一种抗CD47抗原结合蛋白及其应用

摘要

一种分离的抗原结合蛋白，该抗原结合蛋白能够特异性结合肿瘤细胞表面的CD47，抑制CD47与SIRPα的结合，能够结合人红细胞，不引起凝血反应，能够引起巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬，抑制肿瘤生长和/或肿瘤细胞增殖。提供了该抗原结合蛋白在预防和治疗肿瘤中的应用。

权利要求

1.分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其包含抗体重链可变区VH和抗体轻链可变区VL，所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列选自下组中的任意一组：(1)HCDR1：SEQ ID NO:36，HCDR2：SEQ ID NO:138，HCDR3：SEQ ID NO:58，LCDR1：SEQ ID NO:115，LCDR2：SEQ ID NO:31和LCDR3：SEQ ID NO:70；

(2)HCDR1：SEQ ID NO:32，HCDR2：SEQ ID NO:138，HCDR3：SEQ ID NO:58，LCDR1：SEQ ID NO:115，LCDR2：SEQ ID NO:31和LCDR3：SEQ ID NO:70；和(3)HCDR1：SEQ ID NO:34，HCDR2：SEQ ID NO:138，HCDR3：SEQ ID NO:58，LCDR1：SEQ ID NO:115，LCDR2：SEQ ID NO:31和LCDR3：SEQ ID NO:70。

2.根据权利要求1所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段包括Fab，Fab’，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di‑scFv和/或dAb。

3.根据权利要求1所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体选自下组：嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。

4.根据权利要求1所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述VH包括框架区H‑FR1，H‑FR2，H‑FR3，和H‑FR4。

5.根据权利要求4所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述H‑FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，且所述H‑FR1包含SEQ ID NO:145所示的氨基酸序列。

6.根据权利要求5所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述H‑FR1包含SEQ ID NO:170所示的氨基酸序列。

7.根据权利要求4所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述H‑FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述H‑FR2包含SEQ ID NO:146所示的氨基酸序列。

8.根据权利要求7所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述H‑FR2包含SEQ ID NO:190所示的氨基酸序列。

9.根据权利要求4所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述H‑FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述H‑FR3包含SEQ ID NO:147所示的氨基酸序列。

10.根据权利要求9所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述H‑FR3包含SEQ ID NO:176所示的氨基酸序列。

11.根据权利要求4所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述H‑FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接相连，且所述H‑FR4包含SEQ ID NO:148所示的氨基酸序列。

12.根据权利要求11所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述H‑FR4包含SEQ ID NO:186所示的氨基酸序列。

13.根据权利要求1所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述VH包含SEQ ID NO:111、107和109中任一项所示的氨基酸序列。

14.根据权利要求1所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其包括抗体重链恒定区，且所述抗体重链恒定区包括人IgG恒定区。

15.根据权利要求1所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其包括抗体重链恒定区，且所述抗体重链恒定区包括人IgG4恒定区。

16.根据权利要求15所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体重链恒定区包含SEQ ID NO:195中所示的氨基酸序列。

17.根据权利要求1所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其包含抗体重链HC，且所述HC包含SEQ ID NO:112、108和110中任一项所示的氨基酸序列。

18.根据权利要求1所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述VL包括框架区L‑FR1，L‑FR2，L‑FR3，和L‑FR4。

19.根据权利要求18所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述L‑FR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接相连，且所述L‑FR1包含SEQ ID NO:149所示的氨基酸序列。

20.根据权利要求19所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述L‑FR1包含SEQ ID NO:158所示的氨基酸序列。

21.根据权利要求18所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述L‑FR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，且所述L‑FR2包含SEQ ID NO:150所示的氨基酸序列。

22.根据权利要求21所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述L‑FR2包含SEQ ID NO:194所示的氨基酸序列。

23.根据权利要求18所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述L‑FR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，且所述L‑FR3包含SEQ ID NO:151所示的氨基酸序列。

24.根据权利要求23所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述L‑FR3包含SEQ ID NO:155所示的氨基酸序列。

25.根据权利要求18所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述L‑FR4的N末端与所述LCDR3的C末端直接或间接相连，且所述L‑FR4包含SEQ ID NO:152所示的氨基酸序列。

26.根据权利要求25所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述L‑FR4包含SEQ ID NO:159所示的氨基酸序列。

27.根据权利要求1所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述VL包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列。

28.根据权利要求1所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其包括抗体轻链恒定区，且所述抗体轻链恒定区包括人Igκ恒定区。

29.根据权利要求28所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体轻链恒定区包含SEQ ID NO:196中所示的氨基酸序列。

30.根据权利要求1所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段，其包含抗体轻链LC，且所述LC包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列。

31.一种或多种分离的核酸分子，其编码权利要求1‑30中任一项所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段。

32.载体，其包含根据权利要求31所述的核酸分子。

33.细胞，其包含根据权利要求31所述的核酸分子或根据权利要求32所述的载体。

34.制备权利要求1‑30中任一项所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在使得权利要求1‑30中任一项所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段表达的条件下，培养根据权利要求33所述的细胞。

35.药物组合物，其包含权利要求1‑30中任一项所述的分离的CD47抗体或其抗原结合片段、权利要求31所述的核酸分子、权利要求32所述的载体和/或权利要求33所述的细胞，以及任选地药学上可接受的载体。

说明书

一种抗CD47抗原结合蛋白及其应用

[0001] 相关申请的交叉引用

[0002] 本申请要求CN2019107757316优先权，将其通过引用整体并入全文。

技术领域

[0003] 本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种抗CD47抗原结合蛋白及其应用。

背景技术

[0004] CD47也称为整联蛋白相关蛋白(IAP)、卵巢癌抗原OA3、Rh相关抗原和MER6，是一种广泛表达于细胞表面的跨膜蛋白，属于免疫球蛋白超家族。CD47可以与整联蛋白、血小板反
应素(TSP‑1)以及信号调节蛋白α(SIRPα)相互作用。CD47最初被鉴定为人卵巢癌上的肿瘤
抗原，随后大量研究证实，CD47还在大部分人类癌症(例如，淋巴瘤、白血病、乳腺癌、结肠
癌、肺癌、胃癌、成胶质细胞瘤、神经胶质瘤、卵巢癌、宫颈癌、膀胱癌、前列腺癌或黑色素瘤)
的肿瘤细胞上高表达(参见Oldenborg PA.CD47：A Cell Surface Glycoprotein Which 
Regulates Multiple Functions  of Hematopoietic  Cells  in Health and 
Disease.ISRN Hematol.2013；2013：614619.doi：10.1155/2013/614619)，与SIRPα结合后，
能传递抑制性信号逃避巨噬细胞的吞噬。因此，阻断CD47‑SIRPα相互作用的药剂，可以恢复
CD47+靶细胞的吞噬摄取并降低巨噬细胞活化的阈值。

[0005] 近年来，针对CD47与SIRPα信号通路介导的肿瘤逃逸机制的药物研发成为肿瘤免疫治疗的新的热门。目前，临床上正在研究的CD47抗体有Forty Seven的Hu5F9‑G4、Celgene
的CC‑90002、Surface Oncology的SRF‑231等。然而，这些抗体还存在亲和力较低、引起血细
胞凝集反应等缺点(参见专利US9045541)。因此，急需研发更加安全有效的靶向CD47的新型
疗法。

发明内容

[0006] 本申请提供了一种抗CD47抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：1)能够结合源自人和猴的CD47；2)能够特异性结合Jurkat细胞和Raji细胞表面的CD47；3)能够
抑制CD47与SIRPα的结合；4)能够阻断Jurkat细胞表面的CD47与SIRPa的结合；5)能够结合
人红细胞；6)不引起凝血反应；7)能够引起巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬；8)能够抑制肿瘤生
长和/或肿瘤细胞增殖。本申请还提供了所述抗原结合蛋白在预防和治疗肿瘤中的应用。

[0007] 一方面，本申请提供了一种分离的抗原结合蛋白，其包含抗体轻链可变区VL和抗体重链可变区VH，所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中
所述VL包含SEQ ID NO：153所示的氨基酸序列，所述VH包含SEQ ID NO：154所示的氨基酸序
列。

[0008] 在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：

[0009] 1)能够以3x10‑9M或更高的KD值结合源自人和猴的CD47，其中所述KD值通过Biacore测定；

[0010] 2)在FACS测定中，能够特异性结合Jurkat细胞和Raji细胞表面的CD47；

[0011] 3)在ELISA测定中，能够抑制CD47与SIRPα的结合；

[0012] 4)能够结合人血红细胞；

[0013] 5)在红细胞凝血测定中，不引起凝血反应；

[0014] 6)能够引起巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬；

[0015] 7)能够抑制肿瘤生长和/或肿瘤细胞增殖。

[0016] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包括抗体或其抗原结合片段。

[0017] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述抗原结合片段包括Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di‑scFv和/或dAb。

[0018] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述抗体为全人源抗体。

[0019] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中LCDR1包含SEQ ID NO：139所示的氨基酸序列。

[0020] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述LCDR1包含SEQ ID NO：113、114和115中任一项中所示的氨基酸序列。

[0021] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述LCDR2包含SEQ ID NO：140所示的氨基酸序列。

[0022] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述LCDR2包含SEQ ID NO：31、56、57、122、126和127中任一项中所示的氨基酸序列。

[0023] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述LCDR3包含SEQ ID NO：141所示的氨基酸序列。

[0024] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述LCDR3包含SEQ ID NO：67‑74、116‑121中任一项中所示的氨基酸序列。

[0025] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述HCDR1包含SEQ ID NO：142所示的氨基酸序列。

[0026] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述HCDR1包含SEQ ID NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53中任一项中所示的氨基酸序列。

[0027] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述HCDR2包含SEQ ID NO：143所示的氨基酸序列。

[0028] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述HCDR2包含SEQ ID NO：136‑138中任一项中所示的氨基酸序列。

[0029] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述HCDR3包含SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列。

[0030] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述HCDR3包含SEQ ID NO：55和58‑63中任一项中所示的氨基酸序列。

[0031] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述VL包括框架区L‑FR1，L‑FR2，L‑FR3，和L‑FR4。

[0032] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述L‑FR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接相连，且所述L‑FR1包含SEQ ID NO：149所示的氨基酸序列。

[0033] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述L‑FR1包含SEQ ID NO：156、157和158中任一项中所示的氨基酸序列。

[0034] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述L‑FR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，且所述L‑FR2包含SEQ ID NO：150所示的氨基酸序列。

[0035] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述L‑FR2包含SEQ ID NO：191‑194中任一项中所示的氨基酸序列。

[0036] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述L‑FR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，且所述L‑FR3包含SEQ ID NO：151所示的氨基酸序列。

[0037] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述L‑FR3包含SEQ ID NO：155、162‑166中任一项中所示的氨基酸序列。

[0038] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述L‑FR4的N末端与所述LCDR3的C末端直接或间接相连，且所述L‑FR4包含SEQ ID NO：152所示的氨基酸序列。

[0039] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述L‑FR4包含SEQ ID NO：159、160和161中任一项中所示的氨基酸序列。

[0040] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述VL包含SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27和29中任一项中所示的氨基酸序列。

[0041] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白，其包括抗体轻链恒定区，且所述抗体轻链恒定区包括人Igκ恒定区。

[0042] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述抗体轻链恒定区包含SEQ ID NO：196所示的氨基酸序列。

[0043] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白，其包含抗体轻链LC，且所述LC包含SEQ ID NO 197所示的氨基酸序列。

[0044] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白，其包含抗体轻链LC，且所述LC包含SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28和30中任一项中所示的氨基酸序
列。

[0045] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述VH包括框架区H‑FR1，H‑FR2，H‑FR3，和H‑FR4。

[0046] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H‑FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，且所述H‑FR1包含SEQ ID NO：145所示的氨基酸序列。

[0047] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H‑FRI包含SEQ ID NO：167‑170中任一项中所示的氨基酸序列。

[0048] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H‑FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述H‑FR2包含SEQ ID NO：146所示的氨基酸序列。

[0049] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H‑FR2包含SEQ ID NO：184、187‑190中任一项中所示的氨基酸序列。

[0050] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H‑FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述H‑FR3包含SEQ ID NO：147所示的氨基酸序列。

[0051] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H‑FR3包含SEQ ID NO：171‑182中任一项中所示的氨基酸序列。

[0052] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H‑FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接相连，且所述H‑FR4包含SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列。

[0053] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述H‑FR4包含SEQ ID NO：183、185和186中任一项中所示的氨基酸序列。

[0054] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述VH包含SEQ ID NO：75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109和111中任一项中所示的氨基
酸序列。

[0055] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白，其包括抗体重链恒定区，且所述抗体重链恒定区包括人IgG恒定区。

[0056] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白，其包括抗体重链恒定区，且所述抗体重链恒定区包括人IgG4恒定区。

[0057] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白中所述抗体重链恒定区包含SEQ ID NO：195中任一项中所示的氨基酸序列。

[0058] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含抗体重链HC，且所述HC包含SEQ ID NO：198所示的氨基酸序列。

[0059] 在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含抗体重链HC，且所述HC包含SEQ ID NO：76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110和112中任一
项中所示的氨基酸序列。

[0060] 另一方面，本申请提供了分离的一种或多种核酸分子，其编码本申请所述的分离的抗原结合蛋白。

[0061] 另一方面，本申请提供了一种载体，其包含本申请所述的核酸分子。

[0062] 另一方面，本申请提供了一种细胞，其包含本申请所述的核酸分子或本申请所述的载体。

[0063] 另一方面，本申请提供了一种制备本申请所述的分离的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括在使得本申请所述的分离的抗原结合蛋白表达的条件下，培养本申请所述的细
胞。

[0064] 另一方面，本申请提供了一种药物组合物，其包含本申请所述的分离的抗原结合蛋白、本申请所述的核酸分子、本申请所述的载体和/或本申请所述的细胞，以及任选地药
学上可接受的载体。

[0065] 另一方面，本申请提供了一种本申请所述的分离的抗原结合蛋白、本申请所述的核酸分子、本申请所述的载体、本申请所述的细胞和/或本申请所述的药物组合物在制备药
物中的用途，所述药物用于预防、缓解和/或治疗肿瘤。

[0066] 在某些实施方式中，所述的用途，其中所述肿瘤包括实体瘤和/或血液肿瘤。

[0067] 另一方面，本申请提供了一种抑制CD47与SIRPα结合的方法，所述方法包括施用本申请所述的分离的抗原结合蛋白。

[0068] 另一方面，本申请提供了一种预防、缓解和/或治疗肿瘤的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用本申请所述的分离的抗原结合蛋白。

[0069] 本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认
识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱
离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例
性的，而非为限制性的。

附图说明

[0070] 本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简
要说明书如下：

[0071] 图1A‑1B显示的是本申请所述抗原结合蛋白与Jurkat细胞的结合活性(FACS检测)；

[0072] 图1C显示的是本申请所述抗原结合蛋白PR000806、PR000807和PR000808与Raji细胞的结合活性(FACS检测)；

[0073] 图2显示的是本申请所述抗原结合蛋白PR000796、PR000802、PR000803、PR000804、PR000805、PR000806、PR000807、PR000808和PR000811与食蟹猴PBMC细胞的结合活性(FACS
检测)；

[0074] 图3A显示的是本申请所述抗原结合蛋白PR000796、PR000802、PR000803、PR000804、PR000805、PR000806、PR000807、PR000808和PR000811与猴CD47蛋白的结合活性
(ELISA检测)；

[0075] 图3B‑3C显示的是本申请所述抗原结合蛋白PR000806、PR000807和PR000808分别与人和猴CD47蛋白的结合活性(ELISA检测)；

[0076] 图4A‑4B显示的是本申请所述抗原结合蛋白PR000796、PR000802、PR000803、PR000804、PR000805、PR000806、PR000807、PR000808和PR000811抑制人CD47与SIRPα结合的
活性(ELISA检测)；

