一种双模式快速检测食品中组胺的方法

摘要

本发明公开了一种双模式快速检测食品中组胺的方法，该方法将组胺与邻苯二甲醛进行化学衍生，形成具有荧光的衍生物，组胺荧光衍生物对β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点产生荧光增敏，加入金纳米后，进行表面增强拉曼散射检测，经过β‑CD‑N,Zn‑CDs增强后的组胺衍生物的拉曼散射信号得到很大提高，而荧光强度大大降低，金纳米起到了拉曼增强和荧光猝灭的双重作用，为此建立了组胺的SERS及荧光双模式检测方法；将本方法应用于食品中组胺的检测分析，结果与GB5009.208‑2016食品安全国家标准食品中生物胺的测定方法相符；且具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。

权利要求

1.一种双模式快速检测食品中组胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）在5mL具塞比色管中加入不同浓度的组胺标准溶液、1mol/L的NaOH溶液100μL、

5mol/L 的邻苯二甲醛溶液500μL，混匀后静置5min，形成组胺衍生物；再加入50µL β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点并用蒸馏水定容至5mL，涡旋混合1 2min，静置5 10min后，进行分~ ~

子荧光检测，绘制标准曲线，得到回归方程；

在5mL具塞比色管中加入不同浓度的组胺标准溶液、1mol/L的NaOH溶液100μL、5mol/L的邻苯二甲醛溶液500μL，混匀后静置5min，形成组胺衍生物；再加入50µL β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点及100μL金纳米溶液，用pH4的醋酸‑醋酸钠缓冲溶液稀释至5mL，涡旋混合1~

2min，静置5 10min后，使用便携拉曼仪进行拉曼光谱检测，绘制标准曲线，得到回归方程；

~

根据组胺及组胺衍生物的分子结构和拉曼峰位归属，以及组胺浓度与峰面积的线性关系，‑1 ‑1 ‑1

确定480cm 、1140cm 及1358cm 处的特征峰作为表面增强拉曼散射检测组胺的判别依据；

（2）样品处理

奶酪样品：将捣碎的1 5g奶酪样品放入5 10mL 0.1mol/L 盐酸溶液中，混合均匀，放入~ ~

微波炉中，500MHz功率下处理3min，完成酸解，冷却后，转移到离心管中，加入Carrez溶液Ⅰ和Carrez溶液Ⅱ各0.5mL去除蛋白，涡旋混合1min，离心5min，取出上清液，待测；Carrez溶液Ⅰ是将10.6g六铁氰化钾溶解于100mL去离子水中制得；Carrez溶液Ⅱ是在29.9g乙酸锌、

3mL乙酸中添加去离子水至100mL制得；

鱿鱼及香肠样品：准确称取匀浆后的鱿鱼或香肠样品10g，置于100mL具塞锥形瓶中，加入20mL 5%三氯乙酸溶液，振荡提取30min，转移至50mL具塞离心管中，5000r/min离心

10min，转移上清液至50mL容量瓶中，残渣用20mL 5%三氯乙酸溶液再提取一次，合并上清液，用5%三氯乙酸稀释至刻度，得提取液；移取提取液10mL于25mL 具塞试管中，加入0.5g氯化钠涡旋振荡至氯化钠完全溶解后加入10mL正己烷，涡旋振荡5min，静置分层后弃去上层有机相，下层试样溶液加入10mL正己烷再除脂一次，得待测溶液；

（3）样品测定：

样品分子荧光测定：在5mL具塞比色管中，加入步骤（2）待测溶液2mL，加入1mol/L的NaOH溶液100μL、5mol/L的邻苯二甲醛溶液500μL，混匀后静置5min，形成组胺衍生物，再加入50µL β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点并用蒸馏水定容至5mL，涡旋混合1 2min，静置5~ ~

10min后，进行分子荧光检测；

样品表面增强拉曼散射测定：在5mL具塞比色管中，加入步骤（2）待测溶液2mL，加入

1mol/L的NaOH溶液100μL、5mol/L 邻苯二甲醛溶液500μL，混匀后静置5min，形成组胺衍生物；再加入50µL β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点及100μL金纳米溶液，用pH4的醋酸‑醋酸钠‑1 ‑1 ‑1

