一种具有增强免疫功能的多效益生菌制剂及其应用

摘要

本发明提供了一种具有增强免疫功能的多效益生菌制剂及其应用。所述多效益生菌制剂包括：药用植物提取物和益生菌剂；所述药用植物提取物包括如下重量份数的组分：姜黄提取物10～20份、朝鲜蓟提取物10～15份、铁皮石斛提取物5～10份和黄芪提取物5～10份；所述益生菌剂包括如下组分：保加利亚乳杆菌剂、动物双歧杆菌剂、瑞士乳杆菌剂、鼠李糖乳杆菌剂、副干酪乳杆菌剂、干酪乳杆菌剂和罗伊氏乳杆菌剂。本发明提供的多效益生菌制剂可以有效改善益生菌定植抗性、调节肠道微生态环境、增强机体免疫力，具有减少胃肠道等消化系统疾病、抗皮炎、抗肿瘤、降血脂、降胆固醇的作用。

权利要求

1.一种具有增强免疫功能、抗皮炎和抗肿瘤作用的多效益生菌制剂，其特征在于，所述多效益生菌制剂包括：药用植物提取物和益生菌剂；

所述药用植物提取物由如下重量份数的组分组成：姜黄提取物10～20份、朝鲜蓟提取物10～15份、铁皮石斛提取物5～10份和黄芪提取物5～10份；

10

所述益生菌剂由如下重量份数的组分组成：有效活菌数为1～2×10 cfu/g的保加利亚

10

乳杆菌剂10～20份、有效活菌数为1～2×10 cfu/g的动物双歧杆菌剂20～30份、有效活菌

10 10

数为1～2×10 cfu/g的瑞士乳杆菌剂20～30份、有效活菌数为1～2×10 cfu/g的鼠李糖

10

乳杆菌剂20～30份、有效活菌数为1～2×10 cfu/g的副干酪乳杆菌剂20～30份、有效活菌

10 10

数为1～2×10 cfu/g的干酪乳杆菌剂10～20份和有效活菌数为1～2×10 cfu/g的罗伊氏乳杆菌剂10～20份；

所述多效益生菌制剂还包括益生菌保护剂，所述益生菌保护剂包括如下重量份数的组分：

葡聚糖50～100份、谷氨酸钠30～50份、碳酸钙30～50份、酪蛋白50～100份和脱脂奶粉

200～300份。

2.根据权利要求1所述的多效益生菌制剂，其特征在于，所述药用植物提取物和益生菌包埋在所述益生菌保护剂中。

3.根据权利要求1所述的多效益生菌制剂，其特征在于，所述多效益生菌制剂的剂型为粉剂。

4.根据权利要求3所述的多效益生菌制剂，其特征在于，所述多效益生菌制剂的粒径为

200～400μm。

5.一种如权利要求1‑4任一项所述的多效益生菌制剂在制备抗皮炎药物中的应用。

6.一种如权利要求1‑4任一项所述的多效益生菌制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。

7.一种如权利要求1‑4任一项所述的多效益生菌制剂在制备降血脂、降胆固醇药物中的应用。

8.一种如权利要求1‑4任一项所述的多效益生菌制剂在制备调节胃肠道菌群药物中的应用。

说明书

一种具有增强免疫功能的多效益生菌制剂及其应用

技术领域

[0001] 本发明属于微生物医药技术领域，具体涉及一种具有增强免疫功能的多效益生菌制剂及其应用。

背景技术

[0002] 人和细菌是共生体，肠道菌群就是肠道里的各种细菌，数量有10万亿个，约为人类体细胞的10倍。这些肠道菌主要分为三大类：有益菌、有害菌和中性菌。有益菌，也称为益生
菌，主要是各种双歧杆菌、乳酸杆菌等，可以合成多种人体生长发育必需的维生素、氨基酸，
参与糖类和蛋白质的代谢，同时还能促进铁、镁、锌等矿物元素的吸收。有害菌，数量一旦失
控，大量繁殖，就会引发多种疾病。中性菌具有双重作用，如大肠杆菌、肠球菌等在正常情况
下对健康有益，一旦增殖失控，或从肠道转移到身体其它部位，就可能引发许多问题。

