一种用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法

摘要

本发明提供了一种用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，该方法适用于检测口含烟烟碱体外吸收模型的有效性，包括以下步骤：开始测试：将口含烟放入所述口含烟烟碱体外吸收模型中进行烟碱被动扩散；测定不同时间点下接收池中的烟碱含量，计算累积烟碱释放量；绘制体外烟碱累积释放量‑释放时间离散点图，利用零级动力学模型拟合曲线，得到体外拟合曲线的相关系数r2以及烟碱体外释放速率；获得相应的口含烟体内烟碱吸收速率；检查获得的拟合曲线的相关系数r2是否接近1，比较由拟合曲线获得的体外释放速率和相应的口含烟体内吸收速率的数值大小是否接近，评价所述口含烟烟碱体外吸收模型的有效性。

权利要求

1.一种用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，其特征在于，所述方法适用于检测口含烟烟碱体外吸收模型的有效性，所述口含烟烟碱体外吸收模型包括扩散池，扩散池中设有控释膜，口含烟的烟碱通过被动扩散的方式穿过所述控释膜到达接收池，所述方法包括以下步骤：开始测试：将口含烟放入所述口含烟烟碱体外吸收模型中进行烟碱被动扩散；

测定不同时间点下接收池中的烟碱含量，计算累积烟碱释放量；

以时间点为横坐标，相应时间点下累积的烟碱释放量为纵坐标，绘制体外烟碱累积释放量-释放时间离散点图；

针对所述体外烟碱累积释放量-释放时间离散点图利用零级动力学模型拟合曲线，获得体外拟合模型曲线图，得到体外拟合曲线的相关系数r2以及烟碱体外释放速率；

获得相应的口含烟体内烟碱吸收速率；

2

检查获得的拟合曲线的相关系数r是否接近1，比较由拟合曲线获得的体外释放速率和相应的口含烟体内吸收速率的数值大小是否接近，评价所述口含烟烟碱体外吸收模型的有效性。

2.如权利要求1所述的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，其特征在于，利用高效液相色谱法测定不同时间点下接收池中的烟碱含量。

3.如权利要求1所述的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，其特征在于，接收池中的烟碱含量从开始测试之后的一小时以及之后测定。

4.如权利要求3所述的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，其特征在于，在开始测试之后分别于1、2、3、4、5、6、7、8h测定接收池中的烟碱含量。

5.如权利要求1所述的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，其特征在于，所述口含烟体内烟碱吸收速率为体内两小时内的吸收速率。

6.如权利要求5所述的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，其特征在于，获得相应的口含烟体内烟碱吸收速率的方法包括：建立两小时内体内血液烟碱浓度-时间曲线，利用零级动力学模型拟合曲线，获得体内拟合模型曲线图，根据斜率得到口含烟体内烟碱吸收速率作为比较数据；或者，直接利用文献中已有的两小时内相应的口含烟体内烟碱吸收速率数据作为比较数据。

7.如权利要求1所述的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，其特征在于，所述扩散池选自Franz扩散池、Valia-Chien水平扩散池或流通扩散池。

8.如权利要求1所述的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，其特征在于，所述扩散池和所述接收池内的溶媒选自以下中的一种或几种：水、人工唾液、生理盐水、唾液。

9.如权利要求1所述的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，其特征在于，评价所述口2

含烟烟碱体外吸收模型的有效性包括：r是否在0.96～1.03范围内，且所得体外烟碱释放速率与口含烟体内烟碱吸收速率之比是否在0.9～1.3范围内，若是，则所述口含烟烟碱体外吸收模型的有效性较好。

说明书

一种用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法

技术领域

[0001] 本发明属于公共卫生技术领域，涉及一种用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法。

背景技术

[0002] 近年来，随着公共场所对吸烟管控的日益严格，无烟气烟草制品市场快速增长，其中口含烟就是这类无烟气烟草制品。由于不需要燃烧、基本无焦油，口含烟具有比传统卷烟更安全、易携带等优点，满足了一定人群在特定场合中对烟草的需求。