缓冲溶液稀释至刻度，涡旋混合1 2min，静置5 10min后，在480cm 、1140cm 及1358cm 处~ ~

进行表面增强拉曼散射检测；

所述β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点的制备方法如下：（1）氮、锌掺杂碳点的制备：称取1g柠檬酸及0.2 0.5g乙酸锌，溶于25 40mL超纯水中，~ ~

混合均匀后，加入2.5 3.0mL乙二胺，超声10 20min，并转移至聚四氟乙烯反应罐，在850W、~ ~

150℃下微波消解30 40min，自然冷却后，先用孔径为0.22μm滤膜过滤后，再用截留分子量~

为3000Da 的透析袋进行透析处理24h，得到水溶性氮、锌掺杂碳点N,Zn‑CDs；

（2）β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点的制备：在氮、锌掺杂碳点8 10mL中添加pH4醋酸‑~

醋酸钠缓冲溶液7 10mL，混合均匀，加入0.5g 1‑乙基‑3‑(3‑(二甲氨基)丙基)碳二亚胺盐~

酸盐及0.5g N‑羟基硫代琥珀酰亚胺，室温反应40 60min；然后加入0.2 0.05g的单(6‑氨~ ~

基‑6‑去氧)‑β‑环糊精，80℃水浴搅拌反应20‑24h，将溶液过3000‑3500Da透析膜透析24h，移出未反应的NHS、EDC·HCl、β‑CD及其他副产物，制得β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点β‑CD‑N,Zn‑CDs。

2.根据权利要求1所述的双模式快速检测食品中组胺的方法，其特征在于，金纳米溶液的制备如下：将2.2mmol/L柠檬酸溶液150mL加入到带冷凝器的三口烧瓶中，100℃下搅拌

15min后，加入25mmol/L氯金酸溶液1mL，回流下搅拌10min，溶液颜色逐渐由黄色变为蓝灰色再变为浅粉色，溶液冷却至90℃，加入60mmol/L柠檬酸溶液1mL及25mmol/L氯金酸溶液

1mL，回流下搅拌30min，溶液变酒红色，冷却至90℃，加入60mmol/L柠檬酸溶液1mL及

25mmol/L氯金酸溶液1mL，回流下搅拌30min，颜色加深，将溶液立即在冰水浴中冷却至室温，得到金纳米溶液。

3.根据权利要求1所述的双模式快速检测食品中组胺的方法，其特征在于：分子荧光检测的最大激发波长为376nm，最大发射波长为448nm。

4.根据权利要求1所述的双模式快速检测食品中组胺的方法，其特征在于：拉曼光谱检测在785nm激发光、激光功率500mW、扫描10s的条件下进行。

说明书

一种双模式快速检测食品中组胺的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及化学分析检测技术领域，具体为一种双模式快速检测食品中组胺的方法。

背景技术

[0002] 食品在发酵前或食品腐败时，细菌在代谢过程中会产生“组胺”的生物胺化合物，当人体过多摄入此物质，可能会引起对组胺不耐受者出现头痛或其他症状，从而对健康造
成一定影响。因此建立检测食品中组胺含量的快速、灵敏、简单的方法很有意义。目前，食品
中组胺的测定方法有生物学法、薄层层析法、液相色谱法、荧光法、分光光度法等。

[0003] 表面增强拉曼散射( SERS) 光谱由于其高灵敏度、高分辨率、能够提供丰富的结构信息和不需要高真空检测条件等优点，可实现定性定量检测和进行界面应力分析，在环
境保护、食品监测、试样痕量分析等方面应用广泛。

