巴戟天的消毒方法

摘要

本发明涉及外植体消毒技术领域，具体而言，涉及巴戟天的消毒方法，其包括用乙醇擦拭不带叶片的巴戟天的藤茎的表面，将擦拭后的藤茎分割成带有节位的茎段，其中，茎段包括幼嫩茎段、半木质部茎段和全木质部茎段；用氯化汞溶液消毒幼嫩茎段4‑5min、消毒半木质部茎段6‑7min、以及消毒全木质部茎段6‑7min。本发明的巴戟天的消毒方法能够在外植体消毒后确保污染率降低的同时，还具有良好的存活率。

权利要求

1.一种巴戟天的消毒方法，其特征在于，包括：预处理：移栽巴戟天，并从茎基处剪去原生藤茎，间隔6‑8天喷洒多菌灵溶液，待新的藤茎长出，以取所述新的藤茎，并除去所述新的藤茎的叶片，所述多菌灵溶液的质量浓度为9‑

11%；

用乙醇擦拭不带叶片的巴戟天的藤茎的表面，将擦拭后的所述藤茎分割成带有节位的茎段，其中，所述茎段为半木质部茎段；

用氯化汞溶液消毒所述半木质部茎段6‑7min；

所述氯化汞溶液的质量浓度为0.1%；

消毒所述半木质部茎段具体包括用所述氯化汞溶液消毒两次，每次3min‑3min30s。

2.根据权利要求1所述的巴戟天的消毒方法，其特征在于，在所述新的藤茎长出时，使巴戟天植株保持一段时间不沾水，再取所述新的藤茎。

3.根据权利要求2所述的巴戟天的消毒方法，其特征在于，在所述新的藤茎长出时，使所述巴戟天植株保持6‑8天不沾水。

4.根据权利要求1所述的巴戟天的消毒方法，其特征在于，所述乙醇的浓度为70‑80%。

说明书

巴戟天的消毒方法

技术领域

[0001] 本发明涉及外植体消毒技术领域，具体而言，涉及巴戟天的消毒方法。

背景技术

[0002] 巴戟天进行组织培养时，需要对外植体进行有效、可靠地消毒，才能够有利于组织苗形成。

[0003] 巴戟天为多年生植株，其茎较长且木质化程度不一。相关技术提供的巴戟天外植体消毒方法，难以同时保证外植体在消毒后污染率降低的同时还具有良好的存活率。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供巴戟天的消毒方法，该消毒方法能够在外植体消毒后确保污染率降低的同时，还具有良好的存活率。

