一种光刺激响应的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球的应用

摘要

本发明公开了一种光刺激响应的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球的应用，该空心介孔有机硅球能够通过实体瘤的高通透性和滞留效应被动靶向肿瘤，装载的全氟己烷能够保证129Xe MRI信号强度，附着在有机硅球表面的CuS纳米颗粒拥有光热转换性能，近红外光刺激可诱导全氟己烷发生相变，实现对肿瘤细胞探测，同时还可以实现智能型响应的129Xe MRI信号从“ON”到“OFF”的转变，避免假阳性信号的出现。

权利要求

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1.一种光刺激响应的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球在制备 Xe磁共振造影剂中的应用，所述的光刺激响应的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球以全氟己烷作为内核，中空介孔硅球为外壳，中空介孔硅球外壳上修饰有硫化铜和聚乙二醇。

说明书

一种光刺激响应的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球的应用

技术领域

[0001] 本发明属于核磁共振成像技术领域，具体涉及一种光刺激响应的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球的应用。

背景技术

[0002] 肿瘤的早期诊断对其疗效至关重要，采用合适的诊断方法对肿瘤的早期诊断又至关重要。核磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging，MRI)由于空间分辨率高，非侵入性
而广泛用于临床诊断，但是由于其灵敏度比较低，临床上通常需要借助磁共振造影剂来增
强对比效果。目前临床广泛使用的造影剂是顺磁性金属Gd的配合物，它能改变水的纵向弛
豫时间T1来实现对比增强，同时也因其生理毒性较强，不适用于肝，肾功能不全患者。

[0003] 传统的MRI观测对象是水的质子，具有很强的背景信号干扰，如果能开发出新型的129 19
异核MRI造影剂，无疑能够提高病灶部位成像效果，如 Xe、F核磁共振造影剂。化学交换饱
和转移(Chemical Exchange Saturation Transfer，CEST)技术能够进一步提高磁共振的
灵敏度，结合CEST技术开发生物相容性好、高灵敏度且无背景信号干扰的磁共振造影剂对
于肿瘤的早期诊断具有重要的意义。

[0004] 129Xe分子无毒无害，在人体内无背景信号干扰，经超极化装置超极化后具有极高129
的灵敏度，目前报道的 Xe造影剂最低检测限可达到皮摩尔，充分说明其用于肿瘤检测的
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潜力。常规 Xe造影剂主要基于穴藩，葫芦脲等实现，通过化学修饰实现肿瘤组织的靶向
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性，通过识别前后的信号差异实现对生物靶标的探测。然而这些 Xe造影剂中，智能响应型
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的 Xe造影剂目前报道较少，且制备比较复杂，价格昂贵。因此发展一些易于制备，生物兼
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容性好，智能响应型的超极化 Xe MRI造影剂具有很实际的意义。

发明内容

[0005] 为了解决上述现有技术存在的问题，本发明提供了一种光刺激响应的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球的应用，该空心介孔有机硅球能够通过实体瘤的高通透性和滞留效
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应被动靶向肿瘤，装载的全氟己烷能够保证 Xe MRI信号强度，附着在有机硅球表面的CuS
纳米颗粒拥有光热转换性能，近红外光刺激可诱导全氟己烷发生相变，实现对肿瘤细胞探
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测，同时还可以实现智能型响应的 Xe MRI信号从“ON”到“OFF”的转变，避免假阳性信号的
出现。

[0006] 实现本发明上述目的所采用的技术方案为：

[0007] 一种光刺激响应的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球在核磁共振检测方面中的应用。

[0008] 进一步，所述的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球作为129Xe MRI造影剂。

[0009] 与现有技术相比，本发明的优点与有益效果在于：

[0010] 1、该中空介孔有机硅球修饰有CuS纳米颗粒并装载了全氟己烷，将其用于129Xe Hyper CEST，不仅具备高灵敏度和无背景信号干扰的优点，同时能够实现光刺激响应的
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Xe CEST分子探针的构建，而且该中空介孔有机硅球还能作为造影剂，用于对肺癌细胞进
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行 Xe MRI成像，应用于肺癌肿瘤的早期MRI诊断。

[0011] 2、该中空介孔有机硅球的中空结构能够确保全氟己烷的有效装载，稳固的外壳可129 129
防止全氟己烷的外泄，同时可保证壳层内外 Xe交换速率较缓慢，适合 Xe CEST信号的探
测。

[0012] 3、该中空介孔有机硅球修饰有CuS纳米颗粒，CuS纳米颗粒具有良好的光热性能，在近红外光照射下，体系温度升高，能够使全氟己烷发生相变，全氟己烷全部挥发，使得
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Xe CEST信号从“ON”到“OFF”的转变，实现光刺激响应的智能开关型 Xe MRI造影剂的构
建。

[0013] 4、该中空介孔有机硅球生物兼容性非常好，适合用于体内磁共振成像，具有很好的应用前景。

附图说明

[0014] 图1为实施例1制备的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球的TEM图。

[0015] 图2为实施例1制备的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球和全氟己烷的19F NMR图谱。