[0004] 碳点（carbon dots, CDs）是一种尺寸小于10nm的新型碳纳米材料，由sp2/sp3杂化的碳原子组成，表面具有不同的官能团，具有依赖于其成分的荧光性质，由于具有优异的表
面效应、良好的电子传导性能、特殊的尺寸效应，使其在SERS分析中的得以广泛应用。利用
碳点为荧光探针进行种类物质检测的报道层出不穷，大多数是基于目标物对荧光碳点产生
猝灭作用建立的方法，也有少数是基于荧光增敏建立的方法。相较淬灭型探针，增强型荧光
探针具有诸多优点，如干扰相对较少、检出限相对较低、能减少假阳性信号的产生并降低暗
背景的干扰。利用金属掺杂、环糊精改性碳点与组胺荧光衍生物形成更大结构的刚性平面，
导致荧光增强。而金纳米起到双重作用，一是作为拉曼增强剂，使拉曼光谱信号增强，同时
又是荧光猝灭剂，将碳点与组胺荧光衍生物的荧光猝灭，提高拉曼检测信号,目前未见与本
发明相关的报道。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供一种双模式快速检测食品中组胺的方法，本发明将组胺与邻苯二甲醛进行化学衍生，形成具有荧光的衍生物，组胺荧光衍生物对β‑环糊精改性的氮、
锌掺杂碳点（β‑CD‑N,Zn‑CDs）产生荧光增敏，加入金纳米后，进行表面增强拉曼散射（SERS）
检测，经过β‑CD‑N,Zn‑CDs增强后的组胺衍生物的拉曼散射信号得到很大提高，而荧光强度
大大降低，金纳米起到了拉曼增强和荧光猝灭的双重作用，为此建立了组胺的SERS及荧光
双模式检测方法；将本方法应用于食品中组胺的检测分析，结果与GB5009.208‑2016 食品
安全国家标准食品中生物胺的测定方法相符；本发明方法只有组胺衍生物选择性增强碳点
荧光强度，而其他生物胺却无此现象，在SERS及荧光检测中，也只有组胺产生荧光及拉曼信
号增强，方法具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。

[0006] 本发明双模式快速检测食品中组胺的方法如下：

[0007] 1、在5mL具塞比色管中加入不同浓度的组胺标准溶液、1mol/L的NaOH溶液100μL、5mol/L 的邻苯二甲醛溶液500μL，混匀后静置5min，形成组胺衍生物；再加入50µL β‑环糊
精改性的氮、锌掺杂碳点并用蒸馏水定容至5mL，涡旋混合1 2min，静置5 10min后，进行分
~ ~
子荧光检测，绘制标准曲线，得到回归方程；

[0008] 分子荧光检测的最大激发波长为376nm，最大发射波长为448nm；

[0009] 或者，在5mL具塞比色管中加入不同浓度的组胺标准溶液、1mol/L的NaOH溶液100μL、5mol/L的邻苯二甲醛溶液500μL，混匀后静置5min，形成组胺衍生物；再加入50µL β‑环糊
精改性的氮、锌掺杂碳点及100μL金纳米溶液，用pH4的醋酸‑醋酸钠缓冲溶液稀释至5mL，涡
旋混合1 2min，静置5 10min后，使用便携拉曼仪进行拉曼光谱检测，绘制标准曲线，得到回
~ ~
归方程，根据组胺及组胺衍生物的分子结构和拉曼峰位归属，以及组胺浓度与峰面积的线
‑1 ‑1 ‑1
性关系，确定480cm 、1140cm 及1358cm 处的特征峰作为表面增强拉曼散射（SERS）检测组
胺的判别依据；

[0010] 拉曼光谱检测在785nm激发光、激光功率500mW、扫描10s的条件下进行，组胺标准‑1 ‑1 ‑1 ‑1 ‑1
溶液的表面增强拉曼散射光谱特征峰有316cm 、480cm 、941cm 、1100cm 、1140cm 和
‑1
1358 cm 峰；

[0011] （2）样品处理

[0012]  奶酪样品：将捣碎的1 5g奶酪样品放入5 10mL 0.1mol/L HCl中，混合均匀，放~ ~
入微波炉中，500MHz功率下处理3min，完成酸解，冷却后，转移到离心管中，加入Carrez溶液
Ⅰ和CarrezⅡ溶液各0.5mL去除蛋白，涡旋混合1min，离心5min，取出上清液，待测；

[0013] 所述Carrez溶液Ⅰ是将10.6g六铁氰化钾溶解于100mL去离子水中制得；CarrezⅡ是在29.9g乙酸锌、3mL乙酸中添加去离子水至100mL制得；

