一种从Nigella sativa种籽中提取乙基-α-D-呋喃阿拉伯糖的方法转让专利
申请号 : CN202011309298.6
文献号 : CN112409422B
文献日 : 2021-12-24
发明人 : 刘振花 , 康文艺 , 张岩 , 马常阳 , 牛云 , 王贵生 , 王莉 , 屈娇娇
申请人 : 河南大学
摘要 :
本发明涉及一种从Nigella sativa种籽中提取分离化合物乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖的方法：选取干燥的Nigella sativa种籽为原料，粉碎经石油醚脱脂后，用乙醇在室温下提取，提取物浸膏加甲醇溶解后，用硅胶拌样后上样，用二氯甲烷与甲醇洗脱，得到Fr1‑Fr7七个组分，再经过不断地分离纯化，得到化合物纯品。本发明方法有利于更好地开发利用Nigella sativa这一药用植物，有利于植物的可持续利用；本发明提取工艺简单，易得到乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖化合物单体，溶剂可回收利用，提取量大，可工业化生产。
权利要求 :
1.一种从Nigella sativa种籽中提取乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）以干燥的Nigella sativa种籽为原料，粉碎后用石油醚脱脂，残渣挥干石油醚，用
60‑80%乙醇提取，提取液减压回收溶剂，得到提取物浸膏；
2）将提取物浸膏用甲醇溶解，拌样于硅胶柱，用体积比为20:1、15:1、10:1、5:1、3:1、1:
1的二氯甲烷‑甲醇对硅胶柱进行梯度洗脱，硅胶薄层色谱检测合并，得到7个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为Fr1‑Fr7；
3）将第2个组分Fr2经反相柱色谱分离，以体积比20:80、40:60、60:40、80:20、100:0的甲醇‑水溶液梯度洗脱，硅胶薄层色谱检测合并，得到6个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为2‑1 2‑6；
~
4）组分2‑5经Sephadex LH‑20葡聚糖凝胶柱色谱，以体积比1:1的二氯甲烷‑甲醇进行洗脱，再经硅胶柱色谱分离，以体积比为20:1、15:1、10:1、5:1、1:1的二氯甲烷‑甲醇进行梯度洗脱，得到乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖粗品；
步骤4）中所得乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖粗品用甲醇溶解，经Sephadex LH‑20凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，得乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖纯品；
乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖结构式如下所示：。
2.如权利要求1所述从Nigella sativa种籽中提取乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖的方法，其特征在于，步骤1）中，石油醚脱脂2‑4次，每次脱脂时间为2‑4天，干燥Nigella sativa种籽与石油醚的料液添加比为5kg：6‑10L。
3.如权利要求2所述从Nigella sativa种籽中提取乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖的方法，其特征在于，步骤1）中，用70%乙醇冷浸提取3次，每次3天；残渣与70%乙醇的料液添加比为
5kg：6‑10L。
说明书 :
一种从Nigella sativa种籽中提取乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖
的方法
技术领域
[0001] 本发明属于植物提取分离技术领域，具体涉及一种从Nigella sativa种籽中有效、快速地提取分离化合物乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖的方法。
背景技术
[0002] Nigella sativa种籽为毛茛科黑种草属植物Nigella sativa干燥的种籽，原产于西南亚，广泛分布在地中海、中欧、西亚等地；其种籽油作为食用油在中东和北非国家等如
埃及地区被广泛使用，同时，也用于保健食品对抗疾病，在食品中应用广泛。Nigella
sativa种籽的主要成分有黄酮、皂苷、生物碱、甾体和酚类等，此外还含有大量油脂。
Nigella sativa种籽具有多种药理作用，包括抗菌、抗氧化、抗癌、抗炎、降糖、保肝、利尿
等。
埃及地区被广泛使用，同时，也用于保健食品对抗疾病，在食品中应用广泛。Nigella
sativa种籽的主要成分有黄酮、皂苷、生物碱、甾体和酚类等，此外还含有大量油脂。
Nigella sativa种籽具有多种药理作用，包括抗菌、抗氧化、抗癌、抗炎、降糖、保肝、利尿
等。
[0003] 目前，尚无关于在Nigella sativa种籽中提取分离化合物乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖的报道。而本发明则通过对Nigella sativa种籽乙醇提取物的分离，经过硅胶柱色谱、反
相柱色谱、凝胶柱色谱等分离手段，将Nigella sativa种籽中所含的乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯
糖快速、有效的提取分离出来。
相柱色谱、凝胶柱色谱等分离手段，将Nigella sativa种籽中所含的乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯
糖快速、有效的提取分离出来。
发明内容
[0004] 本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种从Nigella sativa种籽中简单、有效、快速分离纯化得到化合物乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖的方法。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] 一种从Nigella sativa种籽中提取乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖的方法，其包括以下步骤：
[0007] 1)以干燥的Nigella sativa种籽为原料，粉碎后用石油醚脱脂，残渣挥干石油醚，用60‑80％乙醇提取，提取液减压回收溶剂，得到提取物浸膏；
[0008] 2)将提取物浸膏用甲醇溶解，拌样于硅胶柱，用体积比为20:1、15:1、10:1、5:1、3:1、1:1的二氯甲烷‑甲醇对硅胶柱进行梯度洗脱，硅胶薄层色谱检测合并，得到7个组分，按
照所得组分极性由小到大依次标记为Fr1‑Fr7；
照所得组分极性由小到大依次标记为Fr1‑Fr7；
[0009] 3)将组分2经反相柱色谱分离，以体积比20:80、40:60、60:40、80:20、100:0的甲醇‑水溶液梯度洗脱，硅胶薄层色谱检测合并，得到6个组分，按照所得组分极性由小到大依
次标记为2‑1～2‑6；
次标记为2‑1～2‑6；
[0010] 4)组分2‑5经Sephadex LH‑20葡聚糖凝胶柱色谱，以体积比1:1的二氯甲烷‑甲醇进行洗脱，再经硅胶柱色谱分离，以体积比为20:1、15:1、10:1、5:1、1:1的二氯甲烷‑甲醇进
行梯度洗脱，得到乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖粗品。
行梯度洗脱，得到乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖粗品。
[0011] 进一步的，为了获得较高的纯度，可以将步骤4)中所得乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖粗品用甲醇溶解，经Sephadex LH‑20凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，得乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖纯
品。
品。
[0012] 具体的，步骤1)中，石油醚脱脂2‑4次，每次脱脂时间为2‑4天，干燥Nigella sativa种籽与石油醚的料液添加比为5kg：6‑10L。
[0013] 具体的，步骤1)中，用70％乙醇冷浸提取3次，每次3天；残渣与70％乙醇的料液添加比为5kg：6‑10L。
[0014] 本发明所述乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖(Ethyl‑α‑D‑furaarabinose)，分子式：C7H14O4，分子量：162，其结构式如下所示，结构式中所标识数字与后续图谱实验结果中标注
的碳编号相一致：
的碳编号相一致：
[0015]
[0016] 目前，尚无关于在Nigella sativa种籽中提取分离乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖的报道。而本发明则通过对Nigella sativa种籽石油醚脱脂、60‑80％乙醇提取物的分离，经过
硅胶柱色谱、反相柱色谱、凝胶柱色谱等分离手段，将Nigella sativa种籽中所含的化合物
乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖快速、有效的提取分离出来。和现有技术相比，本发明具有如下有
益效果：
硅胶柱色谱、反相柱色谱、凝胶柱色谱等分离手段，将Nigella sativa种籽中所含的化合物
乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖快速、有效的提取分离出来。和现有技术相比，本发明具有如下有
益效果：
[0017] 1)到目前为止，尚未见有从植物Nigella sativa种籽中得到化合物乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖的报道。本发明提供了一种从Nigella sativa种籽中提取分离此类化合物的方
法，有利于更好的开发利用Nigella sativa种籽这一药用植物，有利于植物的可持续利用。
法，有利于更好的开发利用Nigella sativa种籽这一药用植物，有利于植物的可持续利用。
[0018] 2)本发明提取分离得到的化合物乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖有着广泛的生物活性，本发明提供了化合物的提取分离方法，便于对其进行深入的研究。本发明提取工艺简单，产
物易得，溶剂可回收利用，提取量大，可工业化生产。
物易得，溶剂可回收利用，提取量大，可工业化生产。
[0019] 3)本发明使用到的分离材料有反相、硅胶、凝胶柱色谱，不溶于水和任何溶剂，无毒无味，化学性质稳定，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的
影响，并且易于洗脱再生，有益于多次利用。在纯化过程中所使用的制备型高效液相的分
离，则是目前最流行的新型分离方法，省时省力，能够大大提高样品的产率。
影响，并且易于洗脱再生，有益于多次利用。在纯化过程中所使用的制备型高效液相的分
离，则是目前最流行的新型分离方法，省时省力，能够大大提高样品的产率。
附图说明
[0020] 图1为乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖的碳谱；
