假单胞菌及其应用和菌剂及其在耐盐方面的用途

摘要

本发明公开了一种假单胞菌，该假单胞菌的分类命名为Pseudomonas brassicacearum subsp.neoaurantiaca，并且，该假单胞菌的的保藏编号为GDMCC No:60266。该功能菌株能在含8％的NaCl培养基中生长，具有抗逆性，可以溶解无机磷、固氮，具有生产植物生长激素、改善水果的品质、提高土壤肥力等的能力。

权利要求

1.一种假单胞菌，其特征在于，该假单胞菌的分类命名为Pseudomonas brassicacearum subsp.neoaurantiaca，并且，该假单胞菌的保藏编号为GDMCC No:60266。

2.权利要求1所述的假单胞菌作为耐盐功能菌株的应用。

3.权利要求1所述的假单胞菌作为溶磷功能菌株的应用。

4.权利要求1所述的假单胞菌作为固氮功能菌株的应用。

5.权利要求1所述的假单胞菌在提高土壤肥力、促进植物生长和改善农林作物品质方面的用途。

6.一种微生物菌剂，其特征在于，该微生物菌剂包括权利要求1所述的假单胞菌和培养基。

7.根据权利要求6所述的微生物菌剂，其中，所述培养基包括牛肉膏蛋白胨培养基。

8.根据权利要求6所述的微生物菌剂，其中，所述微生物菌剂还包括有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和解淀粉芽胞杆菌。

9.权利要求6‑8任意一项权利要求所述的微生物菌剂在提高农林作物抗盐性能方面的用途。

说明书

假单胞菌及其应用和菌剂及其在耐盐方面的用途

技术领域

[0001] 本公开涉及微生物领域，具体地，涉及一种具有抗生素降解能力假单胞菌及其应用和菌剂及其在降解抗生素方面的用途。

背景技术

[0002] 抗生素是由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学
物质。近年来，关于抗生素类污染物在水体、沉积物和土壤中检验出的国内外相关报道层出
不穷，甚至在蔬菜、奶类和肉类等产品中也发现了抗生素的残留。研究发现，长期暴露在抗
生素环境下，不仅人和动物的患病和发病率会升高，而且对植物的叶绿素合成、酶分泌和根
系生长都有影响，从而可以影响生态环境和农林业的发展，因此急需一种微生物，其可以对
抗生素进行降解的同时，也可以提高农作物的生长性能。

发明内容

[0003] 本公开的目的在于提供一种微生物，该微生物可以对抗生素进行降解，同时可以提高农作物的生长性能。

[0004] 为了实现上述目的，本公开提供了一种假单胞菌，该假单胞菌的分类命名为Pseudomonas brassicacearum subsp.neoaurantiaca，并且，该假单胞菌的的保藏编号为
GDMCC No:60266。

[0005] 另一方面，本公开提供了假单胞菌GDMCC No:60266作为耐盐碱功能菌株的应用。

[0006] 再一方面，本公开提供了假单胞菌GDMCC No:60266作为降解抗生素的功能菌株的应用。

[0007] 再一方面，本公开提供了假单胞菌GDMCC No:60266作为溶磷功能菌株的应用。

[0008] 再一方面，本公开提供了假单胞菌GDMCC No:60266作为固氮功能菌株的应用。

[0009] 再一方面，本公开提供了假单胞菌GDMCC No:60266在提高土壤肥力、促进植物生长和改善农林作物品质方面的用途。

[0010] 本公开还提供了一种微生物菌剂，该微生物菌剂包括假单胞菌GDMCC No:60266和培养基。

[0011] 可选地，所述培养基包括牛肉膏蛋白胨培养基。

[0012] 可选地，所述微生物菌剂还包括有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和解淀粉芽胞杆菌。

[0013] 再一方面，本公开提供了包括假单胞菌GDMCC No:60266和培养基的微生物菌剂在提高农林作物盐碱抗逆性能方面的用途。

[0014] 通过上述技术方案，本公开提供一种假单胞菌GDMCC No:60266，该菌株具有降解抗生素的能力，并且能在含8％的NaCl培养基中生长，具有抗逆性，溶解无机磷，固氮，具有
生产植物生长激素、改善水果的品质、提高土壤肥力等的能力。

[0015] 本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

[0016] 生物材料保藏信息

[0017] 假单胞菌，分类命名为Pseudomonas brassicacearum subsp.neoaurantiaca，保藏于广东省微生物菌株保藏中心，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏
日期为2017年10月30日，菌种保藏号为GDMCC No:60266。。

具体实施方式

[0018] 以下对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。

[0019] 本公开提供了一种假单胞菌，该假单胞菌的分类命名为brassicacearum subsp.neoaurantiaca，并且，该假单胞菌的的保藏编号为GDMCC No:60266。