[0014]  鱼类样品：按照GB5009.208‑2016 方法进行处理；

[0015] （3）样品测定：

[0016]  样品分子荧光测定：在5mL具塞比色管中，加入步骤（2）待测溶液2mL，加入1mol/L的NaOH溶液100μL、5mol/L的邻苯二甲醛溶液500μL，混匀后静置5min，形成组胺衍生
物，再加入50µL β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点并用蒸馏水定容至5mL，涡旋混合1 2min，
~
静置5 10min后，进行分子荧光检测；
~

[0017]  样品表面增强拉曼散射测定：在5mL具塞比色管中，加入步骤（2）待测溶液2mL，加入1mol/L的NaOH溶液100μL、5mol/L 邻苯二甲醛溶液500μL，混匀后静置5min，形成组胺
衍生物；再加入50µL β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点及100μL金纳米溶液，用pH4的醋酸‑醋
‑1 ‑1
酸钠缓冲溶液稀释至刻度，涡旋混合1 2min，静置5 10min后，在480cm 、1140cm 及1358cm
~ ~
‑1
处进行表面增强拉曼散射检测。

[0018] 所述β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点的制备方法如下：

[0019] （1）氮、锌掺杂碳点（N,Zn‑CDs）的制备：称取1g柠檬酸及0.2 0.5g乙酸锌，溶于25~ ~
40mL超纯水中，混合均匀后，加入2.5 3.0mL乙二胺，超声10 20min，并转移至聚四氟乙烯反
~ ~
应罐，在850W、150℃下微波消解30 40min，自然冷却后，先用孔径为0.22μm滤膜过滤后，再
~
用截留分子量为3000Da 的透析袋进行透析处理24h，得到水溶性氮、锌掺杂碳点N,Zn‑CDs；

[0020] （2）β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点（β‑CD‑N,Zn‑CDs）的制备：在氮、锌掺杂碳点8~
10mL中添加pH4醋酸‑醋酸钠缓冲溶液7 10mL，混合均匀，加入0.5g 1‑乙基‑3‑(3‑(二甲氨
~
基)丙基)碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl）及0.5g N‑羟基硫代琥珀酰亚胺（NHS），室温反应40
~
60min；然后加入0.05g 0.2的单(6‑氨基‑6‑去氧)‑β‑环糊精（β‑CD），80℃水浴搅拌反应20‑
~
24h，将溶液过3000‑3500Da透析膜透析24h，移出未反应的NHS、EDC·HCl、β‑CD及其他副产
物，制得β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点β‑CD‑N,Zn‑CDs。

[0021] 所述金纳米溶液的制备如下：将2.2mmol/L柠檬酸溶液150mL加入到带冷凝器的三口烧瓶中，100℃下搅拌15min后，加入25mmol/L氯金酸溶液1mL，回流下搅拌10min，溶液颜
色逐渐由黄色变为蓝灰色再变为浅粉色，溶液冷却至90℃，加入60mmol/L柠檬酸溶液1mL及
25mmol/L氯金酸溶液1mL，回流下搅拌30min，溶液变酒红色，冷却至90℃，加入60mmol/L柠
檬酸溶液1mL及25mmol/L氯金酸溶液1mL，回流下搅拌30min，颜色加深，将溶液立即在冰水
浴中冷却至室温，得到金纳米溶液。

[0022] 本发明方法对组胺标准溶液的分子荧光检测的检出限为0.8mg/L，表面增强拉曼散射检测的检出限15mg/L；

[0023] 本发明方法对对食品中组胺的分子荧光检测的检出限为1.5mg/kg，表面增强拉曼散射检测的检出限35mg/L。

[0024] 本发明的优点在于：

[0025] 1、本发明利用组胺与邻苯二甲醛进行化学衍生，形成具有荧光的衍生物，该衍生物与金属锌掺杂、环糊精改性碳点形成包合物及更大结构的刚性平面化合物，导致荧光增
强，拉曼散射强度得到很大提高，同时有新的特征峰出现，由此建立组胺荧光、SERS双模式
检测新方法；

[0026] 2、本发明合成的金纳米起到双重作用，一是作为拉曼增强剂，使拉曼光谱信号增强，同时又是荧光猝灭剂，将碳点与组胺荧光衍生物的荧光猝灭，提高拉曼检测信号；

