一种基因VII型新城疫标记疫苗株及其制备方法与应用转让专利
申请号 : CN202011036432.X
文献号 : CN112111467B
文献日 : 2021-06-22
发明人 : 卢琴 , 温国元 , 王国康 , 邵华斌 , 罗青平 , 商雨 , 王红琳 , 罗玲 , 张蓉蓉 , 汪宏才 , 张腾飞 , 张文婷
申请人 : 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
摘要 :
本发明公开了一种基因VII型新城疫标记疫苗株及其制备方法与应用。本发明利用反向遗传操作技术，以血清2型禽副粘病毒Y2株的全基因组转录质粒为骨架，将其F和HN基因的胞外域分别替换为基因VII型新城疫病毒株的F和HN基因的胞外域，通过病毒拯救，获得重组嵌合病毒。该疫苗株已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:202052。该嵌合病毒可以用于我国主要流行的基因VII新城疫的防控。同时，该嵌合病毒不含有新城疫病毒NP蛋白，其免疫鸡后不会产生针对新城疫病毒NP蛋白的抗体。以常规的新城疫病毒NP抗体ELISA检测方法对rY2‑HB疫苗株免疫鸡群进行抗体检测，可实现特异检测临床野毒株产生的NP抗体，排除疫苗毒株产生的抗体干扰，有利于新城疫的监测与净化。
权利要求 :
1.一种基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株，该毒株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：V202052。
2.如权利要求1所述的基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株在制备基因VII型新城疫标记疫苗方面的应用。
说明书 :
一种基因VII型新城疫标记疫苗株及其制备方法与应用
技术领域
[0001] 本发明属疫苗基因工程领域，具体涉及一种基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株及其制备方法。更具体地，本发明涉及到利用反向遗传操作技术，将血清2
型禽副粘病毒Y2株的F和HN基因胞外域分别替换为基因VII型新城疫病毒株的F和HN基因胞
外域，获得嵌合病毒rY2‑HB株，以及该毒株在基因VII新城疫标记疫苗方面的应用。
型禽副粘病毒Y2株的F和HN基因胞外域分别替换为基因VII型新城疫病毒株的F和HN基因胞
外域，获得嵌合病毒rY2‑HB株，以及该毒株在基因VII新城疫标记疫苗方面的应用。
背景技术
[0002] 新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒(NDV)引起禽的一种高度接触性传染病，严重危害全球养禽业。其典型症状为高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜
出血。我国ND的防控以疫苗免疫预防为主。LaSota、V4、Clone‑30等传统ND疫苗株在新城疫
防控中起到了重要作用。但由于近年来在我国流行的ND以基因VII型为主，与当前广泛使用
的LaSota株等疫苗在抗原匹配性方面存在明显的差异，以致临床带毒现象比较普遍。基因
VII型ND疫苗的成功研发为我国基因VII ND的防控提供了有利支撑。但此类疫苗在接种后
会对ND的血清学监测带来干扰，疫苗接种后动物体内会产生ND抗体，临床野毒感染后动物
体内同样会产生特异性抗体。常规的血清学方法，如血凝抑制、ELISA、胶体金等方法，都不
能很有效的区分疫苗免疫和临床野毒感染。因此，研发ND标记疫苗及配套鉴别诊断技术是
当前ND防控技术研究的重要方向。
出血。我国ND的防控以疫苗免疫预防为主。LaSota、V4、Clone‑30等传统ND疫苗株在新城疫
防控中起到了重要作用。但由于近年来在我国流行的ND以基因VII型为主，与当前广泛使用
的LaSota株等疫苗在抗原匹配性方面存在明显的差异，以致临床带毒现象比较普遍。基因
VII型ND疫苗的成功研发为我国基因VII ND的防控提供了有利支撑。但此类疫苗在接种后
会对ND的血清学监测带来干扰，疫苗接种后动物体内会产生ND抗体，临床野毒感染后动物
体内同样会产生特异性抗体。常规的血清学方法，如血凝抑制、ELISA、胶体金等方法，都不
能很有效的区分疫苗免疫和临床野毒感染。因此，研发ND标记疫苗及配套鉴别诊断技术是
当前ND防控技术研究的重要方向。
