一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片及其制备方法

摘要

本发明提供一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片及其制备方法，咀嚼片中包括如下成分：酪蛋白磷酸肽、海参肽、牛初乳粉、大豆肽、浓缩乳清蛋白、叶黄素酯、维生素C、果蔬粉、抗性糊精、乳糖、赤藓糖醇、山梨糖醇、DL‑苹果酸、低聚木糖、硬脂酸镁；还包括靶向缓释生物相容微囊，所述靶向缓释生物相容微囊，包括：聚碳酸酯薄膜、牛血清白蛋白冻干粉、氨基酸、壳寡糖、卵磷脂、聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒。本发明提供的制备方法和成分制备的肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片能够在肠道内释放具有质量和营养作用的活性肽，能够穿过血脑屏障作用于脑细胞修复心脑血管和氧化应激后损伤，辅助在胃内消化牛初乳粉和浓缩乳清蛋白进而增强人体免疫力。

权利要求

1.一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片，其特征在于，每1g咀嚼片中包括如下成分：酪蛋白磷酸肽8mg；

海参肽25mg；

牛初乳粉27.5mg；

大豆肽37.5mg；

浓缩乳清蛋白59mg；

叶黄素酯20.5mg；

维生素C15mg；

果蔬粉55mg；

抗性糊精3mg；

乳糖2.5mg；

赤藓糖醇5.25mg；

山梨糖醇7.75mg；

DL‑苹果酸0.5mg；

低聚木糖0.8mg；

硬脂酸镁0.75mg；

每1g咀嚼片中还包括靶向缓释生物相容微囊15mg，所述靶向缓释生物相容微囊，按重量组分计，包括以下组分：孔径为250nm、厚度为11mm的聚碳酸酯薄膜25份；牛血清白蛋白冻干粉12.5份；氨基酸12.5份；壳寡糖7.5份；卵磷脂7.5份；聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒25份；N,N‑二甲基甲酰胺0.075份；

具有肽活性的小分子肽—酪蛋白磷酸肽、海参肽和大豆肽通过靶向缓释生物相容微囊直接与聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖的葡聚糖的骨架结合，也可以被包裹在葡聚糖疏水核心的胶束中，然后附着于聚碳酸酯薄膜表面后，外层再附着牛血清白蛋白/氨基酸包裹层，最外层再附着壳寡糖‑卵磷脂双层膜，能够通过壳寡糖‑卵磷脂对具有活性的小肽进行有效油脂包裹，且具有亲水亲油性。

2.根据权利要求1所述的一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片，其特征在于，所述聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒，按重量组分计，包括以下成分：聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)3.75份；琥珀酸酐0.375份；3,3'‑二硫代丙酸0.75；N‑(3‑(二甲氨基)丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺盐酸盐1.25份；4‑(二甲氨基)吡啶2.25份；葡聚糖4.5份；

所述聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：M1：将所述重量组分的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)和所述重量组分的琥珀酸酐溶于二氯甲烷中，形成7.5mmol/浓度的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)有机溶液与40mmol/L浓度琥珀酸酐有机溶液的混合溶液，向所述混合溶液中加入所述重量组分的4‑(二甲氨基)吡啶，于112.5rpm转速、27℃温度下搅拌反应18h；

M2：将所述M1步骤得到的混合物与乙醚以重量体积比为1:8混合反应12min，于所述乙醚中沉淀，得到末端氨基化和羧基化的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物，将所述末端氨基化和羧基化的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物于真空条件下干燥27h，得到所述末端氨基化和羧基化的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物粉末；

M3：将所述重量组分的葡聚糖溶于二甲亚砜中，于15mHz条件下微波溶解3.5h，然后加入所述M2步骤得到的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物粉末、二分之一所述重量组分的N‑(3‑(二甲氨基)丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺盐酸盐，于30℃下搅拌45min后，加入所述重量组分的

3,3'‑二硫代丙酸、剩余二分之一所述重量组分的N‑(3‑(二甲氨基)丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺盐酸盐，于30℃下搅拌45min后，将所得到的混合物于3200Da分子孔隙大小的透析膜下透析1.5h，于‑100℃下冻干，得到聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒。

3.根据权利要求1所述的一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片，其特征在于，所述靶向缓释生物相容微囊的制备方法，包括以下步骤：A1：将所述重量组分的氨基酸和所述重量组分的牛血清白蛋白冻干粉溶于蒸馏水中，于90rpm下充分搅拌水合25min，将得到的混合溶液于0.40μm聚偏氟乙烯过滤器下过滤，取过滤后的上清液，得到所述氨基酸‑牛血清白蛋白混合上清液；

A2：将所述重量组分的壳寡糖和所述重量组分的卵磷脂溶于蒸馏水中，形成浓度为

3mmol/L的壳寡糖溶液、5.5mmol//L的卵磷脂溶液；

A3：将所述重量组分的聚碳酸酯薄膜溶于含有氯化钠浓度为0.14M的磷酸盐缓冲液中，将所述重量组分的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒以10mL/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，然后将所述A1步骤得到的氨基酸‑牛血清白蛋白混合上清液以10mL/h的2

速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，于5cm /L吹速的氮气气流下静置4min；将所述A2步骤得2

到的壳寡糖溶液以10mL/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，于5cm /L吹速的氮气气流下静置4min后，将所述A2步骤得到的卵磷脂溶液以10mL/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，在所述卵磷脂溶液浸渍过程中不断滴加所述重量组分的N,N‑二甲基甲酰胺，浸渍结束2

后于5cm/L吹速的氮气气流下静置4min后，将产物于真空中干燥13min，得到所述靶向缓释生物相容微囊。

4.根据权利要求1所述的一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片，其特征在于，所述果蔬粉中各种果蔬粉末按质量分数计，包括以下成分：猕猴桃粉10％、番茄粉10％、黑莓粉10％、南瓜粉10％、胡萝卜粉10％、蘑菇粉10％、薄荷粉10％，余量为青苹果粉。

5.根据权利要求1所述的一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片，其特征在于，所述海参肽的制备方法，包括以下步骤：

1)按重量组分计，将400份海参与35份碱性蛋白酶、55份枯草杆菌蛋白酶加入至磷酸盐缓冲溶液中，于47.5℃下保存3.5h，保持溶液pH在8；

2)所述步骤1)的水解完成后，通过将温度升高至95℃保温13min使酶失活；

3)将所述步骤2)得到的物质于2℃、7500rpm下离心28min，获得可溶性蛋白水解物；

4)将所述步骤3)得到的可溶性蛋白与23份的碱性蛋白酶于40℃下进一步酶解45min，采用Amicon超离心过滤器于2℃温度、11000×g转速下离心18min，取上层糜状混合液为小分子海参肽；

5)将所述步骤4)得到的小分子海参肽冷冻真空干燥，得到海参肽粉末。

6.根据权利要求5所述的一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片，其特征在于，所述步骤1)中的所述海参与所述磷酸盐缓冲溶液的重量体积比为2.25:1。

7.根据权利要求5所述的一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片，其特征在于，所述步骤4)得到的小分子海参肽的分子量为18KDa。

8.根据权利要求1‑7任一所述的一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将所述重量组分的酪蛋白磷酸肽、所述重量组分的海参肽、所述重量组分的大豆肽溶于体积比为11:50的乙醇与浓度为0.15M的NaCl溶液中，以125rpm转速、18℃温度下搅拌

35min；

S2：将所述重量组分的靶向缓释生物相容微囊加入至所述S1步骤得到的混合物中，以

180rpm转速、27℃温度下搅拌18min，搅拌过程中不断滴加乙醇溶液，得到靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物；

