碳酸钙聚(乳酸-羟基乙酸)复合物微粒及其制备和应用转让专利
申请号 : CN202010967939.0
文献号 : CN111888336B
文献日 : 2021-07-27
发明人 : 刘庄 , 冯良珠 , 杨志娟 , 郝钰 , 朱宇杰
申请人 : 苏州大学
摘要 :
权利要求 :
1.一种碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物微粒,其特征在于,包括核层和包裹于所述核层外的壳层,所述核层包括碳酸钙和阿霉素,所述壳层包括烷基修饰的NLG919、聚乳酸‑羟基乙酸和聚乳酸‑羟基乙酸‑聚乙二醇。
2.根据权利要求1所述的碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物微粒,其特征在于,所述碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物微粒的粒径为100~180nm。
3.一种权利要求1或2所述的碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物微粒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
A)将聚乳酸‑羟基乙酸、聚乳酸‑羟基乙酸‑聚乙二醇和烷基修饰的NLG919在有机溶剂中混合,得到油相混合溶液;将CaCl2、阿霉素和水混合,得到氯化钙阿霉素溶液;
B)将部分所述油相混合溶液与NaHCO3溶液混合,乳化,得到第一乳液;将剩余部分所述油相混合溶液与氯化钙阿霉素溶液混合,乳化,得到第二乳液;
C)将所述第一乳液和第二乳液混合,乳化,得到第三乳液;
D)将所述第三乳液分散于聚乙烯醇水溶液中,搅拌、洗涤得到所述碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物微粒。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,在步骤A)中,所述聚乳酸‑羟基乙酸和聚乳酸‑羟基乙酸‑聚乙二醇的质量比为1~2:1~2;所述烷基修饰的NLG919为C2~C20的烷基修饰的NLG919。
5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,在步骤B)中,所述NaHCO3溶液浓度为
0.6~0.7M,所述氯化钙阿霉素溶液中氯化钙的浓度为1~1.5M。
6.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,在步骤A)中,所述聚乳酸‑羟基乙酸和聚乳酸‑羟基乙酸‑聚乙二醇总和、阿霉素和烷基修饰的NLG919的质量比为(5~10):(0.3~
1):(0.3~2);在步骤A)中,所述CaCl2和阿霉素的质量比为25~30:1;在步骤B)中,所述部分油相混合溶液与NaHCO3溶液的体积比为3~4:1;所述剩余部分油相混合溶液与氯化钙阿霉素溶液的体积比为3~4:1。
7.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,在步骤C)中,所述乳化为超声乳化,超声功率为80~120W;超声时间为250~350s;在步骤D)中,所述聚乙烯醇水溶液的质量分数为1%~2%;搅拌的时间为10~14h;洗涤为14000~15000rpm的条件下离心20~30min,用超纯水洗涤2~3次。
8.权利要求1或2所述的碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物微粒在制备肿瘤化疗的药物或肿瘤化疗和免疫联合治疗的药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述药物为肿瘤酸环境响应性药物,酸环境的pH值为5.5~6.5。
10.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述药物用于治疗实体肿瘤。
说明书 :
碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物微粒及其制备和应用
技术领域
背景技术
是通过其本身的细胞毒性效应起作用的。但是越来越多的证据表明,一些特定的化疗药物
不仅能通过细胞毒性杀伤肿瘤细胞,其诱导的免疫反应也在整体抗肿瘤活性中发挥重要作
用。最近的研究表明,抗肿瘤化疗药物阿霉素(DOX)可以通过损伤相关的分子模式(DAMPs)
诱导免疫原性细胞死亡(ICD),从而引发抗肿瘤免疫。ICD诱导的免疫原性促进细胞毒性T淋
巴细胞(CTL)的肿瘤内浸润,进而有效抑制肿瘤生长。
性的抗体来阻断肿瘤内免疫抑制性的细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA‑4)和程序性细
胞死亡蛋白1(PD‑1)可实现对多种肿瘤生长的有效抑制。除此之外,多种实体瘤会高表达吲
哚胺2,3‑双加氧酶1(IDO‑1)其能够催化瘤内色氨酸(Trp)的降解成犬尿氨酸(Kyn),而肿瘤
内犬尿氨酸的积累不但会减少Th1、CTL等T细胞向瘤内浸润并诱导其凋亡,还会激活瘤内免
疫调节性T细胞(Tregs),进而造成了严重的免疫抑制性微环境。
发明内容
具有良好的药物包载效率和肿瘤富集能力,实现化疗药物DOX和IDO抑制剂aNLG919的共包
载,且可有效释放化疗药物阿霉素,并抑制IDO免疫抑制通路,有效扭转肿瘤免疫抑制微环
境,激活肿瘤免疫,抑制肿瘤生长,实现肿瘤的化疗或化疗与免疫联合治疗。
为壳层,以碳酸钙(CaCO3)和阿霉素(DOX)为核层。
阿霉素的质量比为25~30:1;
14000~15000rpm的条件下离心20~30min,用超纯水洗涤2~3次。
良好,在生理条件下具有良好的稳定性,其对疏水化的NLG919以及亲水性的盐酸阿霉素都
