一种舞花姜组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种舞花姜组织培养快速繁殖方法。本发明以舞花姜优良株系的未开放的幼嫩花蕾为外植体，通过外植体的获得和消毒、愈伤组织的诱导和增殖、愈伤组织的脱分化、不定芽继代增殖、生根培养和试管苗移栽等等阶段，选择适合各培养阶段的培养基配方和培养条件，实现舞花姜种苗的规模化繁殖，繁育出优质的舞花姜种苗满足市场的需要。本发明技术简单实惠，切实可行，应用价值高。实施该发明只需有简单的植物组织培养设备即可进行。

权利要求

1.一种舞花姜组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)外植体的获得和消毒方法：在生长季节选取生长旺盛、无病虫害危害的舞花姜(Globba winitti)的幼嫩花蕾作为外植体，经消毒处理后，接入愈伤组织诱导培养基中培养，培养温度24‑30℃，光照度1500‑2500lx，光照12‑16小时/天，外植体产生愈伤组织，所述的愈伤组织诱导培养基每升含有：6‑苄基嘌呤0.2‑1.0毫克、2,4‑二氯苯氧乙酸1.0‑3.0毫克、蔗糖20‑30克、琼脂6‑7克，余量为MS培养基，pH 5.8‑6.0；

(b)愈伤组织的增殖：将步骤(a)获得的愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基中进行愈伤组织的增殖，培养温度24‑30℃，光照度1500‑2500lx，光照12‑16小时/天，所述的愈伤组织增殖培养基每升含有：2,4‑二氯苯氧乙酸0.5‑1.0毫克、蔗糖20‑30克、琼脂6‑7克，余量为MS培养基，pH 5.8‑6.0；

(c)愈伤组织的脱分化：将步骤(a)或步骤(b)获得的愈伤组织转移到愈伤组织脱分化培养基中培养，培养温度24‑30℃，光照度1500‑2500lx，光照12‑16小时/天，愈伤组织脱分化形成体细胞胚，所述的愈伤组织脱分化培养基每升含有：噻苯隆0.5‑1.5毫克、蔗糖20‑30克、琼脂6‑7克，余量为MS培养基，pH 5.8‑6.0；将体细胞胚转移到不定芽诱导培养基中培养，培养温度24‑30℃，光照度1500‑2500lx，光照12‑16小时/天，体细胞胚分化成不定芽，所述的不定芽诱导培养基每升含有：噻苯隆0.05‑0.15毫克、蔗糖20‑30克、琼脂6‑7克，余量为MS培养基，pH 5.8‑6.0；

(d)不定芽继代增殖：将诱导出的不定芽切割成单芽后再继代培养于不定芽继代增殖培养基中进行不定芽的增殖，培养温度24‑30℃，光照度1500‑2500lx，光照12‑16小时/天，所述的不定芽继代增殖培养基每升含有：6‑苄基嘌呤1.0‑2.0毫克、萘乙酸0.1‑0.3毫克、蔗糖20‑30克、琼脂6‑7克，余量为MS培养基，pH 5.8‑6.0；

(e)生根培养：当继代增殖的不定芽芽高2‑3厘米高时，切下接种到生根培养基上进行生根培养，培养温度24‑30℃，光照度1500‑2500lx，光照12‑16小时/天，所述的生根培养基每升含有：萘乙酸0.5‑1.0毫克、蔗糖20‑30克、琼脂6‑7克，余量为1/2MS培养基，pH 5.8‑

6.0；

(f)试管苗移栽：当生根培养得到的试管苗长至4‑5厘米高时，在自然光照下炼苗，然后洗掉试管苗根部培养基，栽入栽培基质中，浇水遮荫，保温保湿，由此得到舞花姜种苗；所述的栽培基质包括泥炭土和珍珠岩，所述的泥炭土和珍珠岩的体积比为(2‑5):1。