S3：将所述步骤S2得到的靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物于真空度为

0.03MPa、‑3℃下真空冷冻干燥，得到缓释肽组合物冻干粉；

S4：将所述重量组分的牛初乳粉、所述重量组分的浓缩乳清蛋白与所述S3步骤得到的缓释肽组合物冻干粉溶于体积比为7:10的甘油与蒸馏水中，以225rpm转速搅拌13min后，加入所述重量组分的果蔬粉继续搅拌13min，过8目筛后，得到湿颗粒；

S5：将所述重量组分的叶黄素酯、所述重量组分维生素C、所述重量组分的DL‑苹果酸、所述重量组分的乳糖、所述重量组分的赤藓糖醇、所述重量组分的山梨糖醇和所述重量组分的低聚木糖溶于125ml蒸馏水中，以1.8ml/min的喷雾速率，雾化压力1.8MPa均匀旋转喷2

雾于所述S4步骤得到的湿颗粒，与所述湿颗粒混合均匀后，以8cm/L速率吹送氮气10min；

S6：将所述重量组分的抗性糊精和所述重量组分的硬脂酸镁与所述S5步骤得到的颗粒搅拌均匀后，压片，得到1g所述肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片。

说明书

一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于复合生物技术领域，具体涉及一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片及其制备方法。

背景技术

[0002] 2型糖尿病是棘手的慢性疾病，目前尚无特效治疗方法，一般发病需要终生用药。2型糖尿病可能导致多方面的并发症发生，如神经、心脑血管并发症，严重还可导致患者死
亡。而“肽”是介于蛋白质和氨基酸之间的一种物质，是由两个或两个以上的氨基酸以肽键
相连的化合物，是细胞的核心物质，在人体内起重要的生理作用，发挥生理功能。人体内各
种细胞功能、所有生命行为，如生长、发育、繁衍、代谢、运作等，都必须通过肽才能实现，肽
控制着蛋白质的合成数量、质量和速度；控制着人的疾病和衰老，是决定人类生命质量的关
键物质。

[0003] 脑血管疾病指脑部动脉粥样硬化、血栓形成、狭窄、闭塞、动脉瘤等病理改变造成的短暂或持久性局部、弥漫性脑损伤，具有高致残率、高病死率的特点，可严重影响患者的
生活质量和生命安全。但是现有技术中缺少能够有效针对2型糖尿病或心脑血管疾病引起
的细胞氧化应激后修复的咀嚼片以及能够在肠道内缓释具有治疗和营养作用的肽类组合
物的咀嚼片。

发明内容

[0004] 本发明针对上述缺陷，提供一种能够在肠道内释放具有质量和营养作用的酪蛋白磷酸肽、海参肽和大豆肽，并且能够穿过血脑屏障作用于脑细胞修复心脑血管后遗症和细
胞氧化应激后的损伤，辅助在胃内消化的牛初乳粉和浓缩乳清蛋白进而增强人体免疫力的
肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片及其制备方法。

[0005] 本发明提供如下技术方案：一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片，每1g咀嚼片中包括如下成分：

[0006] 酪蛋白磷酸肽1mg～15mg；

[0007] 海参肽1mg～50mg；

[0008] 牛初乳粉5mg～50mg；

[0009] 大豆肽5mg～70mg；

[0010] 浓缩乳清蛋白4mg～114mg；

[0011] 叶黄素酯1mg～40mg；

[0012] 维生素C 1mg～30mg；

[0013] 果蔬粉10mg～100mg；

[0014] 抗性糊精1mg～5mg；

[0015] 乳糖1mg～4mg；

[0016] 赤藓糖醇0.5mg～10mg；

[0017] 山梨糖醇0.5mg～15mg；

[0018] DL‑苹果酸0.05mg～1mg；

[0019] 低聚木糖0.6mg～1mg；

[0020] 硬脂酸镁0.5mg～1mg。

[0021] 进一步地，每1g咀嚼片中还包括靶向缓释生物相容微囊20mg～30mg，所述靶向缓释生物相容微囊，按重量组分计，包括以下组分：孔径为200nm～300nm、厚度为10mm～12mm
的的聚碳酸酯薄膜20份～30份；牛血清白蛋白冻干粉10份～15份；氨基酸10份～15份；壳寡
糖5份～10份；卵磷脂5份～10份；聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒20份～30份，
N,N‑二甲基甲酰胺0.05份～0.1份；所述聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒，按重
量组分计，包括以下成分：

[0022] 聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)2.5份～5份；琥珀酸酐0.2份～0.5份；3,3'‑二硫代丙酸0.5份～1份；N‑(3‑(二甲氨基)丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺盐酸盐1份～1.5份；4‑(二甲氨基)吡
啶2份～2.5份；葡聚糖3份～6份；

[0023] 所述聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：

[0024] M1：将所述重量组分的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)和所述重量组分的琥珀酸酐溶于二氯甲烷中，形成5mmol/L～10mmol/L浓度的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)有机溶液与30mmol/L～
50mmol/L浓度琥珀酸酐有机溶液的混合溶液，向所述混合溶液中加入所述重量组分的4‑
(二甲氨基)吡啶，于75rpm～150rpm转速、25℃～28℃温度下搅拌反应12h～24h；

[0025] M2：将所述M1步骤得到的混合物与乙醚以重量体积比为1:8混合反应10min～15min，于所述乙醚中沉淀，得到末端氨基化和羧基化的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物，将所
述末端氨基化和羧基化的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物于真空条件下干燥18h～36h，得到
所述末端氨基化和羧基化的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物粉末；

[0026] M3：将所述重量组分的葡聚糖溶于二甲亚砜中，于10mHz～20mHz条件下微波溶解3h～4h，然后加入所述M2步骤得到的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物粉末、二分之一所述重量
组分的N‑(3‑(二甲氨基)丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺盐酸盐，于28℃～32℃下搅拌30min～
60min后，加入所述重量组分的3,3'‑二硫代丙酸、剩余二分之一所述重量组分的N‑(3‑(二
甲氨基)丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺盐酸盐，于28℃～32℃下搅拌30min～60min后，将所得到
的混合物于3000Da～3500Da分子孔隙大小的透析膜下透析1h～2h，于‑100℃下冻干，得到
聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒。

[0027] 进一步地，所述靶向缓释生物相容微囊的制备方法，包括以下步骤：

[0028] A1：将所述重量组分的氨基酸和所述重量组分的牛血清白蛋白冻干粉溶于蒸馏水中，于80rpm～100rpm下充分搅拌水合20min～30min，将得到的混合溶液于0.35μm～0.45μm
聚偏氟乙烯过滤器下过滤，取过滤后的上清液，得到所述氨基酸‑牛血清白蛋白混合上清
液；

[0029] A2：将所述重量组分的壳寡糖和所述重量组分的卵磷脂溶于蒸馏水中，形成浓度为1mmol/L～5mmol/L的壳寡糖溶液、3mmol//L～8mmol//L的卵磷脂溶液；

[0030] A3：将所述重量组分的聚碳酸酯薄膜溶于含有氯化钠浓度为0.13M～0.15M的磷酸盐缓冲液中，将所述重量组分的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒以9mL/h～
11mL/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，然后将所述A1步骤得到的氨基酸‑牛血清白蛋
2
白混合上清液以9mL/h～11mL/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，于5cm/L吹速的氮气
气流下静置3min～5min；将所述A2步骤得到的壳寡糖溶液以9mL/h～11mL/h的速率浸渍透
2
过所述聚碳酸酯薄膜，于5cm/L吹速的氮气气流下静置3min～5min后，将所述A2步骤得到
的卵磷脂溶液以9mL/h～11mL/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，在所述卵磷脂溶液浸
2
渍过程中不断滴加所述重量组分的N,N‑二甲基甲酰胺，浸渍结束后于5cm/L吹速的氮气气
流下静置3min～5min后，将产物于真空中干燥10min～15min，得到所述靶向缓释生物相容
微囊。

