牡丹花蕊提取物及其制备方法与应用转让专利
申请号 : CN202110187939.3
文献号 : CN112791126B
文献日 : 2022-01-28
发明人 : 舒庆艳 , 马晓丰 , 方令豪
申请人 : 中国科学院植物研究所 , 瑞莱茵(北京)生物科技有限责任公司
摘要 :
权利要求 :
1.牡丹花蕊提取物的制备方法,包括以下步骤:(1)将牡丹花蕊干燥、粉碎,得到干燥的牡丹花蕊粉末;
(2)使用体积百分比浓度为40%‑60%的乙醇‑水溶液对所述牡丹花蕊粉末进行1次或多次超声提取,收集并合并提取液,从所述提取液中除去乙醇,得到牡丹花蕊醇提取物水溶液;
(3)向步骤(2)得到的牡丹花蕊醇提取物水溶液加水稀释,至相对密度为1.10‑1.20,用乙酸乙酯萃取1次或多次,收集并合并乙酸乙酯萃取液,浓缩至干浸膏,得到牡丹花蕊乙酸乙酯萃取物;所述乙酸乙酯为水饱和的乙酸乙酯溶液,以乙酸乙酯:水按体积比1:0.8‑1.5加入;
(4)将步骤(3)得到的牡丹花蕊乙酸乙酯萃取物用体积百分比浓度为10%‑30%的乙醇‑水混合溶剂溶解后,用D101大孔吸附树脂柱进行纯化,其中所述纯化依次使用体积百分比浓度为10%‑30%的乙醇‑水混合溶剂作为第一洗涤液和体积百分比浓度为50%‑60%的乙醇‑水混合溶剂作为第二洗涤液进行洗脱,分别得到第一洗脱液和第二洗脱液,收集第二洗脱液,浓缩至浸膏状态,得到牡丹花蕊目标提取物。
2.根据权利要求1所述的牡丹花蕊提取物的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中所述牡丹花蕊粉末与所述乙醇‑水溶液的料液比为1 g:(10‑15 )ml,所述超声提取是在22℃‑27℃下超声提取2次‑3次,每次15分钟‑30分钟。
3.根据权利要求1所述的牡丹花蕊提取物的制备方法,其特征在于:所述步骤(3)中所述浓缩至干浸膏是在温度为50℃、压力为0.05 MPa的条件下减压浓缩至干浸膏。
4.由权利要求1‑3中任一所述的方法制备得到的牡丹花蕊提取物。
5.权利要求1‑3中任一所述的方法制备得到的牡丹花蕊提取物在制备诱导癌症细胞凋亡的产品中的应用;
所述癌症细胞为乳腺癌细胞MDA‑MB‑231。
6.权利要求1‑3中任一所述的方法制备得到的牡丹花蕊提取物在制备具有抗乳腺癌功效的药物、化妆品中的用途。
说明书 :
牡丹花蕊提取物及其制备方法与应用
技术领域
背景技术
和2000多年的人工栽培历史,而且是一种传统的药食两用的植物资源。牡丹花蕊是一个潜
在的功能性食品。牡丹花蕊中碳水化物、蛋白质、不饱和脂肪酸和矿物质含量丰富,能够补
充人体所需营养。
型、灭菌。CN104524322B披露了一种牡丹花蕊前列腺袋泡茶及生产方法,其生产方法步骤如
下:步骤如下:(1)牡丹花蕊晒干或烘干,筛去外粘花粉,含水量在9‑13%;(2)山楂片焙炒,
焙炒的火候掌握为160‑190℃,2‑5min,至外面焦褐色里面黄褐色即可;(3)然后将焦山楂片
与薏苡仁、茯苓分别用破碎机打成颗粒状,筛除不能通过10目的大颗粒和能通过100目筛孔
的细粉;(4)按照配方比例,将上述四种物料混合均匀。CN110679819A披露了一种牡丹花蕊
固体饮料及其制备方法,其制备方法包括以下步骤:将喷雾干燥粉末、牡丹花蕊干粉、固体
饮料添加剂混合均匀,即得。CN110507622A披露了一种牡丹花蕊片的制作工艺,其制作步骤
如下:第一步:采摘含苞待放的牡丹花蕊,将牡丹花蕊进行干燥挑选;第二步:将第一步处理
过的牡丹花蕊取出3‑8份,使用超临界二氧化碳进行萃取,制成膏;第三步:将第一步处理过
的牡丹花蕊取出1‑5份,采用水热回流提取法,经过浓缩、喷雾干燥后,制成粉;第四步:取中
期蕊1‑3份,经过低温粉碎成粉;第五步:将第三步制作出来的喷雾干燥粉和第四步的低温
粉碎粉混合搅拌均匀;第六步:将第五步混合均匀后的物质加入到第二步的膏中,然后进行
彻底均质,制成粒,然后沸腾干燥;第七步:将第六步沸腾干燥后的混合物内加入硬脂酸镁,
然后进行压片、凉片后包装。
发明内容
溶液;
蕊乙酸乙酯萃取物;
水性醇溶液作为第一洗涤液和体积百分比浓度为50%‑60%的水性醇溶液作为第二洗涤液
进行洗脱,分别得到第一洗脱液和第二洗脱液,收集第二洗脱液,浓缩至浸膏状态,得到牡
丹花蕊目标提取物。
和水混合、振荡,再静置,待分层以后,取乙酸乙酯层(上层)。
很适合萃取操作。萃取操作可以瞬间或短时间完成。
可节约成本,简化工艺,减少废液排放。由于本发明所用的步骤中包含有大孔树脂吸附环
节,可以有效去除脂溶性杂质,因此不必单独脱脂处理。由于本发明产品主要目的之一是得
到对脂肪酸合酶抑制能力强的提取物,因此某些脂溶性成分是不必去除的。
脱液弃去;第二洗脱液主要是富集有效成分。
附图说明