[0027] 3、本发明建立的组胺荧光检测新方法具有特异性强，其他生物胺不具备此反应，克服了荧光检测抗干扰能力弱的缺点，实现了组胺准确、特异、灵敏的荧光‑SERS双模式检
测；

[0028] 4、与国家标准采用的柱前衍生结合HPLC方法相比，方法具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。

附图说明

[0029] 图1为实施例1中组胺荧光检测的发射浓度梯度图；

[0030] 图2为组胺荧光检测标准曲线；

[0031] 图3为组胺与邻苯二甲醛衍生物、β‑CD‑N,Zn‑CDs 及邻苯二甲醛衍生物+β‑CD‑N,Zn‑CDs 荧光光谱图；

[0032] 图4为组胺邻苯二甲醛衍生物及加入金纳米后的荧光光谱图；

[0033] 图5为各种体系中加入金纳米后的SERS图；

[0034] 图6为组胺拉曼光谱检测的拉曼光谱图；

[0035] 图7为拉曼光谱检测标准曲线。

具体实施方式

[0036] 下面将结合具体的实施例对本发明的技术方案作进一步详细地描述说明，但本发明的保护范围并不仅限于此。

[0037] 实施例1：奶酪样品中组胺的测定

[0038] （1）氮、锌掺杂碳点（N,Zn‑CDs）的制备：称取1g 柠檬酸及0.3g乙酸锌，溶于30mL超纯水中，混合均匀后，加入2.5mL乙二胺，超声15min，并转移至聚四氟乙烯反应罐，在850W、
150℃下微波消解30min，自然冷却后，先用孔径为0.22μm滤膜过滤后，用截留分子量为
3000Da 的透析袋进行透析处理24h，得到水溶性N,Zn‑CDs；

[0039] （2）β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点（β‑CD‑N,Zn‑CDs）的制备：在上述制备的N,Zn‑CDs 8mL中加入pH4醋酸‑醋酸钠缓冲溶液7mL，混合均匀，加入0.5g 1‑乙基‑3‑(3‑(二甲氨
基)丙基)碳二亚胺盐酸盐（EDC· HCl）及0.5g N‑羟基硫代琥珀酰亚胺（NHS），室温反应40 
min；然后加入0.1g的单(6‑氨基‑6‑去氧)‑β‑环糊精（β‑CD），80℃水浴搅拌反应20h，将溶液
过3000Da透析膜透析24h，移出未反应的NHS、EDC·HCl、β‑CD及其他副产物，制得β‑CD‑N,
Zn‑CDs；

[0040] （3）将2.2mmol/L柠檬酸溶液150mL加入到带冷凝器的三口烧瓶中，100℃下搅拌15min后，加入25mmol/L氯金酸溶液1mL，回流下搅拌10min，溶液颜色逐渐由黄色变为蓝灰
色再变为浅粉色，溶液冷却至90℃，加入60mmol/L柠檬酸溶液1mL及25mmol/L氯金酸溶液
1mL，回流下搅拌30min，溶液变酒红色，冷却至90℃，加入60mmol/L柠檬酸溶液1mL及
25mmol/L氯金酸溶液1mL，回流下搅拌30min，颜色加深，将溶液立即在冰水浴中冷却至室
温，得到金纳米溶液；

[0041] （4）组胺的分子荧光检测工作曲线绘制：在5mL具塞比色管中加入组胺标准溶、1mol/L的NaOH溶液100μL、5mol/L 的邻苯二甲醛溶液500μL，混匀后静置5min，形成组胺衍
生物，再加入50µL β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点并用蒸馏水定容至5mL，其中组胺浓度为
5、50、100、200、300、400、500和600mg/L；涡旋混合1min钟，静置5min后，在最大激发波长为
376nm，最大发射波长为448nm下进行荧光光谱测定，得到线性回归方程，见表1、图1及图2；

[0042] （5）组胺的SERS检测工作曲线绘制：在5mL具塞比色管中加入组胺标准溶液、1mol/L的NaOH溶液100μL、5mol/L的邻苯二甲醛溶液500μL，混匀后静置5min，形成组胺衍生物；再
加入50µL β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点及100μL金纳米溶液，用pH4的醋酸‑醋酸钠缓冲
溶液稀释至5mL刻度，其中组胺浓度为25、50、100、200、300、400、500和600mg/L，涡旋混合
1min，静置5min后，在785nm激发光、激光功率500mW下扫描10s，使用便携拉曼仪对待检测液
进行拉曼光谱检测；