[0003] 口含烟的效力一方面取决于烟碱含量，但由于人类吸食烟草制品行为的个体差异，烟草制品标示的烟碱量并不能确切表示人体摄入的烟碱量。更准确地评价口含烟效力的方法是评价血药浓度和持续时间，现在多以研究人体体液，包括血液、尿液、唾液中烟碱的含量来确认人体摄入烟碱的水平。但是，单纯依赖体内实验获得这些数据，面临着操作繁琐的问题，并且对实验人员和实验环境有较高要求。因此，通过模拟体内环境，用体外实验预测烟碱的体内特征，这对于口含烟的质量控制和新配方的开发具有重要意义。

[0004] 为此，例如，中国专利申请CN109030398A公开了一种口含烟烟碱释放行为检测方法及其专用测试仪器，通过该发明的方法及专用仪器可即时得到释放液中的烟碱含量，并绘制浓度随时间变化曲线，即口含烟烟碱释放行为曲线，为袋装口含烟的烟碱释放检测和调控提供技术支持和数据参考。该发明结合光纤传导技术、紫外光谱分析技术以及计算机数据处理技术对袋装口含烟的释放行为进行描绘。测定方法重现性好、自动化程度高、便于推广。

[0005] 另外，中国专利CN205352766U公开了一种用于口含烟溶出物采集的模拟口腔装置，通过人工唾液淋洗口含烟得到待测组分，再用结构改造过的药物溶出仪即时检测体系中的烟碱浓度；用两层薄膜来模拟口腔，将口含烟置于两层薄膜之间，人工唾液被导入用于浸润口含烟，检测导出液中的烟碱浓度。该装置使用便捷，将多套用于口含烟溶出物采集的模拟口腔装置并联，可同时开展口含烟模拟口腔溶出实验，提高工作效率。

[0006] 可以发现，现有技术中大多通过开发新的检测设备以及检测方法来模拟口腔环境，并将体外检测烟碱释放的情况来模拟体内吸收烟碱的行为。其主要研究方向在于如何让体外的模拟装置更加接近体内吸收烟碱的环境，并认为模拟装置越接近体内环境，则模拟效果越好。然而，上述这种不断接近体内环境的模拟的研究方向只是基于理论认知上所确定的可以改进的方向，研发的模拟装置到底是否能真正与人体体内口含烟烟碱吸收的情形类似？或者如何确定哪些改进特征能够更加接近体内口含烟烟碱吸收的情况？现有技术缺乏对模拟效果验证的实践手段。

发明内容

[0007] 基于上述问题，本发明提出一种用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法。

[0008] 本发明提供了一种用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，该方法适用于检测口含烟烟碱体外吸收模型的有效性，口含烟烟碱体外吸收模型包括扩散池，扩散池中设有控释膜，口含烟的烟碱通过被动扩散的方式穿过所述控释膜到达接收池，该方法包括以下步骤：开始测试：将口含烟放入所述口含烟烟碱体外吸收模型中进行烟碱被动扩散；测定不同时间点下接收池中的烟碱含量，计算累积烟碱释放量；以时间点为横坐标，相应时间点下累积的烟碱释放量为纵坐标，绘制体外烟碱累积释放量-释放时间离散点图；针对所述体外烟碱累积释放量-释放时间离散点图利用零级动力学模型拟合曲线，获得体外拟合模型曲线图，得到体外拟合曲线的相关系数r2以及烟碱体外释放速率；获得相应的口含烟体内烟碱吸收速率；检查获得的拟合曲线的相关系数r2是否接近1，比较由拟合曲线获得的体外释放速率和相应的口含烟体内吸收速率的数值大小是否接近，评价所述口含烟烟碱体外吸收模型的有效性。