[0003] 有研究表明，肠道菌群平衡状态与消化系统疾病、内分泌系统疾病、精神系统疾病、自身免疫性疾病以及一些感染性疾病都有着密切的关系。因此，近几年来，随着社会的
发展，人们对益生菌展开了深入的研究，逐渐了解到其益生特性。

[0004] 市场上已经有很多种益生菌产品出现，并广泛应用于食品、营养保健、动物养殖等多个方面。但是有研究表明，不同的益生菌具有不同的益生功能，且增强机体免疫功能的作
用机制也不同。改变不同益生菌的配比组合可以在改善益生菌定植抗性、调节肠道微生态
环境以及调剂机体免疫三方面同时发挥作用，或在某个方面发挥作用。因此如何合理的搭
配各种有益菌以及促进其活性菌在体内的释放，是充分发挥不同有益菌在人体内作用的关
键所在。此外，添加相关药用物质还能与有益菌起到相辅相成的作用，对人体功能起到调节
和促进作用。

发明内容

[0005] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种具有增强免疫功能的多效益生菌制剂及其应用。该多效益生菌制剂可以有效改善益生菌定植抗性、调节肠道微生态环境、增强机体免
疫力，具有减少胃肠道等消化系统疾病、抗皮炎、抗肿瘤、降血脂、降胆固醇的作用。

[0006] 为达此目的，本发明采用以下技术方案：

[0007] 第一方面，本发明提供一种具有增强免疫功能的多效益生菌制剂，所述多效益生菌制剂包括：药用植物提取物和益生菌剂；

[0008] 所述药用植物提取物包括如下重量份数的组分：姜黄提取物10～20份、朝鲜蓟提取物10～15份、铁皮石斛提取物5～10份和黄芪提取物5～10份；

[0009] 所述益生菌剂包括如下重量份数的组分：有效活菌数为1～2×1010cfu/g的保加利10
亚乳杆菌剂10～20份、有效活菌数为1～2×10 cfu/g的动物双歧杆菌剂20～30份、有效活
10 10
菌数为1～2×10 cfu/g的瑞士乳杆菌剂20～30份、有效活菌数为1～2×10 cfu/g的鼠李
10
糖乳杆菌剂20～30份、有效活菌数为1～2×10 cfu/g的副干酪乳杆菌剂20～30份、有效活
10 10
菌数为1～2×10 cfu/g的干酪乳杆菌剂10～20份和有效活菌数为1～2×10 cfu/g的罗伊
氏乳杆菌剂10～20份。

[0010] 本发明通过药用植物提取物和益生菌在特定的比例下合理搭配，从而得到了一种具有多种功效的益生菌制剂，该制剂可以有效改善益生菌定植抗性、调节肠道微生态环境、
增强机体免疫力，具有减少胃肠道等消化系统疾病、抗皮炎、抗肿瘤、降血脂、降胆固醇等作
用。