[0077] 图5A‑5B显示的是本申请所述抗原结合蛋白PR000796、PR000802、PR000803、PR000804、PR000805、PR000806、PR000807、PR000808和PR000811阻断Jurkat细胞表面的
CD47与SIRPα结合的活性(FACS检测)；

[0078] 图6A‑6B显示的是本申请所述抗原结合蛋白不引起人红细胞凝集反应；

[0079] 图7显示的是本申请所述抗原结合蛋白与红细胞的结合能力(FACS检测)；

[0080] 图8A‑8B显示的是本申请所述抗原结合蛋白PR000796、PR000802、PR000803、PR000804、PR000805、PR000806、PR000807、PR000808和PR000811引起巨噬细胞对Jurkat细
胞吞噬作用的能力；

[0081] 图9显示的是本申请所述抗原结合蛋白PR000806、PR000807和PR000808引起巨噬细胞对OVCAR3细胞吞噬作用的能力；

[0082] 图10显示的是本申请所述抗原结合蛋白PR001265、PR001275、PR001276、PR000806、PR000808和PR001281引起巨噬细胞对人红细胞吞噬作用的能力；

[0083] 图11A‑11B显示的是不同浓度的本申请所述抗原结合蛋白PR000806和PR000808在NCG‑Raji小鼠模型上的体内抗肿瘤活性，分别为肿瘤体积变化(A)和小鼠体重变化(B)；

[0084] 图12A‑12B显示的是不同浓度的本申请所述抗原结合蛋白PR001265和PR000806在B‑hSIRPa/hCD47‑MC38‑hCD47小鼠模型上的体内抗肿瘤活性，分别为肿瘤体积变化(A)和小
鼠体重变化(B)；

[0085] 图13显示的是使用本申请所述抗原结合蛋白PR001265、PR001275、PR001276、PR000806、PR000808和PR001281治疗前后小鼠体重变化趋势；

[0086] 图14显示的是使用本申请所述抗原结合蛋白PR001265、PR001275、PR001276、PR000806、PR000808和PR001281治疗前7天小鼠模型血常规检测结果；

[0087] 图15显示的是使用本申请所述抗原结合蛋白PR001265、PR001275、PR001276、PR000806、PR000808和PR001281治疗后第1天小鼠模型血常规检测结果；

[0088] 图16显示的是使用本申请所述抗原结合蛋白PR001265、PR001275、PR001276、PR000806、PR000808和PR001281治疗后第7天小鼠模型血常规检测结果；

[0089] 图17显示的是使用本申请所述抗原结合蛋白PR001265、PR001275和PR001276以高度特异性结合CD47，而不结合非CD47抗原。

具体实施方式

[0090] 以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。

[0091] 在本申请中，术语“抗原结合蛋白”通常是指包含结合抗原的部分的蛋白质，以及任选地允许结合抗原的部分采用促进抗原结合蛋白与抗原结合的构象的支架或骨架部分。
可典型地包含抗体轻链可变区(VL)、抗体重链可变区(VH)或上述两者。VH和VL区可进一步
被区分为称为互补决定区(CDR)的高变区，它们散布在称为框架区(FR)的更保守的区域中。
每个VH和VL可由三个CDR和四个FR区构成，它们从氨基端至羧基端可按以下顺序排列：FR‑
1、CDR1、FR‑2、CDR2、FR‑3、CDR3和FR‑4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结
构域。抗原结合蛋白的实例包括但不限于抗体、抗原结合片段(Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F
(ab’)2，scFv，di‑scFv和/或dAb)、免疫缀合物、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、抗体片
段、抗体衍生物、抗体类似物或融合蛋白等，只要它们显示出所需的抗原结合活性即可。

[0092] 在本申请中，术语“可变”通常是指这样的事实，即抗体的可变结构域的序列的某些部分变化强烈，它形成各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，变异性并非均
匀地分布在抗体的整个可变区中。它集中在轻链和重链可变区中的三个区段，被称为互补
决定区(CDR)或高变区(HVR)。可变域中更高度保守的部分被称为框架(FR)。天然重链和轻
链的可变结构域各自包含四个FR区，大部分采用β‑折叠构型，通过三个CDRs连接，形成环连
接，并且在一些情况下形成β‑折叠结构的一部分。每条链中的CDRs通过FR区紧密靠近在一
起，并与来自另一条链的CDR一起形成抗体的抗原结合位点，恒定区不直接参与抗体与抗原
的结合，但是它们表现出不同的效应功能，例如参与抗体的依赖于抗体的细胞毒性。在本领
域中，可以通过多种方法来定义抗体的CDR，例如基于序列可变性的Kabat定义规则(参见，
Kabat等人，免疫学的蛋白质序列，第五版，美国国立卫生研究院，贝塞斯达，马里兰州
(1991))和基于结构环区域位置的Chothia定义规则(参见，A1‑Lazikani等人，JMol Biol 
273：927‑48，1997)。在本申请中，还使用包含了Kabat定义和Chothia定义的Combined定义
规则确定可变结构域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基。

[0093] 表1本申请抗体CDR定义方法(可参见http：//bioinf.org.uk/abs/)

[0094]   Kabat Chothia CombinedLCDR1 L24‑‑L34 L24‑‑L34 L24‑L34
LCDR2 L50‑‑L56 L50‑‑L56 L50‑L56
LCDR3 L89‑‑L97 L89‑‑L97 L89‑L97
HCDR1 H31‑‑H35 H26‑‑H32 H26‑H35
HCDR2 H50‑‑H65 H52‑‑H56 H50‑H65
HCDR3 H95‑‑H102 H95‑‑H102 H95‑H102

[0095] 其中，Laa‑Lbb可以指从抗体轻链的N端开始，第aa位(Chothia编码规则)至第bb位(Chothia编码规则)的氨基酸序列；Haa‑Hbb可以指从抗体重链的N端开始，第aa位(Chothia
编码规则)至第bb位(Chothia编码规则)的氨基酸序列。例如，L24‑L34可以指从抗体轻链N
端开始，按照Chothia编码规则的从第24位至第34位的氨基酸序列；H26‑H32可以指从抗体
重链N端开始，按照Chothia编码规则的从第26位至第32位的氨基酸序列。

[0096] 在本申请中，术语“分离的抗原结合蛋白”通常是指已经从其产生环境(例如，天然的或重组的)的组分中识别，分离和/或回收的抗原结合蛋白。其产生环境的污染组分通常
是干扰其研究、诊断或治疗用途的物质，可以包括酶、激素和其他蛋白质或非蛋白质溶质。
分离的抗原结合蛋白或抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。

[0097] 在本申请中，术语“单克隆抗体”通常是指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即集群中的个别抗体是相同的，除了可能存在的少量的自然突变。单克隆抗体通常针对单
个抗原位点具有高度特异性。而且，与常规多克隆抗体制剂(通常具有针对不同决定簇的不
同抗体)不同，各单克隆抗体是针对抗原上的单个决定簇。除了它们的特异性之外，单克隆
抗体的优点在于它们可以通过杂交瘤培养合成，不受其他免疫球蛋白污染。修饰语“单克
隆”表示从基本上同质的抗体群体获得的抗体的特征，并且不被解释为需要通过任何特定
方法产生抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可以在杂交瘤细胞中制备，或者可以通
过重组DNA方法制备。

[0098] 在本申请中，术语“全人源抗体”通常是指将人类编码抗体的基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中，使动物表达的抗体。抗体所有部分(包括抗体的可变区和
恒定区)均由人类来源的基因所编码。全人源抗体可以大大减少异源抗体对人体造成的免
疫副反应。本领域获得全人源抗体的方法可以有噬菌体展示技术、转基因小鼠技术、核糖体
展示技术和RNA‑多肽技术等。

[0099] 在本申请中，术语“特定抗CD47抗体”通常是指可以与本申请的抗体竞争结合CD47的抗体。本申请的抗原结合蛋白可包括与特定抗CD47抗体具有相同氨基酸序列的那些抗
体。

[0100] 在本申请中，术语“特异性结合”通常是指抗体通过其抗原结合域与表位结合，并且该结合需要抗原结合域和表位之间的一些互补性。根据该定义，当抗体相比于其将结合
随机的，不相关的表位而言更容易通过其抗原结合域与表位结合时，抗体被称为“特异性结
合”该抗原。“表位”是指抗原上与抗原结合蛋白(如抗体)结合的特定的原子基团(例如，糖
侧链、磷酰基、磺酰基)或氨基酸。

[0101] 在本申请中，术语“CD47”通常是指白细胞表面抗原CD47，可以为完整的CD47蛋白，也可以为保留CD47的至少部分活性的任何形式的CD47及其变体。所述CD47可包括人CD47及
其片段或猴CD47及其片段。例如，人CD47可包含参见UniProtKB数据库中登录号No.Q08722
所示的氨基酸序列。所述的猴可以为食蟹猴。例如，食蟹猴CD47可包含UniProtKB数据库中
登录号为No.A0A2K5X412的氨基酸序列。在本申请中，术语“人CD47胞外区”和“hCD47.ECD”
可互换地使用，通常是指CD47胞外N端的V型免疫球蛋白的结构域，也是CD47配体结合区域。
例如，人CD47胞外区可包含UniProtKB中登录号为No.Q08722所示氨基酸序列的第19位至第
141位序列。

[0102] 在本申请中，术语“SIRPα”通常是指信号调节蛋白α，也称为BIT、MFR、MYD1、PTPNS1、SHPS1或SIRP，是CD47的免疫球蛋白样细胞表面受体，可以为完整的SIRPα蛋白，也
可以为保留SIRPα的至少部分活性的任何形式的SIRPα及其变体。在某些情形中，所述SIRPα
可以为人SIRPα，其可包含UniProtKB数据库中登录号为P78324所示的氨基酸序列。

[0103] 在本申请中，术语“Jurkat细胞”通常是指人白血病T淋巴细胞。所述Jurkat细胞来源于一个14岁的男孩的外周血。

[0104] 在本申请中，术语“Raji细胞”通常是指人Burkitt′s淋巴瘤细胞。所述Raji细胞源自一位11岁黑人男孩的左上颌骨的Burkitt淋巴瘤。

[0105] 在本申请中，术语“OVCAR 3细胞”和“OVCAR‑3细胞”可互换地使用，通常是指人卵巢腺癌细胞。所述OVCAR 3细胞源自患有进行性卵巢腺癌病人的恶性腹水。

[0106] 在本申请中，术语“凝血反应”、“凝集作用”可互换地使用，通常是指当与不同试剂一起孵育时，血红细胞凝集或结块时发生的同型相互作用。所述凝集作用可以是指对照抗
体存在时，红细胞的凝集使血液圆斑边缘模糊的现象。据报道，现有的CD47抗体在一定浓度
下会引起RBC的凝集，如本申请实施例7中的现有抗体Tab1(FortySeven，Hu5F9‑G)。因此，凝
血作用会限制CD47抗体的治疗效果。术语“不引起凝血反应”通常是指不产生血红细胞凝集
或结块。

[0107] 在本申请中，术语“Tab1”通常是指FortySeven公司的抗CD47抗体Hu5F9‑G。

[0108] 在本申请中，术语“Tab2”通常是指Celgene公司的抗CD47抗体CC‑90002。

[0109] 在本申请中，术语“Tab3”通常是指Surface Oncology公司的抗CD47抗体SRF‑231。

[0110] 在本申请中，术语“KD”、“Kd”、“KD”可互换地使用，通常是指平衡解离常数，并指在滴定测量中，在平衡时、或者通过将解离速率常数(koff)除以结合速率常数(kon)所获得的
值。可使用结合速率常数(kon)、解离速率常数(koff)和平衡解离常数(KD)表示抗原结合蛋
白(例如抗体)对抗原的结合亲和力。确定结合和解离速率常数的方法为本领域熟知。使用
基于荧光的技术可提供高灵敏度以及在生理缓冲液中在平衡时检查样品的能力。可以使用
其他实验途径和仪器例如BIAcore(生物分子相互作用分析)测定。

[0111] 在本申请中，术语“核酸分子”通常是指从其天然环境中分离的或人工合成的任何长度的分离形式的核苷酸、脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。

[0112] 在本申请中，术语“载体”通常是指能够在合适的宿主中自我复制的核酸分子，其将插入的核酸分子转移到宿主细胞中和/或宿主细胞之间。所述载体可包括主要用于将DNA
或RNA插入细胞中的载体、主要用于复制DNA或RNA的载体，以及主要用于DNA或RNA的转录
和/或翻译的表达的载体。所述载体还包括具有多种上述功能的载体。所述载体可以是当引
入合适的宿主细胞时能够转录并翻译成多肽的多核苷酸。通常，通过培养包含所述载体的
合适的宿主细胞，所述载体可以产生期望的表达产物。

[0113] 在本申请中，术语“细胞”通常是指可以或已经含有包括本申请所述的核酸分子的质粒或载体，或者能够表达本申请所述的抗体或其抗原结合片段的个体细胞、细胞系或细
胞培养物。所述细胞可以包括单个宿主细胞的子代。由于天然的、意外的或故意的突变，子
代细胞与原始亲本细胞在形态上或在基因组上可能不一定完全相同，但能够表达本申请所
述的抗体或其抗原结合片段即可。所述细胞可以通过使用本申请所述的载体体外转染细胞
而得到。所述细胞可以是原核细胞(例如大肠杆菌)，也可以是真核细胞(例如酵母细胞，例
如COS细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，HeLa细胞，HEK293细胞，COS‑1细胞，NS0细胞或骨髓瘤
细胞)。在一些实施方案中，所述细胞是哺乳动物细胞。例如，所述哺乳动物细胞可以是CHO‑
K1细胞。在本申请中，术语“重组细胞”通常是指在其中引入了重组表达载体的细胞。所述重
组宿主细胞不仅包括某种特定的细胞，还包括这些细胞的后代。

[0114] 在本申请中，术语“药物组合物”通常是指这样的制剂，其以允许活性成分的生物学活性有效的形式存在，并且不包含对将施用所述组合物的对象具有不可接受的毒性的另
外的成分。所述组合物是无菌的。“无菌”组合物是灭菌的，或不含所有活的微生物及它们的
孢子。

[0115] 在本申请中，术语“肿瘤”通常是指哺乳动物中的机体(例如，细胞或其组成部分)在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的赘生物。在本申请中，肿瘤可以包括淋
巴瘤、白血病和卵巢癌。例如，肿瘤可以包括侵袭性非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性淋
巴细胞性白血病(ALL)，急性骨髓性白血病(AML)，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，慢性骨髓
性白血病(CML)，卵巢癌等。

[0116] 在本申请中，术语“在……之间”通常是指某种氨基酸片段的C端与第一氨基酸片段的N端直接或间接连接，并且其N端与第二氨基酸片段的C端直接或间接连接。在轻链中，
例如，所述L‑FR2的N末端与所述LCDR1的C末端直接或间接相连，且所述L‑FR2的C末端与所
述LCDR2的N末端直接或间接相连。又例如，所述L‑FR3的N末端与所述LCDR2的C末端直接或
间接相连，且所述L‑FR3的C末端与所述LCDR3的N末端直接或间接相连。在重链中，例如，所
述H‑FR2的N末端与所述HCDR1的C末端直接或间接相连，且所述H‑FR2的C末端与所述HCDR2
的N末端直接或间接相连。又例如，所述H‑FR3的N末端与所述HCDR2的C末端直接或间接相
连，且所述H‑FR3的C末端与所述HCDR3的N末端直接或间接相连。在本申请中，“第一氨基酸
片段”和“第二氨基酸片段”可以为相同或不同的任意一段氨基酸片段。

[0117] 在本申请中，术语“包含”通常是指包括明确指定的特征，但不排除其他要素。

[0118] 在本申请中，术语“约”通常是指在指定数值以上或以下0.5％‑10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、
5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。

