一对同分异构体、其制备方法及应用转让专利
申请号 : CN202011491607.6
文献号 : CN112480134B
文献日 : 2021-11-05
发明人 : 罗稳 , 李景华 , 黄抗 , 龚慧媛 , 赵永梅
申请人 : 河南大学
摘要 :
权利要求 :
1.一对同分异构体,其特征在于,所述同分异构体的化学结构如式(I)和(II)所示:
(I) (II)
2.权利要求1所述的同分异构体的制备方法,其特征在于,包括以下制备步骤:将(E)‑
2‑(2‑((Z)‑1,3,3‑三甲基吲哚‑2‑亚乙基)亚乙基)呋喃[2,3‑b]喹啉‑3,4(2H,9H)‑二酮、硫酸二乙酯、无水碳酸盐及有机溶剂混合,加热搅拌反应后,浓缩有机相,经分离提纯即可得式(I)和(II)所述化合物,所述无水碳酸盐为无水碳酸钾或无水碳酸钠。
3.根据权利要求2所述的同分异构体的制备方法,其特征在于,所述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、丙酮、乙酸乙酯或N,N‑二甲基甲酰胺,所述的(E)‑2‑(2‑((Z)‑1,3,3‑三甲基吲哚‑2‑亚乙基)亚乙基)呋喃[2,3‑b]喹啉‑3,4(2H,9H)‑二酮、硫酸二乙酯、无水碳酸盐摩尔比为1:(1 2):(1 3)。
~ ~
4.根据权利要求2所述的同分异构体的制备方法,其特征在于:所述的加热温度为40℃
80 ℃,所述的分离提纯为柱层析和/或重结晶,所用分离溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸乙酯、~
丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、石油醚、正己烷中的单一溶剂或任意比例的混合溶剂。
5.权利要求1所述的式(I)所示的化合物在制备用于生物细胞内脂滴检测的探针中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述细胞为SH‑SY5Y或Hela细胞。
7.权利要求1所述的式(II)所示的化合物在制备黏度检测剂中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,黏度是指甘油‑水体系中的黏度。
9.权利要求1所述的式(II)所示的化合物在环氧树脂中作为荧光探针的应用。
10.权利要求1所述的式(II)所示的化合物在制备乙酰胆碱酯酶抑制剂中的应用。
说明书 :
一对同分异构体、其制备方法及应用
技术领域
背景技术
磷脂酰肌醇。脂滴与其它细胞器相互作用,可能在脂类代谢与存储、膜转运、蛋白降解,以及
信号传导过程中起着重要的作用。另外,研究还表明,多种代谢性疾病,如肥胖、脂肪肝、心
血管疾病及糖尿病、中性脂贮存性疾病有关。
敏度高、选择性高、响应速度快的脂滴探针对脂滴在生物体内的分布以及功能研究具有重
要的意义。
就需在流体流动方向上加一切线力以对抗阻力作用。传统的黏度探针应用于材料后荧光强
度低、稳定性差、荧光寿命短等缺点,因此开发出一种高灵敏度、高稳定性、响应速度快、荧
光寿命长的黏度探针对黏度检测具有一定的意义。
兴奋作用,保证神经信号在生物体内的正常传递。阿尔茨海默症俗称老年痴呆,是一种在老
人群体中十分常见的疾病,目前临床上的治疗药物主要是AChE抑制剂,如多奈哌齐,卡巴拉
汀,加兰他敏等,这些药物能够制AChE对乙酰胆碱的水解,提高患者脑内神经递质乙酰胆碱
的水平,因此可以改善患者的记忆认知功能。哺乳动物中还存在另外一种胆碱酯酶,与AChE
结构十分相似,称为丁酰胆碱酯酶(简写为BChE),能够水解丁酰胆碱,但它主要存在于外周
系统。许多文献报道的化合物对AChE和BChE的抑制作用没有选择性,因此会对外周系统产
生毒副作用。开发新的选择性抑制AChE的化合物对阿尔兹海默症的治疗具有重要意义。
发明内容
三是提供上述同分异构体在脂滴检测、黏度、抑制乙酰胆碱酯酶活性中的应用。
盐及有机溶剂混合,加热反应后,过滤得滤液,滤饼用氯仿洗涤,合并溶液蒸干,加入冰水,
氯仿萃取,有机相干燥,浓缩有机相,用柱层析分离后,即可得到所述的同分异构体,无水碳
酸盐为无水碳酸钾或无水碳酸钠。
~ ~
构体(II)。
附图说明
具体实施方式
紫外分光光度计。其他参数参照常规仪器设置即可。
DMF中,搅拌下用恒压滴液漏斗滴加含有硫酸二乙酯(231 mg,1.5 mmol)的DMF溶液10 mL。
滴加完毕,升温至60℃搅拌反应30分钟。反应完成,过滤得滤液,滤饼用氯仿洗涤三次,每次
10 mL。合并溶液并蒸干,加入30mL冰水,用氯仿萃取三次,每次30 mL。合并有机层,无水硫
酸钠干燥,蒸干后用柱层析纯化。用石油醚/乙酸乙酯 =2:1(体积比)洗脱得到有同分异构
体(I)210 mg, 产率 51%。所得产物核磁谱图分别为图2、图3所示。产物鉴定数据如下:
(s, 1H), 7.04 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.95 (d, J =
13.2 Hz, 1H), 5.26 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.37 (s, 3H), 1.73 (s, 6H), 1.62 (t,
13
J = 7.2 Hz, 3H). CNMR (75 MHz, CDCl3) δ 175.32, 165.50, 164.41, 161.89,
148.42, 143.05, 140.81, 138.42, 131.60, 126.93, 126.49, 124.13, 123.14,
120.70, 120.53, 119.04, 112.84, 106.31, 101.07, 88.91, 71.84, 45.81, 28.67,
27.40, 27.40, 14.59.