[0011] 本发明中，所述姜黄提取物的重量份数为10～20份；例如可以是10份、12份、13份、14份、15份、16份、18份或20份等。

[0012] 所述朝鲜蓟提取物的重量份数为10～15份；例如可以是10份、11份、12份、13份、14份或15份等。

[0013] 所述铁皮石斛提取物的重量份数为5～10份；例如可以是5份、6份、7份、8份、9份或10份等。

[0014] 所述黄芪提取物的重量份数为5～10份；例如可以是5份、6份、7份、8份、9份或10份等。

[0015] 所述保加利亚乳杆菌剂的重量份数为10～20份；例如可以是10份、12份、13份、14份、15份、16份、18份或20份等。

[0016] 所述动物双歧杆菌剂的重量份数为20～30份；例如可以是20份、22份、23份、24份、25份、26份、27份、28份、29份或30份等。

[0017] 所述瑞士乳杆菌剂的重量份数为20～30份；例如可以是20份、22份、23份、24份、25份、26份、27份、28份、29份或30份等。

[0018] 所述鼠李糖乳杆菌剂的重量份数为20～30份；例如可以是20份、22份、23份、24份、25份、26份、27份、28份、29份或30份等。

[0019] 所述副干酪乳杆菌剂的重量份数为20～30份；例如可以是20份、22份、23份、24份、25份、26份、27份、28份、29份或30份等。

[0020] 所述干酪乳杆菌剂的重量份数为10～20份；例如可以是10份、12份、13份、14份、15份、16份、18份或20份等。

[0021] 所述罗伊氏乳杆菌剂的重量份数为10～20份；例如可以是10份、12份、13份、14份、15份、16份、18份或20份等。

[0022] 在本发明一实施方式中，所述多效益生菌制剂还包括益生菌保护剂。

[0023] 在本发明一实施方式中，所述益生菌保护剂包括如下重量份数的组分：

[0024] 葡聚糖50～100份、谷氨酸钠30～50份、碳酸钙30～50份、酪蛋白50～100份和脱脂奶粉200～300份。

[0025] 其中，所述葡聚糖的重量份数可以是50份、55份、60份、65份、70份、75份、80份、85份、90份、95份或100份等；

[0026] 所述谷氨酸钠的重量份数可以是30份、32份、35份、38份、40份、42份、45份、48份或50份等；

[0027] 所述碳酸钙的重量份数可以是30份、32份、35份、38份、40份、42份、45份、48份或50份等；

[0028] 所述酪蛋白的重量份数可以是50份、55份、60份、65份、70份、75份、80份、85份、90份、95份或100份等；

[0029] 所述脱脂奶粉的重量份数可以是200份、210份、220份、230份、240份、250份、260份、270份、280份、290份或300份等。

[0030] 需要说明的是，本发明中所述药用植物提取物、益生菌剂和益生菌保护剂中各组分的用量单位“份”的含义完全相同，即该组分的重量份数即为其在多效益生菌制剂中的重
量份数。

[0031] 在本发明一实施方式中，所述药用植物提取物和益生菌包埋在所述益生菌保护剂中。

[0032] 在本发明一实施方式中，所述多效益生菌制剂的剂型为粉剂。

[0033] 在本发明一实施方式中，所述多效益生菌制剂的粒径为200～400μm。

[0034] 第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的多效益生菌制剂在制备抗皮炎药物中的应用。

[0035] 第三方面，本发明提供一种如第一方面所述的多效益生菌制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。

[0036] 第四方面，本发明提供一种如第一方面所述的多效益生菌制剂在制备降血脂、降胆固醇药物中的应用。

[0037] 第五方面，本发明提供一种如第一方面所述的多效益生菌制剂在制备调节胃肠道菌群药物中的应用。

[0038] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

[0039] 1、本发明通过药用植物提取物和益生菌在特定比例下合理搭配，得到的多效益生菌制剂能够有效调节胃肠道菌群平衡，促进益生菌在胃肠道内的定殖生长，促进体内毒素
的排出，减少胃肠道等消化系统疾病的发生。

[0040] 2、本发明通过药用植物提取物和益生菌在特定比例下合理搭配，得到的多效益生菌制剂能够有效增强人体免疫力，减少人体的过敏性皮炎反应，并具有一定的抗肿瘤作用。

[0041] 3、该多效益生菌还能够起到降血脂、降胆固醇的作用，具有保持体型、延年益寿、美容养颜、抗衰老的功效。

附图说明

[0042] 图1为本发明实施例多效益生菌粉剂对小鼠体重的影响实验中小鼠体重‑时间曲线图。

[0043] 图2为本发明实施例多效益生菌粉剂对小鼠体重的影响实验中第6周小鼠脂肪组织重量柱状图。

具体实施方式

[0044] 下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述具体实施方式仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

