23-降乌苏烷三萜化合物及其制备方法和在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用转让专利
申请号 : CN202010941053.9
文献号 : CN112028963B
文献日 : 2021-04-20
发明人 : 徐巧林 , 谭建文 , 曾雷 , 王颂
申请人 : 广东省林业科学研究院
摘要 :
权利要求 :
1.23‑降乌苏烷三萜化合物在制备α‑糖苷酶抑制剂中的应用;所述的23‑降乌苏烷三萜化合物,其结构如式(Ⅰ)所示:式(Ⅰ)。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的α‑糖苷酶抑制剂是治疗II型糖尿病的药物。
3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于:所述α‑糖苷酶抑制剂,其剂型为可湿性粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、滴丸、控释或缓释剂型、或纳米制剂。
4.一种23‑降乌苏烷三萜化合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:a、制备总浸膏:将采集的三叶木通的果实材料粉碎,然后用乙醇或丙酮的水溶液浸提,提取液浓缩去除有机溶剂后得到总提物,将总提物悬浮于水中,用石油醚或乙酸乙酯萃取,萃取物浓缩后得到总浸膏;
b、分离纯化:总浸膏经正相硅胶柱层析,以石油醚/丙酮为洗脱剂,依次从体积比100:
0, 8:1,5:1,3:1,2:1,0:100梯度洗脱,收集石油醚/丙酮5:1洗脱下来的馏分E3,再经正相硅胶柱层析,以石油醚/丙酮依次从体积比10:1,8:1,6:1,4:1,2:1,0:100为流动相梯度洗脱,收集石油醚/丙酮6:1洗脱的馏分E3‑3,再经Sephadex LH‑20凝胶柱分离纯化,以丙酮洗脱,经重结晶,得到23‑降乌苏烷三萜化合物;
所述的23‑降乌苏烷三萜化合物,其结构如式(Ⅰ)所示:式(Ⅰ)。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的乙醇或丙酮的水溶液为体积分数大于等于70%的乙醇或丙酮的水溶液。
6.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的再经Sephadex LH‑20凝胶柱分离纯化,以丙酮洗脱,经重结晶是再经Sephadex LH‑20凝胶柱分离纯化,以丙酮洗脱,收集以氯仿/甲醇9:0.25 v/v为展开剂进行正相TLC检测,并以体积分数10%硫酸‑乙醇喷洒加热显色,主成分呈现Rf=0.8的紫红色斑点的馏分,该馏分再以甲醇为溶剂进行重结晶。
7.三叶木通的果实在制备23‑降乌苏烷三萜化合物中的应用;
所述的23‑降乌苏烷三萜化合物,其结构如式(Ⅰ)所示:式(Ⅰ)。
说明书 :
23‑降乌苏烷三萜化合物及其制备方法和在制备糖苷酶抑制
剂药物中的应用
技术领域:
在制备糖苷酶抑制剂或药物中的应用。
背景技术:
前全球范围内糖尿病的发病率正在提高,在我国更是有超过1亿人的患病率,并呈现逐年增
加的趋势。糖尿病正给我国人民健康和国民经济造成越来越重大的损失。
α‑糖苷酶抑制剂具有推迟糖类物质消化吸收、控制饭后血糖急剧升高、进而使血糖浓度在
一天内变化波动幅度减小等功能,是可开发用于治疗Ⅱ型糖尿病的潜在药物。目前已开发
上市正临床试用作治疗Ⅱ型糖尿病的重要α‑糖苷酶抑制剂包括一线用药acarbose(阿卡波
糖)、voglibose和miglitol等,其能够有效控制糖尿病,降低血糖,但却均有明显的包括引
起胃肠功能的紊乱等副作用(比如胃胀,腹胀,腹泻,腹痛等症),偶尔有患者还会出现过敏
等反应,严重的可能出现过敏性休克。因而开发高效和副作用小的新的α‑糖苷酶抑制剂类
降糖药物具有现实广泛需求。
发明内容:
酶抑制剂药物中的应用。
物。材料可以是干品或鲜品,优选植物的果实干品。
萃取,萃取物浓缩后得到总浸膏;
相硅胶柱层析,以石油醚/丙酮依次从体积比10:1,8:1,6:1,4:1,2:1,0:100为流动相梯度
洗脱,收集石油醚/丙酮6:1洗脱的馏分E3‑3,再经Sephadex LH‑20凝胶柱分离纯化,以丙酮
洗脱,收集以氯仿/甲醇9:0.25v/v为展开剂进行正相TLC检测,并以10%硫酸‑乙醇喷洒加
热显色,主成分呈现Rf=0.8的紫红色斑点的馏分,该馏分再以甲醇为溶剂进行重结晶,得
到式(Ⅰ)的所示的2‑羟基‑3‑羰基‑23‑降乌苏烷‑1,4,12‑三烯‑28‑酸。
尿病一线用药阿卡波糖以及结构类似的对照化合物,因此可望发展制备用于预防和治疗α‑
糖苷酶引起或有关的生理改变或疾病的潜在药物候选分子。其中,与α‑糖苷酶引起或有关
的生理改变或疾病包括但不限于Ⅱ型糖尿病。
制α‑葡萄糖苷酶的活性成分与以上所示的六种三萜化合物分子相同,因而属于本发明的严
格保护范围。
活性的可用于预防和治疗Ⅱ型糖尿病的药物或药物组合物。该药物或药物组合物可采用可
湿性粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、滴丸等剂型,还可采用制药界公知的控释或缓释剂