[0031] 进一步地，所述果蔬粉中各种果蔬粉末按质量分数计，包括以下成分：猕猴桃粉5％～15％、番茄粉5％～15％、黑莓粉5％～15％、南瓜粉5％～15％、胡萝卜粉5％～15％、
蘑菇粉5％～15％、薄荷粉5％～15％，余量为青苹果粉。

[0032] 进一步地，所述海参肽的制备方法，包括以下步骤：

[0033] 1)按重量组分计，将300份～500份海参与30份～40份碱性蛋白酶、50份～60份枯草杆菌蛋白酶加入至磷酸盐缓冲溶液中，于40℃～55℃下保存3h～4h，保持溶液pH在7.5～
8.5；

[0034] 2)所述步骤1)的水解完成后，通过将温度升高至95℃保温10min～15min使酶失活；

[0035] 3)将所述步骤2)得到的物质于0℃～4℃、7000rpm～8000rpm下离心25min～30min，获得可溶性蛋白水解物；

[0036] 4)将所述步骤3)得到的可溶性蛋白与20份～25份的碱性蛋白酶于35℃～45℃下进一步酶解30min～60min，采用Amicon超离心过滤器于0℃～4℃温度、10000×g～12000×
g转速下离心15min～20min，取上层糜状混合液为小分子海参肽；

[0037] 5)将所述步骤4)得到的小分子海参肽冷冻真空干燥，得到海参肽粉末。

[0038] 进一步地，所述步骤1)中的所述海参与所述磷酸盐缓冲溶液的重量体积比为(2:1)～(2.5:1)。

[0039] 进一步地，所述步骤4)得到的小分子海参肽的分子量为15KDa～20KDa。

[0040] 本发明还提供上述肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片的制备方法，包括以下步骤：

[0041] S1：将所述重量组分的酪蛋白磷酸肽、所述重量组分的海参肽、所述重量组分的大豆肽溶于体积比为(1:2)～(3:5)的乙醇与浓度为0.15M的NaCl溶液中，以100rpm～150rpm
转速、15℃～20℃温度下搅拌30min～40min；

[0042] S2：将所述重量组分的靶向缓释生物相容微囊加入至所述S1步骤得到的混合物中，以150rpm～200rpm转速、26℃～28℃温度下搅拌15min～20min，搅拌过程中不断滴加乙
醇溶液，得到靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物；

[0043] S3：将所述步骤S2得到的靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物于真空度为0.02MPa～0.05MPa、‑4℃～‑2℃下真空冷冻干燥，得到缓释肽组合物冻干粉；

[0044] S4：将所述重量组分的牛初乳粉、所述重量组分的浓缩乳清蛋白与所述S3步骤得到的缓释肽组合物冻干粉溶于体积比为2:3～4:5的甘油与蒸馏水中，以200rpm～250rpm转
速搅拌10min～15min后，加入所述重量组分的果蔬粉继续搅拌10min～15min，过5目～10目
筛后，得到湿颗粒；

[0045] S5：将所述重量组分的叶黄素酯、所述重量组分维生素C、所述重量组分的DL‑苹果酸、所述重量组分的乳糖、所述重量组分的赤藓糖醇、所述重量组分的山梨糖醇和所述重量
组分的低聚木糖溶于100ml～150ml蒸馏水中，以1.5ml/min～2.0ml/min的喷雾速率，雾化
压力1.5MPa～2.0MPa均匀旋转喷雾于所述S4步骤得到的湿颗粒，与所述湿颗粒混合均匀
2 2
后，以5cm/L～10cm/L速率吹送氮气10min；

[0046] S6：将所述重量组分的抗性糊精和所述重量组分的硬脂酸镁与所述S5步骤得到的颗粒搅拌均匀后，压片，得到1g所述肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片。

[0047] 本发明的有益效果为：

[0048] 1、能够通过提供果均匀等比例添加的果蔬粉，增强胃肠道的蠕动性和咀嚼片的果味，提高了口感的同时不会因为咀嚼片的食用导致便秘，并且各种果蔬粉中含有各种纤维
素、维生素和矿物质，可以有效补充人体因疾病所缺少的各种微量元素或某种营养物质的
缺乏。

[0049] 2、咀嚼片在制作过程中，具有肽活性的小分子肽—酪蛋白磷酸肽、海参肽和大豆肽通过与靶向缓释生物相容微囊直接与聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖的葡聚糖的骨架
结合，也可以被包裹在葡聚糖疏水核心的胶束中，然后附着于聚碳酸酯薄膜表面后，外层再
附着牛血清白蛋白/氨基酸包裹层，最外层再附着壳寡糖‑卵磷脂双层膜，能够通过壳寡糖‑
卵磷脂对具有活性的小肽进行有效油脂包裹，且具有亲水亲油性，在进入胃内后，首先壳寡
糖‑卵磷脂双层膜和牛初乳粉、浓缩乳清蛋白一并被胃蛋白酶等酶消化，壳寡糖‑卵磷脂之
间结合的共价键被解开，剩下带有氨基的壳寡糖和牛血清白蛋白/氨基酸包裹层的聚(2‑乙
基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒的聚碳酸酯薄膜与初步分解的牛初乳粉、浓缩乳清蛋白
进入肠道，进入肠道后，壳寡糖分子中存在的氨基从胃内的强酸性环境进入肠道偏中性的
+
pH环境内，壳寡糖表面的氨基变为NH3 ，使带有氨基的壳寡糖和牛血清白蛋白/氨基酸包裹
层的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒的聚碳酸酯薄膜周围的pH小于其本身的
pKa，进而使其网络结构间的离子静电斥力下降，导致其整体分解，释放牛血清白蛋白/氨基
酸包裹层的小肽。

[0050] 3、牛血清白蛋白含有两种色氨酸残基：Trp 134位于分子表面，Trp 213位于天然牛血清白蛋白的疏水囊中，牛初乳中的免疫球蛋白IgG为疏水的，可以保证其内部包裹的聚
(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒上附着的活性小肽的活性和稳定性；牛血清白蛋
白/氨基酸一部分能够在肠道内整体分解，与牛初乳粉和浓缩血清蛋白的胃消化物被肠道
吸收；

[0051] 由于牛血清白蛋白，具有疏水性能的位于表面的Trp134色氨酸残基，另一部分牛血清白蛋白/氨基酸能够携带具有聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒包裹的酪蛋
白磷酸肽、海参肽和大豆肽穿过血脑屏障，进入大脑内修复因2型糖尿病对心脑血管造成的
细胞损伤以及氧化应激带来的细胞损伤进行修复，营养神经细胞。

[0052] 4、本申请提供的靶向缓释生物相容微囊中采用4‑(二甲氨基)吡啶和N‑(3‑(二甲氨基)丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺盐酸盐作为偶联剂，通过聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)上的羧基与
葡聚糖上的羟基形成静电引力，将氨基化和羧基化后的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝到具有
羟基的葡聚糖上，形成聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖壳结构的纳米颗粒，通过加入3,
3'‑二硫代丙酸后可以调整纳米颗粒的不同核填充量，进而保证不同药物加载量于其中，葡
聚糖是一种亲水性物质，各种活性肽的混合物既可以直接与葡聚糖的骨架结合，也可以被
包裹在葡聚糖疏水核心的胶束中。