[0003] NDV属副黏病毒科、禽副粘病毒属。禽副粘病毒(Avian Paramyxovirus,APMV)的血清型有9个，APMV‑I～APMV‑IX，其中新城疫病毒是APMV‑I的唯一成员。APMV基因组按照3'‑
NP‑P‑M‑F‑HN‑L‑5'，依次编码6种结构蛋白，即核衣壳蛋白(nucleoprotein，NP)、磷蛋白
(phosphoprotein，P)、基质蛋白(matrix protein，M)、融合蛋白(fusion protein，F)、血凝
素‑神经氨酸酶蛋白(haemaggulatinin‑neuraminidase，HN)和大分子量聚合酶蛋白(Large
protein，L)。NP蛋白的基因编码区长度均为1467bp，编码489个氨基酸，相对分子质量为
56kDa。NP蛋白与P和L蛋白结合包裹基因组RNA形成一个螺旋的核糖核蛋白(RNP)复合体，参
与病毒基因转录和基因组复制。NP蛋白在APMV的各个血清型中高度保守，含量丰富，具有较
好的免疫原性，且NP蛋白抗体不具有病毒中和效果。因此，NP蛋白是设计ND标记疫苗的首选
靶标。
NP‑P‑M‑F‑HN‑L‑5'，依次编码6种结构蛋白，即核衣壳蛋白(nucleoprotein，NP)、磷蛋白
(phosphoprotein，P)、基质蛋白(matrix protein，M)、融合蛋白(fusion protein，F)、血凝
素‑神经氨酸酶蛋白(haemaggulatinin‑neuraminidase，HN)和大分子量聚合酶蛋白(Large
protein，L)。NP蛋白的基因编码区长度均为1467bp，编码489个氨基酸，相对分子质量为
56kDa。NP蛋白与P和L蛋白结合包裹基因组RNA形成一个螺旋的核糖核蛋白(RNP)复合体，参
与病毒基因转录和基因组复制。NP蛋白在APMV的各个血清型中高度保守，含量丰富，具有较
好的免疫原性，且NP蛋白抗体不具有病毒中和效果。因此，NP蛋白是设计ND标记疫苗的首选
靶标。
[0004] NDV反向遗传学的快速发展使得对NDV进行点突变修饰、插入外源基因、基因片段互换等基因操作成为可能。关于新城疫标记疫苗和反向遗传操作技术的文献有一定的报
道，但均未涉及到通过基因替换的方法研发新城疫标记疫苗的报道。
道，但均未涉及到通过基因替换的方法研发新城疫标记疫苗的报道。
发明内容
[0005] 本发明为解决上述技术问题提供一种基因VII型新城疫标记疫苗株及其制备方法与应用。
[0006] 为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
[0007] 一种基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株，该毒株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：V202052，保
藏时间为8月28日。
藏时间为8月28日。
[0008] 优选地，所述血清2型禽副粘病毒Y2株的转录质粒的构建方法包括以下步骤：a.对12株禽副黏病毒2型的全基因组序列进行比对分析，选取较为保守的F8株为模板，将该毒株
基因组中10处特有的核苷酸位点突变为其他毒株共有的一致序列，获得一株新的禽副粘病
毒Y2株的全基因组序列；b.通过基因合成和克隆的方法，获得Y2株的全基因组转录质粒。
基因组中10处特有的核苷酸位点突变为其他毒株共有的一致序列，获得一株新的禽副粘病
毒Y2株的全基因组序列；b.通过基因合成和克隆的方法，获得Y2株的全基因组转录质粒。
[0009] 优选地，所述12株禽副黏病毒2型为在GenBank中下载，登录号分别为KT071756、KT071757、KT071755、HQ896023、HQ896024、EU338414、HM159993、HM159994、HM159995、
LC187305、LC187306和NC_039230。
LC187305、LC187306和NC_039230。
[0010] 优选地，F8株特有的10处氨基酸突变具体为T1440C，C2142T，T2709C，C5552T，A6397G，A6868G，G7768T，A11753C，G14409A，T14480C。
[0011] 优选地，所述的禽副粘病毒2型Y2株的全基因组基因序列为SEQ ID NO：1。
[0012] 所述的基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株在基因VII型新城疫标记疫苗方面的应用。
