5-取代淫羊藿素衍生物及其抗肿瘤应用转让专利
申请号 : CN202010942598.1
文献号 : CN111925378B
文献日 : 2022-01-28
发明人 : 王先恒 , 赵长阔 , 何芋岐 , 崔晗琦 , 柯希 , 赵缘财
申请人 : 遵义医科大学
摘要 :
本发明提供了结构式如4所示5‑取代淫羊藿素衍生物、其制备方法及其抗肿瘤应用。活性测试证明，本发明设计并合成得到的如4所示5‑取代淫羊藿素衍生物，是一种适合的抗肿瘤候选药物，尤其是作为抗肝癌、抗结肠癌、肺癌以及抗结肠癌的候选药物。此外，本发明的5‑取代淫羊藿素衍生物的合成方法，合成路线收率高，易于操作实施。
权利要求 :
1.5‑取代淫羊藿素衍生物，其结构式如式4所示，其中，R选自‑C2H5，‑nC3H7，‑nC5H11，‑CH2CH2Br，‑CH2CH2CH2Br，‑CH2CH2CH2CH2Br，烯丙基，‑炔丙基，‑苄基。
2.根据权利要求1所述的5‑取代淫羊藿素衍生物4的合成方法，包括： 1)、淫羊藿素1与甲酸在适当的有机溶剂中反应得到化合物2，2)、化合物2与硫酸二甲酯在碱催化剂存在下在丙酮中反应得到化合物3，3)、化合物3与RX反应得到式4的5‑取代淫羊藿素衍生物，合成路线见以下：
；
其中，R选自‑C2H5，‑nC3H7，‑nC5H11，‑CH2CH2Br，‑CH2CH2CH2Br，‑CH2CH2CH2CH2Br，烯丙基，‑炔丙基，‑苄基。
3.根据权利要求1所述的5‑取代淫羊藿素衍生物4用于制备抗肝癌、结肠癌药物的用途。
说明书 :
5‑取代淫羊藿素衍生物及其抗肿瘤应用
技术领域
[0001] 本发明属于新药设计与合成领域，具体涉及一类新型5‑取代淫羊藿素衍生物及其抗肿瘤应用。
背景技术
[0002] 淫羊藿素(Icaritin,1)是一种从传统中药淫羊藿中提取出来的一种天然烯丙基取代的黄酮化合物，具有抗肿瘤、抗痴呆等多种药理活性，然而由于其溶解性能不佳且生物
利用度不高，限制了其在临床中的使用。淫羊藿素在体内被代谢成为β‑脱水淫羊藿素(化合
物2)。
利用度不高，限制了其在临床中的使用。淫羊藿素在体内被代谢成为β‑脱水淫羊藿素(化合
物2)。
[0003]
[0004] 研究表明，淫羊藿素抗肿瘤作用机制独特，药物学家希望对其黄酮结构进行修饰来获得活性更好的衍生物。为了寻找药效更好，毒性更强的抗癌药物候选者，我们设计并全
合成了如下的药物分子，将淫羊藿素5‑位羟基进行C1‑C5烷基、卤代烷基、烯丙基、炔丙基及
苄基取代获得一类结构独特的新型5‑取代淫羊藿素衍生物4。
合成了如下的药物分子，将淫羊藿素5‑位羟基进行C1‑C5烷基、卤代烷基、烯丙基、炔丙基及
苄基取代获得一类结构独特的新型5‑取代淫羊藿素衍生物4。
发明内容
[0005] 一方面，本发明提供了一种新型的5‑取代淫羊藿素衍生物；其结构式如式4所示，
[0006]
[0007] 另一方面，本发明提供了如上所述的5‑取代淫羊藿素衍生物4的合成方法，包括：1)、淫羊藿素1与甲酸在适当的有机溶剂中反应得到化合物2，2)、化合物2与硫酸二甲酯在
碱催化剂存在下在丙酮中反应得到化合物3，3)、化合物3与卤取代烷R‑X反应得到式4的5‑
取代淫羊藿素衍生物，合成路线见以下：
碱催化剂存在下在丙酮中反应得到化合物3，3)、化合物3与卤取代烷R‑X反应得到式4的5‑
取代淫羊藿素衍生物，合成路线见以下：
[0008]
[0009] 在一种优选的实施方式中，上述步骤3)所述的卤取代烷R‑X，卤素X选自氯、溴或碘，烷基选自C1‑C5烷基、卤代烷基、烯丙基、炔丙基及苄基。
[0010] 在一种优选的实施方式中，上述步骤3)所述的卤取代烷R‑X，卤素X选自溴或碘。
[0011] 在一种优选的实施方式中，上述步骤3)所述的卤取代烷R‑X，烷基选自C1‑C3烷基、卤代C1‑C3烷基及苄基。
[0012] 活性测试证明，本发明设计并合成得到的式4所示的5‑取代淫羊藿素衍生物具有很好的抗肿瘤效果；尤其是针对肝癌、结肠癌、肺癌以及乳腺癌；体外抑制率高达64％‑
72％，与阳性对照药物喜树碱和他莫昔芬的抑制活性相当；可作为新型淫羊藿黄酮类候选
药物应用于抗肿瘤临床应用。因此，本发明的第四方面提供了式4所示的5‑取代淫羊藿素衍
生物用于制备抗肿瘤药物的用途；优选地，用于制备抗肝癌、结肠癌、肺癌以及乳腺癌的用
途。
72％，与阳性对照药物喜树碱和他莫昔芬的抑制活性相当；可作为新型淫羊藿黄酮类候选
药物应用于抗肿瘤临床应用。因此，本发明的第四方面提供了式4所示的5‑取代淫羊藿素衍
生物用于制备抗肿瘤药物的用途；优选地，用于制备抗肝癌、结肠癌、肺癌以及乳腺癌的用
途。
[0013] 本发明的有益之处在于：通过在淫羊藿素母体黄酮结构上的5位羟基上引入烷基，获得了一类新型的淫羊藿黄酮衍生物4。活性试验表明，该类衍生物具备良好的抗肿瘤活
性，尤其是针对肝癌、结肠癌、肺癌以及乳腺癌几种肿瘤。此外，本发明的5‑取代淫羊藿素衍
生物4的合成方法，原料易得，合成路线收率高，非常易于操作实施。
性，尤其是针对肝癌、结肠癌、肺癌以及乳腺癌几种肿瘤。此外，本发明的5‑取代淫羊藿素衍
生物4的合成方法，原料易得，合成路线收率高，非常易于操作实施。
[0014] 在上述合成及制备方法中，有机溶剂也可以依据反应对温度、溶剂极性的需求，从N,N‑二甲基甲酰胺(缩写DMF)、二甲基亚砜(缩写DMSO)、二氯甲烷(缩写DCM)、氯仿、乙腈、四
氢呋喃或乙醚中选取。反应温度可依据反应类型适当选取。反应时间可通过薄层层析TLC、
高效液相色谱法HPLC或LC‑MS液相质谱联用等监控手段追踪反应情况得出。
氢呋喃或乙醚中选取。反应温度可依据反应类型适当选取。反应时间可通过薄层层析TLC、
高效液相色谱法HPLC或LC‑MS液相质谱联用等监控手段追踪反应情况得出。
具体实施方式
[0015] 以下将通过具体实施例进一步阐述本发明，但并不用于限制本发明的保护范围。在不脱离本发明构思的前提下，本领域技术人员可对权利要求的各参数或条件做出的改进
或组合，这些改进或组合也应视为本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所
附权利要求为准。本发明原料及试剂购自国药集团；溶剂够自遵义双巨化工有限公司。除特
别说明外，所用试剂均为化学纯。
或组合，这些改进或组合也应视为本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所
附权利要求为准。本发明原料及试剂购自国药集团；溶剂够自遵义双巨化工有限公司。除特
别说明外，所用试剂均为化学纯。
[0016] 实施例1、β‑脱水淫羊藿素2的制备：
