1＝8.0Hz,2H),7.95(d,J1＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.30,128.25,120.31,114.32,107.36,83.04,77.61,73.25,70.15,55.91,
55.43,54.66,51.24,49.79,49.05,39.78,38.47,37.99,36.99,36.42,35.73,34.74,
33.01,31.13,30.44,29.70,27.93,27.18,25.17,23.57,19.44,18.12,17.04,16.40,
+
16.23,16.16,15.61；HR‑MS(ESI)m/z calcd for C41H61N3O5S.[M+H] 708.4326,found
708.4339.
[0203] 实施例19：20(R)‑达玛烷‑25‑甲氧基‑12β，20β‑羟基‑3β‑基‑[4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯。
[0204]
[0205] 步骤1：将硫代氨基脲加入至甲酸溶液中，在100℃中回流反应0.5h，反应结束后冷却至室温，白色固体析出，过滤得到中间体。将中间体与等物质的量的氢氧化钠加入至15mL
水中，回流反应3h，反应结束后冷却至室温或冷藏，析出结晶，过滤，干燥得到三氮唑中间
体。
水中，回流反应3h，反应结束后冷却至室温或冷藏，析出结晶，过滤，干燥得到三氮唑中间
体。
[0206] 步骤2：在AD‑1的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3h，分离得到PD氯乙酸C‑3单取代衍生
物。
物。
[0207] 步骤3：将步骤2中得到的AD‑1氯乙酸衍生物溶解在15mL丙酮溶液中，分别加入步骤1得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝5：1硅胶
柱分离，得到AD‑1三氮唑衍生物。
柱分离，得到AD‑1三氮唑衍生物。
[0208] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为165‑167℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.82(s,6H),0.87(s,3H),0.89(s,3H),0.97(s,3H),1.16(s,3H),1.21(s,3H),1.24(s,3H),
13
3.55(td,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.55(dd,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.47,83.46,77.33,73.42,70.26,56.07,54.73,51.59,49.77,49.27,
48.62,39.96,38.64,38.15,37.16,36.28,35.84,34.95,34.84,33.16,31.32,30.45,
28.05,27.36,25.37,23.78,19.54,18.26,17.24,16.56,16.33,16.32,15.75.HR‑MS(ESI)
+
m/z calcd for C35H59N3O5S.[M+H]633.9251,found 633.9270.
13
3.55(td,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.55(dd,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.47,83.46,77.33,73.42,70.26,56.07,54.73,51.59,49.77,49.27,
48.62,39.96,38.64,38.15,37.16,36.28,35.84,34.95,34.84,33.16,31.32,30.45,
28.05,27.36,25.37,23.78,19.54,18.26,17.24,16.56,16.33,16.32,15.75.HR‑MS(ESI)
+
m/z calcd for C35H59N3O5S.[M+H]633.9251,found 633.9270.
[0209] 实施例20：20(S)‑达玛烷‑25‑甲氧基‑12β,20α‑羟基‑3β‑基‑[5‑[4‑氯基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯。
[0210]
[0211] 步骤1：将4‑氯苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加入
硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0212] 步骤2：在AD‑1的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0213] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到AD‑1三氮唑衍生物。
5：1硅胶柱分离，得到AD‑1三氮唑衍生物。
[0214] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为154‑156℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.81(s,3H),0.82(s,3H),0.84(s,6H),0.93(s,3H),1.14(s,3H),1.16(s,3H),1.21(s,3H),
3.62(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.55(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.36(d,J1＝
13
8.0Hz,2H),7.97(d,J1＝8.0Hz,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):170.46,136.98,128.02,
127.77,83.49,77.29,73.37,70.26,55.95,54.64,51.23,49.82,49.04,48.64,39.60,
38.47,38.09,37.05,36.43,35.77,34.89,34.74,33.07,31.16,30.44,27.95,27.17,
25.17,23.57,19.46,18.14,17.03,16.45,16.24,16.13,15.65；HR‑MS(ESI)m/z calcd for
+
C41H62ClN3O5S.[M+H]744.4661,found 744.4682.
