一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法

摘要

本发明提供一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法，包括以下步骤：增殖培养基的配制、香蕉的诱变处理、洗涤处理、增殖培养，本发明使用的氯化锂溶液处理抑制幼苗生长，长势存在明显差异，在形态上出现了具有特殊性状的单株；通过诱变剂处理，提高了突变频率，扩大了变异范围，利用化学诱变剂处理可使突变频率最高提高到8.89％，比自然突变频率高1000倍以上；突变类型集中表现为叶色突变、叶型突变及株型突变，其中有6.47％的植株在叶片上表现为亮绿叶，7.11％表现为黄条纹，1.96％表现为叶缘卷曲，4.50％表现为短叶，从而可知人工诱变的范围广，变异类型丰富。

权利要求

1.一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、增殖培养基的配制：MS培养基、6‑苄基氨基嘌呤1.0 5.0mg/L、腺嘌呤0.2 1.5 mg/~ ~

L、琼脂糖2.0 4.0g/L、蔗糖20 40 g/L；

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S2、香蕉的诱变处理：切割单个独立的芽，放入氯化锂诱变剂中，在旋转摇床中以138~

200rpm、20 30℃振荡浸泡培养4 24h后，再放置于光照培养箱中，进行变温处理，初始温度~ ~

为15 20℃处理1 3h，调整温度22 30℃，处理1 3h；所述氯化锂诱变剂是将氯化锂溶液在灭~ ~ ~ ~

菌水中加吐温‑80和香蕉皮多糖溶液，过滤灭菌得到，氯化锂溶液、灭菌水、吐温‑80和香蕉皮多糖溶液的体积比为1:10 20:0.3 2:1 5；

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S3、洗涤处理：上述步骤处理后，在蒸馏水中冲洗2 5次茎尖；

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S4、增殖培养：将处理后的不定芽转接到增殖培养基中，进行4 8个循环后，转入添加~

0.5 3.0mg/L吲哚丁酸、2.0 4.0g/L琼脂糖和20 40g/L蔗糖的MS基础培养基中，获得诱变处~ ~ ~

理植物体。

2.如权利要求1所述的一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法，其特征在于：所述S1中增殖培养基的配制：MS培养基、6‑苄基氨基嘌呤3.0mg/L、腺嘌呤1.0mg/L、琼脂糖3.0g/L、蔗糖30g/L。

3.如权利要求1所述的一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法，其特征在于：所述S2步骤中旋转摇床的转速为150rpm，恒温27℃振荡浸泡培养。

4.如权利要求1所述的一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法，其特征在于：所述S2步骤中光照强度设定为1000 3000lx。

~

5.如权利要求1所述的一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法，其特征在于：所述S4将处理后的不定芽转接到增殖培养基中，进行4 8个循环后，转入添加1.0mg/L吲哚丁酸、~

3.0g/L琼脂糖和30g/L蔗糖的MS基础培养基中，获得诱变处理植物体。

说明书

一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法

技术领域

[0001] 本发明涉及植物多倍体诱变育技术种植领域，特别涉及一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法。

背景技术

[0002] 香蕉是典型的热带亚热带果树，广泛分布于热带和南亚热带地区。我国是世界香蕉主产国之一，种植区域分布于广东、海南、广西、福建、云南及台湾等省区。但目前，香蕉通
过杂交手段培育的新品种的发展空间小，品种的抗逆性不全面，且变异范围小，经自然突变
难以出现新基因突变体，且目前对香蕉的诱变剂耐受能力不同，单一的诱变方法虽然在某
一方面具有高效的突变频率，但总体性状的突变率仍较低，导致变异类型少，诱变育种效率
低。

发明内容

[0003] 鉴于此，本发明提出一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法，解决上述问题。

[0004] 本发明的技术方案是这样实现的：一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法：包括以下步骤：

[0005] S1、增殖培养基的配制：MS培养基、6‑苄基氨基嘌呤(BAP)1.0～5.0mg/L、腺嘌呤0.2～1.5mg/L、琼脂糖2.0～4.0g/L、蔗糖20～40g/L；