[0017] 将Icaritin(3g，8.2mmol)的甲酸(50mL)溶液搅拌回流20h。然后将反应溶液倒入碎冰中。过滤收集固体，得到黄色粉末状的标题化合物(2，2.8g，93.3％)。熔点：221‑222℃
(照明温度：223℃，Akai等，1935)。
(照明温度：223℃，Akai等，1935)。
[0018] 1H NMR(400MHz,CHCl3)δ＝11.47(s,1H,5‑OH),8.17(d,J＝8.7Hz,2H,Ar‑H),7.03(d,J＝8.7Hz,2H,Ar‑H),6.64(s,1H,3‑OH),6.24(s,1H,Ar‑H),3.88(s,3H,CH3O),2.89(t,J
＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.88(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.37(s,6H,
(CH3)2).
＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.88(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.37(s,6H,
(CH3)2).
[0019] 实施例2、化合物3(R＝CH3)的制备：
[0020] 化合物2(100mg，0.27mmol)和K2CO3(75mg，0.54mmol)的丙酮(2ml)溶液在室温下搅拌10分钟。在10分钟内向悬浮液中逐滴加入硫酸二甲酯(1equ.)。将反应加热至回流6小时。
冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层
经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物3(95％)。
冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层
经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物3(95％)。
[0021] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝12.36(s,1H,OH),8.08(d,J＝9.1Hz,2H,Ar‑H),7.00(d,J＝9.1Hz,2H,Ar‑H),6.21(s,1H,Ar‑H),3.85(d,J＝14.6Hz,6H,2CH3O),2.83(t,J＝6.8Hz,
13
2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.84(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.34(s,6H,(CH3)2). C NMR
(101MHz,CDCl3)δ＝178.7(C＝O),161.5(C＝C),160.0(C＝C),159.4(C＝C),155.1(C＝C),
153.7(C＝C),139.0(C＝C),129.9(2C,C＝C),123.2(C＝C),114.1(2C,C＝C),105.7(C＝
C),99.9(C＝C),99.5(C＝C),75.9(C(CH3)2),60.1(CH3O),55.4(CH3O),31.7(CH2‑CH2‑C
(CH3)2),26.6(2C,C(CH3)2),16.3(CH2‑CH2‑C(CH3)2).
13
2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.84(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.34(s,6H,(CH3)2). C NMR
(101MHz,CDCl3)δ＝178.7(C＝O),161.5(C＝C),160.0(C＝C),159.4(C＝C),155.1(C＝C),
153.7(C＝C),139.0(C＝C),129.9(2C,C＝C),123.2(C＝C),114.1(2C,C＝C),105.7(C＝
C),99.9(C＝C),99.5(C＝C),75.9(C(CH3)2),60.1(CH3O),55.4(CH3O),31.7(CH2‑CH2‑C
(CH3)2),26.6(2C,C(CH3)2),16.3(CH2‑CH2‑C(CH3)2).
[0022] 实施例3、化合物4a‑j(R＝CH3)的制备：
[0023] (1)化合物4a(R＝CH3)的制备
[0024]
[0025] 化合物3(50mg，0.136mmol)和K2CO3(放置在丙酮(2ml)中的38mg，2equ.)在室温下搅拌10分钟。在10分钟内向悬浮液中逐滴加入碘甲烷(2equ.)。将反应加热至回流6小时。冷
却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层经
1
MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4a(85％)。H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.06(d,J
＝9.0Hz,2H,Ar‑H),6.97(d,J＝9.0Hz,2H,Ar‑H),6.22(s,1H,Ar‑H),3.88(s,3H,OCH3),
3.84(s,3H,OCH3),3.83(s,3H,OCH3),2.85(t,J＝6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.85(t,J＝
13
6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.35(s,6H,(CH3)2). C NMR(101MHz,CDCl3)δ＝174.3(C＝O),
161.0(C＝C),159.0(C＝C),158.2(C＝C),155.7(C＝C),151.9(C＝C),141.0(C＝C),129.6
(2C,C＝C),123.6(C＝C),113.9(2C,C＝C),108.8(C＝C),101.0(C＝C),96.5(C＝C),75.9
(C(CH3)2),59.8(CH3O),56.2(CH3O),55.3(CH3O),31.9(CH2‑CH2‑C(CH3)2),26.6(2C,C
(CH3)2),16.6(CH2‑CH2‑C(CH3)2).HRMS(TOF):calculated for C23H24O6:396.43,Found:
397.18[M+1].