[0119] 抗体、其抗原结合片段或变体

[0120] 一方面，本申请提供一种抗原结合蛋白，其可包含轻链可变区VL中的至少一个CDR，所述VL可包含SEQ ID NO：153所示的氨基酸序列。

[0121] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含LCDR1，且所述LCDR1可包含SEQ ID NO：139所示的氨基酸序列：

[0122] RASQSX1SSX2LX3(SEQ ID NO：139)；其中，X1＝I或V；X2＝W，Y或H；X3＝A或N。例如，该序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0123] 在本申请中，与SEQ ID NO：113所示抗原结合蛋白的LCDR1相比，所述LCDR1可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1、X2和/或X3处的氨基酸取代。

[0124] 在本申请中，与SEQ ID NO：113所示抗原结合蛋白的LCDR1相比，所述LCDR1可至少包含在X1、X2或X3处的氨基酸取代，其中X1处的氨基酸可被取代为V；X2处的氨基酸可被取代
为Y或H；X3处的氨基酸可被取代为N。

[0125] 例如，所述LCDR1可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：113‑115。

[0126] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含LCDR2，且所述LCDR2可包含SEQ ID NO：140所示的氨基酸序列：

[0127] X1X2SX3X4X5X6(SEQ ID NO：140)；其中，X1＝K，R，V或G；X2＝A或S；X3＝S，T，R或I；X4＝L或R；X5＝E，D，Q或A；X6＝S或T。例如，该序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0128] 在本申请中，与SEQ ID NO：56所示抗原结合蛋白的LCDR2相比，所述LCDR2可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1、X2、X3、X4、X5和/或X6处的氨基酸取代。

[0129] 在本申请中，与SEQ ID NO：56所示抗原结合蛋白的LCDR2相比，所述LCDR2可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5或X6处的氨基酸取代，其中X1处的氨基酸可被取代为R、V或G；X2处的氨
基酸可被取代为S；X3处的氨基酸可被取代为R、I或T；X4处的氨基酸可被取代为R；X5处的氨
基酸可被取代为D、Q或A；X6处的氨基酸可被取代为T。

[0130] 例如，所述LCDR2可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：31、56、57、122、126和127。

[0131] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含LCDR3，且所述LCDR3可包含SEQ ID NO：141所示的氨基酸序列：

[0132] X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10T(SEQ ID NO：141)；其中，X1＝Q或R；X2＝Q，L或H；X3＝Y或‑；X4＝N，I，Q或‑；X5＝S，Y，T或N；X6＝Y，W，N或Q；X7＝S，T或‑；X8＝T或‑；X9＝P或‑；X10＝Y，R或L。
例如，该序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0133] 在本申请中，与SEQ ID NO：116所示抗原结合蛋白的LCDR3相比，所述LCDR3可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9和/或X10处的氨基酸
取代。

[0134] 在本申请中，与SEQ ID NO：116所示抗原结合蛋白的LCDR3相比，所述LCDR3可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9和/或X10处的氨基酸取代，其中X1处的氨基酸可被取代为
Q；X2处的氨基酸可被取代为L或H；X3处的氨基酸可被取代为无氨基酸；X4处的氨基酸可被取
代为I、Q或无氨基酸；X5处的氨基酸可被取代为Y、T或N；X6处的氨基酸可被取代为Q、N或W；X7
处的氨基酸可被取代为T或无氨基酸；X8处的无氨基酸可被取代增加为T；X9处的氨基酸可被
取代为无氨基酸；X10处的氨基酸可被取代为R或L。

[0135] 在本申请中，“‑”表示与对照抗原结合蛋白的LCDR3相比，该位可以为无氨基酸取代。例如，与SEQ ID NO：116所示抗原结合蛋白的LCDR3(X9处氨基酸为P)相比，SEQ ID NO：
74所示的抗原结合蛋白的LCDR3在X9处没有氨基酸取代。

[0136] 例如，所述LCDR3可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：67‑74、116‑121。

[0137] 本申请所述的抗原结合蛋白可包含抗体重链可变区VH中的至少一个CDR，所述VH包含SEQ ID NO：154所示的氨基酸序列。

[0138] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含HCDR1，且所述HCDR1可包含SEQ ID NO：142所示的氨基酸序列：

[0139] GX1SX2X3X4Y(SEQ ID NO：142)；其中，X1＝G或D；X2＝I，L或V；X3＝S，N，D或Q；X4＝N，S或T。例如，该序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0140] 在本申请中，与SEQ ID NO：40所示的抗原结合蛋白的HCDR1相比，所述HCDR1可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1、X2、X3和/或X4处的氨基酸取代。

[0141] 在本申请中，与SEQ ID NO：40所示的抗原结合蛋白的HCDR1相比，所述HCDR1可至少包含在X1、X2、X3和/或X4处的氨基酸取代，其中，X1处的氨基酸可被取代为D；X2处的氨基酸
可被取代为L或V；X3处的氨基酸可被取代为S、D或Q；X4处的氨基酸可被取代为S或T。

[0142] 例如，所述HCDR1可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53。

[0143] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含HCDR2，且所述HCDR2可包含SEQ ID NO：143所示的氨基酸序列：

[0144] YYSGX1(SEQ ID NO：143)；其中，X1＝T，N或S。例如，该序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0145] 在本申请中，与SEQ ID NO：136所示的抗原结合蛋白的HCDR2相比，所述HCDR2可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1处的氨基酸取代。

[0146] 在本申请中，与SEQ ID NO：136所示的抗体的HCDR2相比，所述HCDR2可至少包含在X1处的氨基酸取代，其中，X2处的氨基酸可被取代为S或T。

[0147] 例如，所述HCDR2可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：136‑138。

[0148] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含HCDR3，且所述HCDR3可包含SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列：

[0149] X1X2X3X4X5X6Y(SEQ ID NO：144)；其中，X1＝K或G；X2＝R或K；X3＝G，A，T，W或L；X4＝V，M，G，I或A；X5＝L，Y，H，F或‑；X6＝D或S。例如，该序列可以是根据Chothia定义规则确定的
序列。

[0150] 在本申请中，与SEQ ID NO：60所示的抗原结合蛋白的HCDR3相比，所述HCDR3可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1、X2、X3、X4、X5和/或X6处的氨基酸取代。

[0151] 在本申请中，与SEQ ID NO：60所示的HCDR3相比，所述HCDR3可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5和/或X6处的氨基酸取代，其中，X1处的氨基酸可被取代为G；X2处的氨基酸可被取代
为K；X3处的氨基酸可被取代为A、T、L或W；X4处的氨基酸可被取代为M、G、A或I；X5处的氨基酸
可被取代为Y、H、F或无氨基酸；X6处的氨基酸可被取代为S。

[0152] 例如，所述HCDR3可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：55、58‑63。

[0153] 在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：139所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO：140所示的氨基酸序列；所述LCDR3
可包含SEQ ID NO：141所示的氨基酸序列。

[0154] 在某些情形中，本申请所述抗原结合蛋白的所述LCDR1可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：113、114和115；所述LCDR2可包含下述任一项中所示的氨基酸序
列：SEQ ID NO：31、56、57、122、126和127；所述LCDR3可包含下述任一项中所示的氨基酸序
列：SEQ ID NO：67‑74、116‑121。

[0155] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的氨基
酸序列。

[0156] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：73所示的氨基
酸序列。

[0157] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：114所示的氨基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：126所示的氨基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：72所示的氨基
酸序列。

[0158] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的氨基
酸序列。

[0159] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：115所示的氨基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：70所示的氨基
酸序列。

[0160] 在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可包含HCDR1‑3。所述HCDR1可包含SEQ ID NO：142所示的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO：143所示的氨基酸序列；且所述
HCDR3可包含SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列。

[0161] 在某些情形中，本申请所述抗原结合蛋白的所述HCDR1可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53；所述HCDR2可包含下述
任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：136‑138；且所述HCDR3可包含下述任一项中所示
的氨基酸序列：SEQ ID NO：58‑63和55。

[0162] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中HCDR1可包含SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：58所示的氨
基酸序列。

[0163] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：59所示的氨
基酸序列。

[0164] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中HCDR1可包含SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：55所示的氨
基酸序列。

[0165] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中HCDR1可包含SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：58所示的氨
基酸序列。

[0166] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的氨基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的氨
基酸序列。

[0167] 在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和HCDR1‑3。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：139所示的氨基酸序列；所述LCDR2可包含SEQ ID NO：140所示的氨基酸序列；
所述LCDR3可包含SEQ ID NO：141所示的氨基酸序列；所述HCDR1可包含SEQ ID NO：142所示
的氨基酸序列；所述HCDR2可包含SEQ ID NO：143所示的氨基酸序列；且所述HCDR3可包含
SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列。

[0168] 在某些情形中，本申请所述抗原结合蛋白的所述LCDR1可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：113、114和115；所述LCDR2可包含下述任一项中所示的氨基酸序
列：SEQ ID NO：31、56、57、122、126和127；所述LCDR3可包含下述任一项中所示的氨基酸序
列：SEQ ID NO：67‑74、116‑121；所述HCDR1可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID 
NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53；所述HCDR2可包含下述任一项中所示的氨基酸
序列：SEQ ID NO：136‑138；且所述HCDR3可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID 
NO：58‑63和55。

[0169] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：73所示的氨基
酸序列；其HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示
的氨基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：59所示的氨基酸序列。

[0170] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：114所示的氨基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：126所示的氨基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：72所示的氨基
酸序列；其HCDR1可包含SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示
的氨基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：55所示的氨基酸序列。

[0171] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：115所示的氨基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：70所示的氨基
酸序列；其HCDR1可包含SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示
的氨基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列。

[0172] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的氨基
酸序列；其HCDR1可包含SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示
的氨基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列。

[0173] 例如，本申请所述的抗原结合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：74所示的氨基
酸序列；其HCDR1可包含SEQ ID NO：53所示的氨基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示
的氨基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列。

[0174] 本申请所述的抗原结合蛋白还可包含框架区L‑FR1，L‑FR2，L‑FR3和L‑FR4。

[0175] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含L‑FR1，所述的L‑FR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接相连，且所述的L‑FR1包含SEQ ID NO：149所示的氨基酸序列：

[0176] X1IX2MTQSPX3X4LSX5SX6GX7RX8TX9X10C(SEQ ID NO：149)；其中，X1＝D或E；X2＝Q或V；X3＝S或A；X4＝T或S；X5＝A或V；X6＝V或P；X7＝D或E；X8＝V或A；X9＝I或L；X10＝T或S。例如，该
序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0177] 在本申请中，与SEQ ID NO：157所示的抗原结合蛋白的L‑FR1相比，所述L‑FR1可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9和/或X10处的氨基
酸取代。

[0178] 在本申请中，与SEQ ID NO：157所示的抗原结合蛋白的L‑FR1相比，所述L‑FR1可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9和/或X10处的氨基酸取代，其中，X1处的氨基酸可被取
代为E；X2处的氨基酸可被取代为V；X3处的氨基酸可被取代为A；X4处的氨基酸可被取代为S；
X5处的氨基酸可被取代为V；X6处的氨基酸可被取代为P；X7处的氨基酸可被取代为E；X8处的
氨基酸可被取代为A；X9处的氨基酸可被取代为L；X10处的氨基酸可被取代为S。

[0179] 例如，所述L‑FR1可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：156‑158。

[0180] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含L‑FR2，所述的L‑FR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，且所述的L‑FR2包含SEQ ID NO：150所示的氨基酸序列：

[0181] WYQQKPGX1APX2LLIY(SEQ ID NO：150)；其中，X1＝K，N或Q；X2＝K或R。例如，该序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0182] 在本申请中，与SEQ ID NO：191所示的抗原结合蛋白的L‑FR2相比，所述L‑FR2可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1和/或X2处的氨基酸取代。

[0183] 在本申请中，与SEQ ID NO：191所示的抗原结合蛋白的L‑FR2相比，所述L‑FR2可至少包含在至少包含在X1和/或X2处的氨基酸取代，其中，X1处的氨基酸可被取代为N或Q；X2处
的氨基酸可被取代为R。

[0184] 例如，所述L‑FR2可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：191‑194。

[0185] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含L‑FR3，所述的L‑FR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，且所述的L‑FR3包含SEQ ID NO：151所示的氨基酸序列：

[0186] X1X2PX3RFSGSGSGTX4FX5LTX6SSLQX7X8DFAX9YYC(SEQ ID NO：151)；其中，X1＝G，D；X2＝V或I；X3＝S或V；X4＝E或D；X5＝T或S；X6＝I或V；X7＝P或S；X8＝D或E；X9＝T或I。例如，该序
列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0187] 在本申请中，与SEQ ID NO：166所示的抗原结合蛋白的L‑FR3相比，所述L‑FR3可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8和/或X9处的氨基酸
取代。

[0188] 在本申请中，与SEQ ID NO：166所示的抗体的L‑FR3相比，所述L‑FR3可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8和/或X9处的氨基酸取代，其中，X1处的氨基酸可被取代为D；X2处的
氨基酸可被取代为I；X3处的氨基酸可被取代为V；X4处的氨基酸可被取代为D；X5处的氨基酸
可被取代为S；X6处的氨基酸可被取代为V；X7处的氨基酸可被取代为S；X8处的氨基酸可被取
代为E；X9处的氨基酸可被取代为I。

[0189] 例如，所述L‑FR3可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：155、162‑166。

[0190] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含L‑FR4，所述的L‑FR4的N末端与所述LCDR3的C末端相连，且所述的L‑FR4包含SEQ ID NO：152所示的氨基酸序列：

[0191] FGX1GTKX2EIK(SEQ ID NO：152)；其中，X1＝Q或G；X2＝L或V。例如，该序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0192] 在本申请中，与SEQ ID NO：160所示的抗体的L‑FR4相比，所述L‑FR4可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1和/或X2处的氨基酸取代。

[0193] 在本申请中，与SEQ ID NO：160所示的L‑FR4相比，所述L‑FR4可至少包含在至少包含在X1和/或X2处的氨基酸取代，其中，X1处的氨基酸可被取代为G；X2处的氨基酸可被取代
为V。

[0194] 例如，所述L‑FR4可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：159‑161。

[0195] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含轻链可变区VL，且所述的VL可包含SEQ ID NO：153所示的氨基酸序列：

[0196] X1IX2MTQSPX3X4LSX5SX6GX7RX8TX9X10CRASQSX11SSX12LX13WYQQKPGX14APX15LLIYX16X17SX18X19X20X21X22X23PX24RFSGSGSGTX25FX26LTX27SSLQX28X29DFAX30YYCX31X32X33X34X35X36X37X38X3
9X40TFGX41GTKX42EIK(SEQ ID NO：153)；其中，X1＝D，E；X2＝Q，V；X3＝S或A；X4＝T或S；X5＝A或
V；X6＝V或P；X7＝D或E；X8＝V或A；X9＝I或L；X10＝T或S；X11＝I或V；X12＝W或Y或H；X13＝A或N；
X14＝K，N或Q；X15＝K或R；X16＝K，R，V或G；X17＝A或S；X18＝S，T，R或I；X19＝L或R；X20＝E，D，Q或
A；X21＝S或T；X22＝G或D；X23＝V或I；X24＝S或V；X25＝E或D；X26＝T或S；X27＝I或V；X28＝P或S；
X29＝D或E；X30＝T或I；X31＝Q或R；X32＝Q，L或H；X33＝Y或‑；X34＝N，I，Q或‑；X35＝S，T或N；X36
＝Y，W，N或Q；X37＝S，T或‑；X38＝T或‑；X39＝P或‑；X40＝Y，R或L；X41＝Q或G；X42＝L或V。例如，
该序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0197] 在本申请中，与SEQ ID NO：15所示的抗体的VL相比，所述VL可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15、X16、X17、
X18、X19、X20、X21、X22、X23、X24、X25、X26、X27、X28、X29、X30、X31、X32、X33、X34、X35、X36、X37、X38、X39、X40、
X41和/或X42处的氨基酸取代。