[0009] 进一步地，利用高效液相色谱法测定不同时间点下接收池中的烟碱含量。

[0010] 进一步地，接收池中的烟碱含量从开始测试之后的一小时以及之后测定。

[0011] 进一步地，在开始测试之后分别于1、2、3、4、5、6、7、8h测定接收池中的烟碱含量。

[0012] 进一步地，口含烟体内烟碱吸收速率为体内两小时内的吸收速率。

[0013] 进一步地，获得相应的口含烟体内烟碱吸收速率的方法包括：

[0014] 建立两小时内体内血液烟碱浓度-时间曲线，利用零级动力学模型拟合曲线，获得体内拟合模型曲线图，根据斜率得到口含烟体内烟碱吸收速率作为比较数据；或者，[0015] 直接利用文献中已有的两小时内相应的口含烟体内烟碱吸收速率数据作为比较数据。

[0016] 进一步地，扩散池选自Franz扩散池、Valia-Chien水平扩散池或流通扩散池。

[0017] 进一步地，扩散池和接收池内的溶媒选自以下中的一种或几种：水、人工唾液、生理盐水、唾液。

[0018] 进一步地，评价口含烟烟碱体外吸收模型的有效性包括：r2是否在0.96～1.03范围内，且所得体外烟碱释放速率与口含烟体内烟碱吸收速率之比是否在0.9～1.3范围内，若是，则所述口含烟烟碱体外吸收模型的有效性较好。

[0019] 本发明的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，为目前口含烟烟碱体外吸收模型的有效性提供了评判方法，通过本发明的评价方法能够有效确定体内烟碱吸收的模拟相似性，为后期口含烟烟碱体外吸收模型的研发提供有效性的检验手段。

具体实施方式

[0020] 以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭示的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。虽然本发明的描述将结合较佳实施例一起介绍，但这并不代表此发明的特征仅限于该实施方式。恰恰相反，结合实施方式作发明介绍的目的是为了覆盖基于本发明的权利要求而有可能延伸出的其它选择或改造。为了提供对本发明的深度了解，以下描述中将包含许多具体的细节。本发明也可以不使用这些细节实施。此外，为了避免混乱或模糊本发明的重点，有些具体细节将在描述中被省略。

[0021] 现有的技术开发或建立了口含烟烟碱的体外评价装置或方法，但没有建立体外释放和体内吸收的相关性，无法评价体外模型的有效性。因此，有必要开发用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，能用于了解体外口含烟烟碱模拟装置或方法的模拟效果。

[0022] 本发明提出一种用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，适用于检测口含烟烟碱体外吸收模型的有效性，该口含烟烟碱体外吸收模型包括扩散池，扩散池中设有控释膜，口含烟的烟碱通过被动扩散的方式穿过控释膜到达接收池。目前常用的扩散池例如有Franz扩散池，Valia-Chien水平扩散池和流通扩散池等等，或者也可以是一些盛装有溶媒物质的容器，例如水槽，其作用主要在于为口含烟体外释放提供扩散环境。在扩散池中会装有溶媒，例如水、人工唾液、生理盐水、唾液，或者是上述提到的几种溶媒的混合。控释膜用于模拟人体的口腔粘膜，人体服用口含烟时口含烟中的烟碱透过口腔粘膜进入人体，在体外模拟就是口含烟透过控释膜进入接收池。接收池中烟碱的含量相当于透过口腔粘膜被人体吸收的量。那么如何能够确定进入接收池中的烟碱含量变化状态是否与人体内部吸收烟碱变化状态相似，进而判断出口含烟烟碱体外吸收模型的有效性？本发明的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法包括以下步骤：