[0005] 本发明是这样实现的：

[0006] 第一方面，本发明提供一种巴戟天的消毒方法，包括：

[0007] 用乙醇擦拭不带叶片的巴戟天的藤茎的表面，将擦拭后的藤茎分割成带有节位的茎段，其中，茎段包括幼嫩茎段、半木质部茎段和全木质部茎段；

[0008] 用氯化汞溶液消毒幼嫩茎段4‑5min、消毒半木质部茎段6‑7min、以及消毒全木质部茎段6‑7min。

[0009] 在可选的实施方式中，氯化汞溶液的质量浓度为0.1％。

[0010] 在可选的实施方式中，消毒半木质部茎段具体包括用氯化汞溶液消毒两次，每次3min‑3min30s。

[0011] 在可选的实施方式中，消毒全木质部茎段具体包括用氯化汞溶液消毒两次，每次3min‑3min30s。

[0012] 在可选的实施方式中，用乙醇擦拭不带叶片的巴戟天的藤茎的表面之前还包括预处理，预处理包括：

[0013] 移栽巴戟天，并从茎基处剪去原生藤茎，间隔一段时间喷洒多菌灵溶液，待新的藤茎长出，以取新的藤茎，并除去新的藤茎的叶片。

[0014] 在可选的实施方式中，在新的藤茎长出时，使巴戟天植株保持一段时间不沾水，再取新的藤茎。

[0015] 在可选的实施方式中，在新的藤茎长出时，使巴戟天植株保持6‑8天不沾水。

[0016] 在可选的实施方式中，多菌灵溶液的质量浓度为9‑11％。

[0017] 在可选的实施方式中，间隔6‑8天喷洒一次多菌灵溶液。

[0018] 在可选的实施方式中，乙醇的浓度为70‑80％。

[0019] 本发明具有以下有益效果：

[0020] 本发明实施例提供的巴戟天的消毒方法包括用乙醇擦拭不带叶片的巴戟天的藤茎的表面，将擦拭后的藤茎分割成带有节位的茎段，其中，茎段包括幼嫩茎段、半木质部茎段和全木质部茎段；用氯化汞溶液消毒幼嫩茎段4‑5min、消毒半木质部茎段6‑7min、以及消毒全木质部茎段6‑7min。这样一来，可以使木质化程度不同的巴戟天外植体分别进行消毒，以避免木质化程度低的外植体过度消毒而导致成活率降低，或者避免木质化程度高的外植体消毒不到位而导致污染率高，即本发明的消毒方法针对各种木质化程度的外植体都可以在消毒后同时保证污染率降低，且存活率良好。

附图说明

[0021] 为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

[0022] 图1为本发明中的巴戟天样本批次1，未处理的样本；

[0023] 图2为本发明中的巴戟天样本批次2，间隔喷洒多菌灵的样本；

[0024] 图3为本发明中的巴戟天样本批次3，除去老藤，在洁净的大棚内生长的样本；

[0025] 图4为本发明中巴戟天藤茎木质化程度不同的三种茎段；

[0026] 图5为本发明中巴戟天幼嫩茎段的消毒情况，其中，a为真菌污染，b为细菌污染，c为未被污染；

[0027] 图6为本发明中巴戟天半木质化茎段的消毒情况，其中，a为真菌污染，b为细菌污染，c为未被污染；

[0028] 图7为本发明中巴戟天全木质化茎段的消毒情况，其中，a为真菌污染，b为细菌污染，c为未被污染；

[0029] 图8为本发明中取材于不同生长环境的巴戟天茎段的消毒情况，其中，a为天样本批次1未处理的样本，b为样本批次2间隔喷洒多菌灵的样本，c为样本批次3、除去老藤且在洁净的大棚内生长的样本；

[0030] 图9为本发明中取材于不同湿润程度的巴戟天茎段的消毒情况。

具体实施方式

[0031] 为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

[0032] 以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

[0033] 本发明的巴戟天的消毒方法包括用乙醇擦拭不带叶片的巴戟天的藤茎的表面，将擦拭后的藤茎分割成带有节位的茎段，其中，茎段包括幼嫩茎段、半木质部茎段和全木质部茎段；用氯化汞溶液消毒幼嫩茎段4‑5min、消毒半木质部茎段6‑7min、以及消毒全木质部茎段6‑7min。这样一来，可以使木质化程度不同的巴戟天外植体分别进行消毒，以避免木质化程度低的外植体过度消毒而导致成活率降低，或者避免木质化程度高的外植体消毒不到位而导致污染率高，即本发明的消毒方法针对各种木质化程度的外植体都可以在消毒后同时保证污染率降低，且存活率良好。

[0034] 由于巴戟天为多年生植株，其茎较长且木质化程度不一，幼嫩茎段携带真菌及细菌较少，对消毒剂的承受力较弱，消毒时间过长易失去生命力；木质化程度较高部位表面粗糙，容易携带真菌及细菌，消毒时间过短消毒效果不佳，污染率高。

[0035] 需要说明的是，由于巴戟天表面被有绒毛且较粗糙，若是用乙醇溶液浸泡短时间难以杀灭表面携带的细菌及真菌，而且乙醇浸泡植物，对于植物的杀伤力较大，采用乙醇浸泡巴戟天外植体的效果不佳。本发明采用乙醇擦拭巴戟天的外植体表面，能够有效地使乙醇浸润到巴戟天外植体的表面，进行有效的杀菌，还能避免乙醇伤害外植体。

[0036] 需要进一步说明的是，乙醇的浓度可以选用70‑80％，在此不作具体限定。

[0037] 本发明中，在超净工作台上用乙醇擦拭不带叶片的藤茎表面，且在擦拭后，将藤茎切成带有节位的长度大致为2‑3cm的茎段；其中，距离顶端大致在20cm以内的部位为幼嫩茎段，距离顶端大致20‑40cm的部位为半木质化茎段，距离顶端大致超过40cm的部位为全木质化茎段。