[0198] 在本申请中，与SEQ ID NO：15所示的VL相比，所述VL可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15、X16、X17、X18、X19、X20、X21、X22、X23、X24、X25、X26、X27、X28、X29、
X30、X31、X32、X33、X34、X35、X36、X37、X38、X39、X40、X41和/或X42处的氨基酸取代，其中，X1处的氨基
酸可被取代为E；X2处的氨基酸可被取代为V；X3处的氨基酸可被取代为A；X4处的氨基酸可被
取代为S；X5处的氨基酸可被取代为V；X6处的氨基酸可被取代为P；X7处的氨基酸可被取代为
E；X8处的氨基酸可被取代为A；X9处的氨基酸可被取代为L；X10处的氨基酸可被取代为S；X11
处的氨基酸可被取代为V；X12处的氨基酸可被取代为H或Y；X13处的氨基酸可被取代为N；X14
处的氨基酸可被取代为Q或N；X15处的氨基酸可被取代为R；X16处的氨基酸可被取代为G、R或
V；X17处的氨基酸可被取代为S；X18处的氨基酸可被取代为I、R或T；X19处的氨基酸可被取代
为R；X20处的氨基酸可被取代为A、Q或D；X21处的氨基酸可被取代为T；X22处的氨基酸可被取
代为D；X23处的氨基酸可被取代为I；X24处的氨基酸可被取代为V；X25处的氨基酸可被取代为
D；X26处的氨基酸可被取代为S；X27处的氨基酸可被取代为V；X28处的氨基酸可被取代为S；X29
处的氨基酸可被取代为E；X30处的氨基酸可被取代为I；X31处的氨基酸可被取代为Q；X32处的
氨基酸可被取代为L或H；X33处的氨基酸可被取代为无氨基酸；X34处的氨基酸可被取代为I
或无氨基酸；X35处的氨基酸可被取代为Y、T或N；X36处的氨基酸可被取代为W或N；X37处的氨
基酸可被取代为无氨基酸；X38处的氨基酸可被取代为T；X39处的氨基酸可被取代为无氨基
酸；X40处的氨基酸可被取代为L或R；X41处的氨基酸可被取代为G；X42处的氨基酸可被取代为
V。

[0199] 例如，所述VL区可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27和29。

[0200] 本申请所述的抗原结合蛋白还可包含框架区H‑FR1，H‑FR2，H‑FR3和H‑FR4。

[0201] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含H‑FR1，所述的H‑FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，且所述的H‑FR1包含SEQ ID NO：145所示的氨基酸序列：

[0202] QVQLQESGPGLX1X2PSETLSLTCX3VS(SEQ ID NO：145)；其中，X1＝V或M；X2＝K或Q；X3＝T或S。例如，该序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0203] 在本申请中，与SEQ ID NO：169所示的抗原结合蛋白的H‑FR1相比，所述H‑FR1可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1、X2和/或X3处的氨基酸取代。

[0204] 在本申请中，与SEQ ID NO：169所示的H‑FR1相比，所述H‑FR1可至少包含在X1、X2和/或X3处的氨基酸取代，其中，X1处的氨基酸可被取代为M；X2处的氨基酸可被取代为Q；X3
处的氨基酸可被取代为S。

[0205] 例如，所述H‑FR1可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：167‑170。

[0206] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含H‑FR2，所述的H‑FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述的H‑FR2包含SEQ ID NO：146所示的氨基酸序列：

[0207] YWX1WX2RQX3PGX4GLEWIGX5I(SEQ ID NO：146)；其中，X1＝S或T；X2＝I或F；X3＝P或A；X4＝K或R；X5＝Y或N。例如，该序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0208] 在本申请中，与SEQ ID NO：188所示的H‑FR2相比，所述H‑FR2可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：包含在X1、X2、X3、X4和/或X5处的氨基酸取代。

[0209] 在本申请中，与SEQ ID NO：188所示的H‑FR2相比，所述H‑FR2可至少包含在X1、X2、X3、X4和/或X5处的氨基酸取代，其中，X1处的氨基酸可被取代为T；X2处的氨基酸可被取代为
F；X3处的氨基酸可被取代为A；X3处的氨基酸可被取代为R；X3处的氨基酸可被取代为N。

[0210] 例如，所述H‑FR2可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：184、187‑190。

[0211] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含H‑FR3，所述的H‑FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述的H‑FR3包含SEQ ID NO：147所示的氨基酸序列：

[0212] RVX1X2SX3DX4SKNQFSLX5LX6SVX7X8X9DTAX10YYCX11R(SEQ ID NO：147)；其中，X1＝T或S；X2＝I或M；X3＝V或I；X4＝T或I；X5＝K或N；X6＝S，T或N；X7＝T或I；X8＝A或S；X9＝A或G；X10
＝V或M；X11＝A或G。例如，该序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0213] 在本申请中，与SEQ ID NO：178所示的H‑FR3相比，所述H‑FR3可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14和/或X15处的
氨基酸取代。

[0214] 在本申请中，与SEQ ID NO：178所示的H‑FR3相比，所述H‑FR3可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14和/或X13处的氨基酸取代，其中，X1处的氨基酸可
被取代为D；X2处的氨基酸可被取代为Q；X3处的氨基酸可被取代为P；X4处的氨基酸可被取代
为T；X5处的氨基酸可被取代为S；X6处的氨基酸可被取代为M；X7处的氨基酸可被取代为I；X8
处的氨基酸可被取代为I；X9处的氨基酸可被取代为K；X10处的氨基酸可被取代为S或N；X11处
的氨基酸可被取代为I；X12处的氨基酸可被取代为S；X13处的氨基酸可被取代为G；X14处的氨
基酸可被取代为M；X15处的氨基酸可被取代为G。

[0215] 例如，所述H‑FR3可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：171‑182。

[0216] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含H‑FR4，所述的H‑FR4的N末端与所述HCDR3的C末端相连，且所述的H‑FR4包含SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列：

[0217] X1GQGX2LVTVSS(SEQ ID NO：148)；其中，X1＝W或S；X2＝T或I。例如，该序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0218] 在本申请中，与SEQ ID NO：186所示的H‑FR4相比，所述H‑FR4可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1和/或X2处的氨基酸取代。

[0219] 在本申请中，与SEQ ID NO：186所示的H‑FR4相比，所述H‑FR4可至少包含在X1和/或X2处的氨基酸取代，其中，X1处的氨基酸可被取代为S；X2处的氨基酸可被取代为I。

[0220] 例如，所述H‑FR4可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：183、185和186。

[0221] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含重链可变区VH，且所述的VH包含SEQ ID NO：154所示的氨基酸序列：

[0222] QVQLQESGPGLX1X2PSETLSLTCX3VSGX4SX5X6X7YYWX8WX9RQX10PGX11GLEWIGX12IYYSGX13TX14YX15X16SLX17SRVX18X19SX20DX21SKNQFSLX22LX23SVX24X25X26DTAX27YYCX28RX29X30X31X32X33X34
YX35GQGX36LVTVSS(SEQ ID NO：154)；其中，X1＝V或M；X2＝K或Q；X3＝T或S；X4＝G或D；X5＝I，L
或V；X6＝S，N或D；X7＝N，S或T；X8＝S或T；X9＝I或F；X10＝P或A；X11＝K或R；X12＝Y或N；X13＝T，
S或N；X14＝N或D；X15＝N或Q；X16＝P或S；X17＝K或T；X18＝T或S；X19＝I或M；X20＝V或I；X21＝T
或I；X22＝K或N；X23＝S，T或N；X24＝T或I；X25＝A或S；X26＝A或G；X27＝V或M；X28＝A或G；X29＝K
或G；X30＝R或K；X31＝G，A，T，W或L；X32＝V，M，G，I或A；X33＝L，Y，H，F或‑；X34＝D或S；X35＝W或
S；X36＝T或I。例如，该序列可以是根据Chothia定义规则确定的序列。

[0223] 在本申请中，与SEQ ID NO：85所示的抗原结合蛋白的VH相比，所述VH可至少包含在选自以下的氨基酸位置处的取代：在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15、
X16、X17、X18、X19、X20、X21、X22、X23、X24、X25、X26、X27、X28、X29、X30、X31、X32、X33、X34、X35和/或X36处的
氨基酸取代。

[0224] 在本申请中，与SEQ ID NO：85所示的VH相比，所述VH可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15、X16、X17、X18、X19、X20、X21、X22、X23、X24、X25、X26、X27、X28、X29、
X30、X31、X32、X33、X34、X35和/或X36处的氨基酸取代，其中，X1处的氨基酸可被取代为V；X2处的
氨基酸可被取代为Q；X3处的氨基酸可被取代为S；X4处的氨基酸可被取代为D；X5处的氨基酸
可被取代为L或V；X6处的氨基酸可被取代为S、Q或D；X7处的氨基酸可被取代为T；X8处的氨基
酸可被取代为T；X9处的氨基酸可被取代为F；X10处的氨基酸可被取代为A；X11处的氨基酸可
被取代为R；X12处的氨基酸可被取代为N；X13处的氨基酸可被取代为T或S；X14处的氨基酸可
被取代为D；X15处的氨基酸可被取代为Q；X16处的氨基酸可被取代为P；X17处的氨基酸可被取
代为T；X18处的氨基酸可被取代为S；X19处的氨基酸可被取代为M；X20处的氨基酸可被取代为
I；X21处的氨基酸可被取代为I；X22处的氨基酸可被取代为K；X23处的氨基酸可被取代为N或
T；X24处的氨基酸可被取代为I；X25处的氨基酸可被取代为S；X26处的氨基酸可被取代为G；X27
处的氨基酸可被取代为M；X28处的氨基酸可被取代为G；X29处的氨基酸可被取代为G；X30处的
氨基酸可被取代为K；X31处的氨基酸可被取代为T、A、W或L；X32处的氨基酸可被取代为I、M、G
或A；X33处的氨基酸可被取代为H、F、Y或无氨基酸；X34处的氨基酸可被取代为S；X35处的氨基
酸可被取代为S；X36处的氨基酸可被取代为I。

[0225] 例如，所述VH可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109和111。

[0226] 在本申请中，所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链可变区VL和重链可变区VH。所述VL可包含SEQ ID NO：153所示的氨基酸序列；所述VH可包含SEQ ID NO：154所示的氨基酸序
列。

[0227] 本申请所述抗原结合蛋白的所述VL可包含下述任一项中所示的氨基酸序列SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27和29；所述VH可包含下述任一项中所示的
氨基酸序列SEQ ID NO：75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、
109和111。

[0228] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：111所示的氨基酸序列。

[0229] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：107所示的氨基酸序列。

[0230] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：109所示的氨基酸序列。

[0231] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：79所示的氨基酸序列。

[0232] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：81、83、85、89、91、93、95和97任一项中所示的氨基
酸序列。

[0233] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列。

[0234] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：83所示的氨基酸序列。

[0235] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：85所示的氨基酸序列。

[0236] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：89所示的氨基酸序列。

[0237] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：91所示的氨基酸序列。

[0238] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：93所示的氨基酸序列。

[0239] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：95所示的氨基酸序列。

[0240] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：97任一项中所示的氨基酸序列。

[0241] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：99所示的氨基酸序列。

[0242] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：99所示的氨基酸序列。

[0243] 例如，所述分离的抗原结合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列，且所述VH可包含SEQ ID NO：99所示的氨基酸序列。

[0244] 在本申请中，所述抗原结合蛋白包含轻链恒定区CL，且所述抗体轻链恒定区可包括人Igκ恒定区。

[0245] 例如，所述CL区可包含下述所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：196。

[0246] 在本申请中，所述抗原结合蛋白包含轻链LC，且所述LC可包含SEQ ID NO：197所示的氨基酸序列。

[0247] 例如，所述LC可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28和30。

[0248] 在本申请中，所述抗原结合蛋白包含重链恒定区CH，且所述抗体重链恒定区可包括人IgG恒定区。在某些情形中，本申请所述抗体重链恒定区可包括人IgG4恒定区。

[0249] 例如，所述CH区可包含下述所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：195。

[0250] 在本申请中，所述抗原结合蛋白包含轻链HC，且所述抗体HC可包含SEQ ID NO：198所示的氨基酸序列。

[0251] 例如，所述HC可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110和112。

[0252] 本申请所述抗原结合蛋白包含抗体轻链恒定区CL和重链恒定区CH。所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基酸序列；且所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。

[0253] 本申请所述抗原结合蛋白包含抗体轻链LC和重链HC。所述LC可包含SEQ ID NO：197所示的氨基酸序列，且所述HC可包含SEQ ID NO：198所示的氨基酸序列。

[0254] 例如，所述LC可包含下述任一项中所示的氨基酸序列SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28和30，所述HC可包含下述任一项中所示的氨基酸序列SEQ ID 
NO：76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110和112。

[0255] 本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：139所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：140所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：141所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：149所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：150所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：151所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：152所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：153所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：197所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：
142所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：143所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ 
ID NO：144所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：145所示的氨基酸序列，H‑FR2
可包含SEQ ID NO：146所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO 147所示的氨基酸序列，
且H‑FR4可包含SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所
述VH可包含SEQ ID NO：154所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸
序列。且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：198所示的氨
基酸序列。

[0256] 在某些情形中，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含如SEQ ID NO：113‑115中任一项所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：31、56、
57、122、126和127中任一项所示的氨基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：67‑74、116‑121中
任一项所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：156‑158中任一项所示的氨基酸序
列，L‑FR2可包含SEQ ID NO：191‑194中任一项所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：
155、162‑166中任一项所示的氨基酸序列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：159‑161中任一项所
示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且所述VL可包含SEQ ID NO：1、3、5、7、
9、11、13、15、17、19、21、23、25、27和29中任一项所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID 
NO：196中所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID 
NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28和30中任一项所示的氨基酸序列。所述抗原
结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：32、34、36、38、40、
42、45、47、49、51和53中任一项所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136‑138中任一
项所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：55和58‑63中任一项所示的氨基酸序列，所
述H‑FR1可包含SEQ ID NO：167‑170中任一项所示的氨基酸序列，H‑FR2可包含SEQ ID NO：
184、187‑190中任一项所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：171‑182中任一项所示
的氨基酸序列，且H‑FR4可包含SEQ ID NO：183、185和186中任一项所示的氨基酸序列。所述
抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH可包含SEQ ID NO：75、77、79、81、83、85、87、89、91、
93、95、97、99、101、103、105、107、109和111中任一项所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ 
ID NO：195中任一项所示的氨基酸序列。且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重
链可包含SEQ ID NO：76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110
和112中任一项所示的氨基酸序列。

[0257] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：162所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序
列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：53所
示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：
63所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包含
SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：182所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：183所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：105所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序
列。且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：106所示的氨基
酸序列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001281相同的抗体轻链和抗体重链。

[0258] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列，LCDR3可包
含SEQ ID NO：73所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，
L‑FR2可包含SEQ ID NO：193所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸
序列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，
且所述VL可包含SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨
基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：28所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：
42所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：59所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：172所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：87所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：88所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR000806相同的抗体轻链和抗体重链。

[0259] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：114所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：126所示的氨基酸序列，LCDR3可包
含SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：156所示的氨基酸序列，
L‑FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：163所示的氨基酸
序列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，
且所述VL可包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序
列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：38所
示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：
55所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包含
SEQ ID NO：184所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：180所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：79所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：80所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR000808相同的抗体轻链和抗体重链。

[0260] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：114所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，LCDR3可包
含SEQ ID NO：71所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：156所示的氨基酸序列，
L‑FR2可包含SEQ ID NO：192所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：164所示的氨基酸
序列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：161所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，
且所述VL可包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：4所示的氨基酸序
列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：42所
示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：
61所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：167所示的氨基酸序列，H‑FR2可包含
SEQ ID NO：189所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：171所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：75所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：76所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR000807相同的抗体轻链和抗体重链。

[0261] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：115所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：70所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：158所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：194所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：155所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：159所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：30所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：32
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：58所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：170所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：190所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：176所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：107所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序
列。且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：108所示的氨基
酸序列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001264相同的抗体轻链和抗体重链。