[0023] 开始测试：将口含烟放入待测试的口含烟烟碱体外吸收模型中进行烟碱被动扩散；测定不同时间点下接收池中的烟碱含量，计算累积烟碱释放量；以时间点为横坐标，相应时间点下累积的烟碱释放量为纵坐标，绘制体外烟碱累积释放量-释放时间离散点图；针对上述体外烟碱累积释放量-释放时间离散点图利用零级动力学模型拟合曲线，获得体外拟合模型曲线图，得到体外拟合曲线的相关系数r2以及烟碱体外释放速率；获得相应的口2
含烟体内烟碱吸收速率；检查获得的拟合曲线的相关系数r是否接近1，比较由拟合曲线获得的体外释放速率和相应的口含烟体内吸收速率的数值大小是否接近，评价所述口含烟烟碱体外吸收模型的有效性。

[0024] 发明人发现，口含烟在人体吸收初期主要是烟碱扩散进入人体血液，其吸收情况遵循线性增长，体内烟碱吸收速率在初期维持在较为稳定的数值。因此，若口含烟烟碱体外吸收模型中口含烟释放速率也能保持线性关系，且烟碱释放速率在数值上与体内烟碱吸收速率接近，则可认为该模型较为合理地模拟了体内烟碱吸收情况，模拟的有效性较高。

[0025] 在上述提到的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法中，由于不同口含烟的种类在体内的吸收速率在数值上不同，因此上述方法在检测体外烟碱释放速率时所用的口含烟应当与体内烟碱吸收所用的口含烟相同。

[0026] 在上述提到的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法中，检查相关系数r2是否接近1，以及比较体外释放速率和相应的口含烟体内吸收速率的数值大小是否接近，是一个相对的概念，r2和体外释放速率数值大小并没有绝对值的限定范围，本发明是通过获得的r2相对于1以及体外释放速率相对于体内吸收速率是否更加接近来对口含烟烟碱体外吸收的模拟情况进行评价。

[0027] 举例来说，例如对两种口含烟烟碱体外吸收模型A和B进行测试评价两者的有效性。模型A通过本发明的方法获得的相关系数为r1，烟碱体外释放速率为v1，模型B采用相同的口含烟，通过本发明的方法获得的相关系数为r2，烟碱体外释放速率为v2。若r1比r2更接近1，则模型A的线性模拟效果更好。若v1比v2在数值大小上更接近相同口含烟在体内的吸收速率，则模型A与体内烟碱吸收相关性更好，那么模型A模拟体内烟碱吸收的有效性更高。通过模型A和模型B检测出的相关系数以及体外烟碱释放速率相对于体内吸收情况的相对比较，可以进行两种模型有效性的相对比较。

[0028] 在本发明中，也可以对相关系数和体外烟碱释放速率在数值上进行范围划定。通常来说，线性模拟后的相关系数r2越接近1有效性越高，体外烟碱释放速率在数值上越接近体内烟碱吸收速率有效性越高。进一步细化到数值范围上，评价口含烟烟碱体外吸收模型的有效性可以通过如下方法判断：r2是否在0.96～1.03范围内，且所得体外烟碱释放速率与口含烟体内烟碱吸收速率之比是否在0.9～1.3范围内，若是，则口含烟烟碱体外吸收模型的有效性较好。

[0029] 在上述提到的于评价口含烟烟碱体外吸收的方法中，由于口含烟通过口腔摄入人体后血液中烟碱含量在两小时内能够保持线性增长，两小时内的吸收速率大小较为稳定，而口含烟烟碱体外吸收模型模拟的就是一种烟碱释放匀速增长的过程。因此，选取两小时内人体体内的烟碱吸收速率的数据作为比较参数，在将体外烟碱释放速率与体内烟碱吸收速率进行比较时，评价结果更加准确。

[0030] 进一步地，关于体内烟碱吸收速率的获得，可以建立两小时内体内血液烟碱浓度-时间曲线，利用零级动力学模型拟合曲线，获得体内拟合模型曲线图，根据斜率得到口含烟体内烟碱吸收速率作为比较数据。或者，也可以直接利用文献中已有的两小时内相应的口含烟体内烟碱吸收速率数据作为比较数据。

