单倍型206A-420A在评价发生醋甲唑胺所致药疹的风险性中的应用转让专利
申请号 : CN202010783383.X
文献号 : CN111876481B
文献日 : 2021-11-09
发明人 : 邢清和 , 骆肖群 , 杨凡萍
申请人 : 复旦大学 , 复旦大学附属华山医院
摘要 :
本发明公开了单倍型206A‑420A在评价发生醋甲唑胺所致药疹的风险性中的应用，具体的所述药疹为SJS/TEN。单倍型206A‑420A由两个SNP位点组成，第1个SNP位于人基因组中序列表中序列1所示DNA的第57位核苷酸，第2个SNP位于人基因组中序列表中序列2所示DNA的第57位核苷酸；将第1个SNP携带A等位基因且第2个SNP携带A等位基因的单倍型命名为单倍型206A‑420A。携带单倍型206A‑420A的个体，如用醋甲唑胺治疗可能出现SJS/TEN的风险显著升高，对于该类个体建议使用其他替代药物治疗。不携带单倍型206A‑420A的个体，醋甲唑胺治疗后发生药疹的可能性较低，可以按临床需要选择使用。
权利要求 :
1.特异引物对在制备试剂盒中的应用，所述试剂盒的功能为评价受试者发生醋甲唑胺所致SJS/TEN的风险性；
所述特异引物对由引物F和引物R组成，所述引物F为序列表的序列3所示的单链DNA分子，所述引物R为序列表的序列4所示的单链DNA分子；
所述特异引物对用于检测单倍型206A‑420A；
所述单倍型206A‑420A由两个SNP位点组成，第1个SNP位于人基因组中序列表中序列1所示DNA的第57位核苷酸，第2个SNP位于人基因组中序列表中序列2所示DNA的第57位核苷酸；将第1个SNP携带A等位基因且第2个SNP携带A等位基因的单倍型命名为单倍型206A‑
420A。
2.特异引物对在制备试剂盒中的应用，所述试剂盒的功能为评价受试者是否适于服用醋甲唑胺；
所述特异引物对由引物F和引物R组成，所述引物F为序列表的序列3所示的单链DNA分子，所述引物R为序列表的序列4所示的单链DNA分子；
所述特异引物对用于检测单倍型206A‑420A；
所述单倍型206A‑420A由两个SNP位点组成，第1个SNP位于人基因组中序列表中序列1所示DNA的第57位核苷酸，第2个SNP位于人基因组中序列表中序列2所示DNA的第57位核苷酸；将第1个SNP携带A等位基因且第2个SNP携带A等位基因的单倍型命名为单倍型206A‑
420A。
3.用于检测单倍型206A‑420A的物质在制备试剂盒中的应用，所述试剂盒的功能为评价受试者发生醋甲唑胺所致SJS/TEN的风险性；
单倍型206A‑420A由两个SNP位点组成，第1个SNP位于人基因组中序列表中序列1所示DNA的第57位核苷酸，第2个SNP位于人基因组中序列表中序列2所示DNA的第57位核苷酸；将第1个SNP携带A等位基因且第2个SNP携带A等位基因的单倍型命名为单倍型206A‑420A。
4.用于检测单倍型206A‑420A的物质在制备试剂盒中的应用，所述试剂盒的功能为评价受试者是否适于服用醋甲唑胺；
单倍型206A‑420A由两个SNP位点组成，第1个SNP位于人基因组中序列表中序列1所示DNA的第57位核苷酸，第2个SNP位于人基因组中序列表中序列2所示DNA的第57位核苷酸；将第1个SNP携带A等位基因且第2个SNP携带A等位基因的单倍型命名为单倍型206A‑420A。
说明书 :
单倍型206A‑420A在评价发生醋甲唑胺所致药疹的风险性中
的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及单倍型206A‑420A在评价发生醋甲唑胺所致药疹的风险性中的应用，具体的所述药疹为SJS/TEN。
背景技术
[0002] 药疹又被称为药物性皮炎，是指药物通过注射、内服、吸入和外用等途径进入人体后引起的皮肤和黏膜的炎症反应，为临床上最常见的药物不良反应。药疹根据皮疹表现的
不同，分为普通药疹和重症药疹，重症药疹主要包括Stevens‑Johnson综合征(Steven‑