[0262] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：115所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：70所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：158所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：194所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：155所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：159所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：30所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：36
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：58所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：170所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：190所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：176所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：111所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序
列。且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：112所示的氨基
酸序列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001265相同的抗体轻链和抗体重链。

[0263] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：16所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：32
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：177所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：89所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：90所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001266相同的抗体轻链和抗体重链。

[0264] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：16所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：42
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：178所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：91所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：92所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001267相同的抗体轻链和抗体重链。

[0265] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：16所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：40
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：177所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：82所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001268相同的抗体轻链和抗体重链。

[0266] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：16所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：40
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：178所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：83所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：84所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001269相同的抗体轻链和抗体重链。

[0267] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：20所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：40
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：181所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：85所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：86所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001270相同的抗体轻链和抗体重链。

[0268] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：120所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：18所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：40
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：181所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：85所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：86所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001271相同的抗体轻链和抗体重链。

[0269] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：20所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：42
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：177所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：89所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：90所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001272相同的抗体轻链和抗体重链。

[0270] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：69所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：26所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：47
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：62所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：179所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：99所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：100所示的氨基酸
序列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001273相同的抗体轻链和抗体重链。

[0271] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：68所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：24所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：47
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：62所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：179所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：99所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：100所示的氨基酸
序列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001274相同的抗体轻链和抗体重链。

[0272] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：16所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：45
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：174所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：97所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：98所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001275相同的抗体轻链和抗体重链。

[0273] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：16所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：45
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：175所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：93所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：94所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001276相同的抗体轻链和抗体重链。

[0274] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：119所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：165所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：12所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：42
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：168所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：177所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：78所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001277相同的抗体轻链和抗体重链。

[0275] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：120所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：165所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：14所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：42
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：168所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：177所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：78所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001278相同的抗体轻链和抗体重链。

[0276] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：118所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：165所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：10所示的氨基酸序
列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：42所
示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：
60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：168所示的氨基酸序列，H‑FR2可包含
SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：177所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：78所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001279相同的抗体轻链和抗体重链。

[0277] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：162所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序
列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：51所
示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：
63所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包含
SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：182所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：183所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：103所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序
列。且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：104所示的氨基
酸序列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR001280相同的抗体轻链和抗体重链。

[0278] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：115所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：70所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：158所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：194所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：155所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：159所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：30所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：34
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：58所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：170所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：190所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：176所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：109所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序
列。且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：110所示的氨基
酸序列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR000796相同的抗体轻链和抗体重链。

[0279] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：16所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：40
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：181所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：186所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：85所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：86所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR000802相同的抗体轻链和抗体重链。

[0280] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：67所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：22所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：47
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：62所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：179所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：99所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：100所示的氨基酸
序列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR000803相同的抗体轻链和抗体重链。

[0281] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：166所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基
酸序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：16所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：45
所示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID 
NO：60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包
含SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：173所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：95所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：96所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR000804相同的抗体轻链和抗体重链。

[0282] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：165所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：8所示的氨基酸序
列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：42所
示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：
60所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：168所示的氨基酸序列，H‑FR2可包含
SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：177所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序列。
且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：78所示的氨基酸序
列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR000805相同的抗体轻链和抗体重链。

[0283] 例如，本申请所述抗原结合蛋白可包含LCDR1‑3和L‑FR1‑4。所述LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列，LCDR3可包含
SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，所述L‑FR1可包含SEQ ID NO：157所示的氨基酸序列，L‑
FR2可包含SEQ ID NO：191所示的氨基酸序列，L‑FR3可包含SEQ ID NO：162所示的氨基酸序
列，且L‑FR4可包含SEQ ID NO：160所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VL和CL，且
所述VL可包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，所述CL可包含SEQ ID NO：196所示的氨基酸
序列。所述抗原结合蛋白可包含抗体轻链，所述轻链可包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序
列。所述抗原结合蛋白还可包含HCDR1‑3和H‑FR1‑4。其中所述HCDR1可包含SEQ ID NO：49所
示的氨基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：
63所示的氨基酸序列，所述H‑FR1可包含SEQ ID NO：169所示的氨基酸序列，H‑FR2可包含
SEQ ID NO：188所示的氨基酸序列，H‑FR3可包含SEQ ID NO：182所示的氨基酸序列，且H‑
FR4可包含SEQ ID NO：183所示的氨基酸序列。所述抗原结合蛋白可包含VH和CH，且所述VH
可包含SEQ ID NO：101所示的氨基酸序列，所述CH可包含SEQ ID NO：195所示的氨基酸序
列。且所述抗原结合蛋白可包含抗体重链，所述抗体重链可包含SEQ ID NO：102所示的氨基
酸序列。例如，所述抗原结合蛋白包含与PR000811相同的抗体轻链和抗体重链。

[0284] 特定抗CD47抗体本申请所述的分离的抗原结合蛋白，其可与特定抗CD47抗体竞争结合所述CD47，其中所述特定抗CD47抗体可包含轻链可变区和重链可变区，所述特定抗
CD47抗体的轻链可变区可包含LCDR1‑3，所述LCDR1‑3的可包含依次为SEQ ID NO：139‑141
所示的氨基酸序列；所述特定抗CD47抗体的重链可变区可包含HCDR1‑3，所述HCDR1‑3可包
含依次为SEQ ID NO：142‑144所示的氨基酸序列。所述特定抗CD47抗体的轻链可变区氨基
酸序列可为SEQ ID NO：153，且所述特定抗CD47抗体的重链可变区可为SEQ ID NO：154。

[0285] 在本申请中，所述特定抗CD47抗体的LCDR1可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：113、114和115；所述LCDR2可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID 
NO：31、56、57、122、126和127；且所述LCDR3可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID 
NO：67‑74、116‑121。

[0286] 在本申请中，所述特定抗CD73抗体的HCDR1可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53；所述HCDR2可包含下述任一项中所
示的氨基酸序列：SEQ ID NO：136‑138；且所述HCDR3可包含下述任一项中所示的氨基酸序
列：SEQ ID NO：58‑63和55。

[0287] 在本申请中，所述特定抗CD47抗体的VL可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27和29。

[0288] 在本申请中，所述特定抗CD47抗体的VH可包含下述任一项中所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109和111。

[0289] 在本申请中涉及的蛋白质、多肽和/或氨基酸序列，还应理解为至少包含以下的范围：与该所述蛋白质或多肽具备相同或类似功能的变体或同源物。与所述蛋白质或多肽具
备相同或类似功能的变体可以称为功能性变体。

[0290] 在本申请中，所述变体可以为，在所述蛋白质和/或所述多肽(例如，特异性结合CD47蛋白的抗体或其片段)的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸的蛋
白质或多肽。例如，所述变体(例如，功能性变体)可包含已经通过至少1个，例如1‑30个、1‑
20个或1‑10个，又例如1个、2个、3个、4个或5个氨基酸取代、缺失和/或插入而具有氨基酸改
变的蛋白质或多肽。所述变体(例如，功能性变体)可基本上保持改变(例如取代、缺失或添
加)之前的所述蛋白质或所述多肽的生物学特性。例如，所述变体(例如，功能性变体)可保
持改变之前的所述蛋白质或所述多肽的至少60％、70％、80％、90％或100％的生物学活性
(例如抗原结合能力)。例如，所述取代可以为保守取代。

[0291] 在本申请中，所述抗原结合蛋白的氨基酸序列的一部分可以与来自特定物种的抗体中相应的氨基酸序列同源，或者属于特定的类别。例如，抗体的可变区及恒定部分均可以
来自一个动物物种(如人)的抗体的可变区及恒定区。在本申请中，所述同源物可以为，与所
述蛋白质和/或所述多肽(例如，特异性结合CD47蛋白的抗体或其片段)的氨基酸序列具有
至少约85％(例如，具有至少约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约
96％、约97％、约98％、约99％或更高的)序列同源性的蛋白质或多肽。

[0292] 在本申请中，所述同源性通常是指两个或多个序列之间的相似性、类似或关联。可以通过以下方式计算“序列同源性百分比”：将两条待比对的序列在比较窗中进行比较，确
定两条序列中存在相同核酸碱基(例如，A、T、C、G)或相同氨基酸残基(例如，Ala、Pro、Ser、
Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys和Met)的位置的
数目以得到匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗中的总位置数(即，窗大小)，并
且将结果乘以100，以产生序列同源性百分比。为了确定序列同源性百分数而进行的比对，
可以按本领域已知的多种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件如BLAST、BLAST‑
2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适宜参数，
包括为实现正在比较的全长序列范围内或目标序列区域内最大比对所需要的任何算法。所
述同源性也可以通过以下的方法测定：FASTA和BLAST。对FASTA算法的描述可以参见
W.R.Pearson和D.J.Lipman的“用于生物学序列比较的改进的工具”，美国国家科学院院刊
(Proc.Natl.Acad.Sci.)，85：2444‑2448，1988；和D.J.Lipman和W.R.Pearson的“快速灵敏
的蛋白质相似性搜索”，Science，227：1435‑1441，1989。对BLAST算法的描述可参见
S.Altschul、W.Gish、W.Miller、E.W.Myers和D.Lipman的“一种基本的局部对比
(alignment)搜索工具”，分子生物学杂志，215：403‑410，1990。

[0293] 在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白能结合源自人和猴的CD47。所述猴可以指食蟹猴。抗CD47抗体对CD47的结合亲和性可通过本领域已知的任何方法测定。在某些情形
中，结合亲和性可通过竞争性ELISA、RIA或表面等离子共振如BIAcore来测定。在某些具体
的情形中，结合亲和性通过表面等离子共振测定。例如，结合亲和性和解离速率可通过
‑9
BIAcore测定。在某些情形中，所述分离的抗原结合蛋白与CD47结合的KD可以为3x10 M或以
‑9 ‑
下。在一些具体的情形中，所述分离的抗原结合蛋白与CD47结合的KD可以为3x10 M、2x10
9 ‑9 ‑10 ‑11
M、1x10 M、1x10 M、1x10 M或以下。在某些情形中，KD可以为约1pM至约500pM。在另一些
情形中，KD可以为约500pM至约1nM。在另一些情形中，KD可以为约1nM至约10nM。

[0294] 在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以特异性结合CD47。本申请所述CD47可以是肿瘤细胞表面的CD47。所述肿瘤细胞可以是Jurkat细胞或Raji细胞。在某些情形中，所
述抗原结合蛋白与Jurkat细胞上的CD47结合的EC50值可以为约10pM至约10nM。在另一些情
形中，所述EC50值可以为约100pM至约100nM。在另一些情形中，EC50值可以为约1pM至约1nM。
在另一些情形中，所述EC50值可以为约0.1nM至约1nM，例如，在FACS测量中。例如，在FACS测
定中，所述抗原结合蛋白与Jurkat细胞上的CD47结合的EC50值可以为约10pM至约10nM，如，
约10pM至约1nM、至约1nM至约10nM。在本申请中，所述抗原结合蛋白不结合或不特异性结合
非CD47的抗原，例如，不结合或不特异性结合SIPRα、CD147、PD‑1、PD‑L1、CTLA‑4、CD80、
CD86、CD28H、B7H3、B7H4和ICOS。

[0295] 所述抗原结合蛋白还能与食蟹猴细胞表面的CD47结合，如，可以是食蟹猴外周血单个核細胞(PBMC)。在某些情形中，所述结合可通过FACS检测，得到的EC50值可以是约
0.02nM至约0.2nM。在某些情形中FACS测得的EC50可以是约0.01nM至约0.3nM、约0.01nM至
约0.5nM或约0.01nM至约1.0nM。

[0296] 在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以抑制CD47与SIRPα的结合。在本申请中，所述CD47可以为人CD47胞外区。本申请所述人CD47胞外区可包含UniProt中登录号为
Q08722所示氨基酸序列中第19位至第141位的序列。例如，通过ELISA测量的，所述分离的抗
原结合蛋白抑制人CD47与SIRPα结合的IC50值可以是约0.5nM至约5.0nM。在某些情形中，所
述阻断结合的IC50值可以是约1.0nM至约3.0nM。在另一些情形中，可以是约1.5nM至约
2.5nM。例如，通过ELISA测量的，所述分离的抗原结合蛋白抑制人CD47与SIRPα结合的抑制
率可大于90％(例如，大于95％、大于96％、大于97％、大于98％、大于99％或更高)。

[0297] 在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以阻断肿瘤细胞表面的CD47与SIRPα结合。本申请所述的肿瘤细胞可以为Jurkat细胞。本申请所述CD47抗原结合蛋白能够通过阻
断SIRPα与人CD47的结合。例如，所述分离的抗原结合蛋白阻断Jurkat细胞表面的CD47与
SIRPα结合的IC50值可以是约0.01nM至约5.0nM，约0.02nM至约3.0nM或约0.03nM至约2.0nM.
在某些情形中，所述IC50值可以是约0.1nM至约1.0nM，例如通过FACS测量的。

[0298] 在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以不引起凝血反应。在某些情形下，与现有CD47抗体存在时的凝集水平相比，本申请的CD47抗原结合蛋白存在时的凝集水平下降了
至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少
80％、至少90％或至少99％，说明本申请的CD47抗原结合蛋白不引起凝血反应。例如，在浓
度介于约065nM至约665nM之间时，所述的抗原结合蛋白不引起凝血反应。

[0299] 在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以引起巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬。本申请所述的肿瘤细胞可以包括Jurkat和OVCAR 3肿瘤细胞。例如，用CFSE标记Jurkat细胞，
用流式细胞仪进行测量，所述分离的抗原结合蛋白可引起巨噬细胞对Jurkat的吞噬作用，
+ + +
吞噬指数可以为CFSE CD14细胞占总CD14细胞的百分比，且所述吞噬指数可以至少大于
30％(例如，至少大于40％、至少大于50％、至少大于60％、至少大于70％、至少大于80％、至
少大于90％或以上)。所述分离的抗原结合蛋白可引起巨噬细胞对OVCAR3的吞噬作用的EC50
值可以是约0.1nM至约5.0nM(例如，约0.2nM至约3.0nM、约0.2nM至约2.0nM或约0.5nM至约
1.5nM)。在某些情形中，例如，用CD14‑APC标记巨噬细胞，用流式细胞仪进行测量，可以是约
0.5nM至约1.5nM。

[0300] 本申请检测了所述分离的抗原结合蛋白引起巨噬细胞对人红细胞的吞噬能力。例如，用FACS所测量的，所述分离的抗原结合蛋白可引起巨噬细胞对人红细胞的吞噬作用的
吞噬指数可低于35％(例如，可低于30％、低于25％、低于20％、低于15％、低于10％、低于
5％或更低)。本申请所述分离的抗原结合蛋白引起巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用强于对
红细胞的吞噬作用。本申请所述的抗原结合蛋白能够抑制肿瘤生长和/或肿瘤细胞增殖。在
某些情形中，所述抗原结合蛋白可以减缓肿瘤体积增长，消除肿瘤增长，或可以减缓体重减
轻趋势。该效果可通过建立小鼠肿瘤模型检测，例如，Raji小鼠模型或MC38小鼠模型。其中
所述肿瘤包括实体瘤和/或血液肿瘤。实体瘤可包括卵巢癌等，血液瘤可包括白血病、淋巴
瘤。白血病可包括急性淋巴细胞性白血病(ALL)，急性骨髓性白血病(AML)，慢性淋巴细胞性
白血病(CLL)，慢性骨髓性白血病(CML)等。淋巴瘤可包括霍奇金淋巴瘤，无痛性和侵袭性非
霍奇金淋巴瘤，伯基特淋巴瘤等。

[0301] 核酸、载体、细胞和制备方法

[0302] 在另一个方面，本申请还提供了分离的一种或多种核酸分子，所述一种或多种核酸分子可编码本申请所述的抗体、其抗原结合片段。例如，所述一种或多种核酸分子中的每
一个核酸分子可以编码完整的所述抗体、其抗原结合片段，也可以编码其中的一部分(例
如，HCDR1‑3、LCDR1‑3、VL、VH、轻链或重链中的一种或多种)。