[0045] 本发明实施例中采用的原料来源如下：

[0046] 姜黄提取物：陕西永源生物技术有限公司，产品编号YYS‑086。

[0047] 朝鲜蓟提取物：陕西永源生物技术有限公司，产品编号YYS‑005。

[0048] 铁皮石斛提取物：西安泽隆生物技术有限公司。

[0049] 黄芪提取物：陕西永源生物技术有限公司，产品编号YYS‑015。

[0050] 保加利亚乳杆菌粉剂：有效活菌数2×1010cfu/g

[0051] 动物双歧杆菌粉剂：有效活菌数1×1010cfu/g

[0052] 瑞士乳杆菌粉剂：有效活菌数1×1010cfu/g

[0053] 鼠李糖乳杆菌粉剂：有效活菌数2×1010cfu/g

[0054] 副干酪乳杆菌粉剂：有效活菌数1×1010cfu/g

[0055] 干酪乳杆菌粉剂：有效活菌数1×1010cfu/g

[0056] 罗伊氏乳杆菌粉剂：有效活菌数2×1010cfu/g

[0057] 实施例1

[0058] 本实施例提供一种多效益生菌粉剂，按重量份数计，包括如下组分：

[0059] 药用植物提取物粉剂、益生菌粉剂和益生菌保护剂；

[0060] 其中，药用植物提取物粉剂含有姜黄提取物10份、朝鲜蓟提取物10份、铁皮石斛提取物5份和黄芪提取物5份；

[0061] 益生菌粉剂含有保加利亚乳杆菌粉剂10份、动物双歧杆菌粉剂20份、瑞士乳杆菌粉剂20份、鼠李糖乳杆菌粉剂20份、副干酪乳杆菌粉剂20份、干酪乳杆菌粉剂10份和罗伊氏
乳杆菌粉剂10份；

[0062] 益生菌保护剂含有葡聚糖50份、谷氨酸钠30份、碳酸钙30份、酪蛋白50份和脱脂奶粉200份。

[0063] 本实施例中，多效益生菌粉剂的制备方法为：

[0064] 将上述药用植物提取物粉剂和益生菌粉剂投入混合制粒机内进行混合；取葡聚糖50份、谷氨酸钠30份、碳酸钙30份、酪蛋白50份和脱脂奶粉200份用300mL 0.9％氯化钠溶液
溶解后，搅拌混匀，加入到混合制粒机内与益生菌粉剂和药用植物提取物粉剂混合，制成多
效益生菌湿粒，经冷冻干燥制备成200～400μm的多效益生菌干粉。

[0065] 依照《GB4789.35》的方法检测益生菌的含量。测得实施例1制得的多效益生菌粉剂8
中每种活性菌的含量在9×10cfu/g以上。

[0066] 实施例2

[0067] 本实施例提供一种多效益生菌粉剂，按重量份数计，包括如下组分：

[0068] 药用植物提取物粉剂、益生菌粉剂和益生菌保护剂；

[0069] 其中，药用植物提取物粉剂含有姜黄提取物15份、朝鲜蓟提取物12份、铁皮石斛提取物8份和黄芪提取物8份；

[0070] 益生菌粉剂含有保加利亚乳杆菌粉剂15份、动物双歧杆菌粉剂25份、瑞士乳杆菌粉剂25份、鼠李糖乳杆菌粉剂25份、副干酪乳杆菌粉剂25份、干酪乳杆菌粉剂15份和罗伊氏
乳杆菌粉剂15份；

[0071] 益生菌保护剂含有葡聚糖80份、谷氨酸钠40份、碳酸钙40份、酪蛋白80份和脱脂奶粉250份。

[0072] 本实施例中，多效益生菌粉剂的制备方法为：

[0073] 将上述药用植物提取物粉剂和益生菌粉剂投入混合制粒机内进行混合；取葡聚糖80份、谷氨酸钠40份、碳酸钙40份、酪蛋白80份和脱脂奶粉250份用300mL 0.9％氯化钠溶液
溶解后，搅拌混匀，加入到混合制粒机内与益生菌粉剂和药用植物提取物粉剂混合，制成多
效益生菌湿粒，经冷冻干燥制备成200～400μm的多效益生菌干粉。

[0074] 依照《GB4789.35》的方法检测益生菌的含量。测得实施例1制得的多效益生菌粉剂9
中每种活性菌的含量在1.6×10cfu/g以上。

[0075] 实施例3

[0076] 本实施例提供一种多效益生菌粉剂，按重量份数计，包括如下组分：

[0077] 药用植物提取物粉剂、益生菌粉剂和益生菌保护剂；

[0078] 其中，药用植物提取物粉剂含有姜黄提取物20份、朝鲜蓟提取物15份、铁皮石斛提取物10份和黄芪提取物10份；

[0079] 益生菌粉剂含有保加利亚乳杆菌粉剂20份、动物双歧杆菌粉剂30份、瑞士乳杆菌粉剂30份、鼠李糖乳杆菌粉剂30份、副干酪乳杆菌粉剂30份、干酪乳杆菌粉剂20份和罗伊氏
乳杆菌粉剂20份；