[0031] 为了能更加准确地评价体外烟碱释放速率是否与体内烟碱吸收速率是否接近，一般可将接收池中的烟碱含量从开始测试之后的一小时以及之后测定。具体地，在开始测试之后分别于1、2、3、4、5、6、7、8h测定接收池中的烟碱含量。由于口含烟烟碱体外吸收模型中体外烟碱释放速率始终为线性增长，因此可以选取超过两小时以后的数据，选取数据较多时，模拟结果更加精确。

[0032] 关于接收池中的烟碱含量的测定，可以是在某一时间点上取出所有接收池中的液体进行检测并换上新的溶媒，进而计算累积烟碱释放量。或者是从接收池中取出固定体积的液体，通过测定固定体积中烟碱含量推出整个接收池中烟碱的含量，进而计算累积烟碱释放量。并补充等体积的溶媒。具体操作方式可参考下述介绍的具体实施例。

[0033] 关于接受池中烟碱含量的测定，可以采用高效液相色谱法(HPLC)，或者其它分析方法。体外烟碱释放速率和体内烟碱吸收速率最后要换算成一致的单位，方便统一比较。

[0034] 下面将通过以下具体实施例对本发明的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法作具体介绍。本实施例以本发明技术方案为前提进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

[0035] 实施例1：

[0036] 将猪口腔黏膜固定在Franz扩散池(渗透面积为3.46cm2)之间，离体黏膜上皮层面向供给室，组织面面向接受池。将1小袋mocca口含烟样品(0.12～0.14g)置于扩散池供给室，加入1ml人工唾液润湿后，分别于5、10、15、20、25、30、45、60、75和90min取出接受池内全部液体(8.0ml)，并换上全新的等温生理盐水。取出的样品经0.22μm微孔滤膜过滤，用HPLC法测定样品的烟碱含量，计算累积渗透量。用零级释放方程拟合体外释放曲线，结果见表1。

[0037] 表1.mocca口含烟中烟碱透过猪口腔黏膜的渗透实验

[0038]

[0039] 实施例2：

[0040] 将聚碳酸酯膜(0.05μm孔径)固定在Valia-Chien扩散池(渗透面积为0.785cm2)之间。将1小袋Golden Deer口含烟样品(0.30-0.37g)置于扩散池供给室，加入10ml的超纯水，接收液是10mL的超纯水。分别于1、2、3、4、5、6、7和8h从接收池中取1ml的样品，并立即补充等体积等温度的接收液。取出的样品经0.22μm微孔滤膜过滤，用HPLC法测定样品的烟碱含量，计算累积渗透量。用零级释放方程拟合体外释放曲线，结果见表2。

[0041] 表2.Golden Deer口含烟中烟碱透过Whatman(0.05μm孔径)薄膜的渗透实验[0042]

[0043]

[0044] 实施例3：

[0045] 将纤维素膜(截留分子量14K)固定在Valia-Chien扩散池(渗透面积为0.785cm2)之间。将1小袋Golden Deer口含烟样品(0.30-0.37g)置于扩散池供给室，加入10ml的超纯水，接收液是10mL的超纯水。分别于1、2、3、4、5、6、7和8h从接收池中取1ml 的样品，并立即补充等体积等温度的接收液。取出的样品经0.22μm微孔滤膜过滤，用HPLC 法测定样品的烟碱含量，计算累积渗透量。用零级释放方程拟合体外释放曲线，结果见表 3。

[0046] 表3.Golden Deer口含烟中烟碱透过纤维素膜(截留分子量14K)的渗透实验[0047]