[0006] S2、香蕉的诱变处理：使用手术刀切割下单个独立的芽，放入装有氯化锂诱变剂的三角瓶中，在旋转摇床中以138～200rpm、20～30℃振荡浸泡培养4～24h后，再放置于光照
培养箱中，进行变温处理，初始温度为15～20℃处理1～3h，调整温度22～30℃，处理1～3h；
所述氯化锂诱变剂是将氯化锂溶液在灭菌水中加吐温‑80和香蕉皮多糖溶液，过滤灭菌得
到；

[0007] S3、洗涤处理：上述步骤处理后，在蒸馏水中冲洗2～5次茎尖；

[0008] S4、增殖培养：将处理后的不定芽转接到增殖培养基中，进行4～8个循环后，转入含有0.5～3.0g/L吲哚丁酸IBA、2.0～4.0g/L琼脂糖和20～40g/L蔗糖的MS基础培养基中，
获得诱变处理植物体。

[0009] 进一步的，所述S1中的蔗糖pH为4.0～6.0。

[0010] 进一步的，所述S1中增殖培养基的配制：MS培养基、6‑苄基氨基嘌呤(BAP)3.0mg/L、腺嘌呤1.0mg/L、琼脂糖3.0g/L、蔗糖30g/L。

[0011] 进一步的，所述S1中诱变剂浓度0.4～1.6％。

[0012] 进一步的，所述S2步骤中旋转摇床的转速为150rpm，恒温27℃荡浸泡培养。

[0013] 进一步的，所述S2步骤中光照强度设定为1000～3000lx。

[0014] 进一步的，所述S2步骤中氯化锂溶液、灭菌水、吐温‑80和香蕉皮多糖溶液的体积比为1:10～20:0.3～2:1～5。

[0015] 进一步的，所述S4步骤的增殖培养基为1.0g/L吲哚丁酸IBA、3.0g/L琼脂糖和30g/L蔗糖的MS基础培养基。

[0016] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：

[0017] 本发明使用的氯化锂溶液处理抑制幼苗生长，长势存在明显差异，在形态上出现了具有特殊性状的单株；通过诱变剂处理，按比例将氯化锂溶液、灭菌水、吐温‑80和香蕉皮
多糖溶液配制成诱变剂，结合光照培养箱培养，控制光照强度和温度变化，明显提高了突变
频率，扩大了变异范围，利用化学诱变剂和特殊的处理工艺可使突变频率最高提高到
8.89％，比自然突变频率高1000倍以上；突变类型集中表现为叶色突变、叶型突变及株型突
变，其中有6.47％的植株在叶片上表现为亮绿叶，7.11％表现为黄条纹。1.96％表现为叶缘
卷曲，4.50％表现为短叶，从而可知人工诱变的范围广，变异类型丰富。

具体实施方式

[0018] 为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。

[0019] 本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

[0020] 本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

[0021] 实施例1

[0022] 一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法：包括以下步骤：

[0023] S1、增殖培养基的配制：MS培养基、6‑苄基氨基嘌呤(BAP)1.0mg/L、腺嘌呤0.2mg/L、琼脂糖2.0g/L、蔗糖20g/L，蔗糖pH为4.0；

[0024] S2、香蕉的诱变处理：使用手术刀切割下单个独立的芽，放入装有氯化锂诱变剂的三角瓶中，在旋转摇床中以138rpm、20℃振荡浸泡培养4h后，再放置于光照培养箱中，光照
强度设定为1000lx，再进行变温处理，初始温度为15℃处理1h，调整温度22℃，处理1h；所述
氯化锂诱变剂是将氯化锂溶液在灭菌水中加吐温‑80和香蕉皮多糖溶液，过滤灭菌得到，所
述氯化锂溶液、灭菌水、吐温‑80和香蕉皮多糖溶液的体积比为1:10:0.3:1；

[0025] S3、洗涤处理：上述步骤处理后，在蒸馏水中冲洗2次茎尖；

[0026] S4、增殖培养：将处理后的不定芽转接到增殖培养基中，进行4个循环后，转入含有0.5g/L吲哚丁酸IBA、2.0.0g/L琼脂糖和20g/L蔗糖的MS基础培养基中，获得诱变处理植物
体。

[0027] 实施例2

[0028] 一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法：包括以下步骤：

[0029] S1、增殖培养基的配制：MS培养基、6‑苄基氨基嘌呤(BAP)5.0mg/L、腺嘌呤1.5mg/L、琼脂糖4.0g/L、蔗糖40g/L，蔗糖pH为6.0；