[0013] 优选地，利用新城疫病毒NP抗体ELISA检测试剂盒对所述VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株免疫鸡群后进行抗体检测。
[0014] 本发明的有益效果是：
[0015] 1)本发明以血清2型禽副粘病毒Y2株的全基因组转录质粒为基础，将其F和HN基因的胞外域分别替换为基因VII型新城疫病毒HB0901株的F和HN基因胞外域，通过病毒拯救，
获得基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株。由于该毒株含有基因VII型新城
疫病毒HB0901株的F和HN基因胞外域，这两个区域为新城疫病毒的关键免疫保护区域。因
此，该疫苗株可以用于预防基因VII型新城疫。
获得基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株。由于该毒株含有基因VII型新城
疫病毒HB0901株的F和HN基因胞外域，这两个区域为新城疫病毒的关键免疫保护区域。因
此，该疫苗株可以用于预防基因VII型新城疫。
[0016] 2)与其他传统疫苗株相比，rY2‑HB株不含有新城疫病毒NP蛋白，其免疫鸡后不会产生针对新城疫病毒NP蛋白的抗体。利用新城疫病毒NP抗体ELISA检测试剂盒对rY2‑HB株
免疫鸡群进行抗体检测，可特异检测出临床野毒株产生的NP抗体，排除rY2‑HB疫苗株免疫
产生的抗体干扰。因此，rY2‑HB株可作为基因VII新城疫标记疫苗，实现疫苗免疫与野毒感
染的鉴别诊断，可用于临床新城疫的监测与净化。
免疫鸡群进行抗体检测，可特异检测出临床野毒株产生的NP抗体，排除rY2‑HB疫苗株免疫
产生的抗体干扰。因此，rY2‑HB株可作为基因VII新城疫标记疫苗，实现疫苗免疫与野毒感
染的鉴别诊断，可用于临床新城疫的监测与净化。
附图说明
[0017] 图1是Y2株的全基因组转录质粒pY2的BamHI酶切鉴定结果。
[0018] 图2是辅助质粒pVAX‑NP和pVAX‑P的HindIII酶切鉴定结果。
[0019] 图3是辅助质粒pcDNA‑L的SalI酶切鉴定结果。
[0020] 图4是基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株的基因组结构示意图。
[0021] 图5是全基因组转录质粒pY2‑HB的HindIII酶切鉴定结果。
具体实施方式
[0022] 以下结合附图和实施例进一步对本发明进行说明，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
[0023] 本发明提供一种基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株，该毒株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：
202052，保藏日期为2020年8月28日。
202052，保藏日期为2020年8月28日。
[0024] 所述基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株是以血清2型禽副粘病毒Y2株为母本株，将其F和HN基因的胞外域分别替换为基因VII型新城疫病毒株的F和HN基
因胞外域，得到所述的rY2‑HB株。本发明选用的是HB0901株，可以理解的是，还可以为ZJ1
株、NA‑1株或其他基因VII型新城疫病毒株。
因胞外域，得到所述的rY2‑HB株。本发明选用的是HB0901株，可以理解的是，还可以为ZJ1
株、NA‑1株或其他基因VII型新城疫病毒株。
[0025] 本发明还提供所述的基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株的制备方法，包括以下步骤：a.构建血清2型禽副粘病毒Y2株的转录质粒；b.将所述Y2株转录质粒
中F和HN基因的胞外域分别替换为基因VII型新城疫病毒HB0901株的F和HN基因胞外域；c.
将胞外域替换后的转录质粒与三个辅助质粒共同转染宿主细胞，获得基因VII型新城疫标
记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株。所述的禽副粘病毒2型Y2株的全基因组基因序列为SEQ
ID NO：1。
中F和HN基因的胞外域分别替换为基因VII型新城疫病毒HB0901株的F和HN基因胞外域；c.