[0303] 本申请所述的核酸分子可以为分离的。例如，其可以是通过以下方法产生或合成的：(i)在体外扩增的，例如通过聚合酶链式反应(PCR)扩增产生的，(ii)通过克隆重组产生
的，(iii)纯化的，例如通过酶切和凝胶电泳分级分离，或者(iv)合成的，例如通过化学合
成。在某些实施方式中，所述分离的核酸是通过重组DNA技术制备的核酸分子。

[0304] 在本申请中，可以通过本领域已知的多种方法来制备编码所述抗体、其抗原结合片段的核酸，这些方法包括但不限于，采用限制性片段操作或采用合成性寡核苷酸的重叠
延伸PCR，具体操作可参见Sambrook等人，Molecular Cloning，ALaboratory Manual，Cold 
Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，1989；和Ausube等人
Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishing and Wiley‑
Interscience，New York N.Y.，1993。

[0305] 在另一个方面，本申请提供了一种或多种载体，其包含本申请所述的一种或多种核酸分子。每种载体中可包含一种或多种所述核酸分子。此外，所述载体中还可包含其他基
因，例如允许在适当的宿主细胞中和在适当的条件下选择该载体的标记基因。此外，所述载
体还可包含允许编码区在适当宿主中正确表达的表达控制元件。这样的控制元件为本领域
技术人员所熟知的，例如，可包括启动子、核糖体结合位点、增强子和调节基因转录或mRNA
翻译的其他控制元件等。在某些实施方式中，所述表达控制序列为可调控的元件。所述表达
控制序列的具体结构可根据物种或细胞类型的功能而变化，但通常包含分别参与转录和翻
译起始的5’非转录序列和5’及3’非翻译序列，例如TATA盒、加帽序列、CAAT序列等。例如，5’
非转录表达控制序列可包含启动子区，启动子区可包含用于转录控制功能性连接核酸的启
动子序列。所述表达控制序列还可包括增强子序列或上游活化子序列。在本申请中，适当的
启动子可包括，例如用于SP6、T3和T7聚合酶的启动子、人U6RNA启动子、CMV启动子及其人工
杂合启动子(如CMV)，其中启动子的某部分可与其他细胞蛋白(如人GAPDH，甘油醛‑3‑磷酸
脱氢酶)基因启动子的某部分融合，其可包含或不包含另外的内含子。本申请所述的一种或
多种核酸分子可以与所述表达控制元件可操作地连接。

[0306] 所述载体可以包括，例如质粒、粘粒、病毒、噬菌体或者在例如遗传工程中通常使用的其他载体。例如，所述载体为表达载体。

[0307] 在另一方面，本申请提供了宿主细胞，所述宿主细胞可包含本申请所述的一种或多种核酸分子和/或本申请所述的一种或多种载体。在某些实施方式中，每种或每个宿主细
胞可包含一个或一种本申请所述的核酸分子或载体。在某些实施方式中，每种或每个宿主
细胞可包含多个(例如，2个或以上)或多种(例如，2种或以上)本申请所述的核酸分子或载
体。例如，可将本申请所述的载体引入所述宿主细胞中，例如原核细胞(例如，细菌细胞)、
CHO细胞、NS/0细胞、HEK293T细胞或HEK293A细胞，或者其他真核细胞，如来自植物的细胞、
真菌或酵母细胞等。可通过本领域已知的方法将本申请所述的载体引入所述宿主细胞中，
例如电穿孔、lipofectine转染、lipofectamin转染等。例如，所述宿主细胞可以为COS、CHO、
NSO、sf9、sf21、DH5a、BL21(DE3)或TG1。

[0308] 在另一个方面，本申请提供了制备本申请所述的抗体、其抗原结合片段的方法。所述方法可包括，在使得所述抗体、其抗原结合片段表达的条件下，培养本申请所述的宿主细
胞。例如，可通过使用适当的培养基、适当的温度和培养时间等，这些方法是本领域普通技
术人员所了解的。

[0309] 在某些情形中，所述方法还可包括收获(例如分离和/或纯化)，本申请所述的抗体、其抗原结合片段的步骤。例如，可以采用蛋白G‑琼脂糖或蛋白A‑琼脂糖进行亲和层析，
还可通过凝胶电泳和/或高效液相色谱等来纯化和分离本申请所述的抗体、其抗原结合片
段。

[0310] 药物组合物、应用

[0311] 在另一个方面，本申请提供了一种药物组合物，其可包含本申请所述的抗原结合片段或变体，所述的核酸分子，所述的载体，所述的宿主细胞，以及任选地药学上可接受的
载体。

[0312] 所述药学上可接受的载体通常是指可用于制备药物组合物或制剂的载体，通常安全、无毒，且既不是生物学上也非其它方面不合需要的。所使用的载体通常是适合施用于人
体或其他哺乳动物的载体。在制备组合物时，活性成分通常与载体混合，由载体稀释或封
闭。当载体用作稀释剂时，其可以是固体，半固体或液体材料，其充当抗体活性成分的媒介
物或介质。所述药学上可接受的载体可以包括缓冲剂、抗氧化剂、防腐剂、低分子量多肽、蛋
白质、亲水聚合物、氨基酸、糖、螯合剂、反离子、金属复合物和/或非离子表面活性剂等。

[0313] 所述药物组合物可包括本申请所述抗原结合蛋白，还可包括一种或多种联用的活性化合物。活性化合物可以为不与所述抗原结合蛋白产生不良影响的化合物，或者，可以为
增强其功能的试剂，例如细胞毒剂、细胞因子、化疗制剂或生长抑制剂。所述联用的化合物
可以以有效用于所需目的用量联合存在。

[0314] 在本申请中，所述药物组合物可被配制用于口服给药，静脉内给药，肌肉内给药，在肿瘤部位的原位给药，吸入，直肠给药，阴道给药，经皮给药或通过皮下储存库给药。用于
经皮给药或通过皮下储存库的溶液或悬液可包括以下组分：无菌稀释剂如注射用水、盐水
溶液、非挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂如苯甲醇或对羟基苯甲酸
甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂如乙酸
盐、柠檬酸盐或磷酸盐；和调节张力的物质如氯化钠或右旋糖。pH可用酸或碱调节，例如盐
酸或氢氧化钠。

[0315] 所述药物组合物可以用于抑制肿瘤生长。例如，本申请的药物组合物可以抑制或延缓疾病的发展或进展，可以减小肿瘤大小(甚至基本消除肿瘤)，和/或可以减轻和/或稳
定疾病状态。例如，可通过肿瘤小鼠体重增长减缓程度和肿瘤细胞荧光信号强度表示。

[0316] 本申请所述的药物组合物可以包含预防和/或治疗有效量的所述抗体、其抗原结合片段。所述预防和/或治疗有效量是能够预防和/或治疗(至少部分治疗)患有或具有发展
风险的受试者中的疾病或病症和/或其任何并发症而所需的剂量。

[0317] 另一方面，本申请提供了所述抗体、其抗原结合片段在制备预防或治疗疾病或病症的药物中的用途。

[0318] 另一方面，本申请提供的所述抗体、其抗原结合片段，可用于预防或治疗疾病或病症。所述预防或治疗疾病或病症可以指抑制或延缓疾病或病症的发展或进展。例如，可以用
于抑制肿瘤的发展或进展。例如，可以抑制肿瘤增长或肿瘤细胞增殖。

[0319] 另一方面，本申请提供了用于预防或治疗肿瘤的所述的抗体或其抗原结合片段。

[0320] 另一方面，本申请提供了一种抑制CD47与SIRPα结合的方法，其包括施用本申请所述的抗体、其抗原结合片段、所述的核酸分子、所述的载体、所述的宿主细胞和/或所述的药
物组合物。例如，所述方法可以为体外或离体方法。例如，所述方法可以为ELISA或FACS。

[0321] 另一方面，本申请提供了预防或治疗肿瘤的方法，其包括向有需要的受试者施用本申请所述的抗体或其抗原结合片段、所述的分子核酸、所述的载体、所述的宿主细胞和/
或所述的药物组合物。在本申请中，所述肿瘤包括实体瘤和/或血液肿瘤。例如，所述肿瘤包
含淋巴瘤、白血病、卵巢癌。

[0322] 联合用药

[0323] 本申请的抗原结合蛋白、药物组合物和方法可以与其它治疗剂和/或形式组合施用。所述组合施用通常是指，在向受试者施用的过程中两种(或更多种)不同的疗法被递送
至所述受试者，使得对所述受试者的治疗效果在某个时间点重叠。在某些情形中，当第二疗
法的递送开始时，第一疗法的递送仍在发生，使得在施用方面存在重叠。这在本文中有时被
称为“同时”或“并行递送”。在其它情形中，一个疗法的递送在其它疗法的递送开始之前结
束。在某些情形中，由于组合施用，治疗更有效，两种处理的效果可以部分叠加、完全叠加或
大于叠加。

[0324] 在本申请中，所述的抗原结合蛋白或药物组合物可以与一种或多种另外的疗法如手术、放射治疗或另一治疗性制剂的施用组合。在一个实施方案中，另外的疗法可以包括化
学疗法，例如，细胞毒性剂。在一个实施方案中，另外的疗法可以包括靶向治疗，例如酪氨酸
激酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂或蛋白酶抑制剂。在一个实施方案中，另外的疗法可以包括：
抗炎化合物、抗血管生成化合物、抗纤维化化合物或抗增殖化合物，例如类固醇、生物免疫
调节剂、单克隆抗体、抗体片段、适配子、siRNA、反义分子、融合蛋白、细胞因子、细胞因子受
体、支气管扩张剂、他汀类药物、抗炎剂(例如甲氨蝶呤)或NSAID。在另一实施方案中，另外
的疗法可以包括不同类别的组合疗法。可以同时或顺序地施用本申请所述的抗原结合蛋
白、药物组合物或制剂和另外的疗法。

[0325] 另一方面，本申请还提供了如下实施方案：

[0326] 1.分离的抗原结合蛋白，其包含抗体轻链可变区VL和抗体重链可变区VH，所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3中的任意一个，所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3中的任意一个，
其中所述VL包含SEQ ID NO：153所示的氨基酸序列，所述VH包含SEQ ID NO：154所示的氨基
酸序列。

[0327] 2.如实施方案1所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述LCDR1包含SEQ ID NO：139所示的氨基酸序列，其中LCDR1优选包含SEQ ID NO：113、114和115中任一项中所示的氨基
酸序列。

[0328] 3.如实施方案1所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述LCDR2包含SEQ ID NO：140所示的氨基酸序列，其中LCDR2优选包含SEQ ID NO：31、56、57、122、126和127中任一项中所
示的氨基酸序列。

[0329] 4.如实施方案1所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述LCDR3包含SEQ ID NO：141所示的氨基酸序列，其中LCDR3优选包含SEQ ID NO：67‑74、116‑121中任一项中所示的氨基
酸序列。

[0330] 5.如实施方案1所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO：142所示的氨基酸序列，其中HCDR1优选包含SEQ ID NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53
中任一项中所示的氨基酸序列。

[0331] 6.如实施方案1所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR2包含SEQ ID NO：143所示的氨基酸序列，其中HCDR2优选包含SEQ ID NO：136‑138中任一项中所示的氨基酸序
列。

[0332] 7.如实施方案1所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR3包含SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列，其中HCDR3优选包含SEQ ID NO：55和58‑63中任一项中所示的氨基酸序
列。

[0333] 8.如实施方案1中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述VL包含SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27和29中任一项中所示的氨基酸序列。

[0334] 9.如实施方案1中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述VH包含SEQ ID NO：75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109和111中任一项中
所示的氨基酸序列。

[0335] 10.如实施方案1中所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体轻链LC，且所述LC包含SEQ ID NO：197所示的氨基酸序列，其中所述LC优选包含SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、
16、18、20、22、24、26、28和30中任一项中所示的氨基酸序列。

[0336] 11.如实施方案1中所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链HC，且所述HC包含SEQ ID NO：198所示的氨基酸序列，其中所述HC优选包含SEQ ID NO：76、78、80、82、84、
86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110和112中任一项中所示的氨基酸序列。

[0337] 12.如实施方案1所述的分离的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：

[0338] 1)能够特异性结合源自人和猴的CD47，优选KD≤3x10‑9M；

[0339] 2)能够抑制CD47与SIRPα的结合；

[0340] 3)能够结合人血红细胞；

[0341] 4)在红细胞凝血测定中，不引起凝血反应；

[0342] 5)能够引起巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬；和

[0343] 6)能够抑制肿瘤生长和/或肿瘤细胞增殖。

[0344] 13.一种或多种分离的核酸分子，其编码实施方案1‑12中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。

[0345] 14.载体，其包含如实施方案13所述的核酸分子。

[0346] 15.细胞，其包含如实施方案13所述的核酸分子或如实施方案14所述的载体。

[0347] 16.制备实施方案1‑12中任一项所述的分离的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括在使得实施方案1‑12中任一项所述的分离的抗原结合蛋白表达的条件下，培养如实施方
案15所述的细胞。

[0348] 17.药物组合物，其包含实施方案1‑12中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方案13所述的核酸分子、实施方案14所述的载体和/或实施方案15所述的细胞，以及任选地
药学上可接受的载体。

[0349] 18.实施方案1‑12中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方案13所述的核酸分子、实施方案14所述的载体、实施方案15所述的细胞和/或实施方案17所述的药物组合物
在制备药物中的用途，所述药物用于预防、缓解和/或治疗肿瘤。

[0350] 19.抑制CD47与SIRPα结合的方法，所述方法包括施用实施方案1‑12中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。

[0351] 不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的融合蛋白、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。

[0352] 实施例

[0353] 下面显示的实施例意在说明本发明的具体实施方案，并且不意在以任何方式限制本说明书或权利要求书的范围。实施例不包括对传统方法的详细描述，如那些用于构建载
体和质粒的方法，将编码蛋白的基因插入到这样的载体和质粒的方法或将质粒引入宿主细
胞的方法.这样的方法对于本领域中具有普通技术的人员是众所周知的，并且在许多出版
物中都有所描述，包括Sambrook，J.，Fritsch，E.F.andManiais，T.(1989)MolecuLar 
Cloning：ALaboratory Manual，2nd edition，Cold spring Harbor Laboratory Press。

[0354] 实施例1 小鼠免疫和抗体分子的获得

[0355] 可以利用CD47抗原对实验动物进行免疫以获得针对CD47特异性结合的抗体分子，该实验动物可以是小鼠、大鼠、兔、羊、骆驼等。通常，其得到的抗体分子是非人源的。在获得
非人源抗体后，需要对这些分子利用抗体工程技术进行人源化改造，以降低免疫原性并提
高成药性。然而，抗体的人源化过程有其技术复杂性，经过人源化改造的分子往往会降低对
抗原的亲和力。另一方面，转基因技术的进步使得可以培育出基因工程化小鼠，其携带人免
疫球蛋白免疫库并使其内源的鼠的免疫库缺失。这种转基因小鼠产生的抗体具有全人源的
序列，因而无需再进一步做人源化改造，大大提高了治疗性抗体开发的效率。Harbour H2L2
小鼠(Harbour Antibodies BV)是一种携带人免疫球蛋白免疫库的转基因小鼠，其产生的
抗体具有完整的人的抗体可变结构域和大鼠恒定结构域。

