沙场链霉菌及其生防菌剂的制备方法与应用转让专利
申请号 : CN202011447269.6
文献号 : CN112592847B
文献日 : 2021-12-17
发明人 : 瞿佳 , 孙晓宇 , 门欣 , 赵玲侠 , 陈锐
申请人 : 陕西省微生物研究所
摘要 :
权利要求 :
1.沙场链霉菌,其特征在于:
所述沙场链霉菌(Streptomyces arenae)YNF36于2020年9月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO. 20690。
2.根据权利要求1所述的沙场链霉菌,其特征在于:所述沙场链霉菌(Streptomyces arenae)YNF36的16S rDNA序列为:GTACCAGGGGACGGGGTGTTTAAAATGTAAGTCGGACTATGAAACCGTTCGGTGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTTCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATAACACTTCCACTCTCCTGAGTGGAGGTTAAAAGCTCCGGCGGTGAAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCACGTCGGTTGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCGATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGGCACTAGGTGTGGGCAACATTCCACGTTGTCCGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATACACCGGAAACGTCTGGAGACAGGCGCCCCCTTGTGGTCGGTGTACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCCGTGTTGCCAGCAGGCCCTTGTGGTGCTGGGGACTCACGGGAGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGCGATACCGCGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCCAACCCCTTGTGGGAGGGAGCTTTTGGAAAGAGGAGGCCCGCTT。
3.沙场链霉菌生防菌剂的制备方法,其特征在于:所述方法包括以下步骤:
步骤一:活化菌株:
将保存于SYP培养基斜面上保藏编号为CGMCC NO. 20690的沙场链霉菌YNF36划线于SYP培养基平板上,28℃倒置培养3‑5 d;
步骤二:种子液的培养:
使用无菌打孔器在步骤一得到的菌株YNF36平板上打出菌饼,接种于种子液培养基中,9
在恒温摇床28℃,120‑220 r/min培养50‑100 h,发酵液细胞数达2.0×10个/mL时得到种子液;
步骤三:生防菌剂的固体发酵培养:
将步骤二得到的种子液按接种量体积质量比2‑10%接种到装有固体发酵培养基浅盘3
中,将浅盘置于通风培养箱中,设置温度为25‑30℃,湿度60‑85%,通风速度0.2‑2.0m/min,9
条件下培养120‑240h,待发酵液中细胞数达2.0×10 个/mL时终止发酵;调节通风速度3
5.0m /min,温度10‑20℃风干至含水量10%左右,粉碎,100‑120目过筛收集筛下物,即为制得的生防菌剂。
4.根据权利要求3所述的沙场链霉菌生防菌剂的制备方法,其特征在于:步骤一中,所述SYP培养基配方为:淀粉10 g/L、酵母浸粉 4 g/L、蛋白胨 10 g/L、余量水,调节pH为6.2‑7.4。
5.根据权利要求4所述的沙场链霉菌生防菌剂的制备方法,其特征在于:步骤二中,所述种子液培养基配方为:淀粉10 g/L、酵母浸粉5 g/L、蛋白胨5 g/L、K2HPO4 5 g/L、NaCl 1 g/L、MgSO4•7H2O 1 g/L、FeSO4•7H2O 0.05g/L、余量水,调节pH为6.2‑
7.4。
6.根据权利要求5所述的沙场链霉菌生防菌剂的制备方法,其特征在于:步骤三中,所述固体发酵培养基配方为:麸皮40%、豆饼粉20%、淀粉10%、燕麦粉10‑15%、甘油1‑5%、K2HPO4 0.25‑0.5%、CaCO30.5‑0.7%、NaCl 0.1‑0.5% 、MgSO4•7H2O 0.05‑0.1%、余量水。
7.如权利要求6所述的制备方法制得的沙场链霉菌生防菌剂。
8.如权利要求7所述的沙场链霉菌生防菌剂在防治核桃黑斑病方面的应用。
说明书 :
沙场链霉菌及其生防菌剂的制备方法与应用
技术领域
背景技术
该病的防治主要以化学农药为主,但核桃树冠高大且处于山区,喷药条件差,且化学农药的
使用容易造成土壤环境污染,并严重影响核桃产品品质。针对核桃黑斑病的防治产品开发
需求,开发生防菌剂具有重大意义。
发明内容
ACTTCCACTCTCCTGAGTGGAGGTTAAAAGCTCCGGCGGTGAAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTAGTTGGTGA
GGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCC
CAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGG
ATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGG
CTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGT
AGGCGGCTTGTCACGTCGGTTGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTT
CGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGG
ATCTCTGGGCCGATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGC
CGTAAACGGTGGGCACTAGGTGTGGGCAACATTCCACGTTGTCCGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCT
GGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAAT
TCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATACACCGGAAACGTCTGGAGACAGGCGCCCCCTTGTGGTC
GGTGTACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCC
TTGTCCCGTGTTGCCAGCAGGCCCTTGTGGTGCTGGGGACTCACGGGAGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGT
GGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGC
GATACCGCGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGT
CGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACG
TCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCCAACCCCTTGTGGGAGGGAGCTTTTGGAAAGAGGAGGCCCGC
TT。
基中,在恒温摇床28℃,120‑220r/min培养50‑100h,发酵液细胞数达2.0×10个/mL时得到
种子液;
3 9
2.0m/min,条件下培养120‑240h,待发酵液中细胞数达2.0×10个/mL时终止发酵;调节通
3
风速度5.0m/min,温度10‑20℃风干至含水量10%左右,粉碎,100‑120目过筛收集筛下物,
即为制得的生防菌剂。
7.4。
0.05‑0.1%、余量水。
畜无害、环境友好、不破坏生态平衡、抗药性发展缓慢,原料丰富,生产较为方便,是一种高
效、低成本、绿色环保的微生物农药新技术产品。
具体实施方式
NO.20690。该沙场链霉菌(Streptomyces arenae)YNF36分离于酸性土壤,耐pH值5.0‑8.5。
ACTTCCACTCTCCTGAGTGGAGGTTAAAAGCTCCGGCGGTGAAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTAGTTGGTGA
GGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCC
CAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGG
ATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGG
CTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGT
AGGCGGCTTGTCACGTCGGTTGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTT
CGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGG
ATCTCTGGGCCGATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGC
CGTAAACGGTGGGCACTAGGTGTGGGCAACATTCCACGTTGTCCGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCT
GGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAAT
TCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATACACCGGAAACGTCTGGAGACAGGCGCCCCCTTGTGGTC
GGTGTACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCC
TTGTCCCGTGTTGCCAGCAGGCCCTTGTGGTGCTGGGGACTCACGGGAGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGT
GGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGC
GATACCGCGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGT
CGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACG
TCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCCAACCCCTTGTGGGAGGGAGCTTTTGGAAAGAGGAGGCCCGC
TT。
基中,在恒温摇床28℃,120‑220r/min培养50‑100h,发酵液细胞数达2.0×10个/mL时得到
种子液;
3 9
2.0m/min,条件下培养120‑240h,待发酵液中细胞数达2.0×10个/mL时终止发酵;调节通
3
风速度5.0m/min,温度10‑20℃风干至含水量10%左右,粉碎,100‑120目过筛收集筛下物,
即为制得的生防菌剂。
7.4。
0.05‑0.1%、余量水。
目过筛收集筛下物,即为制得的生防菌剂。
目过筛收集筛下物,即为制得的生防菌剂。
120目过筛收集筛下物,即为制得的生防菌剂。
霉菌YNF36生防菌剂2000倍稀释液,2%春雷霉素1000倍稀释液,对照组为清水,以上稀释液
8
体均为清水,每个处理重复3次,每株核桃苗接种2mL浓度为10 cfu/mL的核桃黑斑病病原
菌。
样点随机调查5片树叶或5个果实。根据黑斑面积设定分级标准,统计病情指数,计算药剂防
治效果。
沙场链霉菌稀释500倍 12.17±0.44a 78.31±0.53a
沙场链霉菌稀释1000倍 15.16±1.16a 73.05±1.0b
沙场链霉菌稀释2000倍 16.16±2.13a 70.81±4.76b
春雷霉素稀释1000倍 15.73±1.2b 72.53±4.13b
清水对照 56.17±2.62b