将胞外域替换后的转录质粒与三个辅助质粒共同转染宿主细胞，获得基因VII型新城疫标
记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株。所述的禽副粘病毒2型Y2株的全基因组基因序列为SEQ
ID NO：1。
[0026] 本发明还提供所述的基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2‑HB株在基因VII型新城疫标记疫苗方面的应用。
[0027] 下面以具体实施例进行说明。
[0028] 实施例1禽副粘病毒2型(APMV‑2)Y2株的全基因组转录质粒构建
[0029] 在GenBank中下载12株禽副粘病毒2型的全基因组序列，登录号分别为KT071756、KT071757、KT071755、HQ896023、HQ896024、EU338414、HM159993、HM159994、HM159995、
LC187305、LC187306和NC039230。对这些序列进行核苷酸序列比对分析后，选取较为保守的
F8株(HQ896023)为模板，将该毒株基因组中特有的10处氨基酸突变为其他毒株共有的一致
序列(T1440C，C2142T，T2709C，C5552T，A6397G，A6868G，G7768T，A11753C，G14409A，T14480C)，获得一株新的
副粘病毒Y2株的全基因组序列。通过基因合成和克隆的方法，构建获得Y2株的全基因组质
粒。该质粒包含了Y2株的全基因组序列、T7 RNA聚合酶启动子序列、T7 RNA聚合酶终止子序
列、丁型肝炎病毒核酶序列和低拷贝质粒序列等，其主要功能是转录表达并准确切割出Y2
株的全基因组RNA序列。其具体构建策略为：首先将全基因组序列共分为编号从A到I的9个
小片段，进行人工合成。其中在A片段的上游加入了T7启动子，I片段的下游加入了丁型肝炎
病毒核酶序列和T7终止子。通过Overlap PCR将9个小片段按顺序组合成3个中片段，通过
In‑fusion PCR克隆的方式，将3个中片段依次连入克隆质粒中，获得转录质粒pY2。
LC187305、LC187306和NC039230。对这些序列进行核苷酸序列比对分析后，选取较为保守的
F8株(HQ896023)为模板，将该毒株基因组中特有的10处氨基酸突变为其他毒株共有的一致
序列(T1440C，C2142T，T2709C，C5552T，A6397G，A6868G，G7768T，A11753C，G14409A，T14480C)，获得一株新的
副粘病毒Y2株的全基因组序列。通过基因合成和克隆的方法，构建获得Y2株的全基因组质
粒。该质粒包含了Y2株的全基因组序列、T7 RNA聚合酶启动子序列、T7 RNA聚合酶终止子序
列、丁型肝炎病毒核酶序列和低拷贝质粒序列等，其主要功能是转录表达并准确切割出Y2
株的全基因组RNA序列。其具体构建策略为：首先将全基因组序列共分为编号从A到I的9个
小片段，进行人工合成。其中在A片段的上游加入了T7启动子，I片段的下游加入了丁型肝炎
病毒核酶序列和T7终止子。通过Overlap PCR将9个小片段按顺序组合成3个中片段，通过
In‑fusion PCR克隆的方式，将3个中片段依次连入克隆质粒中，获得转录质粒pY2。
[0030] 1.1转录质粒的连接与鉴定
[0031] 将人工合成并鉴定正确的9个PCR片段分先后以overlap PCR克隆的方式按顺序组合成3个中片段。反向PCR的方式线性化载体，同时通过PCR在插入片段上加入同源臂，参照
In‑fusion克隆试剂盒的操作说明将3个中片段依次插入载体，最终获得质粒pY2。酶切结果
见图1。
