缬草总生物碱提取物在制备马拉色菌抑制剂中的用途

摘要

本发明公开了缬草总生物碱提取物在制备马拉色菌抑制剂中的用途。体外抑菌试验表明，缬草总生物碱提取物在体外对马拉色菌具有抑制能力，最小抑菌浓度MIC值为6.25mg/mL。缬草总生物碱提取物能用于制备马拉色菌抑制剂，发挥在体外或体内的抑菌作用，具有很广泛的应用前景。当其应用于体内时，能够发挥对马拉色菌所致疾病的治疗作用，这些疾病包括脂溢性皮炎、头皮屑、毛囊炎、花斑癣等。本发明提供的新用途不仅活性和疗效好，而且性质温和、安全性高，能有效降低马拉色菌对现有药物的耐药性。

权利要求

1.缬草总生物碱提取物在制备马拉色菌抑制剂中的用途，所述缬草总生物碱提取物是缬草水或乙醇提取物的乙酸乙酯部位。

2.缬草总生物碱提取物在制备治疗脂溢性皮炎药物中的用途，所述缬草总生物碱提取物通过抑制马拉色菌发挥对脂溢性皮炎的治疗作用，所述缬草总生物碱提取物是缬草水或乙醇提取物的乙酸乙酯部位。

3.缬草总生物碱提取物在制备去屑护理用品中的用途，所述缬草总生物碱提取物通过抑制马拉色菌发挥去屑作用，所述缬草总生物碱提取物是缬草水或乙醇提取物的乙酸乙酯部位。

4.缬草总生物碱提取物在制备治疗马拉色菌毛囊炎药物中的用途，所述缬草总生物碱提取物通过抑制马拉色菌发挥对毛囊炎的治疗作用，所述缬草总生物碱提取物是缬草水或乙醇提取物的乙酸乙酯部位。

5.如权利要求1‑4任何一项所述的用途，其特征在于：所述缬草总生物碱提取物是缬草水或乙醇提取物的乙酸乙酯部位的大孔吸附树脂纯化产物。

说明书

缬草总生物碱提取物在制备马拉色菌抑制剂中的用途

技术领域

[0001] 本发明属于制药领域，涉及缬草总生物碱提取物在制备马拉色菌抑制剂中的用途，本发明还涉及治疗由马拉色菌感染所导致相关疾病的药物以及用于去除头皮屑的护理
用品。

背景技术

[0002] 缬草(Valeriana offcinalis L.)为败酱科植物，全世界有广泛分布，多为根及根茎入药。缬草具有解痉、止痛与镇静、安神的功效，对跌打损伤、心神不安、心悸失眠、痛经、
经闭、风湿痹痛等症都能起到一定的治疗作用。缬草主要含挥发油、环烯醚萜类、倍半萜类、
生物碱类、木脂素类、黄酮类活性成分，是优良的天然药物资源。目前针对缬草化学成分和
活性的研究报道 不多，主要集中在挥发油、环烯醚萜、倍半萜、木脂素类，而对生物碱的研
究少之又少。据个别文献报道，缬草生物碱含量在2‑5％之间，主要存在与根茎部，其中有缬
草碱A、缬草碱B、缬草胺碱、缬草宁碱、猕猴桃碱等多种成分。缬草总生物碱具有抗菌和抗病
毒活性，尤其是对革兰氏阳性细菌和轮状病毒具有较好的体外抑制作用。但是，关于缬草总
生物碱抗真菌尤其是马拉色菌的相关研究尚未见报道 。

[0003] 马拉色菌是一种致病性、嗜脂性真菌，主要存在于皮肤表面，在皮肤皮脂腺分泌旺盛的条件下，该真菌依赖皮肤分泌的油脂大量生存和繁殖，从而导致花斑癣、毛囊炎、脂溢
性皮炎等多种疾病，目前也有大量研究证实马拉色菌在头皮的过度增生是导致头皮屑的重
要原因。抗真菌药如酮康唑、氯咪巴唑、吡硫鎓锌是公认有效的几种抗马拉色菌治疗药物，
但是这些药物具有一定的皮肤刺激性，而且长期使用还会产生耐药性。因此，从天然植物中
发掘更加温和、安全的抗真菌药物对降低耐药性具有重要意义，也是目前药物研发的热点。

发明内容

[0004] 本发明的目的旨在更好地利用缬草生物碱类成分这一宝贵的天然药物资源，提供一种其在制备马拉色菌抑制剂中的用途，本发明的实施有利于降低马拉色菌对现有药物的
耐药性，同时丰富药物种类，更好地满足临床用药。

[0005] 上述目的是通过以下技术方案实现的：

[0006] 牛津杯抑菌圈试验结果表明，缬草总生物碱提取物在体外对马拉色菌具有一定的抑制能力，缬草总生物碱是一大类成分的总称，它由无数具体的成分组成，每种成分的抑菌
活性都不相同，试验发现，乙酸乙酯部位的抑菌活性要明显高于氯仿、丙酮、正丁醇等部位，
可能是由于乙酸乙酯部位的化合物种类不同于其它部位所致。