[0080] 益生菌保护剂含有葡聚糖100份、谷氨酸钠50份、碳酸钙50份、酪蛋白100份和脱脂奶粉300份。

[0081] 本实施例中，多效益生菌粉剂的制备方法为：

[0082] 将上述药用植物提取物粉剂和益生菌粉剂投入混合制粒机内进行混合；取葡聚糖100份、谷氨酸钠50份、碳酸钙50份、酪蛋白100份和脱脂奶粉300份用500mL 0.9％氯化钠溶
液溶解后，搅拌混匀，加入到混合制粒机内与益生菌粉剂和药用植物提取物粉剂混合，制成
多效益生菌湿粒，经冷冻干燥制备成200～400μm的多效益生菌干粉。

[0083] 依照《GB4789.35》的方法检测益生菌的含量。测得实施例1制得的多效益生菌粉剂9
中每种活性菌的含量在1.8×10cfu/g以上。

[0084] 多效益生菌粉剂功效测试：

[0085] 一、多效益生菌粉剂对小鼠胃肠道菌群的影响

[0086] 1.实验材料

[0087] Balb/c小鼠，SPF级，雌性，12只，常规饲料，购自北京维通利华实验动物技术有限公司；实施例1～3提供的3种多效益生菌粉剂；粪便基因组DNA提取试剂盒，购自北京天根生
化科技有限公司。

[0088] 2.实验方法

[0089] 2.1动物分组与处理

[0090] 将12只Balb/c小鼠平均分为A、B、C共3组，A组2只饲喂实施例1提供的多效益生菌粉剂，2只作为对照；B组2只饲喂实施例2提供的多效益生菌粉剂，2只作为对照；C组2只饲喂
实施例3提供的多效益生菌粉剂，2只作为对照。实验组小鼠采取灌胃的方式饲喂多效益生
菌粉剂2周，之后正常饮食(常规饲料+蒸馏水)继续饲喂8天，每周收集各组小鼠粪便，保存
于‑80℃冰箱。其中，小鼠分组和处理情况如下表1所示：

[0091] 表1小鼠分组和处理情况

[0092]

[0093]

[0094] 2.2二代测序及分析

[0095] 分别收集每组小鼠的粪便，按照试剂盒操作步骤提取粪便DNA，根据16SrRNA V3‑V4可变区通用引物进行16SrRNA PCR扩增(338正向5'‑ACTCCTACGGGAGGCAGCAG‑3'；806反向
5'‑GGACTACHVGGGTWTCTAAT‑3')。PCR扩增后回收PCR产物进行文库构建，使用HiSeq进行上
机测序。将相似性高于97％的16SrRNA序列定义为一个操作分类单元(OTU)，样品中的OTU数
目即observed species(物种丰度)指数，反应样品的物种丰富度；从一个样本数据中完全
随机抽取2个OTU，他们属于不同物种的概率即为simpson(辛普森)指数，反应样品的物种多
样性。将测序得到的有效数据进行OTUs聚类和物种分类分析。

[0096] 表2多效益生菌粉剂对小鼠粪便样品细菌alpha多样性的影响

[0097]

[0098] 从表2的数据中，可以看出饲喂多效益生菌粉剂的3组实验组小鼠的observed species指数和simpson指数均显著高于对照组，这说明本发明提供的多效益生菌粉剂能够
明显调节肠道菌群的多样性。

[0099] 二、多效益生菌粉剂对小鼠皮炎反应的抑制作用

[0100] 1.实验材料

[0101] Balb/c小鼠，SPF级，雌性，10只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司；实施例1～3提供的3种多效益生菌粉剂；小鼠血清IgE、TNF‑α及MCP‑1表达水平的ELISA检测试剂
盒，购自武汉新启迪生物科技有限公司。

[0102] 2.实验方法

[0103] 2.1动物分组及处理

[0104] 10只雌性Balb/c小鼠随机分为对照组、实验组1、实验组2、实验组3、实验组4共5组，每组2只。除对照组小鼠外，其余8只小鼠腹部体毛剃掉，面积约2.5cm×2.5cm，实验当日
用1.5％DNCB(丙酮:橄榄油体积比＝4:1)溶液100μL涂抹腹部剃毛处初次致敏；2周后再次
致敏：在小鼠耳廓内外两侧相同位置涂1％DNCB溶液20μL，每周重复刺激3次，连续2周，共造
模30天，致敏成功的小鼠可见耳部出现红斑、肿胀、渗出和结痂。从初次致敏起，采用灌胃方
式，按照0.3g/kg·d剂量给实验组1、实验组2、实验组3的小鼠分别饲喂实施例1、实施例2、
实施例3提供的多效益生菌粉剂，持续饲喂30天；对照组小鼠和实验组4小鼠不饲喂任何多
效益生菌粉剂。