Johnson syndrome，SJS)、中毒性表皮坏死松解症(Toxic epidermal necrolysis，TEN)、伴
嗜酸性粒细胞增多和系统症状的药物反应(drug reaction with eosinophilia and
systemic symptoms，DRESS)和急性泛发性发疹型脓疱病(acute generalized
exanthematous pustulosis，AGEP)。依据临床及病理学差异，SJS和TEN属于具有不同严重
程度的同一病谱性疾病：SJS累及的皮肤剥脱面积不超过体表面积的10％，SJS/TEN重叠为
10‑30％，TEN则超过30％。将SJS、TEN和SJS/TEN重叠这一病谱统称为SJS/TEN。SJS/TEN为药
疹各类型中病情最严重、死亡率最高的类型。除了可以引起皮肤粘膜的广泛坏死和剥脱以
外，SJS/TEN还会导致胃肠道、呼吸道黏膜的剥脱和坏死，死亡率可高达50％。
不同，分为普通药疹和重症药疹，重症药疹主要包括Stevens‑Johnson综合征(Steven‑
Johnson syndrome，SJS)、中毒性表皮坏死松解症(Toxic epidermal necrolysis，TEN)、伴
嗜酸性粒细胞增多和系统症状的药物反应(drug reaction with eosinophilia and
systemic symptoms，DRESS)和急性泛发性发疹型脓疱病(acute generalized
exanthematous pustulosis，AGEP)。依据临床及病理学差异，SJS和TEN属于具有不同严重
程度的同一病谱性疾病：SJS累及的皮肤剥脱面积不超过体表面积的10％，SJS/TEN重叠为
10‑30％，TEN则超过30％。将SJS、TEN和SJS/TEN重叠这一病谱统称为SJS/TEN。SJS/TEN为药
疹各类型中病情最严重、死亡率最高的类型。除了可以引起皮肤粘膜的广泛坏死和剥脱以
外，SJS/TEN还会导致胃肠道、呼吸道黏膜的剥脱和坏死，死亡率可高达50％。
[0003] 醋甲唑胺是一种碳酸酐酶抑制剂，临床上广泛用于治疗慢性开角型青光眼、继发性青光眼以及闭角型青光眼的术前治疗，效果明显且价格低廉，已使用超过40余年，已被国
家药典收录。近年来，由于社会老龄化加剧和糖尿病发病率增长加上电子设备使用的增多，
导致青光眼(尤其是开角型青光眼)的发病率也逐渐增高。因此，醋甲唑胺的应用越来越多。
然而部分患者服用醋甲唑胺可出现SJS/TEN。醋甲唑胺诱发的SJS/TEN最早由FLACH等于
1995年在日本报道，后续在韩国和中国等多个亚洲人群均有报道。
家药典收录。近年来，由于社会老龄化加剧和糖尿病发病率增长加上电子设备使用的增多，
导致青光眼(尤其是开角型青光眼)的发病率也逐渐增高。因此，醋甲唑胺的应用越来越多。
然而部分患者服用醋甲唑胺可出现SJS/TEN。醋甲唑胺诱发的SJS/TEN最早由FLACH等于
1995年在日本报道，后续在韩国和中国等多个亚洲人群均有报道。
发明内容
[0004] 本发明的目的是提供单倍型206A‑420A在评价发生醋甲唑胺所致药疹的风险性中的应用，具体的所述药疹为SJS/TEN。
[0005] 本发明提供了特异引物对，由引物F和引物R组成；所述引物F为序列表的序列3所示的单链DNA分子，所述引物R为序列表的序列4所示的单链DNA分子。
[0006] 本发明还提供了所述特异引物对在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的功能为评价受试者发生醋甲唑胺所致SJS/TEN的风险性。
[0007] 本发明还保护所述特异引物对在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的功能为评价受试者是否适于服用醋甲唑胺。
[0008] 本发明还保护一种试剂盒，包括所述特异引物对；所述试剂盒的功能为评价受试者发生醋甲唑胺所致SJS/TEN的风险性。