3.62(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.55(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.36(d,J1＝
13
8.0Hz,2H),7.97(d,J1＝8.0Hz,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):170.46,136.98,128.02,
127.77,83.49,77.29,73.37,70.26,55.95,54.64,51.23,49.82,49.04,48.64,39.60,
38.47,38.09,37.05,36.43,35.77,34.89,34.74,33.07,31.16,30.44,27.95,27.17,
25.17,23.57,19.46,18.14,17.03,16.45,16.24,16.13,15.65；HR‑MS(ESI)m/z calcd for
+
C41H62ClN3O5S.[M+H]744.4661,found 744.4682.
[0215] 实施例21：20(R)‑达玛烷‑25‑甲氧基‑12β,20α‑羟基‑3β‑基‑[5‑[4‑溴基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯。
[0216]
[0217] 步骤1：将4‑溴苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加入
硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0218] 步骤2：在AD‑1的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0219] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到AD‑1三氮唑衍生物。
5：1硅胶柱分离，得到AD‑1三氮唑衍生物。
[0220] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为161‑163℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.80(s,3H),0.82(s,3H),0.86(s,6H),0.96(s,3H),1.16(s,3H),1.23(s,3H),1.24(s,3H),
3.58(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.58(dd,J1＝10.4Hz,J2＝6.4Hz,1H),7.56(d,J1＝
13
8.0Hz,2H),7.88(d,J1＝8.0Hz,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.63,131.85,127.44,
126.92,122.94,82.43,76.20,72.33,69.18,54.94,53.64,50.22,48.73,48.66,48.08,
38.77,37.45,37.03,36.02,35.43,34.72,33.78,33.72,31.96,30.12,29.44,26.92,
26.15,24.14,22.58,18.42,17.13,16.05,15.37,15.27,15.19,14.67；HR‑MS(ESI)m/z
+
calcd for C41H62BrN3O5S.[M+H]788.9171,found 788.9185.
3.58(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.58(dd,J1＝10.4Hz,J2＝6.4Hz,1H),7.56(d,J1＝
13
8.0Hz,2H),7.88(d,J1＝8.0Hz,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):169.63,131.85,127.44,
126.92,122.94,82.43,76.20,72.33,69.18,54.94,53.64,50.22,48.73,48.66,48.08,
38.77,37.45,37.03,36.02,35.43,34.72,33.78,33.72,31.96,30.12,29.44,26.92,
26.15,24.14,22.58,18.42,17.13,16.05,15.37,15.27,15.19,14.67；HR‑MS(ESI)m/z
+
calcd for C41H62BrN3O5S.[M+H]788.9171,found 788.9185.
[0221] 实施例22：20(R)‑达玛烷‑25β,12β，20β‑羟基‑3β‑基‑[4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯。
[0222]
[0223] 步骤1：将硫代氨基脲加入至甲酸溶液中，在100℃中回流反应0.5h，反应结束后冷却至室温，白色固体析出，过滤得到中间体。将中间体与等物质的量的氢氧化钠加入至15mL
水中，回流反应3h，反应结束后冷却至室温或冷藏，析出结晶，过滤，干燥得到三氮唑中间
体。
水中，回流反应3h，反应结束后冷却至室温或冷藏，析出结晶，过滤，干燥得到三氮唑中间
体。
[0224] 步骤2：在AD‑2的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3h，分离得到PD氯乙酸C‑3单取代衍生
物。
物。
[0225] 步骤3：将步骤2中得到的AD‑2氯乙酸衍生物溶解在15mL丙酮溶液中，分别加入步骤1得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝5：1硅胶
柱分离，得到AD‑2三氮唑衍生物。
柱分离，得到AD‑2三氮唑衍生物。
[0226] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为161‑163℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.83(s,6H),0.85(s,3H),0.86(s,3H),0.98(s,3H),1.14(s,3H),1.20(s,3H),1.24(s,3H),
13
3.56(td,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.57(dd,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):168.48,83.49,77.35,73.42,70.24,56.03,54.76,51.56,49.77,49.28,
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+
calcd for C34H57N3O5S.[M+H]619.8985,found 619.8996.
