一种提取薯蓣皂苷元的生产工艺转让专利
申请号 : CN202011105552.0
文献号 : CN112680496B
文献日 : 2022-03-08
发明人 : 李雁青 , 付宏征
申请人 : 河南度帮中药生物科技股份有限公司
摘要 :
权利要求 :
1.一种提取薯蓣皂苷元的生产工艺,其特征在于,包括如下步骤:S1.原料的预处理:将新鲜的薯蓣植物清洗后,切成段,然后用水清洗,将淀粉和薯蓣残渣分离;
S2.溶剂提取:收集步骤S1中的薯蓣残渣,经过溶剂提取得到薯蓣皂苷;
S3.将薯蓣皂苷水解后得到薯蓣皂苷元;
S4.将步骤S3中的水解物进行萃取、提纯、重结晶制备薯蓣皂苷元纯品;
在步骤S2中,为了从薯蓣植物中提取出薯蓣皂苷,可以借助溶剂提取法,在有机溶剂存在的条件下联合微波和超声的作用;所述溶剂为70%的乙醇溶液;薯蓣残渣的重量和乙醇的体积比1g:40ml~1g:55ml,溶剂提取的时间为300s,0~60s时间内微波功率为450~
500W,60~150s时间内微波功率为400~450W,150~300s时间内微波功率为600W。
2.根据权利要求1所述的一种提取薯蓣皂苷元的生产工艺,其特征在于,步骤S3中,通过糖苷酶将薯蓣皂苷水解得到薯蓣皂苷元,所述糖苷酶选自α‑葡萄糖苷酶、β‑葡萄糖苷酶、鼠李糖苷酶、根皮苷水解酶、葡萄糖醛酸苷酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的一种提取薯蓣皂苷元的生产工艺,其特征在于,步骤S4中,采用CO2超临界技术进行萃取。
4.根据权利要求3所述的一种提取薯蓣皂苷元的生产工艺,其特征在于,所述CO2超临界萃取的设备包括萃取釜、分离柱和分离釜,萃取压力为25~40MPa,萃取温度为53~62℃,萃取时间为2~3h;分离柱的压力为18~26MPa,温度为40~60℃;两个分离釜的条件分别为:压力10~15MPa,温度48~55℃和压力5~6MPa,温度30~40℃。
5.根据权利要求4所述的一种提取薯蓣皂苷元的生产工艺,其特征在于,所述萃取压力为30MPa,萃取温度为55℃,萃取时间为2.5h;分离柱的压力为20MPa,温度为45℃;两个分离釜的条件分别为:压力11MPa,温度50℃和压力5.6MPa,温度35℃。
说明书 :
一种提取薯蓣皂苷元的生产工艺
技术领域
背景技术
皂苷元含量最高的两个种,其次有黄山 药(D.panthaica)、柴黄姜(D.nipponica)、三角叶
薯蓣(D.deltoidea)等。 这些植物容易种植、年产量大,因而成为了目前工业中用于生产薯
蓣 皂苷元的最主要中药原料。薯蓣皂苷元,工业上称薯蓣皂素,是薯蓣 皂苷的配基,在C‑3
位置通过苷键与糖基相连,主要以薯蓣皂苷的形 式存在于薯蓣植物的根茎中,并与纤维素
紧密结合于细胞壁中。薯蓣 皂苷元是合成多种甾体激素和甾体避孕药的理想前体,世界各
国生产 的甾体激素60%以上是以它为原料生产的。同时还具有溶血、降血脂、 抗肿瘤和抗
菌消炎和的功效。国内外对薯蓣皂苷元的需求极大,因此 开发新的提取薯蓣皂苷元的生产
工艺具有重要价值和广阔的市场潜 力。
通常是采用预发酵、酸水解法和汽油回流提取来提取薯蓣皂苷 元。使用盐酸或者硫酸破坏
薯蓣植物细胞结构和组成,断开薯蓣皂苷元与糖(纤 维素)连接的苷键,使薯蓣皂苷元游离
出来,利用它不溶于水而溶于有机溶剂的 性质,用120#汽油或石油醚等把它提取出来。传
统的酸水解法操作繁琐,消耗 时间长,薯蓣皂苷元得率低。且由于药材体积大,酸的耗费量