[0020] 发明人于山东德州陵县盐渍土壤样品中分离出本公开的假单胞菌GDMCC No:60266，通过引物27F和1492R对上述纯化后的菌株进行PCR扩增，得到的PCR产物进行16S 
rRNA样品测序，该菌株16S rRNA核酸序列在EzBioCloud网站比对和Pseudomonas 
brassicacearum的相似度为99.6％，经鉴定命名为brassicacearum 
subsp.neoaurantiaca，保藏编号为GDMCC No:60266。

[0021] 经过对假单胞菌GDMCC No:60266的生理特征和生长条件进行评价，发现该菌株能在牛肉膏蛋白胨、TSA，R2A等培养基上良好生长，菌落在R2A培养基上生长3天，菌落形态为半
透明圆形，表面平坦湿润，运动，不产孢子，革兰氏阴性菌株。细胞大小长1.0‑1.5μm，宽0.3‑
0.8μm，接触酶、氧化酶和V‑P反应为呈阴性，甲基红和硫化氢产生实验为阴性。细菌反硝化
合成旺盛果聚糖蔗糖和明胶。该菌株不能水解七叶树素，淀粉，琼脂，吐温80，葡萄糖苷酸和
磷酸胆碱。G+C含量为61.7‑62.9％，,细胞主要脂肪酸(>10％)组成为C16:0，C16:1(n‑7)，C18:1
(n‑7)和C17:0cyclo。菌株在牛肉膏蛋白胨培养基上的温度生长范围4‑37℃，酸碱度范围
pH6‑10，生长的NaCl含量的范围0‑8％，最适生长条件是温度25℃，pH7，NaCl含量0.5％的牛
肉膏蛋白胨培养基上。

[0022] 另一方面，本公开提供了假单胞菌GDMCC No:60266作为耐盐碱功能菌株的应用。

[0023] 再一方面，本公开提供了假单胞菌GDMCC No:60266作为降解抗生素的功能菌株的应用。

[0024] 再一方面，本公开提供了假单胞菌GDMCC No:60266作为溶磷功能菌株的应用。

[0025] 再一方面，本公开提供了假单胞菌GDMCC No:60266作为固氮功能菌株的应用。

[0026] 再一方面，本公开提供了假单胞菌GDMCC No:60266在提高土壤肥力、促进植物生长和改善农林作物品质方面的用途。

[0027] 本公开还提供了一种微生物菌剂，该微生物菌剂包括假单胞菌GDMCC No:60266和培养基。

[0028] 可选地，所述培养基包括牛肉膏蛋白胨培养基。

[0029] 可选地，所述微生物菌剂还包括有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和解淀粉芽胞杆菌。

[0030] 再一方面，本公开提供了包括假单胞菌GDMCC No:60266和培养基的微生物菌剂在提高农林作物盐碱抗逆性能方面的用途。

[0031] 可选地，该盐碱抗逆微生物菌剂的发酵液的配方包括：豆饼粉20g/L，蛋白胨1g/L，(NH4)2SO4 2g/L，KH2PO4 0.4g/L，酵母粉0.2g/L，CaCO3 10g/L；pH＝7.2。

[0032] 以下，通过实施例进一步详细说明，实施例中使用的培养基及配方如下：

[0033] 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，蒸馏水1L，pH 7.0～7.5。

[0034] 溶解无机磷细菌筛选培养基：葡萄糖10g，Ca3(PO4)2 5g，(NH4)2SO4 0.5g，NaCl 0.2g，KCl 0.2g，MgSO4·7H2O 0.03g，MnSO4 0.03g，FeSO4 3mg，酵母膏0.5g，蒸馏水1L，pH 
6.8～7.0。

[0035] 溶解有机磷细菌筛选培养基：1L NA培养基中加入100ml生理盐水和鸡蛋黄1:1混合的溶液。

[0036] 解钾菌的筛选培养基：蔗糖5g，MgSO4·7H2O 0.5g，CaCl2 0.1g，FeCl3 0.005g，钾长石粉1.0g，蒸馏水1L，pH 7.2～7.5，121℃灭菌20min。

[0037] IAA测定培养基：甘露醇10g，K2HPO4 0.5g，MgSO4 0.2g，NaCl 0.4g，酵母粉2.5g，L‑色氨酸5mM，pH7.0。

[0038] 实施例1

[0039] 保藏编号为GDMCC No:60266的假单胞菌菌株。

[0040] 对比例1

[0041] 与上述保藏编号为GDMCC  No:60266的假单胞菌同时提取出的菌株Brevibacterium 1。

[0042] 对比例2

[0043] 与上述保藏编号为GDMCC No:60266的假单胞菌同时提取出的菌株Enterobacter 1。

[0044] 对比例3

[0045] 与上述保藏编号为GDMCC  No:60266的假单胞菌同时提取出的菌株Lysinibacillus 1。

[0046] 对比例4

[0047] 与上述保藏编号为GDMCC  No:60266的假单胞菌同时提取出的菌株Photobacterium 1。

[0048] 对比例5

[0049] 与上述保藏编号为GDMCC No:60266的假单胞菌同时提取出的菌株Ochrobactrum 1。

[0050] 测试例1

[0051] 将实施例1和对比例1‑5中的菌株分别在NaCl浓度为1％和5％的培养基上培养，这些菌株的生长情况如表1所示

[0052] 表1.菌株的耐盐性生长状况

[0053]

