一株高产香气物质的美极梅奇酵母菌株YC15及其应用

摘要

本发明“一株高产香气物质的美极梅奇酵母菌株YC15及其应用”属于微生物技术领域。所述一株美极梅奇酵母Metschnikowiapulcherrima菌株YC15的保藏号为CCTCC M 2021084。该菌株发酵葡萄汁生成的正己醇产量高达312.53μg/L，丙酸乙酯的产量高达102.2μg/L。

权利要求

1.一株美极梅奇酵母（Metschnikowia pulcherrima）菌株YC15，其保藏号为CCTCC M 

2021084。

2.保藏号为CCTCC M 2021084的美极梅奇酵母（Metschnikowia pulcherrima）菌株YC15在生产香气物质方面的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述香气物质选自由2‑庚醇、正辛醇、正庚醇、1‑辛烯‑3‑醇、香茅醇、芳樟醇、大马士酮、乙酸己酯、辛酸乙酯、戊酸乙酯、庚酸乙酯、己酸乙酯、正己醇、橙花醇、丁位十二内酯、丁烯醛、异丁醛、乙酸异丁酯、乙酸异戊酯、亚油酸乙酯、丁酸乙酯、异丁酸乙酯、丙酸乙酯组成的组。

4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述香气物质选自由正己醇、橙花醇、丁位十二内酯、丁烯醛、异丁醛、乙酸异丁酯、乙酸异戊酯、亚油酸乙酯、丁酸乙酯、异丁酸乙酯、丙酸乙酯组成的组。

5.保藏号为CCTCC M 2021084的美极梅奇酵母（Metschnikowia pulcherrima）菌株YC15在酿酒方面的应用。

6.一种酿酒发酵剂，其特征在于，其发酵活性物质包括保藏号为CCTCC M 2021084的美极梅奇酵母（Metschnikowia pulcherrima）菌株YC15。

7.根据权利要求6所述的一种酿酒发酵剂，其特征在于，所述酿酒发酵剂为菌剂。

8.根据权利要求6或7所述的一种酿酒发酵剂，其特征在于，所述酿酒发酵剂还包括菌剂可接受的辅料。

9.根据权利要求8所述的一种酿酒发酵剂，其特征在于，所述菌剂可接受的辅料包括菌的培养基物质；所述菌的培养基物质包括：淀粉、蔗糖、蛋白胨、水。

10.一种葡萄酒酿造方法，其特征在于，采用保藏号为CCTCC M 2021084的美极梅奇酵母（Metschnikowia pulcherrima）菌株YC15进行发酵酿造。

11.根据权利要求10所述的一种葡萄酒酿造方法，其特征在于，所述发酵指采用所述美极梅奇酵母（Metschnikowia pulcherrima）菌株YC15以葡萄或葡萄汁做为底物进行发酵。

12.根据权利要求11所述的一种葡萄酒酿造方法，其特征在于，所述美极梅奇酵母

6 7

（Metschnikowia pulcherrima）菌株YC15在底物中的添加浓度为10‑10CFU/ml。

13.根据权利要求12所述的一种葡萄酒酿造方法，其特征在于，所述美极梅奇酵母6

（Metschnikowia pulcherrima）菌株YC15在底物中的添加浓度为10CFU/ml。

说明书

一株高产香气物质的美极梅奇酵母菌株YC15及其应用

技术领域

[0001] 本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株高产香气物质的美极梅奇酵母菌株YC15及其应用。

背景技术

[0002] 目前已报道的美极梅奇酵母菌(Metschnikowia pulcherrima)较少，其中“Applications of Metschnikowia pulcherrima in Wine Biotechnology”一文披露了美极梅奇酵母菌(Metschnikowia pulcherrima)的呼吸代谢作用可在好气条件下帮助达到更低的醇含量，并且在生产中低水平的总挥发酸过程以及较低水平的H2S过程中，该菌表现出与酿酒酵母及其它酵母良好的兼容性。