大,酸降解的有 机质多,造成污水量大,对环境污染大,严重阻碍了薯蓣皂苷元产业的发
展。 利用汽油或石油醚抽提水解产物,用量较大。而且120#汽油是一级防爆溶剂, 危险系
数高。
元的生产工艺和原料药质量符合国际标准,为国内外药品生 产提供优质的原料药,促进薯
蓣种植的发展,发展农村经济,该发明的实施具 有广泛社会效益和经济效益,为中药和天
然产物的绿色环保开发利用提供示范。
发明内容
基葡萄糖苷酶中的至少一种。
40~60℃;两个分离釜的条件分别为:压力10~15MPa, 温度48~55℃和压力5~6MPa,温度
30~40℃
50℃和压力5.6MPa,温度35℃。
素和甾体避孕药提供原料;
产品收率显著提高。
附图说明
第三酶解搅拌罐,14.第四酶解搅拌罐,2.总酶解搅拌罐,21.第二 搅拌轴,22.出料口。
具体实施方式
域普通技术人员可以在此数据下理解并实施本发明。这些实 施例仅用于说明本发明而不
用于限制本发明的范围。此外应理解,在阅读了本 发明的内容之后,本领域技术人员可以
对本发明作各种改动或修改,这些改动 或修改同样落于本申请所保护的范围。
行萃取和提纯。
溶解。薯蓣皂苷在细胞内外具有一定的浓度差,浓度较高的 提取溶剂向外扩散,并带走一
部分薯蓣皂苷,而位于细胞外的有机溶剂又不断 进入细胞内,循环往复,将薯蓣皂苷尽可
能多的提取出来。考虑到经济性和有 机溶剂的毒性,可以选用乙醇作为提取溶剂。由于薯
蓣皂苷的成分复杂,其具 有的糖链有长有短,从而具有较大的极性或较小的极性,可采用
乙醇的水溶液 作为提取溶剂。为了增加溶剂的穿透能力,加速溶剂的进出,并破坏细胞壁,
尽可能多的释放薯蓣皂苷,可采用微波和超声辅助的方式。
15ml、微波功率为500W、超声微波协同处理时间为420s。 但是由于需要使用大量的乙醇,且
乙醇不易回收,经济性不高。本申请人在一 次偶然的实验中发现,将薯蓣残渣的重量和乙
醇的体积比继续增加的时候,且 改变不同处理时间的微波功率,薯蓣皂苷的得率无变化,
但是可以缩短提取时 间。此外,由于加入的乙醇过量,在反应结束的时候,可以利于回收乙
醇,并 用于下次的生产。大量的实验也证明了,回收的乙醇品质并无影响,可以作为 提取
溶剂使用。能真正的实现绿色低成本的工艺。具体数据如表1所示。
~150s时间内微波功率为400~450W,150~300s时间内微波 功率为600W,在保证皂苷得率
不变且较高的情况下,可以缩短处理时间,并 且由于加入的乙醇过量,方便收回,回收率高
达89~95%。回收的乙醇可以继 续使用。
包括分酶解搅拌罐1和总酶解搅拌罐2。所述分酶解搅拌罐1 并联设置若干个,且和总酶解
搅拌罐2相连。在本实验例1中,所述分酶解搅 拌罐1设置四个,分别为第一酶解搅拌罐11、
第二酶解搅拌罐12、第三酶解搅 拌罐13和第四酶解搅拌罐14,四个酶解搅拌罐结构相同,
区别地方在于投入 不同的糖苷酶。
112和酶进口113位于罐体111的顶部,出料管道115 位于罐体111的底部,一端和第一酶解
搅拌罐11相连,另一端和总酶解搅拌罐 2相连。物料进口112用以投放薯蓣植物残渣,酶进
口113用于投放糖苷酶。 薯蓣植物残渣和糖苷酶在罐体111内进行充分的混合并水解,水解
完成后经过 所述出料管道115进入总酶解搅拌罐2。所述第一搅拌轴114位于罐体111内,
通过搅拌器进行驱动,对进入罐体111内的薯蓣植物残渣和糖苷酶进行充分的 搅拌混合。