[0053] 5、本发明对细胞氧化应激有较好的修复效果，对高糖辅食本发明降糖降压作用明显，且能增强病体免疫力，补充多种肽类及多种宏量营养素、常量元素、微量元素调整和恢
复机体功能改善睡眠，达到减毒增效的目的，无毒无副作用，可长期食用。

附图说明

[0054] 图1为本发明效果例1中各组的第0天平均血糖柱形图；

[0055] 图2为本发明效果例1中各组的第14天平均血糖柱形图；

[0056] 图3为本发明效果例1中各组的第21天平均血糖柱形图；

[0057] 图4为本发明效果例1中各组的第28天平均血糖柱形图；

[0058] 图5为本发明效果例1中各组的第31天平均血糖柱形图；

[0059] 图6为本发明效果例1中各组的第14天降糖率柱形图；

[0060] 图7为本发明效果例1中各组的第21天降糖率柱形图；

[0061] 图8为本发明效果例1中各组的第28天降糖率柱形图；

[0062] 图9为本发明效果例1中各组的第31天降糖率柱形图；

[0063] 图10为本发明效果例2中对DON诱导的IPEC‑J2细胞炎症和凋亡相关基因的影响柱形对比图；

[0064] 图11为本发明效果例3中各组的血清中MDA含量柱形图；

[0065] 图12为本发明效果例3中各组的血清中H2O2含量柱形图；

[0066] 图13为本发明效果例3中各组的肝脏8‑OHDG含量柱形图；

[0067] 图14为本发明效果例3中各组的肝脏蛋白质羰基PC含量柱形图；

[0068] 图15为本发明效果例3中各组的GSH‑Px活性柱形图；

[0069] 图16为本发明临床应用例1食用本发明提供的咀嚼片1个月后的效果图；

[0070] 图17为本发明临床应用例1患者食用本发明提供的咀嚼片2年后的效果图；

[0071] 图18为本发明临床应用例1患者食用本发明提供的咀嚼片辅以格列本脲、地黄丸、胰岛素注射1.5个月后的血液化学检验报告单；

[0072] 图19为本发明临床应用例2患者确诊时的血糖化验报告单；

[0073] 图20为本发明临床应用例2患者仅食用本发明提供的咀嚼片2周后的血糖化验报告单。

具体实施方式

[0074] 下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的
实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都
属于本发明保护的范围。

[0075] 本发明的叶黄素酯来源于万寿菊提取物，其余原料均为市购。本发明中的靶向缓释生物相容微囊中所使用的氨基酸可以为赖氨酸、天冬氨酸、色氨酸、脯氨酸或上述各氨基
酸的单一一种氨基酸聚合物或任意几种氨基酸聚合物。

[0076] 实施例1

[0077] 本实施例提供的一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片，每1g咀嚼片中包括如下成分：

[0078] 酪蛋白磷酸肽1mg；

[0079] 海参肽50mg；

[0080] 牛初乳粉5mg；

[0081] 大豆肽70mg；

[0082] 浓缩乳清蛋白114mg；

[0083] 叶黄素酯1mg；

[0084] 维生素C 1mg；

[0085] 果蔬粉10mg；

[0086] 抗性糊精1mg；

[0087] 乳糖4mg；

[0088] 赤藓糖醇0.5mg；

[0089] 山梨糖醇15mg；

[0090] DL‑苹果酸1mg；

[0091] 低聚木糖1mg；

[0092] 硬脂酸镁0.5mg；

[0093] 靶向缓释生物相容微囊20mg；

[0094] 其中靶向缓释生物相容微囊，按重量组分计，包括以下组分：孔径为200nm、厚度为10mm的的聚碳酸酯薄膜20份；牛血清白蛋白冻干粉15份；氨基酸10份；壳寡糖5份；卵磷脂10
份；聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒30份；N,N‑二甲基甲酰胺0.05份。

[0095] 其中，聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒，按重量组分计，包括以下成分：

[0096] 聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)2.5份；琥珀酸酐0.2份；3,3'‑二硫代丙酸0.5份；N‑(3‑(二甲氨基)丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺盐酸盐1份；4‑(二甲氨基)吡啶2份；葡聚糖3份。

[0097] 聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：

[0098] M1：将2.5份的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)和0.2份的琥珀酸酐溶于二氯甲烷中，形成5mmol/L浓度的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)有机溶液与30mmol/L浓度琥珀酸酐有机溶液的混合
溶液，向混合溶液中加入2份的4‑(二甲氨基)吡啶，于75rpm转速、25℃温度下搅拌反应12h；

[0099] M2：将M1步骤得到的混合物与乙醚以重量体积比为1:8混合反应10min，于上述乙醚中沉淀，得到末端氨基化和羧基化的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物，将末端氨基化和羧基
化的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物于真空条件下干燥18h，得到末端氨基化和羧基化的聚
(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物粉末；

[0100] M3：将3份的葡聚糖溶于二甲亚砜中，于10mHz条件下微波溶解3h，然后加入M2步骤得到的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物粉末、0.5份的N‑(3‑(二甲氨基)丙基)‑N‑乙基碳化二
亚胺盐酸盐，于28℃下搅拌60min后，加入0.5份的3,3'‑二硫代丙酸、0.5份的N‑(3‑(二甲氨
基)丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺盐酸盐，于32℃下搅拌30min后，将所得到的混合物于3000Da
分子孔隙大小的透析膜下透析1h，于‑100℃下冻干，得到聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖
纳米颗粒。

[0101] 上述靶向缓释生物相容微囊的制备方法，包括以下步骤：

[0102] A1：将10份的氨基酸和15份的牛血清白蛋白冻干粉溶于蒸馏水中，于80rpm下充分搅拌水合30min，将得到的混合溶液于0.35μm聚偏氟乙烯过滤器下过滤，取过滤后的上清
液，得到氨基酸‑牛血清白蛋白混合上清液；

[0103] A2：将5份的壳寡糖和10份的卵磷脂溶于蒸馏水中，形成浓度为1mmol/L的壳寡糖溶液、8mmol//L的卵磷脂溶液；

[0104] A3：将20份的聚碳酸酯薄膜溶于含有氯化钠浓度为0.13M的磷酸盐缓冲液中，将30份的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒以9mL/h的速率速率浸渍透过聚碳酸酯薄
膜，使聚碳酸酯薄膜带正电荷；

[0105] 然后将A1步骤得到的氨基酸‑牛血清白蛋白混合上清液以9mL/h的速率浸渍透过2
聚碳酸酯薄膜，使聚碳酸酯薄膜带负电荷，于5cm/L吹速的氮气气流下静置3min；

[0106] 将A2步骤得到的壳寡糖溶液以9mL/h的速率浸渍透过聚碳酸酯薄膜，于5cm2/L吹速的氮气气流下静置3min后，将A2步骤得到的卵磷脂溶液以9mL/h的速率浸渍透过聚碳酸
酯薄膜，在卵磷脂溶液浸渍过程中不断滴加0.05份的N,N‑二甲基甲酰胺，浸渍结束后于
2
5cm/L吹速的氮气气流下静置3min后，将产物于真空中干燥10min，得到靶向缓释生物相容
微囊。

[0107] 在壳寡糖溶液浸渍后，采用N,N‑二甲基甲酰胺滴加伴随卵磷脂溶液的浸渍，利用强大电荷间的静电相互作用使壳寡糖和卵磷脂形成聚电解质双层膜于聚碳酸酯薄膜表面，
能够将壳寡糖分子中的羟基与卵磷脂上的羰基通过N,N‑二甲基甲酰胺的作用形成羧基后，
通过正负电荷的吸引，形成静电相互作用，形成聚电解质壳寡糖‑卵磷脂双层膜附着于聚碳
酸酯薄膜表面。