In‑fusion克隆试剂盒的操作说明将3个中片段依次插入载体，最终获得质粒pY2。酶切结果
见图1。
[0032] 1.2辅助质粒的构建
[0033] 以转录质粒为PCR模板进行PCR扩增，分别得到核蛋白NP、磷蛋白P和大聚合酶蛋白L的3个基因全序列，以酶切连接的方式，将3个片段分别克隆至真核表达质粒。为增加蛋白
的表达量，在起始密码子前加入Kozak序列。对PCR检测为阳性的菌液进行质粒提取及酶切
鉴定。结果表明，所构建的三个辅助质粒pcDNA‑NP、pcDNA‑P和pcDNA‑L均正确，结果见图2、
图3。
的表达量，在起始密码子前加入Kozak序列。对PCR检测为阳性的菌液进行质粒提取及酶切
鉴定。结果表明，所构建的三个辅助质粒pcDNA‑NP、pcDNA‑P和pcDNA‑L均正确，结果见图2、
图3。
[0034] 实施例2rY2‑HB毒株的全基因组转录质粒构建与病毒拯救
[0035] 以重组质粒pY2为模板，通过In‑fusion的方法将Y2株的F和HN基因胞外域替换为NDV基因VII型HB0901株的F和HN基因胞外域。具体替换的位置如下：NDV HB0901株F基因的
胞外域(1‑1506nt)替换Y2株F基因的胞外域(1‑1455nt)，NDV HB0901株HN基因的胞外域
(139‑1713nt)替换Y2株HN基因的胞外域(130‑1740nt)。构建示意图见图4。具体构建方案如
下。
胞外域(1‑1506nt)替换Y2株F基因的胞外域(1‑1455nt)，NDV HB0901株HN基因的胞外域
(139‑1713nt)替换Y2株HN基因的胞外域(130‑1740nt)。构建示意图见图4。具体构建方案如
下。
[0036] 2.1新城疫病毒HB0901株F、HN基因胞外域的PCR扩增
[0037] 以新城疫病毒HB0901株鸡胚尿囊液为对象，参照试剂盒说明书进行病毒基因组RNA的提取，反转录为cDNA。以cDNA为模板，采用设计好的引物，PCR扩增出F、HN基因的胞外
域。琼脂糖凝胶电泳检测，将特异的阳性条带以DNA纯化试剂盒进行纯化回收，以相应的内
切酶进行酶切鉴定，鉴定正确的PCR片段保存于‑20度。
域。琼脂糖凝胶电泳检测，将特异的阳性条带以DNA纯化试剂盒进行纯化回收，以相应的内
切酶进行酶切鉴定，鉴定正确的PCR片段保存于‑20度。
[0038] 2.2新城疫病毒HB0901株F基因改造
[0039] 由于新城疫病毒HB0901株为强毒株，需要将HB0901病毒F蛋白裂解位点GRRQKR↓F突变为LaSota病毒的F蛋白裂解位点GGRQGR↓L。通过重叠PCR的方法将F裂解位点进行突变
改造。具体使用的引物为，上游引物：gggagacaaggacgccttATAGGTGCAGTTATTGGCAGTGTAG，下
游引物：aaggcgtccttgtctccctTCCTCCGGACGTGGATACAG。
改造。具体使用的引物为，上游引物：gggagacaaggacgccttATAGGTGCAGTTATTGGCAGTGTAG，下
游引物：aaggcgtccttgtctccctTCCTCCGGACGTGGATACAG。
[0040] 2.3重组质粒pY2‑HB的构建以及病毒rY2‑HB的拯救
[0041] 以重组质粒pY2为模板，通过In‑fusion的方法，用获得的HB0901株F和HN基因胞外域替换pY2质粒的相应区域。对阳性质粒进行酶切鉴定，结果见图5。将重组质粒pY2‑HB质粒
与三个辅助质粒共转染宿主细胞，收获细胞培养物并进行病毒鉴定，最终获得重组病毒
rY2‑HB。
与三个辅助质粒共转染宿主细胞，收获细胞培养物并进行病毒鉴定，最终获得重组病毒
rY2‑HB。