13
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+
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[0227] 实施例23：20(S)‑达玛烷‑25β,12β,20α‑羟基‑3β‑基‑[5‑[4‑氯基‑苯基]‑4H‑[1,2,4]三氮唑‑3‑基]‑硫代乙酸酯。
[0228]
[0229] 步骤1：将4‑氯苯甲酸，加入至15mL干燥二氯甲烷溶液中，加入过量的氯化亚砜，滴加5滴二甲基甲酰胺(DMF)。回流反应3h，减压除去溶剂。加入20mL吡啶溶液溶解，其中加入
硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
硫代氨基脲，室温反应16h，减压除去吡啶溶液得到粗品，加入氢氧化钠水溶液，100℃回流
反应3h，冷却，调节pH值，过滤析出沉淀，清洗后干燥，得到三氮唑中间体。
[0230] 步骤2：在AD‑2的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3‑5h，分离得到人参皂苷元氯乙酸衍生
物。
物。
[0231] 步骤3：将步骤2中得到的人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10mL丙酮溶液中，分别加入步骤1中得到的三氮唑中间体，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h，石油醚：丙酮＝
5：1硅胶柱分离，得到AD‑2三氮唑衍生物。
5：1硅胶柱分离，得到AD‑2三氮唑衍生物。
[0232] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为157‑159℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.81(s,3H),0.81(s,3H),0.84(s,6H),0.93(s,3H),1.15(s,3H),1.16(s,3H),1.22(s,3H),
3.60(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.53(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.36(d,J1＝
13
8.0Hz,2H),7.93(d,J1＝8.0Hz,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):170.24,136.46,128.32,
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23.58,19.45,18.34,17.07,16.45,16.26,16.11,15.60；HR‑MS(ESI)m/z calcd for
+
C40H60ClN3O5S.[M+H]730.4395,found 730.4421.
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13
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+
C40H60ClN3O5S.[M+H]730.4395,found 730.4421.
[0233] 实施例24：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[哌嗪‑1‑基]‑乙酸酯(D1)。
[0234]
[0235] 步骤1：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3h，分离得到PD氯乙酸C‑3单取代衍生物。
[0236] 步骤2：人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10‑15mL丙酮溶液中，加入无水哌嗪，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h。二氯甲烷：甲醇＝10：1分离得到PD哌嗪衍生物(D1)。
[0237] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为167‑169℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.82(s,3H),0.84(s,3H),0.85(s,6H),0.93(s,3H),1.16(s,3H),1.19(s,3H),1.22(s,3H),
13
3.62(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.55(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
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+
calcd for C36H62N2O4.[M+H]586.8885,found 586.8899.
13
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+
calcd for C36H62N2O4.[M+H]586.8885,found 586.8899.
[0238] 实施例25：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[1‑[2‑甲基‑哌嗪]‑基]‑乙酸酯(D2)。
[0239]
[0240] 步骤1：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯乙酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3h，分离得到PD氯乙酸C‑3单取代衍生物。
[0241] 步骤2：人参皂苷元氯乙酸衍生物溶解在10‑15mL丙酮溶液中，加入2‑甲基哌嗪，加入少量的碳酸钾作为缚酸剂，反应2h。二氯甲烷：甲醇＝10：1分离得到PD‑2‑甲基哌嗪衍生
物(D2)。
物(D2)。
[0242] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为175‑177℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.81(s,3H),0.82(s,3H),0.85(s,6H),0.94(s,3H),1.12(s,3H),1.17(s,3H),1.21(s,3H),
13
3.61(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.53(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
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27.28,25.29,23.24,19.78,18.48,17.00,16.23,16.12,16.11,15.56；HR‑MS(ESI)m/z
+
calcd for C37H64N2O4.[M+H]600.9151,found 600.9168.