8.1, 4.8 Hz, 3H), 6.89 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.50
(d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.35 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.22 (s, 3H), 1.56 (s, 6H),
13
1.43 (t, J = 7.2 Hz, 3H). CNMR (75 MHz, CD2Cl2) δ 176.14, 172.35, 165.80,
165.76, 144.29, 141.43, 139.49, 137.70, 132.91, 128.03, 127.76, 127.49,
124.35, 121.83, 121.57, 115.37, 112.63, 107.41, 102.94, 87.28, 46.96, 39.24,
29.64, 28.33, 28.33, 13.44.
搅拌下滴加含有硫酸二乙酯(231 mg,1.5 mmol)的乙腈溶液10 mL,滴加完毕后升温至70
℃搅拌反应30分钟。反应完毕,将反应液过滤,并用氯仿洗涤滤饼三次,每次20 mL。将滤液
合并,蒸干溶剂后,加入30mL冰水,用氯仿萃取三次,每次30 mL,合并有机层,无水硫酸钠干
燥,蒸干后用柱层析纯化。洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯=2:1(体积比),得到同分异构体(I)
196 mg,产率 48%。核磁数据与实施例1中的同分异构体(I)相同。
Hela细胞接种到灭菌的35 mm成像培养皿中,密度为2.0×10 个/皿,在培养箱(温度为37
℃,5%体积分数的CO2)中培养,待细胞贴壁后,向细胞中加入化合物(I)以及商业化染料尼
罗红,同分异构体(I)的最终浓度为5 μM,尼罗红最终浓度为10 μM。半小时后,弃掉培养基,
用PBS缓冲液冲洗细胞3次,随后进行荧光成像(化合物(I)的激发波长为488 nm,黄色通道
550‑600 nm;尼罗红的激发波长为473 nm,红色通道570‑650 nm),结果如图6所示。其中,A
为本发明所合成的同分异构体(I)在SH‑SY5Y细胞内的成像图;B为商业染料尼罗红在SH‑
SY5Y细胞内的成像图;C是A和B的叠加图;D为同分异构体(I)在Hela细胞内的成像图;E为尼
罗红在Hela细胞内的成像图;F是D和E的叠加图;由图6可看出,化合物(I)与尼罗红的成像
位置一致,表明同分异构体(I)定位于细胞中的脂滴。5 μM的化合物(I)与10 μM的尼罗红亮
度相近,表明本发明的同分异构体(I)荧光性质优于商业染料尼罗红。
60%,70%,80%,90%,100%),然后加入同分异构体(II)的储备液(终浓度为10 μM),用荧光分
光光度计测各个体系的荧光光谱,如图7所示,激发波长为504 nm。由图7可以看出,随着甘
油比例的增加(体系黏度逐渐增大),560 nm处的荧光强度增强,且增强倍数与甘油比例呈
良好的曲线关系(图8),表明同分异构体(II)对溶液粘度具有荧光响应,因此具有检测体系
粘度的潜在应用价值。
的块状材料在365 nm紫外灯下照射,发射出明亮的绿色荧光。持续用紫外灯照射以考察材
料荧光的稳定性,如图9和图10所示。由图10可看出,在365 nm紫外灯下连续照射72小时后,
材料在最大发射波长521 nm处的荧光强度衰减小于5%,表明(II)在滴胶中的稳定性较好。
μM,200 μM)进行测试,卡巴拉汀为阳性对照药物。通过化合物的浓度对AChE的抑制率作图,
可计算出半数抑制浓度(IC50值),结果见表1。同分异构体(II)的IC50仅为0.24 μM,是市售
药物卡巴拉汀的27/1,表明(II)对AChE的抑制活性远高于卡巴拉汀。同时,测试了化合物对
BChE的抑制活性,发现(II)对BChE的IC50值为120.35 μM,表明(II)能够选择性的抑制AChE。
而同分异构体(I)对两种胆碱酯酶的IC50活性均大于50 μM,抑制活性较弱。
相同剂量(灌胃,20 μmol/kg体重,生理盐水配制)的化合物(II)和卡巴拉汀连续四天,第四
天进行测试,结果如图11所示。由图11可知,给予化合物(II)的小鼠找到水迷宫中平台的平
均时间比卡巴拉汀组更短,表明化合物(II)比卡巴拉汀具有更强的改善记忆认知功能。
为等效的置换方式,都包含在本发明保护范围之内。