[0016] 图3为实施例1制备的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球的129Xe Hyper CEST图谱。

[0017] 图4为实施例1制备的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球对A549肺癌细胞在激光129
照射前后的 Xe CEST响应图谱。

[0018] 图5为实施例1制备的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球对正常肺纤维细胞WI‑38129
在激光照射前后的 Xe CEST响应图谱。

[0019] 图6为实施例1制备的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球对A549肺癌细胞在激光129
照射前后的 Xe MRI图。

[0020] 图7为实施例1制备的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球对正常肺纤维细胞WI‑38129
在激光照射前后的 Xe MRI图。

具体实施方式

[0021] 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。

[0022] 实施例1

[0023] 1、中空介孔有机氧化硅球的制备：

[0024] 将200g 10wt％的十六烷基三甲基氯化铵的水溶液与0.8g三乙醇胺于95℃油浴中搅拌均匀，随后滴加1mL正硅酸四乙酯，反应1h后，将0.5mL正硅酸四乙酯与1mL 1，4‑双(三
乙氧基甲硅烷基)丙烷四硫化物的混合物加入上述反应后的溶液中，继续反应4h后，将所得
的混合物在3000rpm条件下离心5min，将所得的固体物用乙醇洗涤3次，得到中间产物；将中
间产物分散于100mL无水乙醇与10mL浓盐酸的混合溶液中，加热至78℃反应12h，重复该操
作3次以完全除去CTAC，得到介孔有机氧化硅包被的MSNs(MSN@MON)，将乙醇洗涤MSN@MON多
次，将所得的固体物分散于20mL水中，加入8mL氨水，在95℃下反应3h，得到中空介孔有机氧
化硅球(HMON)；

[0025] 2、巯基化空心有机硅球的制备：

[0026] 将15mg步骤1制备的HMON分散于40mL乙醇中，加入0.15mL(3‑巯基丙基)三甲氧基硅烷与0.2mL 25wt％氨水，室温下搅拌过夜，将所得的混合物在3000rpm下离心5min，将所
得的固体物用乙醇洗涤3次，得到巯基修饰的HMON，即巯基化空心有机硅球(HMON‑SH)；

[0027] 3、CuS水溶液的制备：

[0028] 将2mL 0.05mM硫化钠水溶液加入至100mL 1mM氯化铜与0.68mM柠檬酸钠的混合水溶液中，在室温下搅拌5min，之后将混合溶液加热至80℃并反应15min，得到深绿色的CuS水
溶液后，立即将CuS水溶液转移到冰浴中备用；

[0029] 4、CuS修饰的巯基化空心有机硅球的制备：

[0030] 将30mg步骤2制备的HMON‑SH与60mL步骤3制备的CuS水溶液混合搅拌40min后，将所得的混合物在3000rpm下离心5min，将所得的固体物用乙醇洗涤3次，得到CuS修饰的巯基
化空心有机硅球(HMON@CuS)；

[0031] 5、PEG修饰的HMON@CuS纳米硅球的制备：

[0032] 将步骤4制备的HMON@CuS分散于100mL乙醇中，加入25mg PEG2000‑SH溶解于上述分散液中，在75℃下回流24h，将所得的混合液在3000rpm下离心5min，将所得的固体物用乙
醇洗涤3次，将所得的固体物用超纯水分散，冷冻干燥，得到PEG修饰的HMON@CuS纳米硅球
(HMON@CuS‑PEG，简写HMCP)；

[0033] 6、装载全氟己烷的空心介孔有机硅球的制备：

[0034] 将10mg步骤5制备的HMCP置于25ml双颈烧瓶中，盖上塞子，抽真空2min，注射器注入100ul全氟己烷，冰浴下超声2min，得到装载全氟己烷的空心介孔有机硅球(PFH@HMCP)，
将PFH@HMCP分散于10mL PBS缓冲液中备用。

[0035] 将本实施例制备的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球用透射电子显微镜进行扫描，所得的TEM图如图1所示，由图1可知，所制得的HMCP‑PFH分散性好，粒径均一，存在明显
的中空结构。

[0036] 将本实施例制备的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球进行19F NMR测试，所得的19 19 19
F NMR图谱如图2所示，由图2可知，所制得的HMCP‑PFH的 F NMR图谱与全氟己烷的 F NMR
图谱相同，说明成功装载上了全氟己烷。

[0037] 将本实施例制备的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球进行129Xe Hyper CEST测129 129
试，所得的 Xe Hyper CEST图谱如图3所示，从图3可以看到，在80ppm处观测到明显的 Xe 
Hyper CEST信号。

[0038] 试验一、本发明的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球对肺癌细胞的129Xe CEST试验

[0039] 试验方法：

[0040] 1、称取10mg的实施例1合成的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球分散于10mL MEM培养液(含体积分数10％小牛血清白蛋白)中，超声10min，获得混合液A；