13
3.61(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.53(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):169.39,83.54,76.56,73.23,70.33,55.87,55.64,51.37,49.80,49.14,
39.66,38.36,38.29,37.14,36.49,35.67,34.82,34.75,33.33,32.10,30.56,27.83,
27.28,25.29,23.24,19.78,18.48,17.00,16.23,16.12,16.11,15.56；HR‑MS(ESI)m/z
+
calcd for C37H64N2O4.[M+H]600.9151,found 600.9168.
[0243] 实施例26：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[2‑甲基‑5‑苯基‑[1,3,4‑恶二唑]‑胺基]硫脲(E1)。
[0244]
[0245] 步骤1：将不苯甲酸与等物质的量的甲醇，在硫酸催化下得到苯甲酸甲酯，加入水合肼反应得到苯甲酰肼，干燥后，将苯甲酰肼溶解在三氯氧磷中，加入等物质的量的氯乙
酸，反应4‑6小时，分离得到具有恶二唑中间体。
酸，反应4‑6小时，分离得到具有恶二唑中间体。
[0246] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯铬酸吡啶盐(PCC)，室温反应3h，得到达玛烷皂苷元羰基衍生物。将得到的达玛烷皂苷元羰基衍生物与等物质的量的硫
代氨基脲，溶解在10mL无水乙醇中，70‑80℃回流反应24h，分离得到PD C‑3取代基硫代氨基
脲衍生物。
代氨基脲，溶解在10mL无水乙醇中，70‑80℃回流反应24h，分离得到PD C‑3取代基硫代氨基
脲衍生物。
[0247] 步骤3：将步骤2中的PD硫代氨基脲衍生物与步骤1中的恶二唑中间体溶解在15mL丙酮中，加入碳酸钾和碘化钾，60℃回流反应10h。得到具有PD恶二唑衍生物(E1)。
[0248] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为188‑190℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.81(s,3H),0.82(s,3H),0.84(s,6H),0.97(s,3H),1.12(s,3H),1.17(s,3H),1.21(s,3H),
3.64(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.57(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.44‑7.47(m,
13
3H),7.93‑7.98(m,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):173.39,155.64,136.58,129.58,
128.64,127.50,71.56,70.23,66.33,58.87,55.94,52.37,50.12,48.80,48.14,37.66,
37.36,37.29,36.14,35.49,35.27,34.62,34.44,33.30,32.50,30.56,27.81,27.78,
25.20,24.24,19.08,18.38,17.60,16.20,16.15,16.11,15.86；HR‑MS(ESI)m/z calcd for
+
C40H59N5O3S.[M+H]689.9932,found 689.9952.
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13
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25.20,24.24,19.08,18.38,17.60,16.20,16.15,16.11,15.86；HR‑MS(ESI)m/z calcd for
+
C40H59N5O3S.[M+H]689.9932,found 689.9952.
[0249] 实施例27：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑[2‑乙基‑4‑苯基‑[1,2,4‑三氮唑]‑3‑酮‑胺基]硫脲(F1)。
[0250]
[0251] 步骤1：将苯胺与肼甲酸甲酯溶解在无水乙醇中，加入原甲酸三乙酯和甲醇钠进行回流反应48h得到中间体。然后将中间体在碳酸钾和碘化钾的存在下，与1，2‑二溴乙烷在丙
酮中回流反应4‑6h，得到氮唑酮衍生物。
酮中回流反应4‑6h，得到氮唑酮衍生物。
[0252] 步骤2：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的氯铬酸吡啶盐(PCC)，室温反应3h，得到达玛烷皂苷元羰基衍生物。将得到的达玛烷皂苷元羰基衍生物与等物质的量的硫
代氨基脲，溶解在10mL无水乙醇中，70‑80℃回流反应24h，分离得到PD C‑3取代基硫代氨基
脲衍生物。
代氨基脲，溶解在10mL无水乙醇中，70‑80℃回流反应24h，分离得到PD C‑3取代基硫代氨基
脲衍生物。
[0253] 步骤3：将步骤2中的PD硫代氨基脲衍生物与步骤1中的氮唑酮中间体溶解在15mL丙酮中，加入碳酸钾和碘化钾，60℃回流反应10h。得到具有PD氮唑酮衍生物(F1)。
[0254] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为198‑200℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.80(s,3H),0.81(s,3H),0.89(s,6H),0.97(s,3H),1.12(s,3H),1.17(s,3H),1.21(s,3H),
3.64(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.57(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.43‑7.46(m,
13
3H),7.98‑8.02(m,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):178.19,158.34,155.69,154.25,
138.28,128.64,127.50,124.21,120.35,73.59,71.23,69.33,59.97,56.90,55.87,54.12,
49.87,48.84,37.66,37.36,37.20,36.34,35.40,35.47,35.12,34.94,33.37,32.90,
30.53,27.51,26.78,25.80,24.27,19.38,18.30,17.60,16.28,16.25,16.10,15.85；HR‑MS
+
(ESI)m/z calcd for C41H62N6O3S.[M+H]719.0344,found 719.0358.