[0007] 试验中还发现，缬草总生物碱提取物乙酸乙酯部位的大孔吸附树脂纯化产物具有更高的抑菌活性，可能与总生物碱含量增加，其它杂质成分含量减少，活性成分得到富集有
关。

[0008] 以上结果表明，缬草中的总生物碱类成分是抑制马拉色菌的活性成分。

[0009] 进一步测定缬草总生物碱提取物对马拉色菌的最小抑菌浓度，结果表明其MIC值为 6.25mg/mL。

[0010] 缬草总生物碱提取物能用于制备马拉色菌抑制剂，发挥在体外或体内的抑菌作用，具有很广泛的应用前景。当其应用于体内时，能够发挥对马拉色菌所致疾病的治疗作
用，这些疾病包括脂溢性皮炎、头皮屑、毛囊炎、花斑癣等，并且不限于这些疾病。

[0011] 在治疗这些疾病时，可以将缬草总生物碱提取物按照本领域所熟知的药剂学方法制成适合临床使用的各种药物，这些药物包括口服、外用或注射药物等，优选为外用药物，
例如软膏，贴剂、凝胶剂、喷雾剂、洗剂等。另外还可以将缬草总生物碱提取物根据化工学原
理制成适合日常使用的护理产品，包括洗发水、沐浴露、香皂、面膜、霜膏等。这些含有缬草
总生物碱提取物的药物或日化用品都在本发明的保护范围之内。

[0012] 在制备以上所述药物或护理产品时，既可以将缬草总生物碱提取物单独作为活性成分，也可以与其它抗真菌药物尤其是抗马拉色菌药物组合后作为活性成分。

[0013] 本发明的有益效果是：

[0014] (1)本发明提供的新用途有利于更充分地利用缬草生物碱类成分这一宝贵的天然药物资源。

[0015] (2)本发明提供的新用途不仅活性和疗效好，而且性质温和、安全性高，能有效降低马拉色菌对现有药物的耐药性。

[0016] 更为具体的技术方案详见具体实施方式。

具体实施方式

[0017] 下面通过具体实施例对本发明进行详细说明。需要强调的是，所述的具体实施例仅用以解释本发明而不是用于对保护范围进行限定，在以下实施例基础上所作出的任何改
进或等同替换都在本发明的保护范围内。此外，本发明中所涉及的各种实验操作，均为本领
域的常规技术，文中没有特别说明的部分，本领域的普通技术人员可以参照本发明申请日
之前的各种常用工具书、科技文献或相关的说明书、手册等予以实施。

[0018] 实施例1缬草总生物碱提取物不同萃取部位的抑菌活性研究

[0019] 将缬草用水或乙醇提取，得到含有总生物碱的粗提取物，然后将粗提取物用不同极性的有机溶剂萃取，得到提取物的不同萃取部位，然后检测不同部位的抑菌活性，具体方
法如下：

[0020] 1.总生物碱的提取：采用联合提取的方式，即将缬草先用水煎煮提取一次，再用 60％乙醇(含0.3％盐酸)回流提取一次，将两部分提取液浓缩成稠膏。该方法对总生物碱的
提取效率较高，为加速生物碱的溶出，最好是向提取溶剂中加入一定量的盐酸，但由于煎煮
时盐酸容易挥发造成污染，因此在密闭的回流提取中加入。提取结束需用碱调节提取液pH
至中性或弱碱性，一方面可防治酸液腐蚀设备，另一方面可将生物碱盐酸盐还原为原态。

[0021] 2.总生物碱提取物不同部位的制备及其抑菌活性：向以上稠膏中分别加入石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇进行萃取，萃取后分别得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、
正丁醇萃取部位，回收有机溶剂并浓缩、干燥，检测各部位对马拉色菌的抑制率，具体方法
如下：

[0022] 将糠秕马拉色菌活化培养并用液体培养基配制成浓度为106cfu/ml的菌悬液，吸取 0.5ml菌悬液于灭菌后的营养琼脂培养基中，放置牛津杯；将各待测物用水稀释到相同
的浓度(0.01g/ml)，然后注入牛津杯，注入体积为0.2ml，37℃静置培养24h后测量抑菌圈直
径，蒸馏水为空白对照，计算抑菌率。

[0023] 结果见表1。

[0024] 表1不同萃取部位的总生物碱含量和马拉色菌抑制率比较

[0025]

[0026]

[0027] 从结果中可以看出，乙酸乙酯部位对马拉色菌的抑菌圈最大，其直径比空白对照大56.6％，而石油醚、氯仿、正丁醇等部位的抑菌圈很小，几乎没有抑制活性。该结果表明，
缬草总生物碱提取物的乙酸乙酯部位是抑制马拉色菌的活性部位。

[0028] 实施例2缬草总生物碱提取物的纯化及抑菌活性

[0029] 为进一步提高提取物的药效活性，采用大孔树脂纯化方法对上述产物中的总生物碱进行纯化，具体方法如下：将上述萃取部位上大孔吸附树脂柱，选择树脂类型为XAD‑2，上
柱浓度为5mg/mL；上柱量为3BV；洗脱剂为70％乙醇；洗脱剂流速为1.5BV/h，药液上柱后先
用水洗脱，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得缬草总生物碱提取物。