[0054] 编号对应各自属的属名，其中假单胞菌GDMCC No:60266的编号分别为G11；++表示生长旺盛，+表示生长良好，w表示生长弱，－表示不生长。

[0055] 由表1可得假单胞菌GDMCC No:60266在NaCl浓度为1％时生长旺盛，在NaCl浓度为5％时生长良好，可以作为耐盐功能菌株进行功能评价。

[0056] 测试例1

[0057] 将实施例1和对比例1‑5中的菌株分别点样在无机磷和有机磷培养基上，根据菌株的生长情况和培养基上溶磷菌的溶磷圈的大小进一步筛选优势菌落。用接种环取上述筛选
出的菌落，用平板划线法将其分别培养于解磷培养基上，只有连续划线培养3次后仍能在解
磷平板上生长的菌株才被视为有效溶磷菌，记录数据。对6株菌株(BR1，E1，LY1，PH1，G11，
OCE1)的溶磷能力进行检测，检测结束见表2。

[0058] 表2.菌株的溶磷能力初步测定

[0059]

[0060] 注：编号对应各自属的属名，其中其中假单胞菌GDMCC No:60266的编号分别为G11；－表示无溶解磷能力。

[0061] 在评价的6株细菌中，实施例1中的假单胞菌GDMCC No:60266(G11)具有良好的溶解无机磷的能力，可以作为功能菌株进行研究。

[0062] 通过无机磷培养基对菌株的培养和能力的评价，菌株G11对无机磷Ca3(PO4)2的溶解量在144mg/L左右，该菌株菌同时具有良好的耐盐碱和溶磷的能力，是农业微生物制剂中
提高农林作物盐碱抗逆性能的潜在应用菌株。

[0063] 测试例2

[0064] 将实施例1和对比例1‑5中的耐盐菌株分别点样在解钾筛选培养基上，对6株细菌(BR1，E1，LY1，PH1，G11，OCE1)的解钾能力进行检测。其中只有菌实施例1中的假单胞菌
GDMCC No:60266具有解钾能力，菌株在解钾培养基上单菌落呈水滴状，菌落无色透明，边缘
光滑，表面湿润且黏稠，将菌株转接到装有100mL的钾长石液体培养基中，恒温培养3d后，在
菌液中加入4mL H2O2，121℃消解30min，4000r/min离心5min，取上清液，定容至100mL，以不
接菌处理为对照，用火焰分光光度计测量速效钾含量，实施例1中的假单胞菌GDMCC No:
60266的解钾能力为2.6mg/L。

[0065] 测试例3

[0066] 测试6株细菌(BR1，E1，LY1，PH1，G11，OCE1)的固氮能力，其中只有假单胞菌GDMCC No:60266具有固氮能力，假单胞菌GDMCC No:60266的固氮能力为2.6mg/L。

[0067] 测试例4

[0068] 以测定IAA的液体培养基100ml对实施例1中的假单胞菌GDMCC No:60266进行培养，取对数生长期菌液(培养24h)，在4℃下，6000rpm，离心15min，取2ml上清加入试管中，后
加入100μl 10mM磷酸和4ml试剂(1ml的0.5mM FeCl3加入100ml 35％HClO4)，根据测试液反
应的颜色变化及530nm的吸光值测定IAA的产生能力，采用比色法测定实施例1中的假单胞
菌GDMCC No:60266的分泌生长激素能力，分泌量为42.2mg/L。

[0069] 测试例5

[0070] 将分离得到的保藏编号为GDMCC No:60266的假单胞菌制成悬浮液，得到的悬浮液8
中菌株的活菌数为2×10CFU/mL。

[0071] 本测试例实验基地是山东省德州市，挑选长势均匀、树龄相同的富士苹果果树做为实验材料，将未加菌剂的作为对照组，实施例1和对比例1‑5作为实验组。在果树花芽分化
前和彭果期进行施肥，在果实成熟后，统计各组的平均单果重、每亩产量和优质果占比(以
数量计)，具体结果见表3。

[0072] 表3

[0073]实验处理 单果重g 每亩产量kg 优质果占比(以数量计)
对照组 221 1901 58.8％
实施例1 376 2414 81.0％
对比例1 235 1967 57.7％
对比例2 208 1831 52.3％
对比例3 239 1995 59.5％
对比例4 242 1988 62.8％
对比例5 266 2103 65.0％

[0074] 通过表3可以看出：保藏编号为GDMCC No:60266的假单胞菌可以明显改善水果的品质，提高水果的产量。

[0075] 以上结合详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变
型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。

[0076] 另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可
能的组合方式不再另行说明。

[0077] 此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。