[0105] 2.2小鼠耳朵厚度变化

[0106] 从再次致敏当天用游标卡尺测量每只小鼠两耳中部厚度，以后每次DNCB刺激前(即造模第14、17、20、23、26、29、30天)测量1次，并记录小鼠两耳外观肿胀情况，结果如下表
3所示：

[0107] 表3各组小鼠不同时间左耳厚度(mm)

[0108]

[0109]

[0110] 从表3中可以看出，实验组4没有饲喂多效益生菌粉剂的小鼠耳朵炎症反应强烈，耳朵比对照组小鼠明显增厚，而三组饲喂多效益生菌粉剂的小鼠耳朵虽然较对照组也有增
厚，但增厚量较实验组4少，这说明本发明提供的多效益生菌粉剂具有抗皮炎作用，能够抑
制皮肤过敏性反应。

[0111] 2.3小鼠血清中IgE、TNF‑α及MCP‑1水平检测

[0112] 30天实验结束后，将小鼠采用5％水合氯醛麻醉，75％酒精消毒后，眼球采血，分离血清，采用ELISA试剂盒按照试剂盒说明书操作测定血清中IgE、TNF‑α及MCP‑1的表达水平，
结果如下表4所示：

[0113] 表4各组小鼠血清中IgE、TNF‑α及MCP‑1表达水平(pg/mL)

[0114]

[0115] IgE是特异性皮炎反应的一个重要靶点，作为肥大细胞的主要催化剂，可刺激肥大细胞释放细胞因子、趋化因子及组胺等生物活性物质。TNF‑α则作为一种重要的炎症前介
质，可诱导皮炎患者炎症反应中多种细胞因子的产生。MCP‑1可通过肥大细胞颗粒作用来调
节Th1型免疫反应。因此，检测血清中IgE、TNF‑α及MCP‑1的表达水平，可以预见个体的炎症
反应情况。从表4中可以看出，饲喂多效益生菌粉剂的三组实验组小鼠血清中的IgE、TNF‑α
及MCP‑1表达水平均比对照组高，但是比有炎症反应而未饲喂多效益生菌粉剂的实验组4小
鼠表达水平低。这表明，本发明提供的多效益生菌粉剂能够增强机体自身的免疫功能，使机
体产生抗皮炎作用，从而使预示炎症反应的细胞因子水平下降。

[0116] 三、多效益生菌粉剂对小鼠肿瘤的抑制作用

[0117] 1.实验材料

[0118] Balb/c小鼠，SPF级，雌性，8只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司；实施例1～3提供的3种多效益生菌粉剂。LLT小鼠Lewis肺癌瘤株(实体瘤)细胞株细胞系原代细胞，
购自NTCC典型培养物保藏中心。小鼠血清TNF‑α、IL‑2和IL‑6的ELISA检测试剂盒，购自武汉
新启迪生物科技有限公司。

[0119] 2.实验方法

[0120] 2.1动物分组与处理

[0121] 8只Balb/c小鼠随机分为对照组、实验组1、实验组2、实验组3工4组，每组2只。小鼠6
均腹腔接种Lewis瘤细胞10 个细胞/只。接种后次日开始，对照组小鼠饲喂常规饲料，实验
组1小鼠饲喂实施例1提供的多效益生菌粉剂和常规饲料，实验组2小鼠饲喂实施例2提供的
多效益生菌粉剂和常规饲料，实验组3小鼠饲喂实施例3提供的多效益生菌粉剂和常规饲
料，多效益生菌粉剂饲喂量均为0.3g/kg·d，采取灌胃方式饲喂。

[0122] 2.2样品采集

[0123] 饲喂多效益生菌粉剂10天后，将小鼠采用5％水合氯醛麻醉，75％酒精消毒后，眼球采血，分离血清后‑80℃冻存备用。脱臼处死小鼠，分离瘤组织，用电子天平秤瘤重，并记
录，分析结果。根据记录的瘤组织重量计算抑瘤率，计算公式：抑瘤率＝(对照组平均瘤重‑
实验组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％。实验结果如下表5所示：