[0108] 果蔬粉中各种果蔬粉末按质量分数计，包括以下成分：猕猴桃粉5％、番茄粉15％、黑莓粉5％、南瓜粉5％、胡萝卜粉15％、蘑菇粉15％、薄荷粉15％，余量为青苹果粉。

[0109] 海参肽的制备方法，包括以下步骤：

[0110] 1)按重量组分计，将300份海参与30份碱性蛋白酶、50份枯草杆菌蛋白酶加入至磷酸盐缓冲溶液中，于40℃下保存4h，保持溶液pH在7.5，磷酸盐缓冲液的添加量按照海参与
其的重量体积比为2:1的比例添加；

[0111] 2)步骤1)的水解完成后，通过将温度升高至95℃保温10min使酶失活；

[0112] 3)将步骤2)得到的物质于0℃、7000rpm下离心30min，获得可溶性蛋白水解物；

[0113] 4)将步骤3)得到的可溶性蛋白与20份的碱性蛋白酶于35℃下进一步酶解60min，采用Amicon超离心过滤器于4℃温度、10000×g转速下离心20min，取上层糜状混合液为分
子量为15KDa的小分子海参肽；

[0114] 5)将步骤4)得到的小分子海参肽冷冻真空干燥，得到海参肽粉末。

[0115] 本实施例还提供上述一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片的制备方法，包括以下步骤：

[0116] S1：将1mg的酪蛋白磷酸肽、50mg的海参肽、70mg的大豆肽溶于体积比为1:2的乙醇与浓度为0.15M的NaCl溶液中，以100rpm转速、20℃温度下搅拌30min；

[0117] S2：将20mg的靶向缓释生物相容微囊加入至S1步骤得到的混合物中，以150rpm转速、28℃温度下搅拌15min，搅拌过程中不断滴加乙醇溶液，得到靶向缓释生物相容微囊封
装的肽组合物；

[0118] S3：将步骤S2得到的靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物于真空度为0.02MPa、‑4℃下真空冷冻干燥，得到缓释肽组合物冻干粉；

[0119] S4：将5mg的牛初乳粉、114mg的浓缩乳清蛋白与S3步骤得到的缓释肽组合物冻干粉溶于体积比为2:3的甘油与蒸馏水中，以200rpm转速搅拌15min后，加入10mg的果蔬粉继
续搅拌10min，过5目筛后，得到湿颗粒；

[0120] S5：将1mg的叶黄素酯、1mg维生素C、1mg的DL‑苹果酸、4mg的乳糖、0.5mg的赤藓糖醇、15mg的山梨糖醇和1mg的低聚木糖溶于100ml蒸馏水中，以1.5ml/min的喷雾速率，雾化
2
压力1.5MPa均匀旋转喷雾于S4步骤得到的湿颗粒，与湿颗粒混合均匀后，以5cm /L速率吹
送氮气10min；

[0121] S6：将1mg的抗性糊精和0.5mg的硬脂酸镁与S5步骤得到的颗粒搅拌均匀后，压片，得到1g肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片。

[0122] 实施例2

[0123] 本实施例提供的一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片，每1g咀嚼片中包括如下成分：

[0124] 酪蛋白磷酸肽15mg；

[0125] 海参肽1mg；

[0126] 牛初乳粉50mg；

[0127] 大豆肽70mg；

[0128] 浓缩乳清蛋白4mg；

[0129] 叶黄素酯40mg；

[0130] 维生素C 30mg；

[0131] 果蔬粉100mg；

[0132] 抗性糊精5mg；

[0133] 乳糖1mg；

[0134] 赤藓糖醇10mg；

[0135] 山梨糖醇0.5mg；

[0136] DL‑苹果酸0.05mg；

[0137] 低聚木糖0.6mg；

[0138] 硬脂酸镁1mg；

[0139] 靶向缓释生物相容微囊30mg；

[0140] 其中靶向缓释生物相容微囊，按重量组分计，包括以下组分：孔径为300nm、厚度为12mm的的聚碳酸酯薄膜30份；牛血清白蛋白冻干粉10份；氨基酸15份；壳寡糖10份；卵磷脂5
份；聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒20份；N,N‑二甲基甲酰胺0.1份。

[0141] 聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒，按重量组分计，包括以下成分：

[0142] 聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)5份；琥珀酸酐0.5份；3,3'‑二硫代丙酸1份；N‑(3‑(二甲氨基)丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺盐酸盐1.5份；4‑(二甲氨基)吡啶2.5份；葡聚糖6份。

[0143] 聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：

[0144] M1：将5份的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)和重量组0.5份的琥珀酸酐溶于二氯甲烷中，形成10mmol/浓度的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)有机溶液与50mmol/L浓度琥珀酸酐有机溶液的混
合溶液，向混合溶液中加入2.5份的4‑(二甲氨基)吡啶，于150rpm转速、28℃温度下搅拌反
应24h；

[0145] M2：将M1步骤得到的混合物与乙醚以重量体积比为1:8混合反应15min，于乙醚中沉淀，得到末端氨基化和羧基化的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物，将末端氨基化和羧基化的
聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物于真空条件下干燥36h，得到末端氨基化和羧基化的聚(2‑乙
基‑2‑恶唑啉)粗产物粉末；

[0146] M3：将6份的葡聚糖溶于二甲亚砜中，于20mHz条件下微波溶解4h，然后加入M2步骤得到的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物粉末、0.75份的N‑(3‑(二甲氨基)丙基)‑N‑乙基碳化二
亚胺盐酸盐，于32℃下搅拌30min后，加入1份的3,3'‑二硫代丙酸、0.75份的N‑(3‑(二甲氨
基)丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺盐酸盐，于28℃下搅拌60min后，将所得到的混合物于3500Da
分子孔隙大小的透析膜下透析2h，于‑100℃下冻干，得到聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖
纳米颗粒。

[0147] 上述靶向缓释生物相容微囊的制备方法，包括以下步骤：

[0148] A1：将15份的氨基酸和10份的牛血清白蛋白冻干粉溶于蒸馏水中，于100rpm下充分搅拌水合20min，将得到的混合溶液于0.45μm聚偏氟乙烯过滤器下过滤，取过滤后的上清
液，得到氨基酸‑牛血清白蛋白混合上清液；

[0149] A2：将10份的壳寡糖和5份的卵磷脂溶于蒸馏水中，形成浓度为5mmol/L的壳寡糖溶液、3mmol//L的卵磷脂溶液；

[0150] A3：将30份的聚碳酸酯薄膜溶于含有氯化钠浓度为0.15M的磷酸盐缓冲液中，将20份的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒以11mL/h的速率速率浸渍透过聚碳酸酯薄
膜，使聚碳酸酯薄膜带正电荷；

[0151] 然后将A1步骤得到的氨基酸‑牛血清白蛋白混合上清液以11mL/h的速率浸渍透过2
聚碳酸酯薄膜，使聚碳酸酯薄膜带负电荷，于5cm/L吹速的氮气气流下静置5min；

[0152] 将A2步骤得到的壳寡糖溶液以11mL/h的速率浸渍透过聚碳酸酯薄膜，于5cm2/L吹速的氮气气流下静置5min后，将A2步骤得到的卵磷脂溶液以11mL/h的速率浸渍透过聚碳酸
酯薄膜，在卵磷脂溶液浸渍过程中不断滴加0.1份的N,N‑二甲基甲酰胺，浸渍结束后于
2
5cm/L吹速的氮气气流下静置5min后，将产物于真空中干燥15min，得到靶向缓释生物相容
微囊。