[0009] 本发明还保护一种试剂盒，包括所述特异引物对；所述试剂盒的功能为评价受试者是否适于服用醋甲唑胺。
[0010] 采用所述特异引物对评价受试者发生醋甲唑胺所致SJS/TEN的风险性的方法如下：携带风险单倍型的受试者服用醋甲唑胺后发生SJS/TEN的风险性高于不携带风险单倍
型的受试者。
型的受试者。
[0011] 采用所述特异引物对评价受试者是否适于服用醋甲唑胺的方法如下：携带风险单倍型的受试者不适于服用醋甲唑胺；不携带风险单倍型的受试者适于服用醋甲唑胺。
[0012] 携带风险单倍型的个体，如用醋甲唑胺治疗可能出现SJS/TEN的风险显著升高，对于该类个体建议使用其他替代药物治疗。不携带风险单倍型个体，醋甲唑胺治疗后发生药
疹的可能性较低，可以按临床需要选择使用。
疹的可能性较低，可以按临床需要选择使用。
[0013] 以受试者的基因组DNA为模板，所述特异引物对的扩增产物中具有序列表中序列1所示的DNA分子和序列表中序列2所示的DNA分子。所述特异引物对的扩增产物中具有两个
特异SNP且该两个SNP形成单倍型，第1个SNP位于序列表中序列1所示DNA的第57位核苷酸，
第2个SNP位于序列表中序列2所示DNA的第57位核苷酸。将第1个SNP携带A等位基因且第2个
SNP携带A等位基因的单倍型命名为单倍型206A‑420A，为风险单倍型。
特异SNP且该两个SNP形成单倍型，第1个SNP位于序列表中序列1所示DNA的第57位核苷酸，
第2个SNP位于序列表中序列2所示DNA的第57位核苷酸。将第1个SNP携带A等位基因且第2个
SNP携带A等位基因的单倍型命名为单倍型206A‑420A，为风险单倍型。
[0014] 本发明还保护用于检测单倍型206A‑420A的物质在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的功能为评价受试者发生醋甲唑胺所致SJS/TEN的风险性。携带单倍型206A‑420A的受
试者服用醋甲唑胺后发生SJS/TEN的风险性高于不携带单倍型206A‑420A的受试者。
试者服用醋甲唑胺后发生SJS/TEN的风险性高于不携带单倍型206A‑420A的受试者。
[0015] 本发明还保护用于检测单倍型206A‑420A的物质在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的功能为评价受试者是否适于服用醋甲唑胺。携带单倍型206A‑420A的受试者不适于
服用醋甲唑胺；不携带单倍型206A‑420A的受试者适于服用醋甲唑胺。
服用醋甲唑胺；不携带单倍型206A‑420A的受试者适于服用醋甲唑胺。
[0016] 本发明还保护一种评价受试者发生醋甲唑胺所致SJS/TEN的风险性的方法，包括如下步骤：检测受试者是否携带单倍型206A‑420A，携带单倍型206A‑420A的受试者服用醋
甲唑胺后发生SJS/TEN的风险性高于不携带单倍型206A‑420A的受试者。
甲唑胺后发生SJS/TEN的风险性高于不携带单倍型206A‑420A的受试者。
[0017] 本发明还保护一种评价受试者是否适于服用醋甲唑胺的方法，包括如下步骤：检测受试者是否携带单倍型206A‑420A，携带单倍型206A‑420A的受试者不适于服用醋甲唑
胺，不携带单倍型206A‑420A的受试者适于服用醋甲唑胺。
胺，不携带单倍型206A‑420A的受试者适于服用醋甲唑胺。
[0018] 本发明还保护一种试剂盒，包括用于检测单倍型206A‑420A的物质。
[0019] 单倍型206A‑420A由两个SNP位点组成，第1个SNP位于人基因组中序列表中序列1所示DNA的第57位核苷酸，第2个SNP位于人基因组中序列表中序列2所示DNA的第57位核苷
酸；将第1个SNP携带A等位基因且第2个SNP携带A等位基因的单倍型命名为单倍型206A‑
420A。
酸；将第1个SNP携带A等位基因且第2个SNP携带A等位基因的单倍型命名为单倍型206A‑
420A。
[0020] 用于检测单倍型206A‑420A的物质具体可为所述特异引物对。