[0356] 1.1用CD47抗原免疫小鼠

[0357] 用可溶的重组人CD47‑Fc融合蛋白对Harbour H2L2小鼠进行多轮免疫。抗原蛋白与免疫佐剂混合成免疫原试剂，然后通过皮下经腹股沟注射或通过腹腔注射。在每一轮免
疫中，每只小鼠接受的总注射剂量是100微升。在首轮免疫中，每只小鼠接受用50μg抗原蛋
白(人CD47‑Fc)与完全弗氏佐剂(Sigma#F5881)以体积比1∶1混合配制的免疫原试剂的免
疫。在随后的每轮增强免疫中，每只小鼠接受用25μg抗原蛋白与Sigma Adjuvant System佐
剂(Sigma#S6322)混合配制的免疫原试剂的免疫。每轮增强免疫的间隔时间至少为两周，通
常不超过五轮增强免疫。免疫时间为第0、14、28、42、56、70天；并且在第49、77天，检测小鼠
血清抗体滴度。在进行细胞融合前3天，以每只小鼠25μg抗原蛋白的剂量进行最后一次增强
免疫。

[0358] 1.2获得杂交瘤单克隆和抗体序列

[0359] 当检测小鼠血清中CD47特异的抗体滴度达到一定的水平后，将小鼠的脾细胞取出并与骨髓瘤细胞系融合得到杂交瘤细胞；对杂交瘤细胞经过多轮筛选和克隆之后，分离出
21个表达抗‑CD47单克隆抗体分子的杂交瘤。分离的杂交瘤细胞及其表达的单克隆抗体都
使用对应的克隆号来表示：11B8，15D1，18C4，32F1，35A11，39A8，40D7，73F1，74B6，75F6，
78B6，80B6，81E5，83G1，84G2，85G2，86D7，87E9，87H6，88G3，89E3。分离的杂交瘤表达具有完
整的人可变结构域和大鼠恒定结构域的重链和轻链的抗体分子。对上述单克隆抗体进行进
一步的鉴定，根据其对人CD47的结合能力、食蟹猴CD47的结合能力、抑制CD47与SIRPα结合
能力等参数，选出若干个杂交瘤克隆进行测序。利用常规的杂交瘤测序手段获得编码抗体
分子可变结构域的核苷酸序列以及对应的氨基酸序列。在本实施例中，从免疫的Harbour 
H2L2小鼠得到的抗CD47单克隆抗体分子可变结构域的序列是人源抗体序列。抗体可变结构
域的CDR序列可以通过Kabat或者Chothia或者其他CDR定义规则进行分析。在本实施例中，
还使用了一种结合了Kabat定义和Chothia定义的称为Combined定义规则进行分析。

[0360] 1.3制备全人重组抗体

[0361] 在得到编码抗体分子的轻、重链可变结构域序列以后，可以采用常规的重组DNA技术，将轻、重链可变结构域序列和相应的人的抗体轻、重链恒定结构域序列进行融合表达，
得到重组抗体分子。在本实施例中，抗体重链可变结构域序列(VH)通过基因合成并克隆到
编码人IgG4抗体重链恒定结构域序列的哺乳动物细胞表达质粒载体中，以编码产生IgG4抗
体的全长重链，并且在该IgG4重链恒定区引入S228P突变(根据EU编号，第228位丝氨酸取代
成脯氨酸)以增加IgG4抗体的稳定性。抗体轻链可变结构域序列(VL)通过基因合成并克隆
到编码人抗体Igκ轻链恒定结构域序列的哺乳动物细胞表达质粒载体中，以编码产生抗体
的全长轻链。在本实施例中，由于从免疫的HarbourH2L2小鼠得到的抗CD47单克隆抗体分子
可变结构域的序列是人源抗体序列，因而本实施例也得到全人源的抗CD47重组IgG4抗体。

[0362] 将编码抗体重链的质粒和编码抗体轻链的质粒同时转染哺乳动物宿主细胞(如人胚肾细胞HEK293)，利用常规的重组蛋白表达和纯化技术，可以得到具有轻重链正确配对组
TM
装的纯化的CD47重组抗体。具体说来，将HEK293细胞在FreeStyle F17 Expression Medium
5
培养基(Thermo#A1383504)中扩培。瞬时转染开始之前，调节细胞浓度至6～8x 10 细胞/
6
ml，于37℃8％CO2摇床中培养24小时，细胞浓度在1.2X 10细胞/ml。准备30ml培养的细胞。
将上述编码抗体重链的质粒和编码抗体轻链的质粒以2∶3的比例混合共计30μg质粒溶解于
1.5ml Opti‑MEM减血清培养基(Thermo，31985088)，并用0.22μm滤膜过滤除菌。再取1.5ml 
Opti‑MEM溶入1mg/ml PEI(Polysciences，Inc#23966‑2)120μl，静置5分钟。把PEI缓慢加入
质粒中，室温孵育10分钟，边摇晃培养瓶边缓慢滴入质粒PEI混合溶液，于37℃8％CO2摇床
中培养5天。5天后观测细胞活率。收集培养物，以3300g转速离心10分钟后取上清；然后将上
TM
清高速离心去除杂质。用PBS(pH7.4)平衡含有MabSelect (GE Healthcare Life Science#
71‑5020‑91 AE)的重力柱(Bio‑Rad#7311550)，2‑5倍柱体积冲洗。将上清样品过柱；用5‑10
倍柱体积的PBS冲洗柱子，再用pH3.5的0.1M甘氨酸洗脱目的蛋白，后用pH 8.0的Tris‑HCl
调节至中性，最后用超滤管(Millipore，UFC901024)浓缩换液至PBS缓冲液，得到纯化的
TM TM
CD47抗体溶液。最后用NanoDrop(Thermo Scientific NanoDrop  One)测定浓度，分装、存
储备用。

[0363] 1.4抗CD47全人重组抗体的序列

[0364] 表2列出了本实施例中CD47抗体的轻、重链可变结构域氨基酸序列，轻链全长氨基酸序列，重链(人IgG4)全长氨基酸序列和根据Chothia定义规则定义的CDR的氨基酸序列。

[0365] 实施例2 抗体的序列分析和表达纯化

[0366] 抗体的重链可变结构域序列来源于染色体上重链基因群的胚系基因V、D、J基因片段的基因重排和体细胞高频突变等事件；轻链可变结构域序列来源于轻链基因群的胚系基
因V、J基因片段的基因重排和体细胞高频突变等事件。基因重排和体细胞高频突变是增加
抗体多样性的主要因素。来源于相同胚系V基因片段的抗体也可能产生不同的序列，但总体
上相似性较高。利用一些算法，例如IMGT/DomainGapAlign(http：//imgt.org/
3Dstructure‑DB/cgi/DomainGapAlign  cgi)或者NCBI/IgBLAST(https：//
www.ncbi.nlm.nih gov/igblast/)可以从抗体的可变结构域序列推测出其发生基因重排
时可能的胚系基因片段。将实施例1和表2中的抗体序列进行分析，其重链可变结构域(VH)
和轻链可变结构域(VL)的胚系基因V基因片段列于表3。

[0367] 蛋白质或多肽氨基酸链在细胞中翻译合成后有时会引入化学修饰，称为翻译后修饰(PTM)。对于抗体而言，一些PTM的位点是非常保守的，例如，在人的IgG1抗体的恒定结构
域的第297位(EU编号)的保守的氨基酸天冬酰胺Asn通常会发生糖基化修饰形成糖链，而该
糖链结构对于抗体结构和相关的效应子功能是至关重要的。但是，如果在抗体的可变结构
域尤其是抗原结合区域(如CDR)中存在PTM，那么这些PTM的存在有可能会对抗原的结合有
较大的影响，也可能对抗体的物理化学性质带来变化。例如，糖基化、脱酰胺、异构化、氧化
等都可能增加抗体分子的不稳定性或异质性，从而增加抗体开发的难度和风险。因而避免
一些潜在的PTM对于治疗性抗体的开发是非常重要的。随着经验的积累，人们发现一些PTM
是和氨基酸序列的组成尤其是相邻氨基酸组成的“模式”是高度相关的，这样使得可以从蛋
白质的一级氨基酸序列预测出潜在的PTM。例如，N‑x‑S/T(第一位是天冬酰胺，第二位是非
脯氨酸以外的任意氨基酸，第三位是丝氨酸或者苏氨酸)的序列模式预测出N‑连接糖基化
位点。引起PTM的氨基酸序列模式有可能来源于胚系基因序列，例如人胚系基因片段IGHV3‑
33天然地在FR3区域存在糖基化模式NST；也可能来源于体细胞高频突变。表3列出了实施例
1的抗体的可变结构域VH和VL的预测的PTM。具体说来，NSS或NLT可能是糖基化位点，NS或NT
或NN可能是脱酰胺位点。

[0368] 可以通过氨基酸突变来破坏PTM的氨基酸序列模式，从而降低或者去除特定PTM的形成。根据抗体序列和PTM序列模式的不同，有不同的突变设计方法。一种方法是将“热点”
氨基酸(如NS模式中的N或S)替换成物理化学性质相似的氨基酸(如把N突变为Q)。如果PTM
序列模式来源于体细胞高频突变，而并不存在于胚系基因序列中，那么另一种方法可以是
把该序列模式替换成对应的胚系基因序列。实际操作中，对同一个PTM序列模式可能采用多
种突变设计方法。

[0369] 表4列出了对六个来自实施例1的具有潜在PTM位点的抗体的序列进行氨基酸突变得到的新的抗体分子(称为PTM变体)。表5列出了本实施例中这些PTM变体的轻、重链可变结
构域氨基酸序列，轻链全长氨基酸序列，重链(人IgG4)全长氨基酸序列，和根据Chothia定
义规则定义的CDR的氨基酸序列。所有设计出来的PTM变体按照实施例1.3中描述的方法得
到纯化的重组抗体，并在后续的功能实验中进一步验证。

[0370] 表2筛选得到的抗CD47杂交瘤单克隆及其重组抗体

[0371]

[0372]

[0373] 表3 CD47抗体序列的胚系基因分析和翻译后修饰位点(PTM)分析

[0374]

[0375] 表4 CD47抗体序列的突变位点设计

[0376]

[0377]

[0378] 表5突变PTM后得到的抗体

[0379]

[0380]

[0381]

[0382] 实施例3 抗原结合蛋白能够与人和猴细胞表面的CD47结合

[0383] 3.1能够与Jurkat以及Raji靶细胞表面的CD47结合

[0384] 分别将Jurkat细胞(ATCC#TIB‑152)和Raji细胞(ATCC#CCL‑86)扩增培养，加入965
孔板(Corning#3799)，每孔1×10个，再加入100μl不同浓度的实施例1或2得到的CD47抗体
和对照抗体(Tab1、Tab2、Tab3)，同型hIgG4SP作为对照。混匀后4℃下孵育1小时。1％BSA
(Amresco#0332‑100G)洗涤3次，加入100μl的4μg/mL山羊抗人IgG(H+L)‑Alexa 488，4℃下
孵育1小时。洗涤3次后进行流式细胞上机测试(BD Biosciences#Canto II cytometer)。根
据测定结果计算半数最大结合效应浓度(EC50)，并以EC50值和最大MFI值作为相对结合活性
评价依据。在本申请中，Tab1、Tab2和Tab3均来自现有技术，分别是Forty Seven的Hu5F9‑
G4、Celgene的CC‑90002、Surface Oncology的SRF‑231。

[0385] 结果如图1及下表6‑7所示。实施例1或2得到的CD47抗体均能结合Jurkat细胞，结合活性与Tab1、Tab2没有显著差别(图1A‑1B)，且比Tab3的结合能力好。

[0386] PR000806、PR000807、PR000808和Tab1、Tab2均能与Jurkat(图1B)和Raji(图1C)细胞表面的CD47结合，结合活性没有显著性区别，且比Tab3与Jurkat和Raji的亲和能力强。

[0387] 表6抗原结合蛋白与Jurkat细胞表面CD47的结合

[0388]

[0389]

[0390] 表7抗原结合蛋白PR000806、PR000807、PR000808与Jurkat和Raji表面CD47的结合

[0391]

[0392] 3.2能够与食蟹猴PBMC细胞表面的CD47结合

[0393] 采用3.1的方法检测CD47抗体与食蟹猴PBMC的结合能力，结果如图2及表8所示。实施例1得到的PTM突变前的CD47抗体均能与食蟹猴PBMC细胞表面的CD47结合，且EC50值小于
Tab2。

[0394] 表8抗原结合蛋白与食蟹猴表面CD47的结合

[0395]

[0396] 实施例4 抗原结合蛋白能够与人和食蟹猴CD47蛋白结合

[0397] 分别将人CD47(Sino Biological#12283‑HCCH)和猴CD47(Acro Biosystems#CD7‑C52H1)用PBS稀释为0.25μg/ml，加至96孔板(Corning#9018)中，每孔100μl，4℃下孵育过
夜。弃去液体后用PBST洗板3次，加入2％BSA封闭，室温条件下孵育1小时。弃去封闭液，并用
PBST缓冲液(pH7.4，含0.05％吐温‑20)洗板5次，将实施例1或2得到的CD47抗体和三种现有
技术中的CD47抗体：Tab1(Forty Seven，Hu5F9‑G4)、Tab2(Celgene，CC‑90002)、Tab3
(Surface Oncology，SRF‑231)自66.7nM浓度起，依次进行5倍浓度稀释，共10个浓度梯度，
加入100μl/孔，37℃孵育1小时，同型hIgG4SP(Crown Bio#C0045‑4)为对照。清洗3次后，加
入稀释4000倍的羊抗人HRP二抗(Invitrogen#A18805)，37℃孵育1小时。清洗后添加100μl/
孔TMB(Beyotime#P0209)，室温避光放置5分钟；每孔加入100μl/孔终止液(BBI life 
sciences#E661006‑0200)终止反应，置酶标仪(PerkinElemer#Enspire)中测定450nm吸光
度(OD450)值。根据测定结果计算半数最大结合效应浓度(EC50)，并以EC50值和最大OD值作
为相对结合活性评价依据。

[0398] 结果如图3及下表9‑10所示。图3A和表9显示，实施例1得到的PTM突变前的CD47抗体均能与源自食蟹猴的CD47蛋白结合。图3B‑3C和表10显示PR00806、PR000807、PR000808与
人(图3B)和猴(图3C)CD47结合的活性。PR00806、PR000807、PR000808、Tab1、Tab2、Tab3均能
与人CD47蛋白结合，结合活性没有显著差别，且PR00806、PR000807、PR000808的EC50低于
0.03nM，结合能力优于Tab3。PR00806、PR000807、PR000808、Tab1、Tab2均能与猴CD47蛋白结
合，结合活性没有显著差别，但Tab3与猴CD47蛋白的结合能力较弱。

[0399] 表9抗原结合蛋白与猴CD47蛋白的结合

[0400]

[0401] 表10抗原结合蛋白与人或猴CD47蛋白的结合

[0402]

[0403] 实施例5 抗原结合蛋白能够抑制人CD47蛋白与SIRPα结合

[0404] 将人CD47‑ECD‑hFc(Sino Biological#12283‑H02H)用PBS稀释成1μg/ml加入到96孔板(Corning#9018)中，每孔100μl，4℃包被过夜。洗涤3次后用100μl的2％BSA室温下封闭
1小时。将实施例1或2得到的CD47抗体和对照抗体(Tab1、Tab2、Tab3)用PBST稀释成不同浓
度梯度，与1μg/ml组氨酸标记的SIRPα蛋白(Sino Biological#11612‑H08H)混合后，加入孔
板，同型hIgG4作为对照，室温下孵育1小时。洗涤3次后每孔加入100μl组氨酸标记的HRP抗
体(Biolegend#652504)，室温下反应1小时。洗涤3次后加入100μl TMB显色液，室温下避光
显色5分钟。加入终止液终止反应，用酶标仪(PerkinElemer#Enspire)测定450nm吸光度
(OD450)值。以IC50值、最小OD值、最大抑制率作为相对抑制活性评价依据。

[0405] 结果图4及下表11‑12所示。图4A和表11显示，实施例1得到的CD47抗体均能抑制人CD47与SIRPα结合。图4B和表12显示PR00806、PR000807、PR000808均能抑制人CD47与SIRPα
结合，抑制率均大于97％，且抑制活性与Tab1、Tab2、Tab3没有显著差别。