[0003] 本领域目前更是从未报道过可产正己醇、橙花醇、丁位十二内酯等香气物质的美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)。

发明内容

[0004] 基于本领域的上述空白，本发明筛选得到一株以葡萄汁为底物发酵高产正己醇、橙花醇、丁位十二内酯等香气物质的美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15。

[0005] 本发明的技术方案如下：

[0006] 一株美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15，其保藏号为CCTCC M 2021084。保藏号为CCTCC M 2021084的美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15在生产香气物质方面的应用。

[0007] 所述香气物质选自由2‑庚醇、正辛醇、正庚醇、1‑辛烯‑3‑醇、香茅醇、芳樟醇、大马士酮、乙酸己酯、辛酸乙酯、戊酸乙酯、庚酸乙酯、己酸乙酯、正己醇、橙花醇、丁位十二内酯、丁烯醛、异丁醛、乙酸异丁酯、乙酸异戊酯、亚油酸乙酯、丁酸乙酯、异丁酸乙酯、丙酸乙酯组成的组。

[0008] 所述香气物质选自由正己醇、橙花醇、丁位十二内酯、丁烯醛、异丁醛、乙酸异丁酯、乙酸异戊酯、亚油酸乙酯、丁酸乙酯、异丁酸乙酯、丙酸乙酯组成的组。

[0009] 保藏号为CCTCC M 2021084的美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15在酿酒方面的应用。

[0010] 一种酿酒发酵剂，其特征在于，其发酵活性物质包括保藏号为CCTCC M 2021084的美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15。

[0011] 所述发酵活性物质还包括酿酒美极梅奇酵母。

[0012] 所述酿酒发酵剂为菌剂；

[0013] 优选地，所述酿酒发酵剂还包括菌剂可接受的辅料；

[0014] 优选地，所述菌剂可接受的辅料包括菌的培养基物质；所述菌的培养基物质包括但不限于：淀粉、蔗糖、蛋白胨、水。

[0015] 一种葡萄酒酿造方法，其特征在于，采用保藏号为CCTCC M 2021084的美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15进行发酵酿造。

[0016] 所述发酵指采用所述美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15以葡萄或葡萄汁做为底物进行发酵。

[0017] 优选地，所述美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15在底物中的添6 7 6
加浓度为10‑10CFU/ml，优选10CFU/ml。

[0018] 本发明筛选得到一株菌株，经香气物质成分鉴定实验测得其可高产正己醇、橙花醇、丁位十二内酯等一系列香气物质，并且对比商业的酿酒美极梅奇酵母菌株F33，本发明的菌株还可产生F33无法生成或产量较低的香气物质，例如：正己醇、橙花醇、丁位十二内酯、丁烯醛、异丁醛、乙酸异丁酯、乙酸异戊酯、亚油酸乙酯、丁酸乙酯、异丁酸乙酯、丙酸乙酯，其中正己醇产量高达312.53μg/L，丙酸乙酯的产量高达102.2μg/L。经鉴定，该菌株为一株美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株，申请人将其命名为YC15，并将该菌株送保藏。本发明的美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15的保藏信息如下：

[0019] 命名：YC15

[0020] 分类名称：美极梅奇酵母

[0021] 拉丁名称：Metschnikowia pulcherrima

[0022] 保藏号：CCTCC M 2021084

[0023] 保藏机构：中国典型培养物保藏中心

[0024] 保藏机构地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号

[0025] 保藏日期：2021年1月15日。

具体实施方式

[0026] 下面结合具体实施例对本发明的详细内容做进一步具体说明，但并不以此限制本发明的保护范围。

[0027] 生物材料的来源及记载出处

[0028] 实验例1中使用的葡萄品种的来源和产地如下表1所示：

[0029] 表1

[0030] 葡萄品种 产地 来源赤霞珠 宁夏贺兰山东麓产区 采集
美乐 宁夏贺兰山东麓产区 采集
西拉 宁夏贺兰山东麓产区 采集
蛇龙珠 宁夏贺兰山东麓产区 采集
小味儿多 宁夏贺兰山东麓产区 采集
贵人香 宁夏贺兰山东麓产区 采集
威代尔 宁夏贺兰山东麓产区 采集
雷司令 宁夏贺兰山东麓产区 采集
霞多丽 宁夏贺兰山东麓产区 采集