[0048] 实施例4：

[0049] 将醋酸纤维素膜(截留分子量5K)固定在Valia-Chien扩散池(渗透面积为2
0.785cm) 之间。将1小袋Golden Deer口含烟样品(0.30-0.37g)置于扩散池供给室，加入
10ml的超纯水，接收液是10mL的超纯水。分别于1、2、3、4、5、6、7和8h从接收池中取1ml 的样品，并立即补充等体积等温度的接收液。取出的样品经0.22μm微孔滤膜过滤，用HPLC 法测定样品的烟碱含量，计算累积渗透量。用零级释放方程拟合体外释放曲线，结果见表4。

[0050] 表4.Golden Deer口含烟中烟碱透过醋酸纤维素膜(截留分子量5K)的渗透实验[0051]

[0052] 实施例5：

[0053] 将聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯、4-羟基丁基丙烯酸酯、马来酸二乙酯质量比2:2:1，膜厚度40μm)固定在Valia-Chien扩散池(渗透面积为0.785cm2)之间。将1小袋Golden Deer口含烟样品(0.30-0.37g)置于扩散池供给室，加入10ml的超纯水，接收液是10mL的超纯水。分别于1、2、3、4、5、6、7和8h从接收池中取1ml的样品，并立即补充等体积等温度的接收液。取出的样品经0.22μm微孔滤膜过滤，用HPLC法测定样品的烟碱含量，计算累积渗透量。用零级释放方程拟合体外释放曲线，结果见表5。

[0054] 表5.Golden Deer口含烟中烟碱透过聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯、4-羟基丁基丙烯酸酯、马来酸二乙酯质量比2:2:1，膜厚度40μm)的渗透实验[0055]

[0056] 实施例6：

[0057] 将聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯、4-羟基丁基丙烯酸酯、马来酸二乙酯质量比2:2:1，膜厚度30μm)固定在Valia-Chien扩散池(渗透面积为0.785cm2)之间。将1小袋Golden Deer口含烟样品(0.30-0.37g)置于扩散池供给室，加入10ml的超纯水，接收液是10mL的超纯水。分别于1、2、3、4、5、6、7和8h从接收池中取1ml的样品，并立即补充等体积等温度的接收液。取出的样品经0.22μm微孔滤膜过滤，用HPLC法测定样品的烟碱含量，计算累积渗透量。用零级释放方程拟合体外释放曲线，结果见表6。

[0058] 表6.Golden Deer口含烟中烟碱透过聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯、4-羟基丁基丙烯酸酯、马来酸二乙酯质量比2:2:1，膜厚度30μm)的渗透实验[0059]

[0060] 实施例7：

[0061] 将聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯、4-羟基丁基丙烯酸酯、马来酸二乙酯、聚乙二醇600质量比36:36:18:10，膜厚度30μm)固定在Valia-Chien扩散池(渗透面积为0.785cm2)之间。将1小袋Golden Deer口含烟样品(0.30-0.37g)置于扩散池供给室，加入10ml的超纯水，接收液是10mL的超纯水。分别于1、2、3、4、5、6、7和8h从接收池中取1ml的样品，并立即补充等体积等温度的接收液。取出的样品经0.22μm微孔滤膜过滤，用HPLC法测定样品的烟碱含量，计算累积渗透量。用零级释放方程拟合体外释放曲线，结果见表7。

[0062] 表7.Golden Deer口含烟中烟碱透过聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯、4-羟基丁基丙烯酸酯、马来酸二乙酯、PEG600质量比36:36:18:10，膜厚度30μm)的渗透实验

[0063]

[0064]

[0065] 实施例8：

[0066] 将聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯、4-羟基丁基丙烯酸酯、马来酸二乙酯、聚乙二醇4000质量比36:36:18:10，膜厚度30μm)固定在Valia-Chien扩散池(渗透面积为0.785cm2)之间。将1小袋Golden Deer口含烟样品(0.30-0.37g)置于扩散池供给室，加入10ml的超纯水，接收液是10mL的超纯水。分别于1、2、3、4、5、6、7和8h从接收池中取1ml的样品，并立即补充等体积等温度的接收液。取出的样品经0.22μm微孔滤膜过滤，用HPLC法测定样品的烟碱含量，计算累积渗透量。用零级释放方程拟合体外释放曲线，结果见表8。