3.64(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.57(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.43‑7.46(m,
13
3H),7.98‑8.02(m,2H)；C‑NMR(CDCl3,100MHz,ppm):178.19,158.34,155.69,154.25,
138.28,128.64,127.50,124.21,120.35,73.59,71.23,69.33,59.97,56.90,55.87,54.12,
49.87,48.84,37.66,37.36,37.20,36.34,35.40,35.47,35.12,34.94,33.37,32.90,
30.53,27.51,26.78,25.80,24.27,19.38,18.30,17.60,16.28,16.25,16.10,15.85；HR‑MS
+
(ESI)m/z calcd for C41H62N6O3S.[M+H]719.0344,found 719.0358.
[0255] 实施例28：20(R)‑人参二醇‑12β‑羟基‑3β‑基‑烟酸酯(G1)。
[0256]
[0257] 步骤1：在PD的二氯甲烷溶液中，加入等物质的量的烟酸，加入N'N‑二环己基碳二亚胺(DCC)和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应5h，石油醚：乙酸乙酯＝5：1分离得到PD C‑3
取代的烟酸类衍生物(G1)。
取代的烟酸类衍生物(G1)。
[0258] 所得到的化合物为白色粉末，熔点为153‑155℃。1H‑NMR(CDCl3,400MHz,ppm):δ0.82(s,3H),0.84(s,3H),0.85(s,6H),0.93(s,3H),1.16(s,3H),1.19(s,3H),1.22(s,3H),
13
3.62(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.55(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):167.85,151.25,149.58,124.14,121.95,82.67,76.39,73.73,71.34,57.66,
55.94,51.37,49.65,49.09,39.60,38.56,38.29,37.14,36.38,35.56,34.98,34.32,
33.09,32.37,30.43,27.96,27.15,25.35,23.38,19.44,18.31,17.08,16.53,16.23,
+
16.10,15.67；HR‑MS(ESI)m/z calcd for C36H55N1O4.[M+H]565.8262,found 565.8297.
13
3.62(td,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.55(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H)；C‑NMR(CDCl3,
100MHz,ppm):167.85,151.25,149.58,124.14,121.95,82.67,76.39,73.73,71.34,57.66,
55.94,51.37,49.65,49.09,39.60,38.56,38.29,37.14,36.38,35.56,34.98,34.32,
33.09,32.37,30.43,27.96,27.15,25.35,23.38,19.44,18.31,17.08,16.53,16.23,
+
16.10,15.67；HR‑MS(ESI)m/z calcd for C36H55N1O4.[M+H]565.8262,found 565.8297.