[0021] 图2为乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖的氢谱。
具体实施方式
[0022] 为了使本发明的技术目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面结合具体实施例对本发明的技术方案作出进一步的说明，但所述实施例旨在解释本发明，而不能理解为对
本发明的限制，实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或
条件或者按照产品说明书进行。
本发明的限制，实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或
条件或者按照产品说明书进行。
[0023] 下述实施例中，作为原料的Nigella sativa种籽采集于埃及；所述乙醇、甲醇浓度均为体积浓度。
[0024] 实施例1
[0025] 一种从Nigella sativa种籽中提取乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖的方法，其包括以下步骤：
[0026] 1)以5kg干燥的Nigella sativa种籽为原料，粉碎后在室温下用7L石油醚浸泡脱脂(脱脂3次，每次脱脂时间为3天)，残渣挥干石油醚，用70％乙醇室温冷浸提取3次(残渣与
70％乙醇的料液添加比为5kg：7L)，每次3天，合并提取液，减压回收溶剂，得到提取物浸膏；
70％乙醇的料液添加比为5kg：7L)，每次3天，合并提取液，减压回收溶剂，得到提取物浸膏；
[0027] 2)将提取物浸膏用甲醇溶解，拌样于硅胶柱，依次用体积比为20:1、15:1、10:1、5:1、3:1、1:1的二氯甲烷‑甲醇对硅胶柱进行梯度洗脱，硅胶薄层色谱检测合并，得到7个组
分，按照所得组分极性由小到大依次标记为Fr1‑Fr7；
分，按照所得组分极性由小到大依次标记为Fr1‑Fr7；
[0028] 3)将组分2经反相柱色谱分离，以体积比20:80、40:60、60:40、80:20、100:0的甲醇‑水溶液梯度洗脱，硅胶薄层色谱检测合并，得到6个组分，按照所得组分极性由小到大依
次标记为2‑1～2‑6；
次标记为2‑1～2‑6；
[0029] 4)组分2‑5经Sephadex LH‑20葡聚糖凝胶柱色谱，以体积比1:1的二氯甲烷‑甲醇进行洗脱，再经硅胶柱色谱分离，以体积比为20:1、15:1、10:1、5:1、1:1的二氯甲烷‑甲醇进
行梯度洗脱，得到乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖粗品。所得乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖粗品用甲醇
溶解，经Sephadex LH‑20葡聚糖凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，得乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖纯品。
行梯度洗脱，得到乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖粗品。所得乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖粗品用甲醇
溶解，经Sephadex LH‑20葡聚糖凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，得乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖纯品。
[0030] 上述制得的乙基‑α‑D‑呋喃阿拉伯糖(Ethyl‑α‑D‑furaarabinose)纯品，性状呈无色油状物，收率为0.00050％，纯度≥99％。对上述制得的化合物运用多种谱学技术鉴定结
构，图谱见图1和2，具体如下：
构，图谱见图1和2，具体如下：
[0031] 仪器材料：紫外在UV‑210A紫外光谱测定仪上测定；1H，13C‑NMR图谱由Bruker am‑400MHz核磁共振仪测定。TMS为内标；二维核磁共振图谱由DRX‑500MHz核磁共振仪测定；质
+ 1
谱由VG.AUTO Spec‑3000型质谱仪测定。实验结果：ESI‑MS m/z:185[M+Na]。H‑NMR(CD3OD,
400MHz)δ:4.86(1H,d,J＝2,H‑1),3.94(1H,m,H‑2),3.91(1H,m,H‑6a),3.83(1H,m,H‑4),
3.74(1H,dd,J＝3.2,9.6,H‑5a),3.63(1H,m,H‑5b),3.49(1H,m,H‑3),3.31(1H,m,H‑6b),
13
1.21(3H,t,J＝8,H‑7)。C‑NMR(CD3OD,100MHz)δ:109.2(C‑1),85.2(C‑2),78.6(C‑3),83.6
(C‑4),64.2(C‑5),63.0(C‑6),15.4(C‑7)。
+ 1
谱由VG.AUTO Spec‑3000型质谱仪测定。实验结果：ESI‑MS m/z:185[M+Na]。H‑NMR(CD3OD,
400MHz)δ:4.86(1H,d,J＝2,H‑1),3.94(1H,m,H‑2),3.91(1H,m,H‑6a),3.83(1H,m,H‑4),
3.74(1H,dd,J＝3.2,9.6,H‑5a),3.63(1H,m,H‑5b),3.49(1H,m,H‑3),3.31(1H,m,H‑6b),
13
1.21(3H,t,J＝8,H‑7)。C‑NMR(CD3OD,100MHz)δ:109.2(C‑1),85.2(C‑2),78.6(C‑3),83.6
(C‑4),64.2(C‑5),63.0(C‑6),15.4(C‑7)。
[0032] 检查：利用TLC，在UV 254nm无荧光；硫酸显色剂显色，110℃下5分钟，呈现黑色。