[0153] 果蔬粉中各种果蔬粉末按质量分数计，包括以下成分：猕猴桃粉15％、番茄粉5％、黑莓粉15％、南瓜粉15％、胡萝卜粉5％、蘑菇粉5％、薄荷粉5％，余量为青苹果粉。

[0154] 海参肽的制备方法，包括以下步骤：

[0155] 1)按重量组分计，将500份海参与40份碱性蛋白酶、60份枯草杆菌蛋白酶加入至磷酸盐缓冲溶液中，于55℃下保存3h，保持溶液pH在8.5，磷酸盐缓冲液的添加量按照海参与
其的重量体积比为2.5:1的比例添加；

[0156] 2)步骤1)的水解完成后，通过将温度升高至95℃保温15min使酶失活；

[0157] 3)将步骤2)得到的物质于4℃、8000rpm下离心25min，获得可溶性蛋白水解物；

[0158] 4)将步骤3)得到的可溶性蛋白与25份的碱性蛋白酶于45℃下进一步酶解30min，采用Amicon超离心过滤器于0℃温度、12000×g转速下离心15min，取上层糜状混合液为分
子量为20KDa小分子海参肽；

[0159] 5)将步骤4)得到的小分子海参肽冷冻真空干燥，得到海参肽粉末。

[0160] 本实施例还提供上述一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片的制备方法，包括以下步骤：

[0161] S1：将15mg的酪蛋白磷酸肽、1mg的海参肽、70mg的大豆肽溶于体积比为3:5的乙醇与浓度为0.15M的NaCl溶液中，以150rpm转速、15℃温度下搅拌40min；

[0162] S2：将30mg的靶向缓释生物相容微囊加入至S1步骤得到的混合物中，以200rpm转速、26℃温度下搅拌20min，搅拌过程中不断滴加乙醇溶液，得到靶向缓释生物相容微囊封
装的肽组合物；

[0163] S3：将步骤S2得到的靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物于真空度为0.05MPa、‑2℃下真空冷冻干燥，得到缓释肽组合物冻干粉；

[0164] S4：将50mg的牛初乳粉、4mg的浓缩乳清蛋白与S3步骤得到的缓释肽组合物冻干粉溶于体积比为4:5的甘油与蒸馏水中，以250rpm转速搅拌10min后，加入100mg的果蔬粉继续
搅拌15min，过10目筛后，得到湿颗粒；

[0165] S5：将40mg的叶黄素酯、30mg的维生素C、0.05mg的DL‑苹果酸、1mg的乳糖、10mg的赤藓糖醇、0.5mg的山梨糖醇和0.6mg的低聚木糖溶于150ml蒸馏水中，以2.0ml/min的喷雾
速率，雾化压力2.0MPa均匀旋转喷雾于S4步骤得到的湿颗粒，与湿颗粒混合均匀后，以
2
10cm/L速率吹送氮气10min；

[0166] S6：将5mg的抗性糊精和1mg的硬脂酸镁与S5步骤得到的颗粒搅拌均匀后，压片，得到1g肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片。

[0167] 实施例3

[0168] 本实施例提供的一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片，每1g咀嚼片中包括如下成分：

[0169] 酪蛋白磷酸肽8mg；

[0170] 海参肽25mg；

[0171] 牛初乳粉27.5mg；

[0172] 大豆肽37.5mg；

[0173] 浓缩乳清蛋白59mg；

[0174] 叶黄素酯20.5mg；

[0175] 维生素C 15mg；

[0176] 果蔬粉55mg；

[0177] 抗性糊精3mg；

[0178] 乳糖2.5mg；

[0179] 赤藓糖醇5.25mg；

[0180] 山梨糖醇7.75mg；

[0181] DL‑苹果酸0.5mg；

[0182] 低聚木糖0.8mg；

[0183] 硬脂酸镁0.75mg；

[0184] 靶向缓释生物相容微囊15mg；

[0185] 其中靶向缓释生物相容微囊，按重量组分计，包括以下组分：孔径为250nm、厚度为11mm的的聚碳酸酯薄膜25份；牛血清白蛋白冻干粉12.5份；氨基酸12.5份；壳寡糖7.5份；卵
磷脂7.5份；聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒25份；N,N‑二甲基甲酰胺0.075份。

[0186] 聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒，按重量组分计，包括以下成分：

[0187] 聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)3.75份；琥珀酸酐0.375份；3,3'‑二硫代丙酸0.75份；N‑(3‑(二甲氨基)丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺盐酸盐1.25份；4‑(二甲氨基)吡啶2.25份；葡聚糖4.5
份。

[0188] 聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：

[0189] M1：将3.75份的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)和0.375份的琥珀酸酐溶于二氯甲烷中，形成7.5mmol/浓度的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)有机溶液与40mmol/L浓度琥珀酸酐有机溶液的混
合溶液，向混合溶液中加入2.25份的4‑(二甲氨基)吡啶，于112.5rpm转速、27℃温度下搅拌
反应18h；

[0190] M2：将M1步骤得到的混合物与乙醚以重量体积比为1:8混合反应12min，于乙醚中沉淀，得到末端氨基化和羧基化的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物，将末端氨基化和羧基化的
聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物于真空条件下干燥27h，得到末端氨基化和羧基化的聚(2‑乙
基‑2‑恶唑啉)粗产物粉末；

[0191] M3：将4.5份的葡聚糖溶于二甲亚砜中，于15mHz条件下微波溶解3.5h，然后加入M2步骤得到的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)粗产物粉末、0.625份的N‑(3‑(二甲氨基)丙基)‑N‑乙基
碳化二亚胺盐酸盐，于30℃下搅拌45min后，加入0.75份的3,3'‑二硫代丙酸、0.625份的N‑
(3‑(二甲氨基)丙基)‑N‑乙基碳化二亚胺盐酸盐，于30℃下搅拌45min后，将所得到的混合
物于3200Da分子孔隙大小的透析膜下透析1.5h，于‑100℃下冻干，得到聚(2‑乙基‑2‑恶唑
啉)接枝葡聚糖纳米颗粒。

[0192] 靶向缓释生物相容微囊的制备方法，包括以下步骤：

[0193] A1：将12.5份的氨基酸和12.5份的牛血清白蛋白冻干粉溶于蒸馏水中，于90rpm下充分搅拌水合25min，将得到的混合溶液于0.40μm聚偏氟乙烯过滤器下过滤，取过滤后的上
清液，得到氨基酸‑牛血清白蛋白混合上清液；

[0194] A2：将7.5份的壳寡糖和7.5份的卵磷脂溶于蒸馏水中，形成浓度为3mmol/L的壳寡糖溶液、5.5mmol//L的卵磷脂溶液；

[0195] A3：将25份的聚碳酸酯薄膜溶于含有氯化钠浓度为0.14M的磷酸盐缓冲液中，将25份的聚(2‑乙基‑2‑恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒以10mL/h的速率浸渍透过聚碳酸酯薄膜，
使聚碳酸酯薄膜带正电荷；

[0196] 然后将A1步骤得到的氨基酸‑牛血清白蛋白混合上清液以10mL/h的速率浸渍透过2
聚碳酸酯薄膜，使聚碳酸酯薄膜带负电荷，于5cm/L吹速的氮气气流下静置4min；