[0042] 实施例3新城疫病毒rY2‑HB株的安全性及免疫原性试验
[0043] 1日龄SPF鸡共20只，随机分成2组，分别为rY2‑HB组和PBS组(磷酸盐缓冲溶液)，进行隔离饲养。将rY2‑HB株病毒以滴鼻/点眼的方式对鸡进行免疫，免疫剂量0.1ml，浓度为
7.0
10 EID50/ml。对照组接种同样剂量的PBS。观察免疫鸡的健康状态。在免疫后2周采集血清
进行HI效价测定。同时以新城疫VII型HB0901株以滴鼻/点眼的方式对免疫鸡进行攻毒，攻
4.0
毒剂量为10 EID50/只。攻毒后，每天观察记录鸡的发病、死亡情况，持续观察2周，计算攻毒
保护率。试验结果如表1所示，免疫后两周内所有试验鸡均健康，未出现发病症状。免疫两周
后rY2‑HB组的NDV HI抗体水平为6.5log2，对照组没有HI抗体效价。免疫两周进行基因VII
型NDV强毒攻击，rY2‑HB组的存活率为100％，而对照PBS组则为0％。结果表明，rY2‑HB株病
毒免疫试验鸡安全、无毒副作用，且可100％抵抗基因VII型NDV强毒的攻击。
7.0
10 EID50/ml。对照组接种同样剂量的PBS。观察免疫鸡的健康状态。在免疫后2周采集血清
进行HI效价测定。同时以新城疫VII型HB0901株以滴鼻/点眼的方式对免疫鸡进行攻毒，攻
4.0
毒剂量为10 EID50/只。攻毒后，每天观察记录鸡的发病、死亡情况，持续观察2周，计算攻毒
保护率。试验结果如表1所示，免疫后两周内所有试验鸡均健康，未出现发病症状。免疫两周
后rY2‑HB组的NDV HI抗体水平为6.5log2，对照组没有HI抗体效价。免疫两周进行基因VII
型NDV强毒攻击，rY2‑HB组的存活率为100％，而对照PBS组则为0％。结果表明，rY2‑HB株病
毒免疫试验鸡安全、无毒副作用，且可100％抵抗基因VII型NDV强毒的攻击。
[0044] 表1.rY2‑HB株病毒的免疫及攻毒保护试验
[0045]
[0046] 实施例4新城疫病毒NP抗体ELISA检测方法的建立
[0047] 采用原核表达纯化的方法，获得了NDV的NP蛋白。将其作为包被抗原，通过反应条件的优化，建立了NDV间接ELISA抗体检测方法，对其敏感性、重复性、特异性进行了测定分
析。该方法的检测灵敏度是血凝抑制试验(HI)的50倍，与H9亚型禽流感病毒等其他禽源病
毒或细菌的阳性血清无交叉反应，组间重复性试验的变异系数小于6％。200份养殖场采集
的鸡血清检测结果表明，ELISA方法与HI试验的检测符合率为97％。表明该方法可用于临床
鸡血清的新城疫抗体检测。
析。该方法的检测灵敏度是血凝抑制试验(HI)的50倍，与H9亚型禽流感病毒等其他禽源病
毒或细菌的阳性血清无交叉反应，组间重复性试验的变异系数小于6％。200份养殖场采集
的鸡血清检测结果表明，ELISA方法与HI试验的检测符合率为97％。表明该方法可用于临床
鸡血清的新城疫抗体检测。
[0048] 实施例5rY2‑HB株免疫鸡血清的NP抗体ELISA检测
[0049] 采集rY2‑HB株免疫试验鸡两周后的血清，分别以建立的新城疫病毒NP抗体ELISA检测方法和NDV HI方法对其进行抗体水平测定。NDV HI抗体平均值为6.5log2。ELISA检测
结果如表2所示，5份rY2‑HB株免疫鸡血清的ELISA检测结果均为阴性。
结果如表2所示，5份rY2‑HB株免疫鸡血清的ELISA检测结果均为阴性。
[0050] 表2.rY2‑HB株免疫鸡血清的NP抗体ELISA检测结果
[0051]
[0052] 结果表明，新城疫病毒NP抗体ELISA检测方法对rY2‑HB疫苗株免疫鸡后的血清抗体检测结果为阴性。rY2‑HB株可以作为基因VII新城疫标记疫苗候选株。