[0067] 表8.Golden Deer口含烟中烟碱透过聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯、4-羟基丁基丙烯酸酯、马来酸二乙酯、PEG4K质量比36:36:18:10，膜厚度30μm)的渗透实验

[0068]

[0069] 实施例9：

[0070] 将聚丙烯酸酯膜(将2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯，4-羟基丁基丙烯酸酯，1,6-己二醇二丙烯酸酯、PEG 10K、PEG400质量比40:40:8.9:1.1:2.2，膜厚度35μm)固定在Valia-Chien 扩散池(渗透面积为0.785cm2)之间。将1小袋Golden Deer口含烟样品(0.30-0.37g)置于扩散池供给室，加入10ml的超纯水，接收液是10mL的超纯水。分别于1、2、3、4、5、 
6、7和8h从接收池中取1ml的样品，并立即补充等体积等温度的接收液。取出的样品经 0.22μm微孔滤膜过滤，用HPLC法测定样品的烟碱含量，计算累积渗透量。用零级释放方程拟合体外释放曲线，结果见表9。

[0071] 表9.Golden Deer口含烟中烟碱透过聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯、4-羟基丁基丙烯酸酯、1,6-己二醇二丙烯酸酯、PEG10K、PEG400质量比40:40:8.9:1.1:2.2，膜厚度35μm)的渗透实验

[0072]

[0073] 实施例10：

[0074] 将聚丙烯酸酯膜(将2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯，4-羟基丁基丙烯酸酯，1,6-己二醇二丙烯酸酯、PEG10K、PEG400质量比18:18:4:1:2，膜厚度10μm)固定在Valia-Chien 扩散池(渗透面积为0.785cm2)之间。将1小袋General White Portion(Sweden Snus)口含烟样品(0.80-0.90g)置于扩散池供给室，加入10ml的超纯水，接收液是10mL的超纯水。分别于1、2、3、4、5、6、7和8h从接收池中取1ml的样品，并立即补充等体积等温度的接收液。取出的样品经0.22μm微孔滤膜过滤，用HPLC法测定样品的烟碱含量，计算累积渗透量。用零级释放方程拟合体外释放曲线，结果见表10。

[0075] 表10.General White Portion口含烟中烟碱透过聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯，4-羟基丁基丙烯酸酯，1,6-己二醇二丙烯酸酯、PEG10K、PEG400质量比18:18:4:1:2，膜厚度10μm)的渗透实验

[0076]

[0077]

[0078] 实施例11：

[0079] 将聚丙烯酸酯膜(将2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯，4-羟基丁基丙烯酸酯，1,6-己二醇二丙烯酸酯、PEG10K、PEG400质量比18:18:4:1:2，膜厚度10μm)固定在Valia-Chien 扩散池(渗透面积为0.785cm2)之间。将1小袋Catch Licorice Dry Mini(Sweden Snus)口含烟样品(0.30-0.33g)置于扩散池供给室，加入10ml的超纯水，接收液是10mL的超纯水。分别于1、2、3、4、5、6、7和8h从接收池中取1ml的样品，并立即补充等体积等温度的接收液。取出的样品经0.22μm微孔滤膜过滤，用HPLC法测定样品的烟碱含量，计算累积渗透量。用零级释放方程拟合体外释放曲线，结果见表11。

[0080] 表11.Catch Licorice Dry Mini口含烟中烟碱透过聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯，4- 羟基丁基丙烯酸酯，1,6-己二醇二丙烯酸酯、PEG10K、PEG400质量比18:18:4:1:2，膜厚度10μm)的渗透实验

[0081]