[0043] 组胺SERS光谱检测波数确定及标准品的 SERS 分析，结果如图5所示，在组胺衍生‑1 ‑1 ‑1 ‑1
物+β‑CD‑N,Zn‑CDs+AuNPs体系的SERS谱图中观察到316cm 、480cm 、941cm 、1100cm 、
‑1 ‑1
1140cm 和1358cm 处的 SERS特征峰，组胺及组胺衍生物的分子结构和拉曼峰位归属，确
‑1 ‑1 ‑1
定480cm 、1140cm 及1358cm 处的特征峰可作为 SERS光谱检测组胺的判别依据；组胺的
SERS谱中特征峰峰强随标准溶液浓度（25、50、100、200、300、400、500和600mg/L）而变化，得
到线性回归方程，见表1及图6、图7。

[0044] （6）Carrez溶液Ⅰ配制：10.6g六铁氰化钾溶解于100mL去离子水中；CarrezⅡ溶液配制：在29.9g乙酸锌、3mL乙酸中添加去离子水至100mL制得；

[0045] （7）奶酪样品前处理：将捣碎的3g奶酪样品放入8mL 0.1mol/L HCl中，混合均匀，放入微波炉中，500MHz功率下处理3min，完成酸解，冷却后，转移到离心管中，加入Carrez溶
液Ⅰ和CarrezⅡ溶液各0.5mL去除蛋白，涡旋混合1min，4000r/min离心5min，取出上清液，待
测；

[0046] （8）奶酪样品分子荧光测定：在5mL具塞比色管中，加入步骤（7）待测溶液2mL，加入1mol/L的NaOH溶液100μL、5mol/L的邻苯二甲醛溶液500μL，混匀后静置5min，形成组胺衍生
物；再加入50µL β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点并用蒸馏水定容至5mL，涡旋混合1min，静
置5min后，进行分子荧光检测，结果见表2；

[0047] （9）奶酪样品SERS测定：在5mL具塞比色管中，加入步骤（7）中待测溶液2mL，加入1mol/L的NaOH溶液100μL、5mol/L 邻苯二甲醛溶液500μL，混匀后静置5min，形成组胺衍生
物；再加入50µL β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点及100μL金纳米溶液，用pH 4的醋酸‑醋酸
‑1 ‑1 ‑1
钠缓冲溶液稀释至5mL刻度，涡旋混合1min，静置5min，在480cm 、1140cm 及1358 cm 处进
行SERS检测，检测结果为50mg/kg。

[0048] （10）样品加标回收率与精密度试验：通过加标回收率试验，即在空白待测样品液组胺的提取时加入不同组胺标准溶液浓度（50、100 mg/L），进行荧光检测，结果见表2。SERS
‑1 ‑1 ‑1
检出限确定时，组胺的浓度为35 mg/kg时，480 cm 、1140 cm 及1358 cm 的特征峰仍能明
显识别，当浓度低至 10mg/kg 时，所得的SRES光谱与奶酪空白的相似。实验结果表明，该检
测方法对奶酪中组胺的检出限低于35 mg/kg，实验重现较好。两种方法测定的结果一致。

[0049] 表1线性方程、相关系数、相对标准偏差、线性范围

[0050]

[0051] 表2 样品荧光检测结果及加标回收率及RSD（n = 3）

[0052] ；

[0053] （11）方法特异性考察：将组胺与其他生物胺（精胺、亚精胺、酪胺、苯乙二胺、章胺、色胺、尸胺、丁二胺、腐胺、5‑羟色胺）共存检测本发明方法体系的特异性，由于β‑CD‑N,Zn‑
CDs只能选择性识别组胺荧光衍生物，其他生物胺没有此荧光增敏现象，方法具有好的选择
特异性；