[0124] 表5多效益生菌粉剂对荷瘤小鼠的抑瘤作用

[0125]

[0126]

[0127] 从表5中可以看出，相较于对照组，饲喂本发明提供的多效益生菌粉剂的3组实验组小鼠的肿瘤重量明显减少，表明本发明提供的多效益生菌粉剂具有一定的抑制肿瘤作
用。

[0128] 2.3小鼠血清中TNF‑α、IL‑2和IL‑6的表达水平检测

[0129] 按照试剂盒说明书进行操作，以ELISA方法检测采集的小鼠血清，根据测得的吸光度计算各组小鼠血清中TNF‑α、IL‑2和IL‑6蛋白的表达水平，结果如下表6所示。

[0130] 表6小鼠血清中TNF‑α、IL‑2和IL‑6的表达水平(pg/mL)

[0131]

[0132] 从表6中可以看出，相较于对照组，饲喂多效益生菌粉剂的小鼠血清中的TNF‑α、IL‑2和IL‑6水平均明显下降，而这些细胞因子是介导慢性炎性反应，调节机体免疫功能，发
挥抗肿瘤作用的细胞因子，这些细胞因子的水平降低，说明肿瘤的影响作用减少，这表明本
发明提供的多效益生菌粉剂能够增强机体的免疫功能，从而具有抑制肿瘤的作用。

[0133] 四、多效益生菌粉剂对小鼠体重的影响

[0134] 1.实验材料

[0135] Balb/c小鼠，SPF级，雌性，18只，高脂饲料，常规饲料购自北京维通利华实验动物技术有限公司；实施例1～3提供的的3种多效益生菌粉剂。

[0136] 2.实验方法

[0137] 2.1动物分组与处理

[0138] 18只Balb/c小鼠平均分为A、B、C共3组：A组2只小鼠作为实验组1，饲喂实施例1提供的多效益生菌粉剂、高脂饲料和蒸馏水；2只小鼠作为对照1，饲喂常规饲料和蒸馏水；2只
小鼠作为对照2，饲喂高脂饲料和蒸馏水；B组2只小鼠作为实验组2，饲喂实施例2提供的多
效益生菌粉剂、高脂饲料和蒸馏水；2只小鼠作为对照3，饲喂常规饲料和蒸馏水；2只小鼠作
为对照4，饲喂高脂饲料和蒸馏水；C组2只小鼠作为实验组3，饲喂实施例3提供的多效益生
菌粉剂、高脂饲料和蒸馏水；2只小鼠作为对照5，饲喂常规饲料和蒸馏水；2只小鼠作为对照
6，饲喂高脂饲料和蒸馏水。小鼠连续饲喂6周，分别在第0天、第1周、第2周、第3周、第4周、第
5周和第6周测量小鼠体重，随后处死解剖收集小鼠各脂肪组织并称重。

[0139] 表7小鼠分组和处理情况

[0140]

[0141]

[0142] 2.2小鼠体重和脂肪组织重量变化

[0143] 根据小鼠体重和脂肪组织重量，绘制小鼠体重‑时间曲线图(如图1所示)和第6周小鼠脂肪组织重量柱状图(如图2所示)。

[0144] 从图1可以看出，与饲喂常规饲料的小鼠(对照1、3、5)相比，饲喂高脂饲料却没有饲喂多效益生菌粉剂的小鼠(对照2、4、6)体重明显增长，而饲喂高脂饲料和多效益生菌粉
剂的小鼠(实验组1、2、3)体重在6周内几乎没有增长，与饲喂常规饲料的小鼠体重差异不显
著。

[0145] 从图2可以看出，与饲喂高脂饲料却没有饲喂多效益生菌粉剂的小鼠(对照2、4、6)相比，饲喂多效益生菌粉剂的小鼠(实验组1、2、3)的肠系膜脂肪、肝周脂肪和肾周脂肪重量
明显更少。这说明本发明提供的多效益生菌粉剂能够有效降血脂、降低胆固醇，减少脂肪堆
积，有助于维持体型。

[0146] 虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见
的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的
范围。