却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层经
1
MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4a(85％)。H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.06(d,J
＝9.0Hz,2H,Ar‑H),6.97(d,J＝9.0Hz,2H,Ar‑H),6.22(s,1H,Ar‑H),3.88(s,3H,OCH3),
3.84(s,3H,OCH3),3.83(s,3H,OCH3),2.85(t,J＝6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.85(t,J＝
13
6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.35(s,6H,(CH3)2). C NMR(101MHz,CDCl3)δ＝174.3(C＝O),
161.0(C＝C),159.0(C＝C),158.2(C＝C),155.7(C＝C),151.9(C＝C),141.0(C＝C),129.6
(2C,C＝C),123.6(C＝C),113.9(2C,C＝C),108.8(C＝C),101.0(C＝C),96.5(C＝C),75.9
(C(CH3)2),59.8(CH3O),56.2(CH3O),55.3(CH3O),31.9(CH2‑CH2‑C(CH3)2),26.6(2C,C
(CH3)2),16.6(CH2‑CH2‑C(CH3)2).HRMS(TOF):calculated for C23H24O6:396.43,Found:
397.18[M+1].
[0026] (2)化合物4b(R＝C2H5)的制备
[0027]
[0028] 化合物3(50mg，0.136mmol)和K2CO3(放置于丙酮(2ml)中的38mg，2equ.)在室温下搅拌10分钟。在10分钟内向悬浮液中逐滴加入溴乙烷(2equ.)。将反应加热至回流6小时。冷
却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层经
MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4b(60％)，为白色固体，熔点M.p.165.6‑168.7
1
℃.Rf＝0.19(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.07(d,J＝8.9Hz,2H,Ar‑H),6.98
(d,J＝8.9Hz,2H,Ar‑H),6.21(s,1H,Ar‑H),4.09(q,J＝7.0Hz,2H,CH2CH3),3.85(s,3H,
OCH3),3.84(s 3H,OCH3),2.85(t,J＝6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.85(t,J＝6.8Hz,2H,
13
CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.51(t,J＝7.0Hz,3H,CH2CH3),1.35(s,6H,(CH3)2). C NMR(101MHz,
CDCl3)δ＝174.3(C＝O),160.9(C＝C),158.3(C＝C),158.1(C＝C),155.7(C＝C),151.9(C
＝C),141.0(C＝C),129.6(2C,C＝C),123.7(C＝C),113.9(2C,C＝C),109.0(C＝C),100.9
(C＝C),97.5(C＝C),75.8(C(CH3)2),64.8(OCH2),59.9(CH3O),55.4(CH3O),31.9(CH2‑CH2‑C
(CH3)2),26.6(2C,C(CH3)2),16.6(CH2‑CH2‑C(CH3)2),14.6(CH2CH3).HRMS(TOF):calculated
for C24H26O6:410.46,Found:411.20[M+1].
却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层经
MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4b(60％)，为白色固体，熔点M.p.165.6‑168.7
1
℃.Rf＝0.19(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.07(d,J＝8.9Hz,2H,Ar‑H),6.98
(d,J＝8.9Hz,2H,Ar‑H),6.21(s,1H,Ar‑H),4.09(q,J＝7.0Hz,2H,CH2CH3),3.85(s,3H,
OCH3),3.84(s 3H,OCH3),2.85(t,J＝6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.85(t,J＝6.8Hz,2H,
13
CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.51(t,J＝7.0Hz,3H,CH2CH3),1.35(s,6H,(CH3)2). C NMR(101MHz,
CDCl3)δ＝174.3(C＝O),160.9(C＝C),158.3(C＝C),158.1(C＝C),155.7(C＝C),151.9(C
＝C),141.0(C＝C),129.6(2C,C＝C),123.7(C＝C),113.9(2C,C＝C),109.0(C＝C),100.9
(C＝C),97.5(C＝C),75.8(C(CH3)2),64.8(OCH2),59.9(CH3O),55.4(CH3O),31.9(CH2‑CH2‑C
(CH3)2),26.6(2C,C(CH3)2),16.6(CH2‑CH2‑C(CH3)2),14.6(CH2CH3).HRMS(TOF):calculated
for C24H26O6:410.46,Found:411.20[M+1].
[0029] (3)化合物4c(R＝nC3H7)的制备
[0030]
[0031] 化合物3(50mg，0.136mmol)和K2CO3(放置于丙酮(2ml)中的38mg，2equ.)在室温下搅拌10分钟。在10分钟内向悬浮液中逐滴加入正溴丙烷(2equ.)。将反应加热至回流6小时。
冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层
经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4c(64％)，为白色固体，熔点168.4‑171.3℃
1
.Rf＝0.38(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.07(d,J＝9.0Hz,2H,Ar‑H),6.98(d,J
＝9.0Hz,2H,Ar‑H),6.22(s,1H,Ar‑H),3.97(t,J＝6.7Hz,2H,OCH2),3.86(s,3H,OCH3),3.83
(s,3H,OCH3),2.85(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.92(q,J＝7.1Hz,2H,CH2CH3),1.85
(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.35(s,3H,CH3),1.34(s,3H,CH3),1.07(t,J＝7.4Hz,
13
3H,CH2CH3). C NMR(101MHz,CDCl3)δ＝174.2(C＝O),160.9(C＝C),158.5(C＝C),158.1(C
＝C),155.7(C＝C),151.9(C＝C),141.0(C＝C),129.6(2C,C＝C),123.7(C＝C),113.9(2C,
C＝C),109.0(C＝C),100.8(C＝C),97.5(C＝C),75.8(C(CH3)2),70.7(OCH2),59.9(CH3O),
55.3(CH3O),31.9(CH2‑CH2‑C(CH3)2),26.6(2C,C(CH3)2),22.3(CH2CH3),16.6(CH2‑CH2‑C
(CH3)2),10.5(CH2CH3).HRMS(TOF):calculated for C25H28O6:424.49,Found:425.21[M+1].
冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层
经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4c(64％)，为白色固体，熔点168.4‑171.3℃
1
.Rf＝0.38(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.07(d,J＝9.0Hz,2H,Ar‑H),6.98(d,J
＝9.0Hz,2H,Ar‑H),6.22(s,1H,Ar‑H),3.97(t,J＝6.7Hz,2H,OCH2),3.86(s,3H,OCH3),3.83
(s,3H,OCH3),2.85(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.92(q,J＝7.1Hz,2H,CH2CH3),1.85
(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.35(s,3H,CH3),1.34(s,3H,CH3),1.07(t,J＝7.4Hz,
13
3H,CH2CH3). C NMR(101MHz,CDCl3)δ＝174.2(C＝O),160.9(C＝C),158.5(C＝C),158.1(C
＝C),155.7(C＝C),151.9(C＝C),141.0(C＝C),129.6(2C,C＝C),123.7(C＝C),113.9(2C,
C＝C),109.0(C＝C),100.8(C＝C),97.5(C＝C),75.8(C(CH3)2),70.7(OCH2),59.9(CH3O),
55.3(CH3O),31.9(CH2‑CH2‑C(CH3)2),26.6(2C,C(CH3)2),22.3(CH2CH3),16.6(CH2‑CH2‑C
(CH3)2),10.5(CH2CH3).HRMS(TOF):calculated for C25H28O6:424.49,Found:425.21[M+1].
[0032] (4)化合物4d(R＝nC5H11)的制备
[0033]
[0034] 化合物3(50mg，0.136mmol)和K2CO3(放置于丙酮(2ml)中的38mg，2equ.)在室温下搅拌10分钟。在10分钟内向悬浮液中逐滴加入正溴戊烷(2equ.)。将反应加热至回流6小时。
冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层
经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4d(67％)，为白色固体，熔点M.p.137.2～
1
140.2℃.Rf＝0.47(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.03(d,J＝7.4Hz,2H,Ar‑H),
6.95(d,J＝6.7Hz,2H,Ar‑H),6.18(s,1H,Ar‑H),3.96(t,J＝4Hz,2H,OCH2),3.82(s,3H,
OCH3),3.79(s,3H,OCH3),2.83(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.89(t,J＝6.7Hz,2H,
OCH2CH2),1.83(d,J＝6.6Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.47–1.42(m,2H,CH2CH3),1.32(s,6H,
13
(CH3)2),1.15‑1.24(m,2H,CH2CH2CH3),0.86(t,J＝6.8Hz,3H,CH2CH3). C NMR(101MHz,
CDCl3)δ＝174.2(C＝O),160.9(C＝C),158.5(C＝C),158.1(C＝C),155.7(C＝C),151.9(C
＝C),141.0(C＝C),129.6(2C,C＝C),123.7(C＝C),113.9(2C,C＝C),109.0(C＝C),100.8
(C＝C),97.4(C＝C),75.8(C(CH3)2),69.3(OCH2),59.9(CH3O),55.3(CH3O),31.9(CH2‑CH2‑C
(CH3)2),28.6(OCH2CH2),28.0(OCH2CH2CH2),26.6(2C,C(CH3)2),22.4,16.6(CH2‑CH2‑C
(CH3)2),14.0(CH2CH3).HRMS(TOF):calculated for C27H32O6:452.54,Found:453.25[M+1].
冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层
经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4d(67％)，为白色固体，熔点M.p.137.2～
1
140.2℃.Rf＝0.47(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.03(d,J＝7.4Hz,2H,Ar‑H),
6.95(d,J＝6.7Hz,2H,Ar‑H),6.18(s,1H,Ar‑H),3.96(t,J＝4Hz,2H,OCH2),3.82(s,3H,
OCH3),3.79(s,3H,OCH3),2.83(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.89(t,J＝6.7Hz,2H,
OCH2CH2),1.83(d,J＝6.6Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.47–1.42(m,2H,CH2CH3),1.32(s,6H,
13
(CH3)2),1.15‑1.24(m,2H,CH2CH2CH3),0.86(t,J＝6.8Hz,3H,CH2CH3). C NMR(101MHz,
CDCl3)δ＝174.2(C＝O),160.9(C＝C),158.5(C＝C),158.1(C＝C),155.7(C＝C),151.9(C
＝C),141.0(C＝C),129.6(2C,C＝C),123.7(C＝C),113.9(2C,C＝C),109.0(C＝C),100.8
(C＝C),97.4(C＝C),75.8(C(CH3)2),69.3(OCH2),59.9(CH3O),55.3(CH3O),31.9(CH2‑CH2‑C
(CH3)2),28.6(OCH2CH2),28.0(OCH2CH2CH2),26.6(2C,C(CH3)2),22.4,16.6(CH2‑CH2‑C
(CH3)2),14.0(CH2CH3).HRMS(TOF):calculated for C27H32O6:452.54,Found:453.25[M+1].