花蕊提取物B、3为实施例3的本发明牡丹花蕊提取物C、4为cerulenin、5为EGCG、6为白藜芦
醇;纵座标单位为微克/毫升。
具体实施方式
合并提取液,将得到的提取液减压浓缩至无醇味,得到牡丹花蕊醇提取物水溶液;
液,在温度为50℃、压力为0.05MPa的条件下减压浓缩至干浸膏,得到牡丹花蕊乙酸乙酯萃
取物;
比浓度为10%的乙醇‑水混合溶剂为第一洗脱液洗脱5个柱体积,再以体积百分比浓度为
50%的乙醇‑水混合溶剂作为第二洗脱液洗脱5个柱体积,收集合并第二洗脱液,在温度为
50℃、压力为0.05MPa的条件下减压浓缩至无醇味,并继续减压浓缩挥干溶剂得到浸膏,经
进一步干燥得到粉末状态的目标牡丹花蕊提取物A。
用体外对肿瘤细胞内酶活进行测定的常规方法。即将乳腺癌细胞MDA‑MB‑231细胞(购买自
中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)破碎后,采用乙酰辅酶A、丙二酸单酰辅酶A、
NADPH为底物的标准测活方法进行测定(Tian W.X.et al.,1985.J.Biol.Chem.,260:
11375‑11387;Li P.,et al.,2014.Mol Cancer 13:138)。
其为100%。底物中加入脂肪酸合酶抑制剂提取液的为实验组,测得其脂肪酸合酶活性的数
值为A0的50%时,抑制剂的浓度为IC50值。
照在做活性测定前不需进行前处理,只是溶解于DMSO中,测定时所用浓度根据它们活力的
大小而有不同。
Sigma‑Aldrich公司,产品目录号为219557。
购自Sigma‑Aldrich公司,产品目录号为93894。
cerulenin、5为EGCG、6为白藜芦醇;纵座标单位为微克/毫升。实施例1的牡丹花蕊提取物A
对于脂肪酸合酶的半抑制浓度(IC50)为3.73μg/mL,而对照1(Cerulenin)、对照2(EGCG)、对
照3(白藜芦醇)对于脂肪酸合酶的半抑制浓度(IC50)分别为22.6μg/mL、24.9μg/mL、11.8μ
g/mL,说明牡丹花蕊提取物A对脂肪酸合酶的活性有强烈的抑制作用。
个浓度的药物设置6个复孔。待药物处理细胞24h后,吸去培养基,每孔加入100μL新鲜无血
清培养基和10μL CCK‑8溶液,在37℃下孵育1‑2h,然后用酶标仪检测450nm下的吸光值。数
据为6个复孔的平均值,所有实验重复三次以上。以DMSO处理组细胞活力计为100%,计算牡
丹花瓣提取物A处理组细胞的相对活力。
力(p<0.05)。
取液,将得到的提取液减压浓缩至无醇味,得到牡丹花蕊醇提取物水溶液;
在温度为50℃、压力为0.05MPa的条件下减压浓缩至干浸膏,得到牡丹花蕊乙酸乙酯萃取
物;
比浓度为30%的乙醇‑水混合溶剂为第一洗脱液洗脱5个柱体积,再以体积百分比浓度为
60%的乙醇‑水混合溶剂作为第二洗脱液洗脱5个柱体积,收集合并第二洗脱液,在温度为
50℃、压力为0.05MPa的条件下减压浓缩至无醇味,并继续减压浓缩挥干溶剂得到浸膏,经
进一步干燥得到粉末状态的目标牡丹花蕊提取物B。
为EGCG、6为白藜芦醇;纵座标单位为微克/毫升。实施例2的牡丹花蕊提取物B对于脂肪酸合
酶的半抑制浓度(IC50)为8.96μg/mL,而对照1(Cerulenin)、对照2(EGCG)、对照3(白藜芦
醇)对于脂肪酸合酶的半抑制浓度(IC50)分别为22.6μg/mL、24.9μg/mL、11.8μg/mL,说明牡
丹花蕊提取物B对脂肪酸合酶的活性有强烈的抑制作用,并且所需的有效剂量很低。
压浓缩至无醇味,得到牡丹花蕊醇提取物水溶液;
液,在温度为50℃、压力为0.05MPa的条件下减压浓缩至干浸膏,得到牡丹花蕊乙酸乙酯萃
取物;
比浓度为20%的乙醇‑水混合溶剂为第一洗脱液洗脱5个柱体积,再以体积百分比浓度为
60%的乙醇‑水溶液混合溶剂作为第二洗脱液洗脱5个柱体积,收集合并第二洗脱液,在温
度为50℃、压力为0.05MPa的条件下减压浓缩至无醇味,并继续减压浓缩挥干溶剂得到浸
膏,经进一步干燥得到粉末状态的目标牡丹花蕊提取物C。
为EGCG、6为白藜芦醇;纵座标单位为微克/毫升。实施例3的牡丹花蕊提取物C对于脂肪酸合
酶的半抑制浓度(IC50)为5.46μg/mL,而对照1(Cerulenin)、对照2(EGCG)、对照3(白藜芦
醇)对于脂肪酸合酶的半抑制浓度(IC50)分别为22.6μg/mL、24.9μg/mL、11.8μg/mL,说明牡
丹花蕊提取物C对脂肪酸合酶的活性有强烈的抑制作用,并且所需的有效剂量很低。
在本发明的精神和原则之内所作的修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明保护范围
之内。