[0197] 将A2步骤得到的壳寡糖溶液以10mL/h的速率浸渍透过聚碳酸酯薄膜，于5cm2/L吹速的氮气气流下静置4min后，将A2步骤得到的卵磷脂溶液以10mL/h的速率浸渍透过聚碳酸
酯薄膜，在卵磷脂溶液浸渍过程中不断滴加0.075份的N,N‑二甲基甲酰胺，浸渍结束后于
2
5cm/L吹速的氮气气流下静置4min后，将产物于真空中干燥13min，得到靶向缓释生物相容
微囊。

[0198] 果蔬粉中各种果蔬粉末按质量分数计，包括以下成分：猕猴桃粉10％、番茄粉10％、黑莓粉10％、南瓜粉10％、胡萝卜粉10％、蘑菇粉10％、薄荷粉10％，余量为青苹果粉。

[0199] 海参肽的制备方法，包括以下步骤：

[0200] 1)按重量组分计，将400份海参与35份碱性蛋白酶、55份枯草杆菌蛋白酶加入至磷酸盐缓冲溶液中，于47.5℃下保存3.5h，保持溶液pH在8，磷酸盐缓冲液的添加量按照海参
与其的重量体积比为2.25:1的比例添加；

[0201] 2)步骤1)的水解完成后，通过将温度升高至95℃保温13min使酶失活；

[0202] 3)将步骤2)得到的物质于2℃、7500rpm下离心28min，获得可溶性蛋白水解物；

[0203] 4)将步骤3)得到的可溶性蛋白与23份的碱性蛋白酶于40℃下进一步酶解45min，采用Amicon超离心过滤器于2℃温度、11000×g转速下离心18min，取上层糜状混合液为分
子量为18KDa小分子海参肽；

[0204] 5)将步骤4)得到的小分子海参肽冷冻真空干燥，得到海参肽粉末。

[0205] 本实施例还提供上述的一种肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片的制备方法，包括以下步骤：

[0206] S1：将8mg的酪蛋白磷酸肽、25mg的海参肽、37.5mg的大豆肽溶于体积比为11:50的乙醇与浓度为0.15M的NaCl溶液中，以125rpm转速、18℃温度下搅拌35min；

[0207] S2：将15mg的靶向缓释生物相容微囊加入至S1步骤得到的混合物中，以180rpm转速、27℃温度下搅拌18min，搅拌过程中不断滴加乙醇溶液，得到靶向缓释生物相容微囊封
装的肽组合物；

[0208] S3：将步骤S2得到的靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物于真空度为0.03MPa、‑3℃下真空冷冻干燥，得到缓释肽组合物冻干粉；

[0209] S4：将27.5mg的牛初乳粉、59mg的浓缩乳清蛋白与S3步骤得到的缓释肽组合物冻干粉溶于体积比为7:10的甘油与蒸馏水中，以225rpm转速搅拌13min后，加入重量组分的果
蔬粉继续搅拌13min，过8目筛后，得到湿颗粒；

[0210] S5：将20.5mg的叶黄素酯、15mg的维生素C、0.5mg的DL‑苹果酸、2.5mg的乳糖、5.25mg的赤藓糖醇、7.75mg的山梨糖醇和0.8mg的低聚木糖溶于125ml蒸馏水中，以1.8ml/
min的喷雾速率，雾化压力1.8MPa均匀旋转喷雾于S4步骤得到的湿颗粒，与湿颗粒混合均匀
2
后，以8cm/L速率吹送氮气10min；

[0211] S6：将3mg的抗性糊精和0.75mg的硬脂酸镁与S5步骤得到的颗粒搅拌均匀后，压片，得到1g肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片。

[0212] 效果例1

[0213] 采用KM小鼠作为实验模型对象，取KM小鼠30只，取其中27只腹腔注射四氧嘧啶制作糖尿病模型小鼠，刺激完成后，测小鼠空腹血糖在11mM～30mM之间的为造模成功小鼠。

[0214] 将造模成功的27只小鼠随机分成9组，未造模的3只小鼠作为第(1)组对照组，全部30只小鼠分为如下10组：

[0215] (1)、对照组(生理盐水)

[0216] (2)、模型组(生理盐水)

[0217] (3)、格列本脲治疗组

[0218] (4)、格列本脲+磷参肽治疗组

[0219] (5)、格列本脲+六味地黄丸治疗组

[0220] (6)、格列本脲+磷参肽+六味地黄丸治疗组

[0221] (7)、格列本脲递减治疗组

[0222] (8)、格列本脲递减+磷参肽治疗组

[0223] (9)、格列本脲递减+六味地黄丸治疗组

[0224] (10)、格列本脲递减+磷参肽+六味地黄丸治疗组

[0225] 给药方式：第(3)‑(10)治疗组都按10mg/kg格列本脲、1.6g/kg本申请磷参肽咀嚼片水分散剂和0.4g/kg六味地黄丸进行给药，先用上述浓度的格列本脲给药14天后，按组分
分别添加相应的六味地黄丸或/和磷参肽治疗作用7天，治疗期间用上述浓度的格列本脲继
续给药。

[0226] 治疗7天后，第(3)‑(6)组继续给药，第(7)‑(10)组从第22天‑第28天，格列本脲的给药浓度每天下降10％，至第28天格列本脲的给药浓度为原来的30％，从第29天‑第31天以
第28天的格列本脲的给药浓度继续给药，于第31天给药完成后结束给药。

[0227] 在给药的第0天、第14天、第21天、第28天、第31天断尾采血，检测各小组的血糖含量，并计算其平均值和降糖率，结果如表1‑表2，图1‑9。

[0228] 表1 断尾采血血糖(mM)平均值

[0229]   (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) (10)第0天 6.27 15.87 16.77 16.13 16.97 16.23 16.63 15.87 16.73 15.93
第14天 6.30 16.27 8.03 7.90 7.67 8.17 7.73 8.10 7.93 8.10
第21天 6.57 16.87 8.27 8.37 8.63 8.53 8.03 8.77 8.07 8.27
第28天 6.40 18.50 8.03 8.20 8.50 7.83 14.43 10.77 15.17 10.63
第31天 6.27 18.60 8.70 8.13 8.87 7.77 15.33 8.83 15.70 7.67

[0230] 表2 各小组降糖率

[0231]

[0232]

[0233] 实验结果表明，在降低格列本脲给药量至有效剂量的30％后，同时持续给予适量的本申请提供的磷参肽咀嚼片分散剂可以缓解由于格列本脲给药量的降低造成的血糖上
升，有利于维持血糖稳定。

[0234] 在降低格列本脲给药量至有效剂量的30％后，同时只单独持续给予适量的六味地黄丸无法有效缓解由于格列本脲给药量的降低造成的血糖上升。因此，证明了本申请所要
求保护的磷参肽咀嚼片在降低血糖上的有效作用。

[0235] 效果例2

[0236] 采用DON刺激IPEC‑J2细胞炎症和凋亡，并采用本申请的磷参肽咀嚼片水分散剂CAP进行缓解实验效果测定。

[0237] IPEC‑J2细胞系由上海交通大学动物科学系提供。IPEC‑J2细胞培养液为含10％2
FBS和1％青霉素‑链霉素的HGDMEM培养基，接种于25cm培养瓶中，并放在37℃、5％CO2的培
养箱中培养。当细胞融合率达到80％‑90％时，分别接种于96孔板和6孔板培养24h，然后进
行不同处理。