[0259] 实施例29：抗癌活性评价。
[0260] 本发明中设计合成的达玛烷型人参皂苷衍生物，具有广泛的抗癌活性，可以抑制或杀灭某种特定癌细胞，同时针对正常细胞体现出无毒性的作用，具有很强的生物活性。
[0261] 1.细胞MTT实验
[0262] 1.1实验材料
[0263] 达玛烷型皂苷元对照品，由沈阳药科大学赵余庆教授课题组制备；二甲基亚砜DMSO购自美国Sigma公司；RPMI‑1640培养基，DMEM培养基，胎牛血清购自美国Invitrogen
Gibco公司；96孔板，细胞培养瓶购自大连美仑生物技术有限公司；其他实验耗材例如：移液
枪头，手套等购自沈阳莱博科贸有限公司。
Gibco公司；96孔板，细胞培养瓶购自大连美仑生物技术有限公司；其他实验耗材例如：移液
枪头，手套等购自沈阳莱博科贸有限公司。
[0264] 1.2细胞株
[0265] 5株癌细胞：人肺癌细胞A549，人肝癌细胞HepG‑2，人宫颈癌细胞Hela，人前列腺癌细胞PC‑3，人乳腺癌细胞MCF‑7；1株正常细胞：人胃表皮细胞GES‑1。
[0266] 1.3实验方法
[0267] 6株细胞均培养于无菌细胞间，温度37℃，相对湿度98％，含5％CO2培养箱内。培养基为加入10％牛血清FBS和1％双抗(100U青霉素和100U链霉素以及50μM 2‑琉基乙醇)的
RPMI‑1640，DMEM培养基。
RPMI‑1640，DMEM培养基。
[0268] 取对数生长期的肿瘤细胞制成单细胞悬液，以1*104/孔的密度接种于96孔板上，37℃，5％CO2培养箱中培养24小时。将测试药物与对照品(AD‑1，AD‑2，PD)均配制成80，40，
20，10，5μM。每组设置3个平行复孔。加药培养48小时候每孔加入5mg/mL的MTT溶液10μL，均
匀震荡后至于培养箱中孵育4小时后，在490nm波长下测定吸光值，计算得出IC50值。
20，10，5μM。每组设置3个平行复孔。加药培养48小时候每孔加入5mg/mL的MTT溶液10μL，均
匀震荡后至于培养箱中孵育4小时后，在490nm波长下测定吸光值，计算得出IC50值。
[0269] IC50值是指被测量拮抗剂的半抑制浓度。即细胞凋亡一半时的药物浓度。IC50值越小，药物作用或毒性越强，当IC50值大于100μM，我们一般认为药物对细胞没有作用或毒性。
[0270] 1.4实验结果
[0271] 表1.衍生物的抗肿瘤活性IC50值
[0272]
[0273]
[0274] a Each data represents mean ± S.D.
[0275] 5株癌细胞(人肺癌A549细胞，人肝癌细胞HepG‑2，人宫颈癌Hela，人前列腺癌细胞PC‑3，人乳腺癌细胞MCF‑7)和正常细胞(人胃上皮细胞GES‑1)用于通过MTT分析评估化合物
的抗增殖活性。结果表明，化合物A1对HepG‑2细胞具有最强的抗增殖活性，IC50＝4.21±
0.54μM。评价所有化合物的正常细胞活性，结果表明所有化合物均显示出低毒性或无毒作
用。
的抗增殖活性。结果表明，化合物A1对HepG‑2细胞具有最强的抗增殖活性，IC50＝4.21±
0.54μM。评价所有化合物的正常细胞活性，结果表明所有化合物均显示出低毒性或无毒作
用。
[0276] 实施例30：细胞形态学观察。
[0277] 由于化合物A1对人肝癌细胞HepG‑2细胞具有显著的抑制作用，我们进行化合物A1对HepG‑2细胞的机制研究。
[0278] 1.实验方法
