一种微/纳米分级多孔微球及其制备方法与应用转让专利
申请号 : CN202011335083.1
文献号 : CN112535759B
文献日 : 2022-02-08
发明人 : 焦延鹏 , 谭莉慧 , 周长忍
申请人 : 暨南大学
摘要 :
权利要求 :
1.一种微/纳米分级多孔微球的制备方法,其特征在于包括如下步骤:(1)制备甲壳素纳米纤维与壳聚糖的混合溶液将纳米纤维长度为20‑200nm的甲壳素纳米纤维悬浮液与壳聚糖溶液混合,均质,得到混合溶液;
(2)制备Pickering乳液将步骤(1)得到的混合溶液与有机相混合,均质,得到Pickering乳液;
(3)制备微/纳米分级多孔微球将步骤(2)得到的Pickering乳液采用高压静电液滴喷射技术形成微液滴,接收,脱水去油,干燥,获得微/纳米分级多孔微球;
步骤(1)中所述甲壳素纳米纤维悬浮液为酸性条件下将浓度为0.5~2.0wt%的甲壳素水溶液搅拌、研磨和均质后得到;
步骤(1)中所述甲壳素纳米纤维悬浮液中甲壳素纳米纤维长度为20~200nm;
步骤(1)中所述壳聚糖溶液为溶于乙酸溶液后搅拌至完全溶解得到;所述乙酸溶液的浓度为体积比1%~2%;
步骤(1)中所述壳聚糖溶液的浓度为2.0~5.0wt%;
步骤(1)中所述甲壳素纳米纤维悬浮液与所述壳聚糖溶液的用量为体积比1:1‑3:1;
步骤(2)中所述混合溶液与所述的有机相的体积比为30~50:50~70;
步骤(3)中所述脱水去油为依次用体积比为20%、40%、60%、80%和100%的乙醇溶液进行梯度脱水去油。
2.根据权利要求1所述的微/纳米分级多孔微球的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述甲壳素纳米纤维悬浮液与所述壳聚糖溶液的用量为体积比1:1;
步骤(2)中所述混合溶液与所述的有机相的体积比为40~50:50~60。
3.根据权利要求1所述的微/纳米分级多孔微球的制备方法,其特征在于,所述酸性条件下的pH通过乙酸溶液调节,pH为1~6;
所述的乙酸溶液的体积比为1%;
所述的搅拌的时间为12~48h;
所述研磨的条件:研磨压力150~400MPa、研磨次数20~60times;
所述均质的条件:转速8000~15000rpm、分散时间0.5~2h。
4.根据权利要求3所述的微/纳米分级多孔微球的制备方法,其特征在于,所述酸性条件下的pH为3~4;
所述的搅拌的时间为24h;
所述研磨的条件:研磨压力200MPa、研磨次数20times;
所述均质的条件:转速13000rpm、分散时间0.5h。
5.根据权利要求1所述的微/纳米分级多孔微球的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述均质的条件:转速8000~15000rpm,分散时间0.5~2h;
步骤(2)中所述有机相为不溶于水的任意有机溶剂;
步骤(2)中所述均质为7000~20000rpm转速条件下为均质10~60min。
6.根据权利要求1所述的微/纳米分级多孔微球的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述高压静电液滴喷射技术的参数为:注射器20mL,21~24号针头,电压为
10~20kV,接收距离为5~15cm,纺丝液流速为2~8mL/h,纺丝温度为20~30℃,湿度为30%~50%;
步骤(3)中所述接收的凝固浴为质量比1%~3%的氢氧化钠溶液;
步骤(3)中所述干燥为冷冻干燥。
7.根据权利要求6所述的微/纳米分级多孔微球的制备方法,其特征在于,所述冷冻干燥的时间为24~48h;
所述的冷冻干燥的温度为‑80~‑40℃。
8.一种微/纳米分级多孔微球,通过权利要求1‑7任一项所述的微/纳米分级多孔微球的制备方法制备得到。
9.权利要求8所述的微/纳米分级多孔微球在制备止血粉中的应用。
说明书 :
一种微/纳米分级多孔微球及其制备方法与应用
技术领域
背景技术
感染,损害自然愈合过程,甚至会导致危及生命的败血症。因此,快速止血不仅是初期生存
的必要策略,也是最理想的恢复手段。目前,常用的止血材料有明胶、淀粉、二氧化硅、水凝
胶、纤维素海绵、纳米纤维等。市面上也有许多止血产品,然而这些产品的疗效存在显著差
异,且尚未经过严格的临床试验评估。据报道,其中一些产品在严重出血时使用会形成感染