[0038] 本发明中给巴戟天外植体消毒的氯化汞溶液的质量浓度为0.1％。

[0039] 在较优的实施方式中，幼嫩茎段的消毒时间可以是4min30s。幼嫩茎段用氯化汞溶液消毒后可以用无菌水清洁多次，例如：3次、4次、5次等，在此不作具体限定。

[0040] 在较优的实施方式中，半木质部茎段和全木质部茎段用氯化汞溶液消毒的具体方式包括：用氯化汞溶液消毒两次，每次3min‑3min30s，且每次消毒后都用无菌水清洁多次，例如：3次、4次、5次等，在此不作具体限定。

[0041] 需要说明的是，用氯化汞溶液消毒并用无菌水清洗后的茎段(即外植体)，可以用经过高温灭菌的滤纸吸干水分，以便于茎段外植体用于后续的组织培养上。

[0042] 需要进一步说明的是，由于巴戟天的全木质化茎段的污染主要来源为真菌污染，而巴戟天的茎段表面被有绒毛且全木质部茎段的表面最为粗糙，使得真菌不容易与乙醇接触而被消杀，故幼嫩茎段、半木质化茎段和全木质化茎段三者之间相比，全木质化茎段消毒后的污染率相对来说比幼嫩茎段和半木质化茎段要高。

[0043] 本发明的巴戟天的消毒方法在用乙醇擦拭不带叶片的巴戟天的藤茎的表面之前还包括预处理，预处理包括移栽巴戟天，并从茎基处剪去原生藤茎，间隔一段时间喷洒多菌灵溶液，待新的藤茎长出，以取新的藤茎，并除去新的藤茎的叶片，以便于用乙醇擦拭其表面，即本发明的巴戟天的消毒方法是用移栽后新长出的藤茎进行消毒以及后续的其他消毒步骤。这样一来，移栽后用多菌灵溶液喷洒巴戟天植株，使得新长出的藤茎沾染的真菌和细菌量更少，以便于获得更好的消毒效果。

[0044] 可选地，在秋季选取成株的3‑4年的巴戟天植株进行移栽，且移栽至洁净的大棚。成株的巴戟天的藤茎上相邻节位间距相对于巴戟天扦插苗的长，相对来说更容易按照木质化程度不同切分茎段。而春、夏两季温度较高，空气湿度大，室外雨水多，容易使得植物表面细菌大量滋生，春夏两季是真菌及细菌滋生的最佳环境；而秋季温度低，空气湿润，秋季移栽巴戟天有利于减少巴戟天沾染的细菌、真菌量，有利于消毒后有效地降低污染率。

[0045] 可选地，多菌灵溶液的质量浓度为9‑11％。进一步地，巴戟天移栽后可以间隔6‑8天喷洒一次多菌灵溶液。

[0046] 需要说明的是，将巴戟天移栽到洁净大棚，使得巴戟天在相对于野外洁净的环境下生长一段时间，取新长出的藤茎作为消毒材料，也能够明显的降低污染率；野外环境较为复杂导致在野外环境下生长的巴戟天更容易沾染更多的真菌和细菌。

[0047] 巴戟天移栽后大致一个月后长出新的藤茎，在新的藤茎长出时，使巴戟天植株保持一段时间不沾水，然后取新的藤茎进行后续的擦拭乙醇，切分，用氯化汞溶液消毒等。这样一来，使得进行乙醇擦拭和氯化汞溶液消毒的茎段的湿度适宜，即可保证污染率的降低，还能确保后续组织培养时具有较高的存活率。

[0048] 进一步地，在新的藤茎长出时，使巴戟天保持6‑8天不沾水，即可同时确保降低污染率和组织培养的存活率。在对藤茎消毒之前，使得藤茎保持适宜的湿度，即可以减少藤茎本身沾染真菌和细菌的数量，确保降低污染率，也可以避免藤茎太干燥而降低其成活率。

[0049] 实施例1

[0050] 预处理，秋季选成株的3‑4年生的巴戟天植株，移栽至洁净大棚内，从巴戟天茎基处剪去藤茎，每隔7天向植物喷洒质量浓度为10％多菌灵溶液一次。待一月后长出新的藤茎，保持植物七天不沾水，剪下新生的藤茎作为外植体材料。