[0279] 为了进行细胞形态分析，HepG‑2细胞在6孔板中生长(2*10 5个细胞/孔)。24小时后，将5和10μM的化合物A1和PD与细胞分别孵育12小时。用0.1％DMSO培养对照细胞。用相差
显微镜(Olympus，东京，日本)观察细胞形态。
显微镜(Olympus，东京，日本)观察细胞形态。
[0280] 2.实验结果(见图1和图2)
[0281] 为了研究化合物A1是否诱导HepG‑2细胞凋亡，我们以5、10μM的浓度处理化合物A1。用A1处理的HepG‑2细胞显示收缩和凋亡小体，表明发生了凋亡(图1)。此外，DAPI染色可
进一步表明细胞核正在萎缩，并且细胞破碎，这是细胞凋亡的特征(图2)。数据表明化合物
A1可以诱导HepG‑2细胞凋亡。与PD相比，当以相同浓度处理细胞时，细胞形态没有改变。
进一步表明细胞核正在萎缩，并且细胞破碎，这是细胞凋亡的特征(图2)。数据表明化合物
A1可以诱导HepG‑2细胞凋亡。与PD相比，当以相同浓度处理细胞时，细胞形态没有改变。
[0282] 实施例26：细胞凋亡实验。
[0283] 1.实验方法
[0284] 使用膜联蛋白V‑FITC和碘化丙啶染色以探讨化合物A1的凋亡作用。用6孔板接种5
HepG‑2细胞(2×10 细胞/孔)。将分别在37℃下，将化合物A1和PD以5和10μM的剂量添加到
6孔板中，作用细胞12h。收获细胞后，用PBS洗涤细胞。300μL结合缓冲液用于重悬细胞。之后
在室温下在遮光条件下添加5μL膜联蛋白V‑FITC和10μLPI。通过流式细胞术确定细胞凋亡。
HepG‑2细胞(2×10 细胞/孔)。将分别在37℃下，将化合物A1和PD以5和10μM的剂量添加到
6孔板中，作用细胞12h。收获细胞后，用PBS洗涤细胞。300μL结合缓冲液用于重悬细胞。之后
在室温下在遮光条件下添加5μL膜联蛋白V‑FITC和10μLPI。通过流式细胞术确定细胞凋亡。
[0285] 2.实验结果(见图三)
[0286] Annexin V‑FITC/PI检测被用于进一步探索由A1诱导的HepG‑2细胞的凋亡(图3)。结果表明，化合物A1以浓度依赖性方式强烈诱导HepG‑2细胞凋亡。与对照组(细胞凋亡率为
5.3％)相比，化合物A1在5μM和10μM浓度下的凋亡率分别为10.2％和42.7％。但是，在相同
浓度的细胞进行PD处理后，细胞凋亡率没有变化。
5.3％)相比，化合物A1在5μM和10μM浓度下的凋亡率分别为10.2％和42.7％。但是，在相同
浓度的细胞进行PD处理后，细胞凋亡率没有变化。
[0287] 实施例31：蛋白印迹实验分析
[0288] 1.实验方法
[0289] 将HepG‑2细胞与各种浓度的化合物A1(0、5、10、20μM)和PD(0、10、20μM)孵育24小时。为了提取总蛋白，将细胞在裂解缓冲液和磷酸酶抑制剂中裂解。通过SDS‑PAGE(8％，
12％凝胶)分离蛋白质，然后进行跨膜。用5％脱脂乳封闭聚偏氟乙烯膜。随后，将膜与抗Cl‑
PARP，抗Cl‑caspase‑3，抗Cl‑caspase‑9，抗p53，抗Bcl‑2，抗Bax，抗Cyt c和抗β‑肌动蛋白
分别(1：1000)在4℃过夜。用TBST洗涤膜。用山羊抗兔/抗小鼠二抗(1：5000)孵育膜，使用X
射线胶片显影信号。
12％凝胶)分离蛋白质，然后进行跨膜。用5％脱脂乳封闭聚偏氟乙烯膜。随后，将膜与抗Cl‑
PARP，抗Cl‑caspase‑3，抗Cl‑caspase‑9，抗p53，抗Bcl‑2，抗Bax，抗Cyt c和抗β‑肌动蛋白
分别(1：1000)在4℃过夜。用TBST洗涤膜。用山羊抗兔/抗小鼠二抗(1：5000)孵育膜，使用X