[0030] 纯化产物中总生物碱含量达到24.5％，较纯化前提高了3.6倍，该提取物对马拉色菌的抑制圈为14.7mm，抑制率达77.1％，较纯化前的56.6％提高了36.2％。

[0031] 实施例3最小抑菌浓度(MIC)的测定

[0032] 液体培养基：马拉色菌喜油脂，培养基含20％橄榄油，具体为橄榄油20％，葡萄糖5％，蛋白胨1％，琼脂1.5％，水余量，灭菌后使用；

[0033] 将实施例2制备的缬草总生物碱提取物用含有20％橄榄油的无菌水溶解，配制成浓度为500mg/mL的贮备液；

[0034] 将糠秕马拉色菌活化培养并用液体培养基配制成浓度为106cfu/ml的菌悬液；

[0035] 用马拉色液体培养基将贮备液倍比稀释，得到浓度依次为200、100、50、25、12.5、 6.25、3.125、1.5625、0.7812、0.3906mg/mL的药液。取各浓度的药液3ml分别加入到 10支试
管中，标记为1－10号，接着加入50μl菌悬液，37℃恒温培养2周；

[0036] 另取2支试管，一支试管加入3ml液体培养基和50μl菌悬液作为生长对照，另一支试管加入3ml液体培养基作为空白对照；

[0037] 肉眼观察各试管中菌落的生长情况，以菌落生长的最低药物浓度为总生物碱提取物的最低抑菌浓度。

[0038] 试验结果：生长对照的试管显黄色混浊，有菌丝生长，空白对照的试管显无色澄清，无菌丝，1－6号试管显无色澄清，无菌落生长，7‑10号试管开始显黄色混浊，有菌落生
长。因此缬草总生物碱提取物的最低抑菌浓度(MIC)为6.25mg/mL。

[0039] 实施例4缬草总生物碱提取物对脂溢性皮炎的功效评价

[0040] 脂溢性皮炎为临床常见疾病，患者皮肤瘙痒，经常复发，严重影响生活质量。该病病因复杂，多数研究认为与马拉色菌感染、皮脂分泌亢进、免疫状态异常、皮肤屏障受损等
因素均有关，临床常使用抗真菌药或激素类药物进行治疗。

[0041] 试验药物：缬草总生物碱提取物软膏，含缬草总生物碱1.5％。

[0042] 患者一般资料：武汉市洪山区一元堂中医门诊部于2019年12月至2020年11月期间收诊的患者30例，其中男21例，女9例，年龄18‑40岁。患者头皮、面部、胸腹或背部发生鳞屑
性红斑，皮损处带油腻性痂皮，瘙痒，镜检马拉色菌呈阳性，诊断为脂溢性皮炎。上述患者有
22例经其同意使用缬草总生物碱提取物软膏治疗，另8例根据其意愿使用酮康唑软膏治疗，
两组患者的性别、年龄无显著性差异。

[0043] 治疗方法：将软膏涂抹于患处，每日2次，连续治疗一个月。嘱患者治疗期间禁食辛辣刺激食物，多饮水。

[0044] 疗效评价指标：显效：患者面部红斑、皮损、瘙痒症状完全消失。有效：患者面部红斑、皮损明显减少，瘙痒症状基本消失。无效：患者面部红斑、皮损、瘙痒症状无明显改善，甚
至出现皮肤潮红、斑块蔓延恶化症状。

[0045] 试验结果：结果统计见表2。

[0046] 表2两组患者的临床疗效比较

[0047]   例数 显效 有效 无效 总有效率(％)酮康唑组 8 5 2 1 87.5
缬草总生物碱提取物组 22 12 6 4 81.8

[0048] 结果表明，缬草总生物碱提取物对脂溢性皮炎有很好的疗效，总有效率接近酮康唑，达到80％以上。两组患者在治疗期间均未发生局部刺激、灼烧、局部湿疹等刺激性不良
反应，说明缬草总生物碱提取物不仅疗效高而且也具有很好的安全性。

[0049] 实施例5缬草总生物碱提取物用于去屑护理用品的典型案例

[0050] 曾某，男，53岁，为武汉惠尔生物科技有限公司员工，该员工长期头皮瘙痒，抓挠后有大量白色鳞屑性斑片脱落，镜检马拉色菌呈阳性，近一年一直使用海飞丝去屑洗发露(丝
质柔滑型，广州宝洁有限公司)，效果不明显。于2020年6月开始，该员工向所使用的海飞丝
去屑洗发露中添加缬草总生物碱提取物，添加前先将提取物用少量水溶解，然后倒入洗发
露中，搅拌混匀，每100ml洗发露中加入0.5g。使用一周后，头皮瘙痒和头皮屑脱落症状明显
减轻，连续使用一个月，头皮瘙痒症状完全缓解，头皮光洁明亮，没有任何白色鳞屑性斑片。