和脓肿,使组织愈合复杂化。因此,开发具有良好抗菌性能且能快速止血并促进创面组织修
复的新型止血材料,具有重要的科学研究意义和临床实用价值。
纳米纤维通常定义为直径小于100纳米,纵横比大于100的纤维,具有极高的表面体积比并
能形成高度多孔的网状结构。由于生物聚合物具有生物降解性、生物相容性、可再生性和可
持续性等环保功能,因此,利用生物聚合物产生纳米纤维成为一项重要的研究课题。
是由于它的聚阳离子的结构以及其分子与细胞膜之间的结合力,这使得它可作为良好的止
血材料。此外,壳聚糖廉价、无毒、抗菌、可酶降解、易于加工等优点使其在构建组织工程支
架、药物控释载体以及创面止血修复方面得到广泛的应用。
意外和军事事件中及时发挥作用,特别是对一些头部、颈部、胸部、腹部和躯干等不可按压
的敏感伤口时,效果更是难以提高。而粉末状材料能则能有效解决上述问题,其具有便于携
带,使用简便,快速实现创面的血液吸附,保持创面的干燥性,从而加速止血、促进修复的优
点。
发明内容
30%~50%。
油。
时间,促进创面修复;具有良好的吸附性能,在伤口修复期间不易滑落,能较好的黏附在创
口表面,从而降低外界微生物对伤口感染的可能性。
织内皮下基质中的胶原纤维形态,粘附并激活血小板,有利于加速止血;甲壳素纳米纤维能
够为微/纳米分级多孔微球提供有效的吸液能力,有效吸附创面血液,保持创面干燥。
好的抗菌性能有效抑制创面感染,生物相容性能促进细胞的黏附和增殖。
附图说明
具体实施方式
磨机研磨,研磨压力为200MPa,研磨次数为50times,后经高速均质机分散,转速为
10000rpm,均质时间为1h,得到稳定、均一的甲壳素纳米纤维悬浮液。取一定质量壳聚糖粉
末加入体积比为1%的醋酸溶液中,壳聚糖溶液浓度为2.0wt%,机械搅拌直至壳聚糖完全
溶解。取相同体积的甲壳素纳米纤维悬浮液和壳聚糖溶液,混合,经高速均质机进行均质,
均质转速为8000rpm,均质时间为1h,得到混合溶液。
为30times,后经高速均质机分散,转速为9000rpm,均质时间为1.5h,得到稳定、均一的甲壳
素纳米纤维悬浮液(纤维长度为100nm)。取一定质量壳聚糖粉末加入体积比为2%的醋酸溶
液中,壳聚糖溶液浓度为3.0wt%,机械搅拌直至壳聚糖完全溶解。取相同体积的甲壳素纳
米纤维悬浮液和壳聚糖溶液,混合,经高速均质机进行均质,均质转速为10000rpm,均质时
间为0.5h,得到混合溶液。
为40times,后经高速均质机分散,转速为12000rpm,均质时间为2h,得到稳定、均一的甲壳
素纳米纤维悬浮液(纤维长度为50nm)。取一定质量壳聚糖粉末加入体积比为2%的醋酸溶
液中,壳聚糖溶液浓度为3.0wt%,机械搅拌直至壳聚糖完全溶解。取相同体积的甲壳素纳
米纤维悬浮液和壳聚糖溶液,混合,经高速均质机进行均质,均质转速为8000rpm,均质时间
为1.5h,得到混合溶液。
200MPa,研磨次数为20times,后经高速均质机分散,转速为13000rpm,均质时间为0.5h,得
到稳定、均一的甲壳素纳米纤维悬浮液(纤维长度为20nm);取一定质量壳聚糖粉末加入体
积比为1%的醋酸溶液中,浓度为4.0wt%,室温条件下机械搅拌直至壳聚糖完全溶解即为
壳聚糖溶液。取相同体积的甲壳素纳米纤维悬浮液和壳聚糖溶液,混合,经高速均质机进行
均质,均质转速为8000rpm,均质时间为30min,得到混合溶液。
Pickering乳液。
以形成围绕橄榄油液滴形成牢固的三维网络,从而最终导致Pickering乳液在倒置瓶子中
的流动。而当甲壳素纳米纤维浓度达到或高于0.5wt%时,会形成均匀稳定的O/W型
Pickering乳液。这是因为当甲壳素纳米纤维到达一定浓度时其自身可以作为一种表面活
性剂,这种纳米纤维结构在油水界面分布,能将油相或者水相包裹在内,相当于形成一层致
密的膜对乳液进行包裹,从而达到稳定乳液的目的。
Pickering乳液。
Pickering乳液。
状Pickering乳液。
Pickering乳液。
Pickering乳液。
态状态。然而在油相比>60%时,会导致完全的相分离,乳液出现明显分层现象,这说明能保
持乳液稳定的最大油相比约为60%。
湿度为45%,接收的凝固浴为质量比为2%的氢氧化钠溶液。然后分别用体积比20~100%
的乙醇溶液进行梯度脱水去油处理(依次用体积比为20%、40%、60%、80%和100%的乙醇
进行梯度脱水处理),‑40℃冷冻干燥24h,获得微/纳米分级多孔微球。