[0021] 携带单倍型206A‑420A的个体，如用醋甲唑胺治疗可能出现SJS/TEN的风险显著升高，对于该类个体建议使用其他替代药物治疗。不携带单倍型206A‑420A的个体，醋甲唑胺
治疗后发生药疹的可能性较低，可以按临床需要选择使用。
治疗后发生药疹的可能性较低，可以按临床需要选择使用。
[0022] 所述试剂盒的功能为评价受试者发生醋甲唑胺所致SJS/TEN的风险性和/或所述试剂盒的功能为评价受试者是否适于服用醋甲唑胺。
[0023] 现有技术中，尚无预测醋甲唑胺所致SJS/TEN的高效手段。鉴于SJS/TEN的高危害性、高死亡率，提高对其预测的敏感性进而对其发病进行高效预测无疑具有很大的社会效
益及经济效益。本发明的发明人发现，单倍型206A‑420A可用于预测受试者发生醋甲唑胺所
致SJS/TEN的风险性，从而用于指导临床用药以避免醋甲唑胺所致SJS/TEN的发生。
益及经济效益。本发明的发明人发现，单倍型206A‑420A可用于预测受试者发生醋甲唑胺所
致SJS/TEN的风险性，从而用于指导临床用药以避免醋甲唑胺所致SJS/TEN的发生。
具体实施方式
[0024] 以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自
常规生化试剂商店购买得到的。所述组别的入组者，均为中国汉族。
常规生化试剂商店购买得到的。所述组别的入组者，均为中国汉族。
[0025] SJS/TEN诊断标准由Roujeau等人(Roujeau JC.Clinical heterogeneity of drug hypersensitivity.Toxicology 2005；209:123‑129.)提出，即：临床表现有表皮的大
量剥脱坏死，大多伴口腔粘膜糜烂，伴或不伴有严重的肝肾功能损害等系统并发症；其中，
皮肤剥脱面积<总体表面积的10％称为SJS，皮肤剥脱面积>总体表面积的30％的称为TEN，
面积10％‑30％之间(含两个端值)的称为SJS/TEN重叠。醋甲唑胺所致SJS/TEN组中，所有入
组患者均通过病史及皮肤病理检查排除病毒疹及毒性红斑等其他诊断，所有患者均在发疹
前2个月内首次口服醋甲唑胺。
量剥脱坏死，大多伴口腔粘膜糜烂，伴或不伴有严重的肝肾功能损害等系统并发症；其中，
皮肤剥脱面积<总体表面积的10％称为SJS，皮肤剥脱面积>总体表面积的30％的称为TEN，
面积10％‑30％之间(含两个端值)的称为SJS/TEN重叠。醋甲唑胺所致SJS/TEN组中，所有入
组患者均通过病史及皮肤病理检查排除病毒疹及毒性红斑等其他诊断，所有患者均在发疹
前2个月内首次口服醋甲唑胺。
[0026] 实施例1、
[0027] 基于临床样本采集，基因测序以及序列比对，进一步进行验证，发现了单倍型206A‑420A。单倍型206A‑420A由两个SNP位点组成：第1个SNP位于人基因组中序列表中序列
1所示DNA的第57位核苷酸(人基因组中第1个SNP的上、下游序列如序列表的序列1所示)，为
A/T/C/G多态，风险等位基因为A；第2个SNP位于人基因组中序列表中序列2所示DNA的第57
位核苷酸(人基因组中第2个SNP的上、下游序列如序列表的序列2所示)，为A/T/C/G多态，风
险等位基因为A。将第1个SNP携带A等位基因且第2个SNP携带A等位基因的单倍型命名为单
倍型206A‑420A，为风险单倍型。序列表的序列中,N代表A或T或C或G。
1所示DNA的第57位核苷酸(人基因组中第1个SNP的上、下游序列如序列表的序列1所示)，为
A/T/C/G多态，风险等位基因为A；第2个SNP位于人基因组中序列表中序列2所示DNA的第57
位核苷酸(人基因组中第2个SNP的上、下游序列如序列表的序列2所示)，为A/T/C/G多态，风
险等位基因为A。将第1个SNP携带A等位基因且第2个SNP携带A等位基因的单倍型命名为单
倍型206A‑420A，为风险单倍型。序列表的序列中,N代表A或T或C或G。