[0041] 2、将肺癌细胞A549和正常肺纤维细胞WI‑38分别接种到两个250mL培养瓶中，向两个培养瓶中分别加入MEM培养液(含体积分数10％小牛胚胎血清、体积分数1％盘尼西林‑链
霉素)，将两个培养瓶分别放入二氧化碳的培养箱中，在37℃下培养48h，然后小心移除液
体，向两个培养瓶中分别加入混合液A，共同孵育4h，小心移除液体，用无菌PBS小心洗涤细
胞3次，以完全除掉残余的空心介孔有机硅球；接着向两培养瓶中加入胰蛋白酶消化1分钟，
用MEM培养液小心吹打，在1500rpm下离心3min，去除上清液，分别向肺癌细胞A549和正常肺
纤维细胞WI‑38中加入2mL无菌PBS，吹打均匀分散于两个10mm核磁样品管中，置于冰块中待
用；

[0042] 3、打开超极化129Xe的极化装置，加热30min至125℃，打开激光器，连接好核磁样品129
管，放入核磁谱仪中，将样品温度控制在25℃，调谐，匀场，通入超极化 Xe气体，进行信号
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采集，饱和照射功率6.5μT，照射时间5s，各核磁样品管中的液体采完一次 Xe CEST谱数据
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之后，用808nm激光照射30min之后再次采集 Xe CEST谱数据， Xe CEST谱的采集化学位
移范围58‑220ppm，58‑110ppm每隔2ppm采集一个点，110‑190ppm每隔5ppm采集一个点，190‑
194ppm每隔0.5ppm采集一个点，194‑200ppm每隔2ppm采集一个点，200‑220ppm每隔5ppm采
集一个点。

[0043] 试验结果：

[0044] 肺癌细胞A549与实施例1的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球共同孵育后，在129 129
808nm激光照射前后，其 Xe CEST谱如图4所示，从图4可以看出，肺癌细胞A549明显的 Xe 
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CEST信号，激光照射后 Xe CEST信号基本消失；正常肺纤维细胞WI‑38与实施例1的装载全
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氟己烷的空心介孔有机硅球共同孵育后，在808nm激光照射前后，其 Xe CEST谱如图5所
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示，从图5可以看出，正常肺纤维细胞WI‑38基本没有信号，激光照射后 Xe CEST信号进一
步减弱，由此可以说明，实施例1的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球能够被肿瘤细胞较多
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的摄取，并且能够实现光刺激响应 Xe CEST信号转变。

[0045] 试验二、本发明的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球对肺癌细胞的129Xe MRI试验

[0046] 试验方法：

[0047] 1、称取10mg的实施例1合成的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球分散于10mL MEM培养液(含体积分数10％小牛血清白蛋白)中，超声10min，获得混合液A；

[0048] 2、将肺癌细胞A549和正常肺纤维细胞WI‑38分别接种到两个250mL培养瓶中，向两个培养瓶中分别加入MEM培养液(含体积分数10％小牛胚胎血清、体积分数1％盘尼西林‑链
霉素)，将两个培养瓶分别放入二氧化碳的培养箱中，在37℃下培养48h，然后小心移除液
体，向两个培养瓶钟分别加入混合液A，共同孵育4h，小心移除液体，用无菌PBS小心洗涤细
胞3次，以完全除掉残余的空心介孔有机硅球；接着向两培养瓶中加入胰蛋白酶消化1分钟，
用MEM培养液小心吹打，在1500rpm下离心3min，去除上清液，分别向肺癌细胞A549和正常肺
纤维细胞WI‑38中加入2mL无菌PBS，吹打均匀分散于两个10mm核磁样品管中，置于冰块中待
用；

[0049] 3、打开超极化129Xe的极化装置，加热30min至125℃，打开激光器，连接好核磁样品129
管，放入核磁谱仪中，将样品温度控制在25℃，调谐，匀场，通入超极化 Xe气体，进行信号
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采集，饱和照射功率6.5μT，照射时间5s，各核磁样品管中的样品采完一次 Xe MRI成像之
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后，用808nm激光照射30min之后再次采集 Xe MRI成像，成像的化学位移80ppm和273ppm；

[0050] 实验结果：

[0051] 肺癌细胞A549与实施例1的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球共同孵育后，在129
808nm激光照射前后，其 Xe MRI如图6所示，从图6中可以看出，肿瘤A549细胞有明显的
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Xe CEST信号，图像较亮，激光照射后 Xe CEST信号基本消失，图像变暗；正常肺纤维细
胞WI‑38与实施例1的装载全氟己烷的空心介孔有机硅球共同孵育后，在808nm激光照射前
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后，其 Xe CEST谱如图7所示，从图7可以看出，正常肺纤维细胞WI‑38基本没有信号，图像
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较暗，激光照射后 Xe CEST信号变化不大，由此说明，实施例1的装载全氟己烷的空心介孔
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有机硅球能够被肿瘤细胞较多的摄取，并且能够实现光刺激响应 Xe CEST信号转变。