[0082] 实施例12：

[0083] 将聚丙烯酸酯膜(将2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯，4-羟基丁基丙烯酸酯，1,6-己二醇二丙烯酸酯、PEG10K、PEG400质量比18:18:4:1:2，膜厚度13μm)固定在Valia-Chien 2
扩散池(渗透面积为0.785cm)之间。将1小袋General White Portion(Sweden Snus)口含烟样品(0.80-0.90g)置于扩散池供给室，加入10ml的超纯水，接收液是10mL的超纯水。分别于1、2、3、4、5、6、7和8h从接收池中取1ml的样品，并立即补充等体积等温度的接收液。取出的样品经0.22μm微孔滤膜过滤，用HPLC法测定样品的烟碱含量，计算累积渗透量。用零级释放方程拟合体外释放曲线，结果见表12。

[0084] 表12.General White Portion口含烟中烟碱透过聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯，4-羟基丁基丙烯酸酯，1,6-己二醇二丙烯酸酯、PEG10K、PEG400质量比18:18:4:1:2，膜厚度13μm)的渗透实验

[0085]

[0086] 实施例13：

[0087] 将聚丙烯酸酯膜(将2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯，4-羟基丁基丙烯酸酯，1,6-己二醇二丙烯酸酯、PEG10K、PEG400质量比18:18:4:1:2，膜厚度13μm)固定在Valia-Chien 扩散池(渗透面积为0.785cm2)之间。将1小袋Catch Licorice Dry Mini(Sweden Snus)口含烟样品(0.30-0.33g)置于扩散池供给室，加入10ml的超纯水，接收液是10mL的超纯水。分别于1、2、3、4、5、6、7和8h从接收池中取1ml的样品，并立即补充等体积等温度的接收液。取出的样品经0.22μm微孔滤膜过滤，用HPLC法测定样品的烟碱含量，计算累积渗透量。用零级释放方程拟合体外释放曲线，结果见表13。

[0088] 表13.Catch Licorice Dry Mini口含烟中烟碱透过聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯，4- 羟基丁基丙烯酸酯，1,6-己二醇二丙烯酸酯、PEG10K、PEG400质量比18:18:4:1:2，膜厚度13μm)的渗透实验

[0089]

[0090] 实施例14

[0091] 从实施例1～13，我们可以得出结论：通过调节控释膜的种类、控释膜的组成成分、控释膜的厚度等因素，可以调节控释膜的渗透速率。接下来，我们要建立口含烟烟碱吸收的体内-体外相关性。

[0092] 口含烟的体内吸收的数据来源于文献：Nicotine&Tobacco Research Volume 7,Number 3(June 2005)397–403，报道的两款口含烟的血药浓度的数值。这两款口含烟的体内吸收速率的结果见表14。

[0093] 表14口含烟的体内吸收速率

[0094]

[0095] 用例12、例13的口含烟烟碱体外渗透速率与口含烟烟碱体内吸收速率进行比较，结果见表15。

[0096] 表15口含烟烟碱体内吸收vs.体外渗透

[0097]

[0098] 用聚丙烯酸酯膜(2-丙烯酸-2-羟基-3-苯氧基丙酯，4-羟基丁基丙烯酸酯，1,6-己二醇二丙烯酸酯、PEG10K、PEG400质量比18:18:4:1:2，膜厚度13μm)作为口含烟烟碱体外释放的控释膜时，它对口含烟烟碱的体外渗透速率大约是口含烟烟碱体内吸收速率的 1.1～1.2倍。结果表明体内吸收和体外渗透具有很好的相关性。

[0099] 由于选择不同的控释膜，其渗透速率是不同的，因此我们总能够找到一款控释膜用于模拟口含烟烟碱的体内吸收，使得体内吸收和体外渗透具有很好的相关性。通过本发明的用于评价口含烟烟碱体外吸收的方法，为口含烟烟碱体外吸收的模拟效果提供了评价依据，有助于筛选出模拟效果好的口含烟烟碱体外模拟吸收系统(例如扩散池、控释膜的筛选)。

[0100] 上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。