[0028] 一、各组人群情况
[0029] 醋甲唑胺所致SJS/TEN组：由21例发生醋甲唑胺所致SJS/TEN的患者组成。
[0030] 醋甲唑胺耐受组：由中国东部地区的74位志愿者组成，均符合口服醋甲唑胺后3个月内没有发生相关药物不良反应的入组标准。
[0031] 二、分型
[0032] 对醋甲唑胺所致SJS/TEN组人群以及醋甲唑胺耐受组人群分别进行基因分型。
[0033] 1、分别取每位入组者的外周血，提取基因组DNA。
[0034] 2、以基因组DNA为模板，采用引物F和引物R组成的引物对进行PCR扩增，然后回收PCR扩增产物并测序。
[0035] 引物F(序列表的序列3)：5’‑RAGGGGACCGCAGGCGGGGGC‑3’；
[0036] 引物R(序列表的序列4)：5’‑GATGGGGAAGGCTCCCCACTGCC‑3’。
[0037] R代表A或G。
[0038] 所有入组者的PCR扩增产物均为907±10bp。每位入组者的PCR扩增产物中，均同时具有序列1所示的区段和序列2所示的区段。醋甲唑胺所致SJS/TEN组人群中，18例携带单倍
型206A‑420A，携带率为18/21。醋甲唑胺耐受组人群中，3例携带单倍型206A‑420A，携带率
为3/74。醋甲唑胺所致SJS/TEN组人群的情况见表1。醋甲唑胺耐受组人群的情况见表2。
型206A‑420A，携带率为18/21。醋甲唑胺耐受组人群中，3例携带单倍型206A‑420A，携带率
为3/74。醋甲唑胺所致SJS/TEN组人群的情况见表1。醋甲唑胺耐受组人群的情况见表2。
[0039] 表1.醋甲唑胺所致SJS/TEN组的个案信息
[0040]
[0041]
[0042] 表2.醋甲唑胺耐受组的个案信息
[0043]
[0044]
[0045] 携带者频率＝各组人群中携带单倍型206A‑420A的人数/该组总人数。醋甲唑胺所致SJS/TEN组人群的携带者频率与醋甲唑胺耐受组人群的携带者频率进行比较，利用
SPSS23.0计算比值比(Odds Ratio，OR)及其95％的可信区间，必要时使用Haldane’s校正，
选用卡方检验进行统计学分析，统计学的显著性水平设定为P小于0.05。
SPSS23.0计算比值比(Odds Ratio，OR)及其95％的可信区间，必要时使用Haldane’s校正，
选用卡方检验进行统计学分析，统计学的显著性水平设定为P小于0.05。
[0046] 与醋甲唑胺耐受组相比，醋甲唑胺所致SJS/TEN组单倍型206A‑420A携带者频率显著富集(p＝1.7308E‑15,OR＝142.00,95％CI[26.42‑763.29])。单倍型206A‑420A为醋甲唑
胺诱发SJS/TEN的风险单倍型，该单倍型携带者服用醋甲唑胺后发生SJS/TEN的风险为非携
带者的142.0倍，因此单倍型206A‑420A可用于评价醋甲唑胺所致SJS/TEN的发生风险。
胺诱发SJS/TEN的风险单倍型，该单倍型携带者服用醋甲唑胺后发生SJS/TEN的风险为非携
带者的142.0倍，因此单倍型206A‑420A可用于评价醋甲唑胺所致SJS/TEN的发生风险。
[0047] 真阳性(a)为醋甲唑胺所致SJS/TEN组206A‑420A检测阳性的例数，假阳性(b)为醋甲唑胺耐受组206A‑420A检测阳性的例数，假阴性(c)为醋甲唑胺所致SJS/TEN组206A‑420A
检测阴性的例数，真阴性(d)为醋甲唑胺耐受组206A‑420A检测阴性例数。敏感度＝a/(a+
c)，特异度＝d/(b+d)。阳性预测值＝a/(a+b)，阴性预测值＝d/(c+d)。
检测阴性的例数，真阴性(d)为醋甲唑胺耐受组206A‑420A检测阴性例数。敏感度＝a/(a+
c)，特异度＝d/(b+d)。阳性预测值＝a/(a+b)，阴性预测值＝d/(c+d)。
[0048] 单倍型206A‑420A可有效预测醋甲唑胺所致SJS/TEN的发生风险，其敏感度为85.71％，特异度为95.95％，阳性预测值为85.71％，阴性预测值为95.95％。