进一步的,在所述第一搅拌轴114上均匀或不均匀的设置多个破碎 装置117,所述破碎装置
117可以为刀片。所述破碎装置117从第一搅拌轴114 的方向向罐体111的侧壁方向延伸,可
以将罐体111分隔成多个相互连通的小 空间。在本申请中,薯蓣植物只是经过切段处理,并
未粉碎或研磨至细小颗粒。 如果是将薯蓣植物粉碎至细小颗粒后在放入分酶解搅拌罐1中
进行水解处理, 由于颗粒粒径过小,容易团聚在一起,糖苷酶只能接触到团聚在一起的颗
粒的 外表面,而无法与团聚在一起的颗粒内表面接触,减小了薯蓣植物与糖苷酶的 接触
面积,减小了水解效率,降低了薯蓣皂苷元的提取效果。薯蓣植物残渣和 糖苷酶从罐体111
的顶部投下后,在第一搅拌轴114的搅拌作用下,进行了充 分的混合,同时会和破碎装置
117不断的接触和碰撞。薯蓣植物残渣在和糖苷 酶混合接触的同时,被破碎装置117粉碎、
切割成更小的粒径,增加了接触面 积,降低薯蓣植物粒径过小出现易黏连和团聚的现象。
此外,由于破碎装置117 可以将罐体111分隔成多个空间,薯蓣植物在第一搅拌轴114的驱
动下不断的 翻转,并和罐体111的内壁、破碎装置117发生碰撞和挤压,降低薯蓣植物颗 粒
之间的黏连和团聚,并实现多空间、多阶段的连续水解,提高水解效果。由 于酶水解过程通
常都需要特定的温度,在所述罐体111的侧壁上安装有加热装 置116,可以对整个罐体进行
加热,提供水解所需要的合适温度。
到总酶解搅拌罐2内,在第二搅拌轴21的搅拌作用下充 分混匀,然后经过出料口22排出。
效果更好,制备得到的薯蓣皂苷元含量更高。每一种糖苷酶的加 入量为薯蓣残渣质量的
0.4~0.6%。在本申请中,所用的糖苷酶选自α‑葡萄糖苷 酶、β‑葡萄糖苷酶、鼠李糖苷酶、
根皮苷水解酶、葡萄糖醛酸苷酶、乙酰氨基 葡萄糖苷酶。由于每种糖苷酶具有最适宜的水
解条件,如果直接将复合糖苷酶 和薯蓣植物进行混合去反应,由于每种糖苷酶的最适宜水
解条件具有差异,无 法达到最佳的水解效果。同时,由于多种糖苷酶同时水解,存在各种干
扰因素, 影响各自的效果。通过并联设置的多个分酶解搅拌罐1,并在每个分酶解搅拌 罐1
投入不同的糖苷酶和薯蓣植物进行反应,可以多方位全面发挥复合糖苷酶 的作用,并根据
每种糖苷酶最适宜的水解温度和反应pH去进行调节,以确保 最佳的水解条件。经过各自的
水解作用后,进入到总酶解搅拌罐1中进行混合, 然后将所得物料排出进行下一步操作。
取完成后用乙醇进行重结晶。在采用CO2超临界萃取技术时, 需要选用乙醇作为夹带剂。具
体的,CO2超临界萃取所用的设备规格为 2000L×3/35MPa,包括:萃取釜3个,单釜容积
2000L,分离柱1个,分离釜2 个,单釜容积1000L。萃取压力为25~40MPa,萃取温度为53~62
℃,萃取时间 为2~3h;分离柱的压力为18~26MPa,温度为40~60℃;两个分离釜的条件分
别为:压力10~15MPa,温度48~55℃和压力5~6MPa,温度30~40℃。
别为:压力11MPa,温度50℃和压力5.6MPa,温 度35℃条件下对薯蓣皂苷元进行提取。完成
萃取后的药渣可以利用酶进行发酵 制备醇类,或是生产有机肥或动物饲料。表2给出了采
用汽油法和CO2超临界 萃取薯蓣皂苷元的各项指标。
产品收率(%) 5.26 2.27
产品纯度 96% 94%
生产周期(h) 12 30
生产成本(元/kg) 551 563
微波协同处理300s,在0~60s时微波功率为450W,60~150s 时微波功率为400W,150~300s