2.根据权利要求1所述的舞花姜组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述的消毒处理为先在体积分数75％酒精中浸泡20‑40秒，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒5‑8分钟，无菌水冲洗4‑5次后，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒2‑4分钟，无菌水冲洗4‑5次。

说明书

一种舞花姜组织培养快速繁殖方法

技术领域：

[0001] 本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种舞花姜组织培养快速繁殖方法。
背景技术：

[0002] 舞花姜(Globba winitti)又名威尼替舞花姜、美苞舞花姜、泰国舞花姜等，原产泰国。为多年生草本植物，具有花序独特、花期长、抗病性强等优点，可做切花、盆栽或园林观
赏。我国近年来从泰国引进，价格较贵，主要采用分株繁殖，繁殖速度慢。利用植物组织培养
技术能有效地解决这个问题，但以舞花姜的地下根状茎为外植体时，污染率高。

[0003] 目前，国内外还没有舞花姜组织培养种苗繁殖的报道。发明内容：

[0004] 本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种舞花姜组织培养快速繁殖方法。

[0005] 本发明是通过以下技术方案实现的：

[0006] 一种舞花姜组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

[0007] (a)外植体的获得和消毒方法：在生长季节选取生长旺盛、无病虫害危害的舞花姜(Globba winitti)的幼嫩花蕾作为外植体，经消毒处理后，接入愈伤组织诱导培养基中培
养，培养温度24‑30℃，光照度1500‑2500lx，光照12‑16小时/天，外植体产生愈伤组织，所述
的愈伤组织诱导培养基每升含有：6‑苄基嘌呤0.2‑1.0毫克、2,4‑二氯苯氧乙酸1.0‑3.0毫
克、蔗糖20‑30克、琼脂6‑7克，余量为MS培养基，pH 5.8‑6.0；

[0008] (b)愈伤组织的增殖：将步骤(a)获得的愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基中进行愈伤组织的增殖，培养温度24‑30℃，光照度1500‑2500lx，光照12‑16小时/天，所述的愈
伤组织增殖培养基每升含有：2,4‑二氯苯氧乙酸0.5‑1.0毫克、蔗糖20‑30克、琼脂6‑7克，余
量为MS培养基，pH 5.8‑6.0；

[0009] (c)愈伤组织的脱分化：将步骤(a)或步骤(b)获得的愈伤组织转移到愈伤组织脱分化培养基中培养，培养温度24‑30℃，光照度1500‑2500lx，光照12‑16小时/天，愈伤组织
脱分化形成体细胞胚，所述的愈伤组织脱分化培养基每升含有：噻苯隆0.5‑1.5毫克、蔗糖
20‑30克、琼脂6‑7克，余量为MS培养基，pH 5.8‑6.0，将体细胞胚转移到不定芽诱导培养基
中培养，培养温度24‑30℃，光照度1500‑2500lx，光照12‑16小时/天，体细胞胚分化成不定
芽，所述的不定芽诱导培养基每升含有：噻苯隆0.05‑0.15毫克、蔗糖20‑30克、琼脂6‑7克，
余量为MS培养基，pH 5.8‑6.0；

[0010] (d)不定芽继代增殖：将诱导出的不定芽切割成单芽后再继代培养于不定芽继代增殖培养基中进行不定芽的增殖，培养温度24‑30℃，光照度1500‑2500lx，光照12‑16小时/
天，所述的不定芽继代增殖培养基每升含有：6‑苄基嘌呤1.0‑2.0毫克、萘乙酸0.1‑0.3毫
克、蔗糖20‑30克、琼脂6‑7克，余量为MS培养基，pH 5.8‑6.0；

[0011] (e)生根培养：当继代增殖的不定芽芽高2‑3厘米高时，切下接种到生根培养基上进行生根培养，培养温度24‑30℃，光照度1500‑2500lx，光照12‑16小时/天，所述的生根培
养基每升含有：萘乙酸0.5‑1.0毫克、蔗糖20‑30克、琼脂6‑7克，余量为1/2MS培养基，pH 
5.8‑6.0；