[0031] 上表1中的葡萄品种均为公知公用的葡萄品种，也可商购获得。

[0032] 实验例2中使用的葡萄品种为威代尔冰葡萄，购自宁夏巴格斯醉美国际酒庄有限公司；

[0033] 商业菌株‑酿酒美极梅奇酵母F33购自法国拉氟德(Laffort)公司。

[0034] 第1组实施例、本发明的菌株YC15

[0035] 本组实施例提供一株美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15，其保藏号为CCTCC M 2021080。

[0036] 第2组实施例、本发明菌株YC15的应用

[0037] 本组实施例提供保藏号为CCTCC M 2021080的美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15在生产香气物质方面的应用。

[0038] 在一些实施例中，所述香气物质选自由2‑庚醇、正辛醇、正庚醇、1‑辛烯‑3‑醇、香茅醇、芳樟醇、大马士酮、乙酸己酯、辛酸乙酯、戊酸乙酯、庚酸乙酯、己酸乙酯、正己醇、橙花醇、丁位十二内酯、丁烯醛、异丁醛、乙酸异丁酯、乙酸异戊酯、亚油酸乙酯、丁酸乙酯、异丁酸乙酯、丙酸乙酯组成的组。

[0039] 在另一些实施例中，所述香气物质选自由正己醇、橙花醇、丁位十二内酯、丁烯醛、异丁醛、乙酸异丁酯、乙酸异戊酯、亚油酸乙酯、丁酸乙酯、异丁酸乙酯、丙酸乙酯组成的组，这些香气物质中的任意一种在产量上YC15菌株都比已知酿酒美极梅奇酵母F33的要高很多，具体对比数值可参考下面的表1。

[0040] 第3组实施例、本发明菌株YC15的酿酒应用

[0041] 本组实施例提供保藏号为CCTCC M 2021080的美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15在酿酒方面的应用。

[0042] 第4组实施例、本发明的酿酒发酵剂

[0043] 本组实施例提供一种酿酒发酵剂。本组所有的实施例都具备如下共同特征：所述酿酒发酵剂的发酵活性物质包括保藏号为CCTCC  M  2021080的美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15。

[0044] 在进一步的实施例中，所述发酵活性物质还包括酿酒美极梅奇酵母。本领域技术人员可根据本发明的教导，将本发明的YC15菌株与本领域现有常见的酿酒美极梅奇酵母联用，用于来发酵酿酒。

[0045] 在具体的实施例中，所述酿酒发酵剂为菌剂；

[0046] 在优选的实施例中，所述酿酒发酵剂还包括菌剂可接受的辅料；

[0047] 在另一些优选的实施例中，所述菌剂可接受的辅料包括菌的培养基物质；所述菌的培养基物质包括但不限于：淀粉、蔗糖、蛋白胨、水。

[0048] 第5组实施例、本发明的葡萄酒酿造方法

[0049] 本组实施例提供一种葡萄酒酿造方法。本组所有的实施例都具备如下共同特征：采用保藏号为CCTCC M 2021080的美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15进行发酵酿造。

[0050] 在具体的实施例中，所述发酵指采用所述美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15以葡萄或葡萄汁做为底物进行发酵。

[0051] 在优选的实施例中，所述美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15在6 7 6
底物中的添加浓度为10‑10CFU/ml，优选10CFU/ml。