时微波功率为600W;待反应结束后将所得物均 分成四份,分别通过物料进口放入第一酶解
搅拌罐、第二酶解搅拌罐、第三酶 解搅拌罐和第四酶解搅拌罐,与此同时,在第一酶解搅拌
罐中加入4gα‑葡萄糖 苷酶,并调节pH为5.3,温度为55℃,在第二酶解搅拌罐中加入4g鼠李
糖苷 酶,并调节pH为4.1,温度为35℃,第三酶解搅拌罐中加入6g葡萄糖醛酸苷 酶,并调节
pH为6.5,温度为55℃,第四酶解搅拌罐中加入5gβ‑葡萄糖苷酶, 并调节pH为4.5,温度为60
℃;水解完成后将水解物进行干燥,并用CO2超 临界萃取技术萃取分离得到薯蓣皂苷元,并
用乙醇重结晶,得无色针状结晶纯 品。经过HPLC分析,对原料干重的提取率为2.3%,纯度
为96.6%。。
后超声微波协同处理300s,在0~60s时微波功率为480W, 60~150s时微波功率为430W,150
~300s时微波功率为600W;待反应结束后将 所得物均分成四份,分别通过物料进口放入第
一酶解搅拌罐、第二酶解搅拌罐、 第三酶解搅拌罐和第四酶解搅拌罐,与此同时,在第一酶
解搅拌罐中加入4.5gα‑ 葡萄糖苷酶,并调节pH为5.0,温度为51℃,在第二酶解搅拌罐中加
入4.8g 葡萄糖醛酸苷酶,并调节pH为7.0,温度为56℃,第三酶解搅拌罐中加入5.2g 鼠李
糖苷酶,并调节pH为4.5,温度为42℃,第四酶解搅拌罐中加入5.5g根 皮苷水解酶,并调节
pH为5.5,温度为60℃;水解完成后将水解物进行干燥, 并用CO2超临界萃取技术萃取分离
得到薯蓣皂苷元,并用乙醇重结晶,得无色 针状结晶纯品。经过HPLC分析,对原料干重的提
取率为2.2%,,纯度为96.8%。
后超声微波协同处理300s,在0~60s时微波功率为460W, 60~150s时微波功率为420W,150
~300s时微波功率为600W;待反应结束后将 所得物均分成四份,分别通过物料进口放入第
一酶解搅拌罐、第二酶解搅拌罐、 第三酶解搅拌罐和第四酶解搅拌罐,与此同时,在第一酶
解搅拌罐中加入4gβ‑ 葡萄糖苷酶,并调节pH为4.2,温度为62℃,在第二酶解搅拌罐中加入
5.4g 鼠李糖苷酶,并调节pH为4.3,温度为50℃,第三酶解搅拌罐中加入5.8g葡 萄糖醛酸
苷酶,并调节pH为6.5,温度为50℃,第四酶解搅拌罐中加入5gα‑ 葡萄糖苷酶,并调节pH为
5.0,温度为52℃;水解完成后将水解物进行干燥, 并用CO2超临界萃取技术萃取分离得到
薯蓣皂苷元,并用乙醇重结晶,得无色 针状结晶纯品。经过HPLC分析,对原料干重的提取率
为2.6%,,纯度为97.7%。
的提取率为1.4%,纯度为90.5%。
对原料干重的提取率为1.8%,纯度为95.7%。
露出来,不仅可以对淀粉进行回收利用,且减少淀粉对目标 产物的包裹,使目标产物尽可
能多的释放出来。然后结合溶剂提取、糖苷酶水 解和CO2超临界萃取技术的方法,使制备的
薯蓣皂苷元提取率提高,纯度也提 高,生产的薯蓣皂苷元原料药符合国际标准。实施例1~
3的薯蓣皂苷元的提取 率为2.2~2.6%,纯度为96.6~97.7%。而对比例1的提取率为
1.4%,纯度为90.5%, 对比例2在溶剂提取步骤中采用恒定微波功率处理,提取率仅为
1.8%,纯度为95.7%。可见采用本申请的提取工艺,发挥多种糖苷酶的独有作用,可以更好
的 和薯蓣植物反应,且通过各步骤的工艺改进,使得薯蓣皂苷元的提取率提高, 纯度也提
高。