度为45%,接收的凝固浴为质量比为2%的氢氧化钠溶液。然后分别用体积比20~100%的
乙醇溶液进行梯度脱水去油处理(依次用体积比为20%、40%、60%、80%和100%的乙醇进
行梯度脱水处理),‑60℃冷冻干燥24h,获得微/纳米分级多孔微球。
45%,接收的凝固浴为质量比为2%的氢氧化钠溶液。然后分别用体积比20~100%的乙醇
溶液进行梯度脱水去油处理(依次用体积比为20%、40%、60%、80%和100%的乙醇进行梯
度脱水处理),‑50℃冷冻干燥24h,获得的微/纳米分级多孔微球见图3。
45%,接收的凝固浴为质量比为2%的氢氧化钠溶液。然后分别用体积比20‑100%的乙醇溶
液进行梯度脱水去油处理(依次用体积比为20%、40%、60%、80%和100%的乙醇进行梯度
脱水处理),‑80℃冷冻干燥48h,获得微/纳米分级多孔微球。结果见图3。
为45%,接收的凝固浴为质量比为2%的氢氧化钠溶液。然后分别用体积比20‑100%的乙醇
溶液进行梯度脱水去油处理(依次用体积比为20%、40%、60%、80%和100%的乙醇进行梯
度脱水处理),‑70℃冷冻干燥48h,获得的微/纳米分级多孔微球。
例12制备得到的多孔微球表面为光滑致密,实施例13‑15制备得到的微球表面粗糙,球壁上
有大量的大孔和中孔,孔壁间由纳米纤维连结。从截面图中可以观察到,在微球中随机分布
范围从几纳米到几十微米的分级孔,且随着模板乳液中油相体积比的增加,所制备的气凝
胶孔的数量和类别也相应增加。
10mL蒸馏水而不干扰凝块,随后从中取出5mL溶液,在1000rpm下离心2min。收集上清液并在
37℃下保持30min,再将200μL的上清液转移至96孔板中,用酶标仪检测溶液在540nm处的吸
光度,结果见图5。
处的吸光度,血红蛋白溶液的吸光度值越低表明凝血速度越快。结果如图5所示,从图中可
以看出,甲壳素纳米纤维的引入以及多孔结构的构建有利于缩短止血时间,加速凝血,采用
有机相50‑70%制备的Pickering乳液得到的微球(CS/Ch‑50、CS/Ch‑60、CS/Ch‑70)具有良
好的加速止血作用。采用壳聚糖制备的微球(CS)、直接采用CS/Ch混合溶液制备的微球(CS/
Ch)不具有快速止血的效果。
揭开海绵观察伤口出血情况直至伤口停止出血,记录鼠尾出血时间,并用滤纸吸收溢出的
血液,称重以确定失血量。每个样本在三只大鼠身上进行评估,并以生理盐水作为对照
(Control)。
止出血,并用滤纸吸收溢出的血液,以确定失血量。每个样本在三只大鼠身上进行评估,并
以生理盐水作为对照(Control)。
纯CS微球粉末相比,CS/Ch‑60的止血时间缩短84s,出血量减少62%,这说明CS/Ch‑60样品
具有良好的止血能力。
品的止血时间分别为134s、107s、98s和71s,出血量则分别为0.38g、0.25g、0.21g和0.16g
(表1)。结果表明,引入甲壳素纳米纤维以及构建分级多孔结构可提高材料的止血性能。
下进行,温度为25℃,平均湿度保持在40%左右,所有大鼠均给予正常取食和饮水。制造创
面方法同实施例15。根据伤口被CS、CS/Ch和CS/Ch‑60样品处理的时间,将大鼠随机分为四
组,每组3只大鼠进行平行实验,分别在7d和14d时间点观察伤口修复效果。在样品表面覆盖
一层纱布,以隔绝空气中的水分和细菌,并防止在创面愈合过程中大鼠将复合物蹭掉。其
中,用生理盐水处理伤口作为空白对照组(Control)。在伤口被C、CS/Ch和CS/Ch‑60复合物
处理后的第7d和第14d对大鼠进行安乐死,切除伤口及周围健康皮肤组织,用于后续实验。
实验结束后,对所有老鼠尸体作无害化处理。
苯分别透明10min、5min;分别在软蜡Ⅰ中浸泡1h,软蜡Ⅱ中浸泡1h,硬蜡中浸泡1h。
5min,蒸馏水冲洗多次。
封片。
在伤口部位以及伤口临近的组织中都有大量的炎症细胞存在,并且出现了严重的细胞间水
肿现象。而CS/Ch和CS/Ch‑60组炎症细胞有所减少,细胞水肿逐渐消退。术后14天,CS/Ch‑60
组中只观察到少量的炎症细胞,组织中细胞排列紧密有序,证明创面已经有大量新生上皮
细胞。而生理盐水、CS、CS/Ch组细胞中仍伴有少量充血现象,细胞萎缩变形并且还存在大量
的炎症细胞。
均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。