射线胶片显影信号。
[0290] 2.实验结果(见图4，图5和图6)
[0291] 我们检测到Cl‑PARP，Cl‑Caspase‑3，Cl‑Caspase‑9蛋白表达，随着化合物A1浓度的增加，相应的蛋白表达逐渐增加。与PD相比，先前的研究结果表明PD不会诱导HepG‑2细胞
凋亡。在凋亡蛋白的检测中，未检测到凋亡蛋白的表达，这也证实了先前的结果。该数据表
明，化合物A1在处理细胞后触发半胱天冬酶级联反应，从而诱导凋亡(图4)。
凋亡。在凋亡蛋白的检测中，未检测到凋亡蛋白的表达，这也证实了先前的结果。该数据表
明，化合物A1在处理细胞后触发半胱天冬酶级联反应，从而诱导凋亡(图4)。
[0292] 线粒体凋亡途径是诱导凋亡的经典途径。由于Cl‑caspase‑3和Cl‑caspase‑9的表达增加，上游表达的蛋白可能通过线粒体途径调控，因此我们推测化合物A1通过触发线粒
体凋亡途径诱导凋亡。Bcl‑2家族蛋白和p53是线粒体途径的关键蛋白，主要包括Bcl‑2(抗
凋亡蛋白)和Bax(促凋亡蛋白)，Bax/Bcl‑2的比例是关键通过线粒体途径的指示。因此，我
们测试了Bcl‑2，Bax和p53蛋白的表达水平。结果表明，随着化合物A1浓度的增加，Bcl‑2，
Bax和p53蛋白的表达上调，并且Bax/Bcl‑2的比例也在增加(图5)。
体凋亡途径诱导凋亡。Bcl‑2家族蛋白和p53是线粒体途径的关键蛋白，主要包括Bcl‑2(抗
凋亡蛋白)和Bax(促凋亡蛋白)，Bax/Bcl‑2的比例是关键通过线粒体途径的指示。因此，我
们测试了Bcl‑2，Bax和p53蛋白的表达水平。结果表明，随着化合物A1浓度的增加，Bcl‑2，
Bax和p53蛋白的表达上调，并且Bax/Bcl‑2的比例也在增加(图5)。
[0293] 在线粒体诱导细胞凋亡的过程中，在化合物的影响下，细胞质中的Bax蛋白转移到线粒体膜上，导致细胞色素C(Cyt c)从线粒体释放到细胞质中。线粒体Cyt c的释放也是细
胞凋亡的重要指标。为了进一步证明化合物A1通过线粒体途径诱导凋亡，我们分别检查了
Bax和Cyt c蛋白在细胞质和线粒体中的表达。图6的结果表明，胞质中Bax蛋白的表达逐渐
减少，线粒体Bax蛋白的表达逐渐增加。然而，胞质Cyt c蛋白逐渐增加，线粒体Cyt c蛋白逐
渐减少。表明在HepG‑2细胞中处理了化合物A1之后，Bax蛋白逐渐从细胞质转移到线粒体，
导致线粒体Cyt c蛋白转移到细胞质中，触发下游蛋白并诱导凋亡。
胞凋亡的重要指标。为了进一步证明化合物A1通过线粒体途径诱导凋亡，我们分别检查了
Bax和Cyt c蛋白在细胞质和线粒体中的表达。图6的结果表明，胞质中Bax蛋白的表达逐渐
减少，线粒体Bax蛋白的表达逐渐增加。然而，胞质Cyt c蛋白逐渐增加，线粒体Cyt c蛋白逐
渐减少。表明在HepG‑2细胞中处理了化合物A1之后，Bax蛋白逐渐从细胞质转移到线粒体，
导致线粒体Cyt c蛋白转移到细胞质中，触发下游蛋白并诱导凋亡。
[0294] 因此，基于一系列蛋白表达的结果，我们推断在化合物A1在HepG‑2细胞中处理后，Bax蛋白大量表达，Bcl‑2蛋白表达受到抑制，影响线粒体膜的变化，从而导致Cyt c蛋白的
释放，进一步触发caspase级联反应，引起Cl‑PARP，Cl‑Caspase‑3和Cl‑Caspase‑9的蛋白表
达，并最终指示细胞凋亡。
释放，进一步触发caspase级联反应，引起Cl‑PARP，Cl‑Caspase‑3和Cl‑Caspase‑9的蛋白表
达，并最终指示细胞凋亡。