型或纳米制剂。
以本发明所述的新化合物2‑羟基‑3‑羰基‑23‑降乌苏烷‑1,4,12‑三烯‑28‑酸为实质性有效
成分,因而属于本发明的保护范围范畴。
高并在环境中能快速自然降解无残留的天然化合物,植物材料来源丰富,制备过程易于操
作。所述的新化合物2‑羟基‑3‑羰基‑23‑降乌苏烷‑1,4,12‑三烯‑28‑酸的单体较稳定、易存
放,其α‑糖苷酶抑制活性显著强于临床用药阿卡波糖以及对照的结构类似三萜化合物,极
可能进一步发展为有效、安全的预防和治疗Ⅱ型糖尿病的α‑糖苷酶抑制剂类药物,具有较
好前景。
附图说明:
具体实施方式
中,然后用等体积的石油醚提取,萃取液经减压浓缩得到石油醚总浸膏(31g)。将石油醚总
浸膏用体积比1:1的氯仿/甲醇(100mL)进行溶解,加入正相硅胶(80‑100目)以重量比1:1.5
拌样挥干,干法装柱(200‑300目,800克),干法上样,依次用石油醚/丙酮=100:0、8:1、5:1、
3:1、2:1、0:100v/v为流动相梯度洗脱,根据薄层板检测,各流份按照极性的差别从小到大
依次收集得到组份E1–E6;将E3(石油醚/丙酮5:1v/v洗脱部分)再经正相硅胶柱层析(200‑
300目,50g克)分离纯化,以石油醚/丙酮=100:0、8:1、6:1、4:1、2:1、0:100v/v为流动相梯
度洗脱(每个梯度洗脱330ml,每15ml收集为一个组份),根据正相薄层板检测收集并恰当合
并洗脱液,得到6个组份E3‑1‑E3‑6;E3‑3(石油醚/丙酮6:1洗脱部分)经Sephadex LH‑20凝
胶柱(acetone)分离纯化,根据薄层板检测,收集洗脱液,得到7个组份E3‑3‑1—E3‑3‑7,组
分E3‑3‑6(该组分以氯仿/甲醇9:0.25v/v为展开剂进行正相TLC检测,并以10%硫酸‑乙醇
喷洒加热显色,主成分呈现Rf=0.8的紫红色斑点)再以甲醇为溶剂进行重结晶,得到无色
(白色)粉末状化合物2‑羟基‑3‑羰基‑23降乌苏烷‑1,4,12‑三烯‑28‑酸(4mg)。
+
HRESIMS(pos.)m/z 475.2816(calcd for C29H40NaO4,475.2819);ESIMS(+)m/z 475[M+Na] ,
+ ‑ 1 13
927[2M+Na] ;ESIMS(‑)m/z 487[M+Cl] .H NMR(600MHz,MeOD)和 C NMR(150MHz,MeOD)数
据如表1所示:
α‑D‑葡萄糖吡喃苷(PNPG)购自Tokyo Chemical Industry Co.,Ltd.(Japan);新化合物2‑
羟基‑3‑羰基‑23‑降乌苏烷‑1,4,12‑三烯‑28‑酸(即化合物1)由以上实验例1的方法制备,
结构类似的对照三萜化合物2α,3β‑dihydroxy‑23‑oxo‑30‑norolean‑12,20(29)‑dien‑28‑
oic acid(即化合物2)和2α,3β,29‑trihydroxyolean‑12‑en‑28‑oic acid(即化合物3)由
我们早期对三叶木通的研究中分离获得(M olecules,2014,19(4):4301‑4312;Food
Chem.,2015,168:623‑629)。
制)和0.2M的NaCO3溶液(磷酸缓冲液配制)。
稀释,每孔加入样品溶液120μl,使测试样品(包含待测化合物或阿卡波糖)的最终浓度为:
500μg/mL,250μg/mL,125μg/mL,62.5μg/mL,31.25μg/mL,15.625μg/mL,最后再加入反应底
物4‑硝基酚‑α‑D‑吡喃葡萄糖苷20μl(5mM)。37℃水浴反应15min后,每个样品孔中加入80μl
的Na2CO3(0.2M)终止反应,在405nm波长处比色测定,每个试验3个重复。相同体积的磷酸缓
冲液代替酶溶液。化合物抑制率由样品OD值对于空白和对照OD值计算,计算公式如下:抑制
率(%)=(ODcontrol–ODneg)‑(ODtest–ODtest control)/(ODcontrol–ODneg)×100%。其中所测试六种
化合物分别对α‑葡萄糖苷酶的半数抑制浓度(IC50)由剂量效应曲线得到。
dien‑28‑oic acid,对照化合物3为2α,3β,29‑trihydroxyolean‑12‑en‑28‑oic acid。
具有显著强于糖尿病一线用药阿卡波糖抑制α‑葡萄糖苷酶的活性,其活性约为阿卡波糖的
27倍;另其相对于结构类似的对照三萜化合物3具有超14倍的抑制α‑葡萄糖苷酶的活性,而
另一结构类似的三萜化合物2则没有显示明显抑制α‑葡萄糖苷酶的活性(IC50>1mM)。上述实
验结果既呈现了此类三萜化合物小的结构变化便会对抑制α‑葡萄糖苷酶的活性有显著不
可预知的影响,同时也凸显出本发明的化合物1其结构对应其强活性的特定特殊性。另外本
发明的化合物1为自药食两用植物三叶木通中分离获得,安全性高,因此具备可发展制备用
于预防和治疗α‑糖苷酶引起或有关的生理改变或疾病的副作用小的潜在药物候选分子,具
有较强的应用开发潜质,可望能进一步发展成为新的预防和治疗Ⅱ型糖尿病的用药,应用
潜质广泛。