[0035] (5)化合物4e(R＝‑CH2CH2Br)的制备
[0036]
[0037] 化合物3(50mg，0.136mmol)和K2CO3(放置于丙酮(2ml)中的38mg，2equ.)在室温下搅拌10分钟。在10分钟内向悬浮液中逐滴加入1,2‑二溴乙烷(2equ.)。将反应加热至回流6
小时。冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的
有机层经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4e(44％)，为淡黄色固体，熔点
1
M.p.143.5‑148.7℃.Rf＝0.28(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.06(d,J＝7.9Hz,
2H,Ar‑H),6.98(d,J＝7.8Hz,2H,Ar‑H),6.26(s,1H,Ar‑H),4.31(t,J＝6.7Hz,2H,OCH2),
3.85(s,3H,OCH3),3.82(s,3H,OCH3),3.68(d,J＝7.5Hz,2H,CH2Br),2.86(t,J＝6.0Hz,2H,
13
CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.85(t,J＝6.6Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.35(s,6H,(CH3)2). C NMR
(101MHz,CDCl3)δ＝174.0(C＝O),161.1(C＝C),158.1(C＝C),157.1(C＝C),153.5(C＝C),
152.3(C＝C),140.9(C＝C),129.6(2C,C＝C),123.5(C＝C),114.0(2C,C＝C),109.4(C＝
C),102.5(C＝C),99.5(C＝C),76.0(C(CH3)2),69.5(OCH2),59.9(CH3O),55.3(CH3O),31.8
(CH2‑CH2‑C(CH3)2),28.3(CH2Br),26.6(2C,C(CH3)2),16.7(CH2‑CH2‑C(CH3)2).HRMS(TOF):
calculated for C24H25BrO6:490.08,Found:491.09[M+1].
小时。冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的
有机层经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4e(44％)，为淡黄色固体，熔点
1
M.p.143.5‑148.7℃.Rf＝0.28(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.06(d,J＝7.9Hz,
2H,Ar‑H),6.98(d,J＝7.8Hz,2H,Ar‑H),6.26(s,1H,Ar‑H),4.31(t,J＝6.7Hz,2H,OCH2),
3.85(s,3H,OCH3),3.82(s,3H,OCH3),3.68(d,J＝7.5Hz,2H,CH2Br),2.86(t,J＝6.0Hz,2H,
13
CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.85(t,J＝6.6Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.35(s,6H,(CH3)2). C NMR
(101MHz,CDCl3)δ＝174.0(C＝O),161.1(C＝C),158.1(C＝C),157.1(C＝C),153.5(C＝C),
152.3(C＝C),140.9(C＝C),129.6(2C,C＝C),123.5(C＝C),114.0(2C,C＝C),109.4(C＝
C),102.5(C＝C),99.5(C＝C),76.0(C(CH3)2),69.5(OCH2),59.9(CH3O),55.3(CH3O),31.8
(CH2‑CH2‑C(CH3)2),28.3(CH2Br),26.6(2C,C(CH3)2),16.7(CH2‑CH2‑C(CH3)2).HRMS(TOF):
calculated for C24H25BrO6:490.08,Found:491.09[M+1].
[0038] (6)化合物4f(R＝‑CH2CH2CH2Br)的制备
[0039]
[0040] 化合物3(50mg，0.136mmol)和K2CO3(放置于丙酮(2ml)中的38mg，2equ.)在室温下搅拌10分钟。在10分钟内向悬浮液中逐滴加入1,2‑二溴丙烷(2equ.)。将反应加热至回流6
小时。冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的
有机层经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4f(53％)，为淡黄色固体，熔点
1
M.p.180.2‑185.5℃.Rf＝0.31(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.06(d,J＝8.9Hz,
2H,Ar‑H),6.99(d,J＝8.9Hz,2H,Ar‑H),6.24(s,1H,Ar‑H),4.14(t,J＝5.6Hz,2H,OCH2),
3.86(s,3H,OCH3),3.80(s,3H,OCH3),3.69(d,J＝7.0Hz,2H,CH2Br),2.86(t,J＝6.7Hz,2H,
CH2‑CH2‑C(CH3)2),2.40(p,J＝5.9Hz,2H,CH2CH2Br),1.86(t,J＝6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C
13
(CH3)2),1.36(s,6H,(CH3)2). C NMR(101MHz,CDCl3)δ＝174.2(C＝O),161.0(C＝C),158.1
(2C,C＝C),155.6(C＝C),152.2(C＝C),151.2(C＝C),141.0(C＝C),129.6(2C,C＝C),
123.6(C＝C),113.9(2C,C＝C),101.3(C＝C),97.7(C＝C),75.9(C(CH3)2),66.3(OCH2),
59.8(CH3O),55.3(CH3O),32.0(CH2‑CH2‑C(CH3)2),30.9(CH2CH2Br),29.6(CH2Br),26.6(2C,C
(CH3)2),16.6(CH2‑CH2‑C(CH3)2).HRMS(TOF):calculated for C25H27BrO6:504.38,Found:
505.25[M+1].
小时。冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的
有机层经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4f(53％)，为淡黄色固体，熔点
1
M.p.180.2‑185.5℃.Rf＝0.31(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.06(d,J＝8.9Hz,
2H,Ar‑H),6.99(d,J＝8.9Hz,2H,Ar‑H),6.24(s,1H,Ar‑H),4.14(t,J＝5.6Hz,2H,OCH2),
3.86(s,3H,OCH3),3.80(s,3H,OCH3),3.69(d,J＝7.0Hz,2H,CH2Br),2.86(t,J＝6.7Hz,2H,
CH2‑CH2‑C(CH3)2),2.40(p,J＝5.9Hz,2H,CH2CH2Br),1.86(t,J＝6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C
13
(CH3)2),1.36(s,6H,(CH3)2). C NMR(101MHz,CDCl3)δ＝174.2(C＝O),161.0(C＝C),158.1
(2C,C＝C),155.6(C＝C),152.2(C＝C),151.2(C＝C),141.0(C＝C),129.6(2C,C＝C),
123.6(C＝C),113.9(2C,C＝C),101.3(C＝C),97.7(C＝C),75.9(C(CH3)2),66.3(OCH2),
59.8(CH3O),55.3(CH3O),32.0(CH2‑CH2‑C(CH3)2),30.9(CH2CH2Br),29.6(CH2Br),26.6(2C,C
(CH3)2),16.6(CH2‑CH2‑C(CH3)2).HRMS(TOF):calculated for C25H27BrO6:504.38,Found:
505.25[M+1].