[0030] S2、香蕉的诱变处理：使用手术刀切割下单个独立的芽，放入装有氯化锂诱变剂的三角瓶中，在旋转摇床中以200rpm、30℃振荡浸泡培养24h后，再放置于光照培养箱中，光照
强度设定为3000lx，再进行变温处理，初始温度为20℃处理3h，调整温度30℃，处理3h；所述
氯化锂诱变剂是将氯化锂溶液在灭菌水中加吐温‑80和香蕉皮多糖溶液，过滤灭菌得到，所
述氯化锂溶液、灭菌水、吐温‑80和香蕉皮多糖溶液的体积比为1:20:2:5；

[0031] S3、洗涤处理：上述步骤处理后，在蒸馏水中冲洗5次茎尖；

[0032] S4、增殖培养：将处理后的不定芽转接到增殖培养基中，进行8个循环后，转入含有3.0g/L吲哚丁酸IBA、4.0g/L琼脂糖和40g/L蔗糖的MS基础培养基中，获得诱变处理植物体。

[0033] 实施例3

[0034] 一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法：包括以下步骤：

[0035] S1、增殖培养基的配制：MS培养基、6‑苄基氨基嘌呤(BAP)3.0mg/L、腺嘌呤1.0mg/L、琼脂糖3.0g/L、蔗糖30g/L；

[0036] S2、香蕉的诱变处理：使用手术刀切割下单个独立的芽，放入装有氯化锂诱变剂的三角瓶中，在旋转摇床中以150rpm、27℃振荡浸泡培养14h后，再放置于光照培养箱中，光照
强度设定为2000lx，再进行变温处理，初始温度为18℃处理2h，调整温度26℃，处理2h；所述
氯化锂诱变剂是将氯化锂溶液在灭菌水中加吐温‑80和香蕉皮多糖溶液，过滤灭菌得到，所
述氯化锂溶液、灭菌水、吐温‑80和香蕉皮多糖溶液的体积比为1:15:1.2:3；

[0037] S3、洗涤处理：上述步骤处理后，在蒸馏水中冲洗3次茎尖；

[0038] S4、增殖培养：将处理后的不定芽转接到增殖培养基中，进行6个循环后，转入含有1.0g/L吲哚丁酸IBA、3.0g/L琼脂糖和30g/L蔗糖的MS基础培养基中，获得诱变处理植物体。

[0039] 实施例4

[0040] 本实施例与实施例3的区别在于，一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法：所述氯化锂溶液、灭菌水、吐温‑80和香蕉皮多糖溶液的体积比为1:5:3:7。

[0041] 实施例5

[0042] 本实施例与实施例3的区别在于，一种诱导增加粉蕉突变范围的化学诱变方法：所述S2步骤中光照强度设定为4000lx。

[0043] 实施例6

[0044] 本实施例和实施例3的区别在于，所述S1步骤中增殖培养基浓度0.8％。

[0045] 对比例1

[0046] 本对比例和实施例3的区别在于，所述香蕉的诱变处理中未放置光照培养箱培养。

[0047] 对比例2

[0048] 本对比例和实施例3的区别在于，所述香蕉的诱变处理的光照培养箱中未进行变温处理。

[0049] 对比例3

[0050] 本对比例和实施例3的区别在于，所述变温处理中，初始温度为14℃处理2h后再调整至20℃。

[0051] 一、化学诱变诱导发生变异类型及发生的变异率

[0052] 将本发明实施例1～6和对比例1～3的诱导方法进行对比实验，每次试验重复3次，得到化学诱变诱导发生变异类型及发生的变异率(以下数值为平均值)：

[0053] 变异率计算公式：不同类型变异率＝不同表型变异后代/总数*100

[0054]

[0055]

[0056] 从上表可知，本发明的诱变方法使得粉蕉突变类型集中表现为叶色突变、叶型突变及株型突变。其中有6.47％的植株在叶片上表现为亮绿叶，7.11％表现为黄条纹。1.96％
表现为叶缘卷曲，4.50％表现为短叶，从而可知人工诱变的范围广，变异类型丰富。

[0057] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。