[0238] DON纯度>99％购自Sigma‑Aldrich公司(美国)；磷酸盐缓冲液(PBS)，0.25％胰酶‑乙二胺四乙酸(EDTA)，青霉素‑链霉素(10,000unit/10,000μg/ml)，二甲基亚砜(DMSO)购自
北京索莱宝生物有限公司；高糖培养基(HGDMEM)和胎牛血清(FBS)购自Biological 
Industries公司(以色列)；Trizol试剂购自Invitrogen公司(美国)；逆转录试剂盒和TB 
GREEN试剂盒购自TaKaRa公司(中国大连)。

[0239] 将IPEC‑J2细胞以5×105cells/孔的密度接种在6孔板中，待细胞融合率达到80％，经过上述四个处理组(空白对照度，0.5μg/mL DON，20μg/mL磷参肽咀嚼片水分散剂，
20μg/mL磷参肽咀嚼片水分散剂+0.5μg/mL DON)后，采用使用Trizol提取总RNA，将RNA沉淀
溶于50μL无RNase的水中，并保存在‑80℃。使用安捷伦2100生物分析仪检测RNA的质量和纯
度，使用琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。使用TB GREEN试剂盒，将每个样品中约1μg的总
TM
RNA在42℃的条件下2g去除gDNA，通过反转录生成cDNA。使用CFX Connect 实时PCR检测系
统进行实时PCR。PCR条件为95℃预变性300s，之后95℃ 20s，60℃ 30s和72℃ 30s进行38个
循环。以GAPDH作为内参基因，使用2‑ΔΔCT方法分析各个炎症相关或氧化应激基因的相对
表达量，所有基因的引物均列于表3中。

[0240] 表3 基因的引物序列

[0241]

[0242] 实验结果如图10所示，图中：(A)炎症相关基因的mRNA表达；(B)凋亡相关基因的mRNA表达；(C)Bax/Bcl‑2的比值。各组数据以均数±标准差(n＝3)表示，柱上不同字母表示
差异显著(P<0.05)，相同字母表示差异不显著(P>0.05)。

[0243] 添加DON可以显著上调细胞中IL‑6，IL‑8，TNF‑α，Bax和caspase‑3基因的相对mRNA表达(P<0.05)，且显著下调Bcl‑2的mRNA表达(P<0.05)。而添加磷参肽咀嚼片分散剂CAP可
以显著下调了IL‑6，IL‑8，TNF‑α，Bax和caspase‑3基因的相对mRNA表达及Bax/Bcl‑2比值(P
<0.05)和上调了Bcl‑2基因mRNA的表达丰度(P<0.05)。

[0244] 实验结果证明，本申请提供的磷参肽咀嚼片分散剂能够缓解并减轻DON诱导IPEC‑J2细胞的毒性，提高氧化应激受损细胞的修复能力。

[0245] 效果例3

[0246] 本研究将45只SPF级雄性小鼠随机分成五组，分别是对照组(A)、敌草快处理组(B)、本申请提供的磷参肽咀嚼片分散剂低剂量组(50mg/kg*d)(C)、本申请提供的磷参肽咀
嚼片分散剂中剂量组(100mg/kg*d)(D)和本申请提供的磷参肽咀嚼片分散剂高剂量组
(300mg/kg*d)(E)，每组三笼，每笼三只小鼠。每次按鼠笼顺序先称鼠重再灌胃，对照组和敌
草快处理组灌胃20ml/kg*d的生理盐水，复合多肽组灌胃不同剂量的复合多肽。连续饲喂小
鼠三周后，在第22天，除对照组外，其它四组均用敌草快攻毒(腹腔注射)六小时，然后采集
小鼠的血清和肝脏样品。

[0247] 检测对照组(A)、敌草快处理组(B)、本申请提供的磷参肽咀嚼片分散剂低剂量组(C)、中剂量组(D)、高剂量组(E)中小鼠氧化应激代谢物丙二醛MDA含量和H2O2含量，结果如
图11‑图12。

[0248] 检测对照组(A)、敌草快处理组(B)、本申请提供的磷参肽咀嚼片分散剂低剂量组(C)、中剂量组(D)、高剂量组(E)对小鼠肝脏中蛋白质羰基PC、8‑羟基脱氧鸟苷(8‑OHDG)和
抗氧化酶GSH‑Px活性水平的影响，结果如图13‑15所示。

[0249] 和敌草快处理组相比，本申请提供的磷参肽咀嚼片分散剂能显著降低血清中的丙二醛(MDA)含量、增强抗超氧阴离子活性(P＜0.05)，且剂量越高效果越好；本申请提供的磷
参肽咀嚼片分散剂可显著降低肝脏中的8‑羟基脱氧鸟苷(8‑OHDG)含量和蛋白质羰基(PC)
含量、增强肝脏的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH‑Px)活性(P＜0.05)，中剂量的效果更好，但对
丙二醛(MDA)含量活性无明显影响(P＞0.05)。

[0250] 综上所述，本申请提供的磷参肽咀嚼片分散剂对敌草快诱导的小鼠氧化应激的影响。本申请提供的磷参肽咀嚼片分散剂对小鼠机体的氧化应激有一定的缓解作用，可以减
少氧化应激代谢产物的含量，提高抗氧化酶的活性，从而有效减轻组织的氧化损伤，达到缓
解氧化应激的效果。高剂量对机体安全无害。

[0251] 临床应用例1

[0252] 肖先生，男，1960年生人，身高178cm，体重180kg，2016年7月确诊为2型糖尿病；未服用降糖药物和胰岛素情况下，餐前血糖水平为15‑18mmol/L，餐后2小时的血糖水平为22‑
27mmol/L；服用降糖药物和胰岛素情况下，餐前血糖水平为6‑10mmol/L，餐后2小时血糖水
平为12‑15mmol/L。

[0253] 确诊并使用胰岛素和格列本脲药物后，身上溃烂蔓延至全身(除脸上)，血糖指标回升，胰岛素注射量增加到60个单位，伤口无法愈合并随时间扩大，伴有伤口严重流血水情
况，并爆发并发症有高血压、痛风、双肾衰竭3级。

[0254] 食用本发明提供的肠道缓释牛初乳海参肽咀嚼片后，血糖水平降为餐前5‑7mmol/L、餐后7‑9mmol/L，胰岛素注射量减少至每天20个单位，格列本脲1片，伤口逐步愈合，血压
接近正常，身体精神状态好转，腰部有力；如图16、17所示，食用本发明提供的咀嚼片2年后
相较于食用1个月后，皮肤溃烂有明显改善；如图18所示，为本临床应用例患者食用本发明
提供的咀嚼片辅以格列本脲、地黄丸、胰岛素注射1.5个月后的血液化学检验报告单，可见
血糖水平维持在3.9～6.1mmol/L，能够有效缓解由于过量或长期使用降糖药物及胰岛素造
成的并发症，能有效恢复脏器功能，有利于维持身体机能稳定。

[0255] 临床应用例2

[0256] 李先生，男，1962年生人，于2018年7月在安徽宁国市人民医院确诊2型糖尿病，如图19所示，为确诊时的血糖化验报告单，表明空腹血糖8.77mmol/L，未使用西药手段，通过
控制饮食血糖水平，2019年6月发现空腹超过10mmol/L，如图20所示，2019年6月开始食用本
发明提供的咀嚼片两周后再次到该医院检查血糖水平为6.38mmol/L，患者期间未服用降糖
药物等西药手段。

[0257] 虽然已经参考优选实施例对本发明进行了描述，但在不脱离本发明的范围的情况下，可以对其进行各种改进并且可以用等效物替换其中的成分。上述的对实施例的描述是
为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用本发明。熟悉本领域技术的人员显然可以
容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必
经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，
不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。本发明并不局限
于文中公开的特定实施例，而是包括落入权利要求的范围内的所有技术方案。