[0051] 将新生的巴戟天藤茎切除叶片后置于超净工作台中，用75％乙醇棉片，擦拭其表面，切成带有节位的长度约为2～3cm的茎段，其中，包括幼嫩茎段、半木质部茎段和全木质部茎段。

[0052] 将经过75％乙醇预处理巴戟天幼嫩茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒4min30s，消毒后用无菌水漂洗三次。

[0053] 将经过75％乙醇预处理巴戟天半木质茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒两次，每次3min，每次消毒后无菌水漂洗三次。

[0054] 将经过75％乙醇预处理巴戟天全木质茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒两次，每次3min，每次消毒后无菌水漂洗三次。

[0055] 实施例2

[0056] 预处理，秋季选成株的3年生的巴戟天植株，移栽至洁净大棚内，从巴戟天茎基处剪去藤茎，每隔6天向植物喷洒质量浓度为11％多菌灵溶液一次。待一月后长出新的藤茎，保持植物6天不沾水，剪下新生的藤茎作为外植体材料。

[0057] 将新生的巴戟天藤茎切除叶片后置于超净工作台中，用70％乙醇棉片，擦拭其表面，切成带有节位的长度约为2～3cm的茎段，其中，包括幼嫩茎段、半木质部茎段和全木质部茎段。

[0058] 将经过70％乙醇预处理巴戟天幼嫩茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒4min，消毒后用无菌水漂洗三次。

[0059] 将经过70％乙醇预处理巴戟天半木质茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒两次，每次3min30s，每次消毒后无菌水漂洗三次。

[0060] 将经过70％乙醇预处理巴戟天全木质茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒两次，每次3min30s，每次消毒后无菌水漂洗三次。

[0061] 实施例3

[0062] 预处理，秋季选成株的4年生的巴戟天植株，移栽至洁净大棚内，从巴戟天茎基处剪去藤茎，每隔8天向植物喷洒质量浓度为9％多菌灵溶液一次。待一月后长出新的藤茎，保持植物8天不沾水，剪下新生的藤茎作为外植体材料。

[0063] 将新生的巴戟天藤茎切除叶片后置于超净工作台中，用80％乙醇棉片，擦拭其表面，切成带有节位的长度约为2～3cm的茎段，其中，包括幼嫩茎段、半木质部茎段和全木质部茎段。

[0064] 将经过80％乙醇预处理巴戟天幼嫩茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒5min，消毒后用无菌水漂洗三次。

[0065] 将经过80％乙醇预处理巴戟天半木质茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒两次，每次3min10s，每次消毒后无菌水漂洗三次。

[0066] 将经过80％乙醇预处理巴戟天全木质茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒两次，每次3min10s，每次消毒后无菌水漂洗三次。

[0067] 实施例4

[0068] 预处理，秋季选成株的4年生的巴戟天植株，移栽至洁净大棚内，从巴戟天茎基处剪去藤茎，每隔7天向植物喷洒质量浓度为10％多菌灵溶液一次。待一月后长出新的藤茎，保持植物7天不沾水，剪下新生的藤茎作为外植体材料。

[0069] 将新生的巴戟天藤茎切除叶片后置于超净工作台中，用75％乙醇棉片，擦拭其表面，切成带有节位的长度约为2～3cm的茎段，其中，包括幼嫩茎段、半木质部茎段和全木质部茎段。

[0070] 将经过75％乙醇预处理巴戟天幼嫩茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒4min30s，消毒后用无菌水漂洗三次。

[0071] 将经过75％乙醇预处理巴戟天半木质茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒6min，消毒后无菌水漂洗三次。

[0072] 将经过75％乙醇预处理巴戟天全木质茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒6min，消毒后无菌水漂洗三次。

[0073] 实施例5

[0074] 将巴戟天藤茎切除叶片后置于超净工作台中，用75％乙醇棉片，擦拭其表面，切成带有节位的长度约为2～3cm的茎段，其中，包括幼嫩茎段、半木质部茎段和全木质部茎段。

[0075] 将经过75％乙醇预处理巴戟天幼嫩茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒5min，消毒后用无菌水漂洗三次。

[0076] 将经过75％乙醇预处理巴戟天半木质茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒两次，每次3min，每次消毒后无菌水漂洗三次。