[0012] (f)试管苗移栽：当生根培养得到的试管苗长至4‑5厘米高时，在自然光照下炼苗，然后洗掉试管苗根部培养基，栽入栽培基质中，浇水遮荫，保温保湿，由此得到舞花姜种苗。

[0013] 优选，所述的消毒处理为先在体积分数75％酒精中浸泡20‑40秒，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒5‑8分钟，无菌水冲洗4‑5次后，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒2‑4分
钟，无菌水冲洗4‑5次。消毒成功率85％‑95％。

[0014] 优选，所述的栽培基质包括泥炭土和珍珠岩，所述的泥炭土和珍珠岩的体积比为(2‑5):1。

[0015] 所述的MS为国际通用的培养基，其成分和配制方法参看文献(谭文澄、戴策刚主编.观赏植物组织培养技术.北京：中国林业出版社，1991.)；所述的1/2MS是将MS中的大量
元素浓度减半，而其他成分浓度不变而形成的培养基。

[0016] 本发明以舞花姜优良株系的未开放的幼嫩花蕾为外植体，通过外植体的获得和消毒、愈伤组织的诱导和增殖、愈伤组织的脱分化、不定芽继代增殖、生根培养和试管苗移栽
等等阶段，选择适合各培养阶段的培养基配方和培养条件，实现舞花姜种苗的规模化繁殖，
繁育出优质的舞花姜种苗满足市场的需要。

[0017] 本发明技术简单实惠，切实可行，应用价值高。实施该发明只需有简单的植物组织培养设备即可进行。
具体实施方式：

[0018] 以下实施例是对本发明进一步说明，而不是对本发明的限制。

[0019] 实施例1：

[0020] 1.外植体的获得和消毒方法：在生长季节选取生长旺盛、无病虫害危害的舞花姜(Globba winitti)优良株系的未开放的幼嫩花蕾，先在体积分数75％酒精中浸泡20秒，再
用质量分数0.1％升汞溶液消毒8分钟，无菌水冲洗5次后，再用质量分数0.1％升汞溶液消
毒2分钟，无菌水冲洗4次后，接入愈伤组织诱导培养基中培养，培养温度24℃，光照度
1500lx，光照16小时/天。培养30天时外植体基部有愈伤组织产生，消毒成功率85％。愈伤组
织诱导培养基每升含有：6‑苄基嘌呤(6‑BA)0.20毫克、2,4‑二氯苯氧乙酸(2,4‑D)3.0毫克、
蔗糖20克、琼脂6克，余量为MS培养基，pH 5.8。

[0021] 2.愈伤组织的增殖：将初代培养中获得的愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基中进行愈伤组织的增殖，培养温度24℃，光照度1500lx，光照16小时/天。一个月内的增殖倍数
可达8倍。愈伤组织增殖培养基每升含有：2,4‑二氯苯氧乙酸(2,4‑D)0.5毫克、蔗糖20克、琼
脂6克，余量为MS培养基，pH 5.8。

[0022] 3.愈伤组织的脱分化：将愈伤组织转移到愈伤组织脱分化培养基中培养，培养温度24℃，光照度1500lx，光照16小时/天。愈伤组织能在培养30天时脱分化形成体细胞胚。愈
伤组织脱分化培养基每升含有：噻苯隆(TDZ)0.5毫克、蔗糖20克、琼脂6克，余量为MS培养
基，pH 5.8。将体细胞胚转移到不定芽诱导培养基中培养，培养温度24℃，光照度1500lx，光
照16小时/天。体细胞胚能在培养25天时分化成不定芽。不定芽诱导培养基每升含有：噻苯
隆(TDZ)0.05毫克、蔗糖20克、琼脂6克，余量为MS培养基，pH 5.8。