[0041] (7)化合物4g(R＝‑CH2CH2CH2CH2Br)的制备
[0042]
[0043] 化合物3(50mg，0.136mmol)和K2CO3(放置于丙酮(2ml)中的38mg，2equ.)在室温下搅拌10分钟。在10分钟内向悬浮液中逐滴加入1,2‑二溴丁烷(2equ.)。将反应加热至回流6
小时。冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的
有机层经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4g(78％)，为白色固体，熔点
1
M.p.139.4‑142.6℃.Rf＝0.41(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.07(d,J＝8.9Hz,
2H,Ar‑H),6.99(d,J＝8.9Hz,2H,Ar‑H),6.21(s,1H,Ar‑H),4.04(t,J＝5.9Hz,2H,OCH2),
3.86(s,3H,OCH3),3.81(s,3H,OCH3),3.53(t,J＝6.4Hz,2H,CH2Br),2.86(t,J＝6.7Hz,2H,
CH2‑CH2‑C(CH3)2),2.22–2.15(m,2H,CH2CH2Br),2.09–2.02(m,2H,CH2CH2O),1.86(t,J＝
13
6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.36(s,6H,(CH3)2). C NMR(101MHz,CDCl3)δ＝174.2(C＝O),
160.1(C＝C),158.2(C＝C),158.1(C＝C),155.7(C＝C),152.1(C＝C),141.0(C＝C),129.6
(2C,C＝C),123.6(C＝C),113.9(2C,C＝C),109.0(C＝C),101.1(C＝C),97.5(C＝C),75.9
(C(CH3)2),67.9(OCH2),59.9(CH3O),55.4(CH3O),34.3(CH2Br),31.8(CH2‑CH2‑C(CH3)2),
29.2(CH2CH2Br),27.4(CH2CH2O),26.6(2C,C(CH3)2),16.6(CH2‑CH2‑C(CH3)2).HRMS(TOF):
calculated for C26H29BrO6:518.41,Found:519.12[M+1].
小时。冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的
有机层经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4g(78％)，为白色固体，熔点
1
M.p.139.4‑142.6℃.Rf＝0.41(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.07(d,J＝8.9Hz,
2H,Ar‑H),6.99(d,J＝8.9Hz,2H,Ar‑H),6.21(s,1H,Ar‑H),4.04(t,J＝5.9Hz,2H,OCH2),
3.86(s,3H,OCH3),3.81(s,3H,OCH3),3.53(t,J＝6.4Hz,2H,CH2Br),2.86(t,J＝6.7Hz,2H,
CH2‑CH2‑C(CH3)2),2.22–2.15(m,2H,CH2CH2Br),2.09–2.02(m,2H,CH2CH2O),1.86(t,J＝
13
6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.36(s,6H,(CH3)2). C NMR(101MHz,CDCl3)δ＝174.2(C＝O),
160.1(C＝C),158.2(C＝C),158.1(C＝C),155.7(C＝C),152.1(C＝C),141.0(C＝C),129.6
(2C,C＝C),123.6(C＝C),113.9(2C,C＝C),109.0(C＝C),101.1(C＝C),97.5(C＝C),75.9
(C(CH3)2),67.9(OCH2),59.9(CH3O),55.4(CH3O),34.3(CH2Br),31.8(CH2‑CH2‑C(CH3)2),
29.2(CH2CH2Br),27.4(CH2CH2O),26.6(2C,C(CH3)2),16.6(CH2‑CH2‑C(CH3)2).HRMS(TOF):
calculated for C26H29BrO6:518.41,Found:519.12[M+1].
[0044] (8)化合物4h(R＝allyl)的制备
[0045]
[0046] 化合物3(50mg，0.136mmol)和K2CO3(放置于丙酮(2ml)中的38mg，2equ.)在室温下搅拌10分钟。在10分钟内向悬浮液中逐滴加入烯丙基溴(2equ.)。将反应加热至回流6小时。
冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层
经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4h(76％)，为白色固体，熔点M.p.167.0～
1
169.8℃.Rf＝0.25(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.07(d,J＝9.1Hz,2H,Ar‑H),
6.98(d,J＝9.1Hz,2H,Ar‑H),6.22(s,1H,Ar‑H),6.09(ddd,J＝21.9,10.5,4.7Hz,1H,CH2＝
CH),5.67(dd,J＝17.3,1.6Hz,1H,CH2＝CH),5.31(dd,J＝10.6,1.6Hz,1H,CH2＝CH),4.60
(d,J＝4.7Hz,2H,OCH2),3.86(s,3H,OCH3),3.83(s,3H,OCH3),2.86(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑
13
CH2‑C(CH3)2),1.85(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.35(s,6H,(CH3)2). C NMR
(101MHz,CDCl3)δ＝174.2(C＝O),161.0,158.2(C＝C),157.8(C＝C),155.7(C＝C),152.0
(C＝C),141.9(C＝C),141.0(C＝C),132.4(C＝C),129.6(2C,C＝C),123.7(C＝C),117.6(C
＝C),113.9(2C,C＝C),101.2(C＝C),98.0(C＝C),75.9(C(CH3)2),69.6(OCH2),59.9
(CH3O),55.3(CH3O),31.9(CH2‑CH2‑C(CH3)2),26.6(2C,C(CH3)2),16.6(CH2‑CH2‑C(CH3)2)
.HRMS(TOF):calculated for C25H26O6:422.47,Found:423.20[M+1].
冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层
经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4h(76％)，为白色固体，熔点M.p.167.0～
1
169.8℃.Rf＝0.25(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.07(d,J＝9.1Hz,2H,Ar‑H),
6.98(d,J＝9.1Hz,2H,Ar‑H),6.22(s,1H,Ar‑H),6.09(ddd,J＝21.9,10.5,4.7Hz,1H,CH2＝
CH),5.67(dd,J＝17.3,1.6Hz,1H,CH2＝CH),5.31(dd,J＝10.6,1.6Hz,1H,CH2＝CH),4.60
(d,J＝4.7Hz,2H,OCH2),3.86(s,3H,OCH3),3.83(s,3H,OCH3),2.86(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑
13
CH2‑C(CH3)2),1.85(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.35(s,6H,(CH3)2). C NMR
(101MHz,CDCl3)δ＝174.2(C＝O),161.0,158.2(C＝C),157.8(C＝C),155.7(C＝C),152.0
(C＝C),141.9(C＝C),141.0(C＝C),132.4(C＝C),129.6(2C,C＝C),123.7(C＝C),117.6(C
＝C),113.9(2C,C＝C),101.2(C＝C),98.0(C＝C),75.9(C(CH3)2),69.6(OCH2),59.9
(CH3O),55.3(CH3O),31.9(CH2‑CH2‑C(CH3)2),26.6(2C,C(CH3)2),16.6(CH2‑CH2‑C(CH3)2)
.HRMS(TOF):calculated for C25H26O6:422.47,Found:423.20[M+1].
[0047] (9)化合物4i(R＝炔丙基)的制备
[0048]
[0049] 化合物3(50mg，0.136mmol)和K2CO3(放置于丙酮(2ml)中的38mg，2equ.)在室温下搅拌10分钟。在10分钟内向悬浮液中逐滴加入炔丙基溴(2equ.)。将反应加热至回流6小时。
冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层
经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4i(45％)，为白色固体，熔点M.p.155.7‑
1
161.5℃.Rf＝0.16(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.06(d,J＝8.9Hz,2H,Ar‑H),
6.98(d,J＝8.9Hz,2H,Ar‑H),6.41(s,1H,Ar‑H),4.80(s,2H,OCH2),3.85(s,3H,OCH3),3.83
(s,3H,OCH3),2.87(t,J＝6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),2.51(t,J＝2.4Hz,1H,CH),1.86(t,J
13
＝6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.36(s,6H,(CH3)2). C NMR(101MHz,CDCl3)δ＝174.0(C＝
O),161.0(C＝C),158.0(C＝C),156.5(C＝C),155.6(C＝C),152.1(C＝C),141.0(C＝C),
129.6(2C,C＝C),123.5(C＝C),113.9(2C,C＝C),109.3(C＝C),102.3(C＝C),99.6(C＝C),
78.2(HC≡C‑),76.2(HC≡C‑),76.0(C(CH3)2),59.8(CH3O),57.1(OCH2),55.4(CH3O),31.8
(CH2‑CH2‑C(CH3)2),26.6(2C,C(CH3)2),16.7(CH2‑CH2‑C(CH3)2).HRMS(TOF):calculated
for C25H24O6:420.45,Found:421.18[M+1].
冷却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层
经MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4i(45％)，为白色固体，熔点M.p.155.7‑
1
161.5℃.Rf＝0.16(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.06(d,J＝8.9Hz,2H,Ar‑H),
6.98(d,J＝8.9Hz,2H,Ar‑H),6.41(s,1H,Ar‑H),4.80(s,2H,OCH2),3.85(s,3H,OCH3),3.83
(s,3H,OCH3),2.87(t,J＝6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),2.51(t,J＝2.4Hz,1H,CH),1.86(t,J
13
＝6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.36(s,6H,(CH3)2). C NMR(101MHz,CDCl3)δ＝174.0(C＝
O),161.0(C＝C),158.0(C＝C),156.5(C＝C),155.6(C＝C),152.1(C＝C),141.0(C＝C),
129.6(2C,C＝C),123.5(C＝C),113.9(2C,C＝C),109.3(C＝C),102.3(C＝C),99.6(C＝C),
78.2(HC≡C‑),76.2(HC≡C‑),76.0(C(CH3)2),59.8(CH3O),57.1(OCH2),55.4(CH3O),31.8
(CH2‑CH2‑C(CH3)2),26.6(2C,C(CH3)2),16.7(CH2‑CH2‑C(CH3)2).HRMS(TOF):calculated
for C25H24O6:420.45,Found:421.18[M+1].
[0050] (10)化合物4j(R＝苄基)的制备
[0051]
[0052] 化合物3(50mg，0.136mmol)和K2CO3(放置于丙酮(2ml)中的38mg，2equ.)在室温下搅拌10分钟。在10分钟内向悬浮液中逐滴加入苄基溴(2equ.)。将反应加热至回流6小时。冷
却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层经
MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4j(63％)，为白色固体，熔点M.p.200.1‑203.5
1
℃.Rf＝0.34(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.08(d,J＝9.0Hz,2H,Ar‑H),7.62
(d,J＝7.4Hz,2H,Ar‑H),7.37(t,J＝7.5Hz,2H,Ar‑H),7.27(d,J＝7.1Hz,1H,Ar‑H),6.99
(d,J＝9.1Hz,2H,Ar‑H),6.29(s,1H,Ar‑H),5.18(s,2H,OCH2),3.86(s,3H,OCH3),3.84(s,
3H,OCH3),2.86(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.85(t,J＝6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C
13
(CH3)2),1.35(s,3H,CH3),1.33(s,3H,CH3). C NMR(101MHz,CDCl3)δ＝174.2(C＝O),161.0
(C＝C),158.1(C＝C),157.7(C＝C),155.7(C＝C),152.1(C＝C),141.1(C＝C),136.7(C＝
C),129.6(2C,C＝C),128.5(2C,C＝C),127.4(C＝C),126.5(2C,C＝C),123.6(C＝C),113.9
(2C,C＝C),109.2(C＝C),101.4(C＝C),98.2(C＝C),75.9(C(CH3)2),70.5(OCH2),59.9
(CH3O),55.4(CH3O),31.8(CH2‑CH2‑C(CH3)2),26.6(2C,C(CH3)2),16.6(CH2‑CH2‑C(CH3)2)
.HRMS(TOF):calculated for C29H28O6:472.53,Found:473.20[M+1].