[0077] 将经过75％乙醇预处理巴戟天全木质茎段用0.1％的氯化汞溶液消毒6min，消毒后无菌水漂洗三次。

[0078] 以下将通过实验对本发明的巴戟天的消毒方法的效果进行说明。

[0079] 1仪器与材料

[0080] 1.1仪器

[0081] SHIMADZU电子天平(精度＝0.01g，岛津(中国)有限公司)；洁净工作台(上海博迅实业有限公司医疗设备厂，VS‑840‑1)、立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂，LDZX‑50FBS)。

[0082] 1.2试剂

[0083] 蔗糖(天津市致远化学试剂有限公司)、肌醇(上海伯奥生物科技有限公司，K0850)、琼脂粉(北京普博欣生物科技有限公司)；多菌灵(辽宁省营口雷克农药有限公司)；6‑BA(6‑苄基嘌呤，上海麦克林生化科技有限公司，C10334416)；氯化汞(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)；无水乙醇(分析纯，津东天正试剂有限公司)。

[0084] 1.3实验材料

[0085] 巴戟天植株。

[0086] 1.4巴戟天的处理

[0087] 表1巴戟天的不同处理方法

[0088]

[0089] 2方法

[0090] 2.1培养基的配制

[0091] 培养基类型为MS及1/2MS基本培养基(配方见表2)，添加30g/L蔗糖与4.2～4.3g/L琼脂，调pH值到5.8‑6.0之间，分装，121℃，20min，高压灭菌备用。

[0092] 表2，MS培养基配方

[0093]

[0094] a：1/2MS培养基大量元素浓度为50mL/L，其余与MS培养基一致。

[0095] 2.2巴戟天不同部位茎段消毒方法考察

[0096] 取表1中的第2批样品，将巴戟天茎切除叶片后置于超净工作台中，用75％乙醇棉片，擦拭其表面，切成带有节位的长度约为2～3cm的茎段；其切分得到的茎段分为三部分，距离顶端20cm以内为幼嫩茎段，距离顶端20～40cm处为半木质化茎段，距离顶端超过40cm的部位为完全木质化茎段，见图4。将巴戟天幼嫩、半木质化及木质化茎段分别进行不同的消毒处理，无菌水漂洗三次；处理完后，于无菌条件下接种至1/2MS培养基上；于接种后第2天开始记录污染数。20天后统计污染率和成活率。

[0097] 2.3不同环境处理对巴戟天消毒效果的影响

[0098] 采集表1中的第1‑3批巴戟天的藤茎，按照“2.2”中方法进行处理及分类，分别从1‑3批样本中取用乙醇擦拭并切分出的半木质化茎段用0.1％氯化汞溶液消毒6min，具体地，分两次消毒，每次3min，无菌水漂洗三次；处理完后，于无菌条件下接种至1/2MS培养基；于接种后第2天开始记录污染数。20天后统计污染率和成活率。

[0099] 2.4植物材料湿润程度对巴戟天消毒效果的影响

[0100] 于第3批巴戟天植株浇水后第0、7、14天，剪取其藤茎，即将第3批巴戟天分为3组，采集3组的藤茎前分别保持0天、7天和14天不沾水，按“2.2”中方法进行处理及分类，分别从上述3组取半木质化茎段用0.1％氯化汞溶液消毒6min，具体地，分两次消毒，每次3min，无菌水漂洗三次；处理完后，于无菌条件下接种至1/2MS培养基；于接种后第2天开始记录污染数。20天后统计污染率和成活率。

[0101] 2.5数据处理

[0102] 污染率＝(污染苗数/接种苗数)×100％

[0103] 成活率＝(成活苗数/接种苗数)×100％

[0104] 3结果

[0105] 3.1不同消毒处理对巴戟天茎段消毒效果的影响

[0106] 3.1.1不同消毒时间对幼嫩茎段消毒效果的影响

[0107] 分别对巴戟天幼嫩茎段进行不同的消毒处理，不同处理方法的污染率及成活率见表3，巴戟天幼嫩茎段茎段污染情况见图5。

[0108] 表3不同消毒时间处理对幼嫩茎段外植体消毒效果的影响

[0109]