[0023] 4.不定芽继代增殖：将诱导出的不定芽切割成单芽后再继代培养于不定芽继代增殖培养基中进行不定芽的增殖，培养温度24℃，光照度1500lx，光照16小时/天。一般30天为
1个继代增殖周期。每1个继代增殖周期后的增殖倍数为8倍。不定芽继代增殖培养基每升含
有：6‑苄基嘌呤(6‑BA)1.0毫克、萘乙酸(NAA)0.1毫克、蔗糖20克、琼脂6克，余量为MS培养
基，pH 5.8。

[0024] 5.生根培养：当芽高约2厘米高时，切下接种到生根培养基中进行生根培养，培养温度24℃，光照度1500lx，光照16小时/天。能正常生根，培养30天时生根率可达100％，每株
苗有根数4条。生根培养基每升含有：萘乙酸(NAA)0.5毫克、蔗糖20克、琼脂6克，余量为1/
2MS培养基，pH 5.8。

[0025] 6.试管苗移栽：在生根培养30天内，当试管苗长至4厘米高时，在自然光照下炼苗5天。然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入泥炭土:珍珠岩
体积比为2:1混合的基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到舞花姜种苗，成活率可
达100％。

[0026] 实施例2：

[0027] 1.外植体的获得和消毒方法：在生长季节选取生长旺盛、无病虫害危害的舞花姜(Globba winitti)优良株系的未开放的幼嫩花蕾，先在体积分数75％酒精中浸泡30秒，再
用质量分数0.1％升汞溶液消毒7分钟，无菌水冲洗5次后，再用质量分数0.1％升汞溶液消
毒3分钟，无菌水冲洗4次后，将花苞分成完整花蕾、花药、花托三种外植体，接入愈伤组织诱
导培养基中培养，培养温度27℃，光照度2000lx，光照14小时/天。培养35天时外植体基部有
愈伤组织产生，消毒成功率90％。愈伤组织诱导培养基每升含有：6‑苄基嘌呤(6‑BA)0.5毫
克、2,4‑二氯苯氧乙酸(2,4‑D)2.0毫克、蔗糖25克、琼脂6.5克，余量为MS培养基，pH 5.9。

[0028] 2.愈伤组织的增殖：将初代培养中获得的愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基中进行愈伤组织的增殖，培养温度27℃，光照度2000lx，光照14小时/天。一个月内的增殖倍数
可达10倍。愈伤组织增殖培养基每升含有：2,4‑二氯苯氧乙酸(2,4‑D)0.75毫克、蔗糖25克、
琼脂6.5克，余量为MS培养基，pH 5.9。

[0029] 3.愈伤组织的脱分化：将愈伤组织转移到愈伤组织脱分化培养基中培养，培养温度27℃，光照度2000lx，光照14小时/天。愈伤组织能在培养30天时脱分化形成体细胞胚。愈
伤组织脱分化培养基每升含有：噻苯隆(TDZ)1.0毫克、蔗糖25克、琼脂6.5克，余量为MS培养
基，pH 5.9。将体细胞胚转移到不定芽诱导培养基中培养，培养温度27℃，光照度2000lx，光
照14小时/天。体细胞胚能在培养30天时分化成不定芽。不定芽诱导培养基每升含有：噻苯
隆(TDZ)0.1毫克、蔗糖25克、琼脂6.5克，余量为MS培养基，pH 5.9。

[0030] 4.不定芽继代增殖：将诱导出的不定芽切割成单芽后再继代培养于不定芽继代增殖培养基中进行不定芽的增殖，培养温度27℃，光照度2000lx，光照14小时/天。一般30天为
1个继代增殖周期。每1个继代增殖周期后的增殖倍数为9倍。不定芽继代增殖培养基每升含
有：6‑苄基嘌呤(6‑BA)1.5毫克、萘乙酸(NAA)0.2毫克、蔗糖25克、琼脂6.5克，余量为MS培养
基，pH 5.9。