具有良好的装载效率,是理想的药物载体,具有良好的药代动力学行为,并且碳酸钙的存在
使得该复合制剂具有对肿瘤酸性微环境的响应能力,实现药物的响应性释放,降低毒副作
用。
通过尾静脉注射,并由荧光成像技术对其体内药代动力学行为进行监测发现,碳酸钙聚(乳
酸‑羟基乙酸)复合物制剂能够有效富集在肿瘤部位,且在小鼠体内有较长的循环时间,具
有良好的肿瘤协同治疗效果,能够用于肿瘤化疗免疫联合治疗。
附图说明
具体实施方式
aNGL919。
PLGA‑PEG与aNLG919的二氯甲烷溶液。分别超声乳化后将乳液A、B混合,继续超声得到乳液
C,最后分散与1%PVA水溶液中,得到W1/O/W2微乳体系,搅拌过夜待挥发二氯甲烷后得到碳
酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑DOX‑NLG919制剂。
示,实施例一制得的碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑DOX‑NLG919制剂在水中呈单分散状
态分布,表明本发明制得的碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑DOX‑NLG919制剂的粒径均
一,在水中分散良好。
二氢卟吩e6(Ce6)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、牛血清白蛋白(BSA)等药物,其方法与实施例
一的相同,不同之处在于,在乳液B水相时,将DOX分别替换为等摩尔的Ce6、Mitoxantrone或
BSA。同时利用PLGA‑PEG nanoparticles作为对比,其为PLGA和PLGA‑PEG的混合纳米粒子。
通过UV‑VIS测量所制得的碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物制剂中药物含量以测试碳酸钙
聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物制剂对各种药物的包载能力。测试结果如图3所示,结果显示,本
发明制得的制得的碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物制剂(图中CaNPs)对多种小分子都具
有良好的包载能力,是一种良好的药物载体。
转移到透析袋中,室温下浸入10mL不同pH缓冲溶液(即pH 7.4溶液、pH 6.5溶液、pH 5.5溶
液)中。在预定的时间,收集外部溶液,用紫外‑可见分光光度计测定DOX浓度。测试结果如图
4所示,结果显示,实施例六制得的碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑DOX‑NLG919制剂在酸
性条件下显示出更好的药物释放能力。
制剂,不同之处在于,乳液A油相中aNLG919的浓度不同。将NLG919(Free NLG919)与制得的
碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑DOX‑NLG919制剂分别与IFN‑γ同时加入CT26细胞孵育
48h,再加入30%三氯乙酸,在50℃下孵育6h,将甲酰犬尿氨酸水解为犬尿氨酸。最后加入埃
利希试剂,室温显色10min,测490nm波长处吸收。测试结果如图5所示,结果显示,与未经修
饰的NLG919相比,碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑DOX‑NLG919制剂的IDO抑制能力并不
会在修饰及制备过程中损失,依然显示出几乎不减弱的IDO抑制能力,这为后续的联合治疗
策略提供了基础。
片,观察碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑DOX‑NLG919‑Dir制剂在肿瘤部位的富集量,结
果见图6。选用的激发光源是748nm,曝光时间是50ms。图6结果显示随着时间的推移,肿瘤区
域碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑DOX‑NLG919‑Dir制剂的荧光信号逐渐增强,其在肿瘤
部位的富集随时间增加。
出脂质体‑奥沙利铂前药‑NLG919在不同器官中分布情况,结果见图7,图7为实施例六中小
鼠注射碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑DOX‑NLG919DiR制剂24h后,在体内各个器官分布
的荧光强度统计图;从图6‑7可以看出,碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑DOX‑NLG919‑DiR
制剂在肿瘤(图7f)部位的富集低于肝(图7a)、脾(图7b),但显著高于肾(图7c)、心(图7d)、
肺(图7e),表明碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑DOX‑NLG919‑DiR制剂有较好的肿瘤富集
能力。
(CaNPs);第三组,注射碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑NLG919制剂治疗组(NCaNPs);第
四组,注射碳酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑NLG919制剂治疗组(DCaNPs);第五组,注射碳
酸钙聚(乳酸‑羟基乙酸)复合物‑DOX‑NLG919制剂治疗组(DNCaNPs)。对小鼠进行相应的治
疗后,测量其肿瘤的生长,结果见于图8。
DOX‑NLG919制剂能够实现对肿瘤的化疗与免疫联合治疗。
这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。