[0052] 实验例1、本发明美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15的筛选过程[0053] 采集宁夏贺兰山东麓不同产地、不同品种酿酒葡萄(如表1所示)，剔除腐烂、发霉、破损的果粒及杂物，称取均匀完整葡萄果粒10.0g，加入90mL无菌的YPD液体培养基中，振荡10min，制成菌悬液，采用梯度稀释的方法，将适宜稀释度菌悬液涂布在添加100mg/L氯霉素的YPD固体培养基上，28℃培养2d～3d，依据菌落形态，在YPD固体培养基上多次划线纯化，获得纯化菌株。纯化后的菌株于YPD培养基活化24h后，取1mL菌液按照接Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒说明书提取美极梅奇酵母基因组，以引物NL‑1(5 '‑
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG‑3')和NL‑4(5'‑GGTCCGTGTTTCAAGACGG‑3')进行PCR扩增，测序获得26S rDNA片段的基因序列，通过NCBI的BLAST比对，获得同源性较高的已知标准菌株信息，并对相似度超过99％以上的菌株做种属鉴定，最终获得菌株种属信息。

[0054] 本实验例中一共获得24株Metschnikowia pulcherrima菌株。分别将24株6
Metschnikowia pulcherrima菌株按初始浓度10 CFU/mL接入已灭菌的威代尔葡萄汁中(100℃，10min)，18℃±2℃发酵18天，测定其香气含量，最终获得一株产香效果最好的Metschnikowia pulcherrima菌株YC15，并将该菌株送保藏，其保藏信息如下：

[0055] 命名：YC15

[0056] 分类名称：美极梅奇酵母

[0057] 拉丁名称：Metschnikowia pulcherrima

[0058] 保藏号：CCTCC M 2021084

[0059] 保藏机构：中国典型培养物保藏中心

[0060] 保藏日期：2021年1月15日。

[0061] 实验例2、本发明美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15产香气物质的数据葡萄品种：威代尔冰葡萄葡萄汁生产过程：对采收后的冰葡萄通过气囊压榨机进行带冰压榨操作，同时添加二氧化硫(50mg/L K2S2O5)和20mg/L果胶酶(≥500U/mg)，抑制细菌病提高出汁率。

[0062] 葡萄汁发酵条件：浸渍后的葡萄汁分别按初始浓度106CFU/mL接入F33酿酒美极梅奇酵母和Metschnikowia pulcherrima菌株YC15，发酵温度为18℃±2℃，待葡萄汁失重连续三天不再变化终止发酵。所有葡萄酒样品在7500rpm下离心8分钟，取上清液于4℃保存。

[0063] 各香气物质的检测方法：采用顶空‑固相微萃取法‑气相质谱法(HS‑SPME‑GC/MS)。准确量取8mL葡萄酒样品加入含有1.5g NaCl顶空瓶中，同时394.08μg/L 4‑甲基‑1‑戊醇(内标物)，加盖密封。插入CAR/DVB/PDMS萃取纤维，45℃下吸附30min后将萃取纤维在GC进样口250℃下解吸3min，进行GC‑MS分析。色谱柱：InertCap WAX极性色谱柱(60m×0.25mm，
0.25μm)；升温程序为：40℃保持5min，以3℃/min升至120℃，再以8℃/min升至230℃，保持
10min；载气(He)流速0.8mL/min，不分流。电子轰击离子源；电子能量70eV；传输线温度275℃；离子源温度230℃；激活电压1.5V；灯丝流量0.25mA；质量扫描范围m/z33～450。采用外标定量法进行化合物定量分析。

[0064] 以同一品种的葡萄生产的同一批葡萄汁为底物，在相同的发酵条件下，分别以商业菌株‑酿酒美极梅奇酵母F33和本发明的美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima菌株YC15对等量的葡萄汁进行发酵酿酒处理，再经通过顶空‑固相微萃取法‑气相质谱方法检测各香气物质的含量(单位：μg/L，含义：每升葡萄酒中该香气物质的含量)，得到下表2：

[0065] 表2

[0066]

[0067]

[0068] 上表1中的香气阈值指人类可以嗅闻到该物质的最低浓度下限值。