[0031] 5.生根培养：当芽高约2.5厘米高时，切下接种到生根培养基中进行生根培养，培养温度27℃，光照度2000lx，光照14小时/天。能正常生根，培养30天时生根率可达100％，每
株苗有根数5条。生根培养基每升含有：萘乙酸(NAA)0.75毫克、蔗糖25克、琼脂6.5克，余量
为1/2MS培养基，pH 5.9。

[0032] 6.试管苗移栽：在生根培养30天内，当试管苗长至4.5厘米高时，在自然光照下炼苗7天。然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入泥炭土:珍
珠岩体积比为3:1混合的基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到舞花姜种苗，成活
率可达100％。

[0033] 实施例3：

[0034] 1.外植体的获得和消毒方法：在生长季节选取生长旺盛、无病虫害危害的舞花姜(Globba winitti)优良株系的未开放的幼嫩花蕾，先在体积分数75％酒精中浸泡40秒，再
用质量分数0.1％升汞溶液消毒5分钟，无菌水冲洗4次后，再用质量分数0.1％升汞溶液消
毒4分钟，无菌水冲洗5次后，接入愈伤组织诱导培养基中培养，培养温度30℃，光照度
2500lx，光照12小时/天。培养30天时外植体基部有愈伤组织产生，消毒成功率95％。愈伤组
织诱导培养基每升含有：6‑苄基嘌呤(6‑BA)1.0毫克、2,4‑二氯苯氧乙酸(2,4‑D)1.0毫克、
蔗糖30克、琼脂7克，余量为MS培养基，pH 6.0。

[0035] 2.愈伤组织的增殖：将初代培养中获得的愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基中进行愈伤组织的增殖，培养温度30℃，光照度2500lx，光照12小时/天。一个月内的增殖倍数
可达12倍。愈伤组织增殖培养基每升含有：2,4‑二氯苯氧乙酸(2,4‑D)1.0毫克、蔗糖30克、
琼脂7克，余量为MS培养基，pH 6.0。

[0036] 3.愈伤组织的脱分化：将愈伤组织转移到愈伤组织脱分化培养基中培养，培养温度30℃，光照度2500lx，光照12小时/天。愈伤组织能在培养30天时脱分化形成体细胞胚。愈
伤组织脱分化培养基每升含有：噻苯隆(TDZ)1.5毫克、蔗糖30克、琼脂7克，余量为MS培养
基，pH 6.0。将体细胞胚转移到不定芽诱导培养基中培养，培养温度30℃，光照度2500lx，光
照12小时/天。体细胞胚能在培养35天时分化成不定芽。不定芽诱导培养基每升含有：噻苯
隆(TDZ)0.15毫克、蔗糖30克、琼脂7克，余量为MS培养基，pH 6.0。

[0037] 4.不定芽继代增殖：将诱导出的不定芽切割成单芽后再继代培养于不定芽继代增殖培养基中进行不定芽的增殖，培养温度30℃，光照度2500lx，光照12小时/天。一般30天为
1个继代增殖周期。每1个继代增殖周期后的增殖倍数为10倍。不定芽继代增殖培养基每升
含有：6‑苄基嘌呤(6‑BA)2.0毫克、萘乙酸(NAA)0.3毫克、蔗糖30克、琼脂7克，余量为MS培养
基，pH 6.0。

[0038] 5.生根培养：当芽高约2‑3厘米高时，切下接种到生根培养基中进行生根培养，培养温度30℃，光照度2500lx，光照12小时/天。能正常生根，培养30天时生根率可达100％，每
株苗有根数6条。生根培养基每升含有：萘乙酸(NAA)1.0毫克、蔗糖30克、琼脂7克，余量为1/
2MS培养基，pH 6.0。

[0039] 6.试管苗移栽：在生根培养30天内，当试管苗长至5厘米高时，在自然光照下炼苗8天。然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入泥炭土:珍珠岩
体积比为5:1混合的基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到舞花姜种苗，成活率可
达100％。