[0110] 根据表3的结果可知，不同消毒处理对巴戟天幼嫩茎段的污染率及成活率均有一定的影响。就单个指标而言，0.1％氯化汞浸泡8min的污染率最低，0.1％氯化汞消毒4min30s的成活率最高；随着氯化汞消毒时间的延长，污染率指标变化不明显，成活率随消毒时间的延长降低；加入次氯酸钠进行表面消毒效果不明显；由此可见，用0.1％氯化汞溶液消毒幼嫩茎段并控制时间为4min到5min左右能够同时保证降低污染率，且具有良好的存活率。

[0111] 3.1.2不同消毒时间对半木质化茎段消毒效果的影响

[0112] 分别对巴戟天半木质化茎段进行不同的消毒处理，不同处理方法的污染率及成活率见表4，巴戟天半木质化茎段污染情况见图6。

[0113] 表4不同消毒时间处理对半木质化茎段外植体消毒效果的影响

[0114]

[0115] 由表4可知，对于巴戟天半木质化茎段，就单个指标而言，污染率及成活率都随氯化汞消毒时间的延长而下降；加入次氯酸钠，污染率降低不明显，成活率下降较多；由此可见，用0.1％氯化汞溶液消毒半木质化茎段并控制时间为6min‑7min左右能够同时保证降低污染率，且具有良好的存活率。

[0116] 3.1.3不同消毒时间对全木质化茎段消毒效果的影响

[0117] 分别对巴戟天全木质化茎段进行不同的消毒处理，不同处理方法的污染率及成活率见表5，巴戟天全木质化部位茎段污染情况见图7。

[0118] 表5不同消毒时间处理对全木质化茎段外植体消毒效果的影响

[0119]

[0120] 由表5可得，对于巴戟天的全木质化茎段，就单个指标而言，0.1％氯化汞浸泡8min的污染率最低，0.1％氯化汞消毒5min30s、6min的成活率最高；污染率和成活率都随着氯化汞消毒时间的延长而下降；由此可见，用0.1％氯化汞溶液消毒全木质化茎段并控制时间为6min‑7min左右能够同时保证降低污染率，且具有良好的存活率。

[0121] 综上，本发明通过对幼嫩茎段、半木质化茎段和全木质化茎段分别采用不同的消毒方式，可以保证各个部位的茎段即具有良好的消毒效果，有效降低污染率，又保证了消毒后的存活率。

[0122] 3.2不同生长环境对巴戟天半木质化茎段消毒效果的影响

[0123] 将巴戟天植株的生长环境进行人为处理，取其半木质化部位，比较三种不同处理对巴戟天消毒效果的影响，结果见表6，不同生长环境巴戟天半木质化茎段消毒效果图见图8。

[0124] 表6外植体生长环境对巴戟天半木质化茎段消毒效果的影响

[0125]

[0126] 由表6可得，外植体的生长环境巴戟天茎段消毒效果存在一定的影响。野外带回巴戟天植株表面携带细菌真菌较多，同样的消毒处理下，以野外直接带回未经处理的巴戟天材料，其污染率为94.28％；以经过多菌灵定期处理的巴戟天植株为材料，接种污染率为43.75％；以在洁净大棚内长出的新生巴戟天藤茎为材料，污染率仅为10.34％；因此，优选第三批材料处理方法为巴戟天外植体的前处理方法。

[0127] 3.3植物材料湿润程度对巴戟天半木质化茎段消毒效果的影响

[0128] 分别于巴戟天植株浇水后第0、7、14天时取样，比较巴戟天材料湿润程度对其消毒效果的影响，结果见表7，不同湿润程度巴戟天半木质化茎段消毒效果见图9。

[0129] 表7植物材料湿润程度对巴戟天半木质化茎段消毒效果的影响

[0130]

[0131]

[0132] 根据表7可知，材料的湿润程度对巴戟天半木质化茎段消毒效果有影响，保持植物材料湿润，能够降低巴戟天茎段接种的污染率。保持植物湿润14天虽然污染率最低，但长期不给植物浇水，容易造成植物干枯、死亡。在取藤茎前保持7天左右不沾水，即可在降低污染率的同时确保存活率。

[0133] 综上所述，本发明提供的巴戟天的消毒方法可以使木质化程度不同的巴戟天外植体分别进行消毒，以避免木质化程度低的外植体过度消毒而导致成活率降低，或者避免木质化程度高的外植体消毒不到位而导致污染率高，即本发明的消毒方法针对各种木质化程度的外植体都可以在消毒后同时保证污染率降低，且存活率良好。

[0134] 以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。