却至室温后，在减压下将溶剂完全蒸发。将残余物在二氯甲烷和水中稀释。分离的有机层经
MgSO4干燥。减压完全蒸发溶剂，得到化合物4j(63％)，为白色固体，熔点M.p.200.1‑203.5
1
℃.Rf＝0.34(PE:EA＝3:1).H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.08(d,J＝9.0Hz,2H,Ar‑H),7.62
(d,J＝7.4Hz,2H,Ar‑H),7.37(t,J＝7.5Hz,2H,Ar‑H),7.27(d,J＝7.1Hz,1H,Ar‑H),6.99
(d,J＝9.1Hz,2H,Ar‑H),6.29(s,1H,Ar‑H),5.18(s,2H,OCH2),3.86(s,3H,OCH3),3.84(s,
3H,OCH3),2.86(t,J＝6.8Hz,2H,CH2‑CH2‑C(CH3)2),1.85(t,J＝6.7Hz,2H,CH2‑CH2‑C
13
(CH3)2),1.35(s,3H,CH3),1.33(s,3H,CH3). C NMR(101MHz,CDCl3)δ＝174.2(C＝O),161.0
(C＝C),158.1(C＝C),157.7(C＝C),155.7(C＝C),152.1(C＝C),141.1(C＝C),136.7(C＝
C),129.6(2C,C＝C),128.5(2C,C＝C),127.4(C＝C),126.5(2C,C＝C),123.6(C＝C),113.9
(2C,C＝C),109.2(C＝C),101.4(C＝C),98.2(C＝C),75.9(C(CH3)2),70.5(OCH2),59.9
(CH3O),55.4(CH3O),31.8(CH2‑CH2‑C(CH3)2),26.6(2C,C(CH3)2),16.6(CH2‑CH2‑C(CH3)2)
.HRMS(TOF):calculated for C29H28O6:472.53,Found:473.20[M+1].
[0053] 实施例4、新型5‑取代淫羊藿素衍生物5的活性测试
[0054] 细胞株和溶剂
[0055] 人肝癌细胞HEPG2；
[0056] 人结肠癌细胞SW480；
[0057] 人肺癌细胞A549；
[0058] 人乳腺癌细胞MCF7；
[0059] 细胞培养于含10％胎牛血清的RPMI 1640中培养基；
[0060] 溶剂：二甲亚砜(简称为DMSO)。
[0061] CCK‑8染色法检测细胞抗肿瘤活性实施方案
[0062] 选用待测肿瘤活细胞比例达90％以上的细胞进行实验。细胞增殖抑制试验采用TM
EnoGeneCell Counting Kit‑8(简称为CCK‑8)细胞活力检测试剂盒。细胞消化、计数、制成
浓度为1×105个/mL的细胞悬液，96孔板中每孔加入100μL细胞悬液(每孔1×104个细胞)；
96孔板置于37℃，5％CO2培养箱中培养24小时；每孔加入100μL相应的含药物的培养基，作
用浓度为50μMol/L(即：微摩尔/升)，同时设立阴性对照组，溶媒对照组，阳性对照组(阳性
对照分别选用淫羊藿素和喜树碱)，每组5复孔；96孔板置于37℃，5％CO2培养箱中培养72小
时后；每孔加入10μL CCK‑8溶液，将培养板在培养箱内孵育4小时，用酶标仪测定在450nm处
的吸光值(简称OD值)，计算各个化合物对人肝癌细胞HEPG2、人结肠癌细胞SW480、人肺癌细
胞A549以及人乳腺癌细胞MCF7的抑制率。
EnoGeneCell Counting Kit‑8(简称为CCK‑8)细胞活力检测试剂盒。细胞消化、计数、制成
浓度为1×105个/mL的细胞悬液，96孔板中每孔加入100μL细胞悬液(每孔1×104个细胞)；
96孔板置于37℃，5％CO2培养箱中培养24小时；每孔加入100μL相应的含药物的培养基，作
用浓度为50μMol/L(即：微摩尔/升)，同时设立阴性对照组，溶媒对照组，阳性对照组(阳性
对照分别选用淫羊藿素和喜树碱)，每组5复孔；96孔板置于37℃，5％CO2培养箱中培养72小
时后；每孔加入10μL CCK‑8溶液，将培养板在培养箱内孵育4小时，用酶标仪测定在450nm处
的吸光值(简称OD值)，计算各个化合物对人肝癌细胞HEPG2、人结肠癌细胞SW480、人肺癌细
胞A549以及人乳腺癌细胞MCF7的抑制率。
[0063] 实验结果详见表1‑3。
[0064] 表1淫羊藿素衍生物4a‑j的肿瘤抑制率(％)
[0065]
[0066]
[0067] 表1的实验结果看出，本发明5‑取代淫羊藿素衍生物4具有很好体外抗肿瘤活性，50μMol/L作用浓度对于人肝癌细胞HEPG2、人结肠癌细胞SW480、人肺癌细胞A549以及人乳
腺癌细胞MCF7的体外抑制率高达57％‑72％，与阳性对照药物淫羊藿素和喜树碱的抑制活
性相当；可作为新型淫羊藿黄酮类候选药物应用于抗肿瘤临床应用。
腺癌细胞MCF7的体外抑制率高达57％‑72％，与阳性对照药物淫羊藿素和喜树碱的抑制活
性相当；可作为新型淫羊藿黄酮类候选药物应用于抗肿瘤临床应用。