[0406] 表11抗原结合蛋白抑制人CD47与SIRPα结合

[0407]

[0408] 表12抗原结合蛋白抑制人CD47与SIRPα结合

[0409]

[0410]

[0411] 实施例6 抗原结合蛋白能够阻断Jurkat细胞上的CD47与SIRPα结合

[0412] 将CD47高表达的人Jurkat细胞扩增培养后，以每孔1×105个加入96孔板。将实施例1或2得到的CD47抗体和对照抗体(Tab1、Tab2、Tab3)用PBS稀释成不同浓度梯度，与1μg/
ml组氨酸标记的SIRPα蛋白混合后，加入每孔，同型hIgG4SP作为对照，4℃下孵育1小时。1％
BSA洗涤2次，加入二抗Biotin‑conjugated anti‑His Tag antibody(GenScript#A00613)
100μl体积，4℃下孵育1小时。离心之后1％BSA洗涤2次，加入三抗PE‑Conjugated 
streptavidin(共轭链霉抗生物素蛋白)(Affymetrix#DC)100μl体积，洗涤3次后进行流式
细胞上机测试。以IC50值、最小MFI值、最大抑制率作为相对阻断活性评价依据。

[0413] 结果如图5及下表13‑14所示。图5A和表13显示实施例1得到的CD47抗体均能阻断Jurkat细胞表面的CD47与SIRPα结合。图5B和表14显示PR00806、PR000807、PR000808均能阻
断Jurkat细胞表面的CD47与SIRPα结合，且其阻断活性与Tab1、Tab2没有显著差别，IC50均小
于0.7nM，而Tab3阻断能力较弱。

[0414] 表13抗原结合蛋白阻断Jurkat细胞上的CD47与SIRPα结合

[0415]

[0416]

[0417] 表14抗原结合蛋白阻断Jurkat细胞上的CD47与SIRPα结合

[0418]

[0419] 实施例7 抗原结合蛋白不引起红细胞的凝集反应

[0420] 分析实施例1或2得到的CD47抗体是否引起红细胞凝集反应。将人红细胞用PBS稀释至4％后加入96孔板(Corning#3799)，再加入从200nM开始2倍稀释待测抗体和对照抗体
(Tab1、Tab2、Tab3)，同型hIgG4SP作为对照，在37℃下孵育1小时。通过与无抗体的孔内红点
边缘的清晰程度对比来评价抗体对人红细胞凝集的作用效果。

[0421] 图6A‑6B显示，与不加抗体的孔相比，除PR00796，其他抗原结合蛋白不引起凝集反应，红点边缘清晰；而Tab1引起凝集反应，红点模糊，呈弥散状。

[0422] 实施例8 抗原结合蛋白与红细胞结合能力检测

[0423] 检测实施例1或2得到的CD47抗体与红细胞结合的活性。将人红细胞在PBS中稀释，5
加入96孔板(Corning#3799)，每孔1×10个，再加入100μl不同浓度的抗CD47抗体和对照抗
体(Tab1、Tab2、Tab3)，同型hIgG4SP作为对照，混匀后4℃下孵育1小时。1％BSA(Amresco#
0332‑100G)洗涤3次，加入100μl的4μg/mL山羊抗人IgG(H+L)‑Alexa 488，4℃下孵育1小时，
洗涤3次后进行流式细胞上机测试(BD Biosciences#Canto II cytometer)。以EC50值、最大
MFI值作为相对结合活性评价依据。

[0424] 抗原结合蛋白与红细胞结合的能力如图7和下表15‑16显示。

[0425] 表15抗原结合蛋白与红细胞结合

[0426]

[0427] 比较抗原结合蛋白与Jurkat细胞结合(实施例3)和红细胞(RBC)结合的能力，计算抗原结合蛋白与肿瘤细胞和红细胞结合的EC50和最大MFI的比值，结果见下表16。从结果看
出，与对照抗体相比，实施例1或2所得抗原结合蛋白与Jurkat结合的能力大于与红细胞结
合的能力。

[0428] 表16抗原结合蛋白与肿瘤细胞和红细胞结合能力比值

[0429]

[0430] 实施例9 抗原结合蛋白能够引起巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用

[0431] 9.1引起巨噬细胞对Jurkat细胞的吞噬作用

[0432] 从人外周血单核细胞(PBMC)中分离得到CD14+的单核细胞(Miltenyi Biotec#130‑050‑201)，加入100ng/ml M‑CSF(R&D Systems#216‑MC/CF)培养7天使其分化为巨噬细
4
胞，用胰酶消化，接种于96孔板上，每孔5×10个，同时以1∶1的比例加入用0.25μM羧基荧光
素琥珀酰亚胺酯(CFSE)(Life‑technology#C34570)‑标记的Jurkat细胞，再加入稀释好的
抗CD47的抗体和对照抗体(Tab1、Tab2、Tab3)，混匀后37℃下孵育2小时。用1％BSA洗去未被
吞噬的Jurkat细胞，加入直标抗体CD14‑APC(BD Pharmingen#561708)。流式细胞仪(ACEA#
+ +
Novocyte)进行测量，以吞噬指数作为吞噬作用的评价依据，吞噬指数为CFSE CD14细胞占
+
总CD14细胞的百分比。

[0433] 结果如图8和下表17‑19所示。图8A和表17显示的是实施例1得到的PTM突变前的CD47抗体均能引起巨噬细胞对Jurkat细胞的吞噬作用，且引起吞噬作用的能力优于Tab2。
图8B和表18显示的是PR000806、PR000807、PR000808均能引起巨噬细胞对Jurkat细胞的吞
噬作用，且引起吞噬作用的能力优于Tab2和Tab3。表19显示的是实施例1或2得到的CD47抗
体在不同浓度引起巨噬细胞对Jurkat细胞的吞噬作用。

[0434] 表17抗原结合蛋白引起巨噬细胞对Jurkat细胞的吞噬作用

[0435]

[0436] 表18抗原结合蛋白引起巨噬细胞对Jurkat细胞的吞噬作用

[0437]

[0438] 表19抗原结合蛋白引起巨噬细胞对Jurkat细胞的吞噬作用

[0439]

[0440] 9.2引起巨噬细胞对OVCAR 3细胞的吞噬作用

[0441] 按实施例9.1的方法检测巨噬细胞对OVCAR3(ATCC#HTB‑161)细胞的吞噬作用，流式细胞仪测定EC50和吞噬指数。

[0442] 结果如图9和下表20所示，PR00806、PR000807、PR000808均能引起巨噬细胞对OVCAR3细胞的吞噬作用，且无显著差别；EC50值和最大吞噬指数显示，PR00806、PR000807、
PR000808引起吞噬作用的能力比Tab3更强。

[0443] 表20抗原结合蛋白引起巨噬细胞对OVCAR3细胞的吞噬作用

[0444]

[0445] 实施例10 抗原结合蛋白引起巨噬细胞对人红细胞吞噬作用的能力检测

[0446] 采用实施例9的方法检测实施例1或2所得的抗原结合蛋白引起巨噬细胞对人红细胞的吞噬作用，流式细胞仪测定EC50和吞噬指数。

[0447] 结果如图10和下表21‑22所示。图10和表21显示的是PTM移除后的CD47抗体引起巨噬细胞对人红细胞吞噬作用的能力。表22显示的是实施例1或2得到的CD47抗体在不同浓度
引起巨噬细胞对hRBC吞噬作用的能力检测。结果显示，本申请所述的抗原结合蛋白(如，
CD47抗体)能够有效引起巨噬细胞对hRBC吞噬，且效果与对照抗体相近或高于对照抗体。

[0448] 表21抗原结合蛋白引起巨噬细胞对人红细胞的吞噬作用

[0449]

[0450] 表22抗原结合蛋白引起巨噬细胞对人红细胞的吞噬作用

[0451]

[0452] 实施例11 抗原结合蛋白的体内抗肿瘤活性

[0453] 11.1抗原结合蛋白在NCG‑Raji小鼠模型上的体内抗肿瘤活性

[0454] 在NCG‑Raji小鼠模型中评价抗原结合蛋白的抗肿瘤活性。将Raji细胞1×107个/0.1mL接种于NCG小鼠尾静脉。细胞接种后第三天，将小鼠随机分成10组，每组8只小鼠，开始
给药。分别以0.3mg/kg、1mg/kg和3mg/kg剂量经腹腔注射各待测抗体，10μl/g，每3天给药1
次，连续给药6次，同型hIgG4为对照。记录小鼠体重和肿瘤体积。

[0455] 表23显示的是与同型IgG4相比，注射各抗体的肿瘤抑制率(TGI)，肿瘤抑制率与剂量有关。图11A‑11B显示的是注射PR000806、PR000808和Tab1后小鼠体内肿瘤体积和体重变
化趋势。注射PR000806、PR000808的组小鼠肿瘤体积增长减缓。结果显示，PR000806和
PR000808具能在体内抑制肿瘤生长，PR000808在3mg/kg和1mg/kg剂量下比Tab1效果更好。

[0456] 表23抗原结合蛋白抑制肿瘤生长

[0457]

[0458] 11.2抗原结合蛋白在B‑hSIRPa/hCD47‑MC38‑hCD47小鼠模型上的体内抗肿瘤活性

[0459] 在B‑hSIRPa/hCD47‑MC38‑hCD47小鼠模型中评价抗原结合蛋白的抗肿瘤活性。将6
稳定表达人CD47蛋白的MC38细胞1×10个/0.1mL接种于B‑hSIRPA/hCD47小鼠的右侧皮下。
细胞接种后，当平均肿瘤体积达到大约80‑120mm3时，将小鼠随机分成7组，每组8只小鼠，开
始给药。分别以5mg/kg和10mg/kg剂量经腹腔注射各待测抗体，10μl/g，每3天给药1次，连续
给药6次，同型hIgG4为对照。记录小鼠体重和肿瘤体积。

[0460] 图12A‑12B显示的是注射PR000806、PR001265和Tab1后小鼠体内肿瘤体积和体重变化趋势。注射PR000806、PR001265的组小鼠肿瘤体积增长减缓。结果显示，PR000806和
PR001265能够在体内抑制肿瘤生长，高剂量时PR000806和PR001265肿瘤抑制效果比Tab1更
好。

[0461] 实施例12 抗原结合蛋白的毒性检测

[0462] 将B‑hSIRPA/hCD47纯合小鼠按体重随机分组，每组4只，共8组，分组后第8天以10mpk的剂量腹腔注射给药一次，第一次给药为治疗第0天，共给药1次(第0天)。给药和观察
期间每天测量1次小鼠体重，并记录测量值。另外，分别于给药前7天(正常值)、治疗后1天、7
天取血，进行血常规分析。小鼠体重变化和血常规分析结果如图13‑15所示。

[0463] 给药11天后结束实验，实验结束时，动物安乐死，小鼠拍照。

[0464] 图13显示的是治疗前后小鼠的体重变化。除同型hIgG4，其他抗原结合蛋白或抗体治疗后小鼠体重均减轻，其中，Tab1、PR000806、PR000808和PR001281治疗后小鼠体重减轻
程度较其它三个分子大，与体外抗体分子与抗原在红细胞上的结合能力结果一致，但是在
治疗后大约7天，小鼠体重开始恢复至正常水平。

[0465] 图14‑16显示的是治疗前7天和治疗后小鼠模型第1天、第7天血常规检测结果。从图像中可以看出，给药后第一天，样品组较对照组hIgG4SP血常规中的一些参数发生一定的
变化，但是在给药后7天之后，随着机体代偿功能的作用发挥，指标均恢复正常。

[0466] 最后，从体重和血常规的数据来看，靶向CD47的抗体分子PR000806、PR000808和PR001281、PR001265、PR001275和PR001276均未显示出不可恢复的血液毒性。

[0467] 实施例13 抗原结合蛋白能够与CD47结合的亲和力测试(Biacore)

[0468] 13.1 Protein A的偶联

[0469] 以1x HBS‑EP+(GEHealthcare#BR‑1006‑69)为运行缓冲液，流速10ul/min，在CM5的4个通道上偶联Protein A(Thermo Fisher#21181)：1)设置注入时间800s，将50mM NHS和
200mM EDC以1∶1体积比混合后注入4个通道；2)用pH4.5的醋酸钠将Protein A稀释至20μg/
ml，注入800s；3)注入1M乙醇胺800s，以封闭芯片表面剩余的活性羧基。封闭后继续用1x 
HBS‑EP+缓冲液平衡仪器两小时，Protein A最终偶联量约为2000RU。

[0470] 13.2动力学测试

[0471] 设置多循环动力学模式，每个循环包括抗体的捕获、分析物的结合以及芯片的再生。将抗体均稀释至1μg/ml，以10μl/min的流速注入2、3、4通道40s，由预先偶联的Protein 
A捕获各抗体，捕获量约为200RU。分别将人CD47(Sino biological#12283‑HCCH)和食蟹猴
CD47(Acro Biosystems#CD7‑C52H1)依次按照0nM、1.25nM、2.5nM、5nM、10nM、20nM、40nM的
浓度梯度注入四个通道，流速为30ul/min，设置注入时间180s，解离时间900s。最后以同样
流速注入甘氨酸(10mM，pH1.5)30s，以再生芯片。

[0472] 13.3数据分析

[0473] 用Biacore T200分析软件2.0对实验结果进行分析，1通道作为参比通道扣除，分析模型选用1∶1动力学拟合模型。

[0474] 结果如下表24所示。实验结果表明，5个抗体均与人CD47和食蟹猴CD47有良好的结合。

[0475] 表24抗原结合蛋白与食蟹猴和人CD47结合的结合亲和力

[0476]

[0477] 实施例14 抗原结合蛋白以高度特异性结合CD47

[0478] 分别将组氨酸标记的人CD47(Sino Biological#12283‑HCCH)、SIPRα(Sino Biological#11612‑H08H)、CD147(Sino Biological#10186‑H08H)、PD‑1(Novoprotein#
CD91)、PD‑L1(Novoprotein#C315)、CTLA‑4(Sino Biological#11159‑H08H)、CD80(Sino 
Biological#10698‑H08H)、CD86(SinoBiological#10699‑H08H)、CD28H(AcroBiosystem#
CDH‑H52H3)、B7H3(Sino Biological#11188‑H08H)、B7H4(Sino Biological#10738‑H08H)
和ICOS(AcroBiosystem#ICS‑H52H6)用PBS稀释为1μg/ml，加至96孔板(Corning#9018)中，
每孔100μl，4℃下孵育过夜。弃去液体后用PBST洗板3次，加入2％BSA封闭，室温条件下孵育
1小时。弃去封闭液，并用PBST缓冲液(pH7.4，含0.05％吐温‑20)洗板5次，将实施例1或2得
到的CD47抗体PR001265、PR001275、PR001276以及Tab1(Forty Seven，Hu5F9‑G4)稀释至
10nM和100nM，加入100μl/孔，37℃孵育1小时，同型hIgG4SP(Crown Bio#C0045‑4)为对照。
清洗3次后，加入稀释4000倍的羊抗人HRP二抗(Invitrogen#A18805)，37℃孵育1小时。清洗
后添加100μl/孔TMB(Beyotime#P0209)，室温避光放置5分钟；每孔加入100μl/孔终止液
(BBI life sciences#E661006‑0200)终止反应，置酶标仪(PerkinElemer#Enspire)中测定
450nm吸光度值和570nm吸光度值。计算OD450/570的比值。

[0479] 结果显示(图17)，本申请的抗原结合蛋白以高度特异性结合CD47，不会结合非CD47的抗原SIPRα、CD147、PD‑1、PD‑L1、CTLA‑4、CD80、CD86、CD28H、B7H3、B7H4和ICOS。

[0480] 前述详细说明是以解释和举例的方式提供的，并非要限制所附权利要求的范围。目前本申请所列举的实施方式的多种变化对本领域普通技术人员来说是显而易见的，且保
留在所附的权利要求和其等同方案的范围内。