[0054] （12）相关考察：通过组胺衍生物、β‑CD‑N,Zn及组胺衍生物+β‑CD‑N,Zn体系的荧光光谱测定，组胺衍生物+β‑CD‑N,Zn体系有明显荧光增强信号，见图3；金纳米与荧光检测体
系的作用，明显观察到金纳米对荧光体系的猝灭作用及对SERS检测的信号增强作用，同时
通过对不同体系考察，结果表明，在组胺衍生物+β‑CD‑N,Zn‑CDs+AuNPs体系有最强的SERS
信号，且有新的特征峰出现，见图4、图5。

[0055] 实施例2：鱿鱼样品中组胺的测定

[0056] （1）氮、锌掺杂碳点（N,Zn‑CDs）的制备：称取1g 柠檬酸及0.4g乙酸锌，溶于40mL超纯水中，混合均匀后，加入3.0mL乙二胺，超声20min，并转移至聚四氟乙烯反应罐，在850W、
150℃下微波消解35min，自然冷却后，先用孔径为0.22μm滤膜过滤后，用截留分子量为
3000Da 的透析袋进行透析处理24h，得到水溶性N,Zn‑CDs；

[0057] （2）β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点（β‑CD‑N,Zn‑CDs）的制备：在上述制备的N,Zn‑CDs 10mL中加入pH4醋酸‑醋酸钠缓冲溶液9mL，混合均匀，加入0.5g 1‑乙基‑3‑(3‑(二甲氨
基)丙基)碳二亚胺盐酸盐（EDC· HCl）及0.5g N‑羟基硫代琥珀酰亚胺（NHS），室温反应
50min；然后加入0.2g的单(6‑氨基‑6‑去氧)‑β‑环糊精（β‑CD），80℃水浴搅拌反应22h，将溶
液过3500Da透析膜透析24h，移出未反应的NHS、EDC·HCl、β‑CD及其他副产物，制得β‑CD‑N,
Zn‑CDs；

[0058] （3）金纳米溶液的制备同实施例1；

[0059] （4）组胺的分子荧光检测工作曲线绘制同实施例1；

[0060] （5）组胺的SERS检测工作曲线绘制、组胺SERS光谱检测波数确定及标准品的 SERS 分析同实施例1；

[0061] （6）Carrez溶液Ⅰ、CarrezⅡ溶液配制同实施例1；

[0062] （7）鱿鱼样品前处理：准确称取匀浆后的鱿鱼样品 10g (精确至 0.01g )，置于100mL 具塞锥形瓶中，加入20mL 5%三氯乙酸溶液，振荡提取30min，转移至50mL具塞离心管
中，5000r/min离心10min，转移上清液至50mL容量瓶中，残渣用20mL 5%三氯乙酸溶液再提
取一次，合并上清液，用5%三氯乙酸稀释至刻度，得提取液；移取提取液10mL于25mL 具塞试
管中，加入0. 5g氯化钠涡旋振荡至氯化钠完全溶解后加入10mL正己烷，涡旋振荡5min，静
置分层后弃去上层有机相，下层试样溶液加入10mL正己烷再除脂一次，得待测液；

[0063] （8）鱿鱼样品分子荧光测定方法同实施例1，样品组胺含量为2.1mg/kg；

[0064] （9）鱿鱼样品SERS测定方法同实施例1，未检出。

[0065] 实施例3：香肠样品组胺含量的测定

[0066] （1）氮、锌掺杂碳点（N,Zn‑CDs）的制备：同实施例1；

[0067] （2）β‑环糊精改性的氮、锌掺杂碳点（β‑CD‑N,Zn‑CDs）的制备：同实施例1；

[0068] （3）金纳米溶液的制备同实施例1；

[0069] （4）组胺的分子荧光检测工作曲线绘制同实施例1；

[0070] （5）组胺的SERS检测工作曲线绘制、组胺SERS光谱检测波数确定及标准品的 SERS 分析同实施例1；

[0071] （6）Carrez溶液Ⅰ、CarrezⅡ溶液配制同实施例1；

[0072] （7）香肠样品前处理：同实施例2；

[0073] （8）香肠样品分子荧光测定：同实施例1，样品中组胺含量为12. 4mg/kg。

[0074] （9）香肠样品SERS测定：同实施例1，样品中组胺含量为13mg/kg。

[0075] 将实施例1‑3的样品用GB5009.208‑2016方法进行比对分析，检测结果一致，相对误差在±1.0%以内，方法具有准确性。