本发明公开了一种细梗香草皂苷A的制备方法，属于医药生物技术领域。包括以下步骤：取切段后的细梗香草，加入乙醇，回流提取2～4次，合并提取液浓缩至无乙醇后，加水沉淀，离心；离心液通过大孔吸附树脂吸附，水洗后，加入碱性溶液，反应24‑120小时，用乙醇梯度洗脱，收集含有细梗香草皂苷A的部分洗脱液；对含有细梗香草皂苷A的部分洗脱液回收乙醇后，加入反相色谱柱中分离，收集含有细梗香草皂苷A的分离液；对含有细梗香草皂苷A的分离液回收溶剂后，重结晶，得到高纯度细梗香草皂苷A。本发明的制备方法简单易行，反应条件温和，环境友好，对试剂和设备要求低，适合大规模工业化生产。
1.一种细梗香草皂苷A的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取切段后的细梗香草，加入其质量10～20倍的乙醇水溶液，回流提取2～4次，每次1～3小时，合并提取液并浓缩至无乙醇后，加水使每1ml混合溶液中含有0.1～0.5克细梗香草，充分搅拌，待沉淀完全后离心机离心，收集离心液；
(2)将步骤(1)离心液通过大孔吸附树脂吸附，水洗至洗脱液颜色明显变浅后，加入碱性溶液冲洗，然后10～50℃下反应24‑120小时，水洗至中性，再用乙醇梯度洗脱，收集含有细梗香草皂苷A的部分洗脱液；
(3)将步骤(2)中含有细梗香草皂苷A的部分洗脱液回收乙醇后，加入反相色谱柱中分离，收集含有细梗香草皂苷A的分离液；
(4)将步骤(3)中含有细梗香草皂苷A的分离液回收溶剂后，重结晶，得到高纯度细梗香草皂苷A。
2.根据权利要求1所述的一种细梗香草皂苷A的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的乙醇水溶液中含有质量分数为5～50％的水。
3.根据权利要求1所述的一种细梗香草皂苷A的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的离心机是指管式离心机、碟片离心机或卧式螺旋离心机中的任意一种，离心转速为3000～20000g。
4.根据权利要求1所述的一种细梗香草皂苷A的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述大孔吸附树脂是非极性、弱极性或极性大孔吸附树脂中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种细梗香草皂苷A的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述碱性溶液是氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液、碳酸钠溶液或氨水中的一种。
6.根据权利要求1或5所述的一种细梗香草皂苷A的制备方法，其特征在于，所述的碱性溶液是质量浓度为0.5％～15％的氢氧化钠溶液。
7.根据权利要求1所述的一种细梗香草皂苷A的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述乙醇梯度洗脱是指先用体积浓度10～30％的乙醇水溶液洗脱，然后再用体积浓度40～70％的乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度40～70％乙醇水溶液的洗脱液。
8.根据权利要求1所述的一种细梗香草皂苷A的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的反相色谱分离所用溶剂系统的流动相A为甲醇或乙腈，流动相B为水。
9.根据权利要求1所述的一种细梗香草皂苷A的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述的重结晶所采用溶剂是含有质量分数10～90％丙酮的水溶液。
10.根据权利要求1所述的一种细梗香草皂苷A的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述的高纯度细梗香草皂苷A的含量为98～99.99％。
一种细梗香草皂苷A的制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药技术领域，涉及一种细梗香草皂苷A的制备方法。
背景技术
[0002] 细梗香草(LycimachiaCapillipesHemsl)又名满山香、排草、香排草等，其性甘，味平，全草入药。文献研究表明，细梗香草皂苷具有良好的抗肿瘤作用，其中细梗香草皂苷B和
C是主要有效成分，细梗香草皂苷B和C具有相同的母核，只有酯键取代基不同，细梗香草皂
苷B和C水溶性较差，生物利用度低，细梗香草皂苷B和C都可水解成细梗香草皂苷A，细梗香
草皂苷A具有较好的抗肿瘤活性。现有技术在制备细梗香草皂苷A时，通常先制备成富含细
梗香草皂苷B和C的提取物，然后水溶解后再加强碱水解，这种条件下化合物的活性基团没
有定向的保护，水解过程常伴有较多的副反应，产生较多的新的杂质，水解产物不仅细梗香
草皂苷A含量低，杂质多，不利于后续的纯化，而且过程复杂，成本高。
发明内容
[0003] 为克服现有技术的不足，发明人发明了一种大孔吸附树脂在线水解技术制备细梗香草皂苷A的方法。本发明方法在大孔树脂上在线完成吸附、水解、纯化，可一次性得到含细
梗香草皂苷A大于80％的提取物。
[0004] 为了达到上述目的，本发明是通过以下的技术方案来实现：
[0005] 本发明所述一种细梗香草皂苷A的制备方法，包括以下步骤：
[0006] (1)取切段后的细梗香草，加入其质量10～20倍的乙醇水溶液，回流提取2～4次，每次1～3小时，合并提取液并浓缩至无乙醇后，加水使每1ml混合溶液中含有0.1～0.5克细
梗香草药材，充分搅拌，待沉淀完全后离心机离心，收集离心液；
[0007] (2)将步骤(1)离心液通过大孔吸附树脂吸附，用2～6倍柱体积的水冲洗树脂，接着用2～6倍柱体积的碱溶液冲洗树脂(冲洗后柱子里保留有碱性溶液)，然后将树脂柱加热
到10～60℃保温24～120小时，水洗树脂至流出液呈中性后，用乙醇梯度洗脱，收集含有细
梗香草皂苷A的乙醇洗脱液；
[0008] (3)将步骤(2)含有细梗香草皂苷A的乙醇洗脱液回收乙醇后，加入反相色谱柱中分离，收集含有细梗香草皂苷A的分离液；
[0009] (4)将步骤(3)含有细梗香草皂苷A的分离液回收溶剂后，重结晶，得到高纯度细梗香草皂苷A。
[0010] 上述技术方案中，优选的，步骤(1)中所述的乙醇水溶液中含有质量分数5～50％的水。
[0011] 优选的，步骤(1)中所述的离心机是管式离心机或碟片离心机的任意一种，离心转速3000～20000g。
[0012] 优选的，步骤(2)所述大孔吸附树脂是非极性、弱极性或极性大孔吸附树脂中的一种。
[0013] 优选的，所述的大孔吸附树脂是非极性大孔吸附树脂中的一种。
[0014] 优选的，步骤(2)所述碱性溶液是氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液、碳酸钠溶液或氨水中的一种。
[0015] 优选的，所述的碱性溶液是质量浓度为0.5％～15％的氢氧化钠水溶液。
[0016] 优选的，步骤(2)所述乙醇梯度洗脱是先用体积浓度10～30％的乙醇水溶液洗脱，然后再用体积浓度40～70％的乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度40～70％乙醇水溶液的洗脱
液。
[0017] 优选的，步骤(3)所述的反相色谱分离所用溶剂系统为流动相A和流动相B组成的体系，其中流动相A为甲醇或乙腈，流动相B为水。
[0018] 优选的，步骤(4)所述的重结晶所采用溶剂是含有质量分数10～90％丙酮的水溶液。
[0019] 优选的，步骤(4)所述的高纯度细梗香草皂苷A的含量为98～99.99％。
[0020] 优选的，细梗香草皂苷A用于制备药物的原料。
[0021] 本发明所产生的技术效果：
[0022] 本发明公开了一种大孔吸附树脂在线水解技术制备细梗香草皂苷A的方法，本发明方法简单易行，反应条件温和，环境友好，对试剂和设备要求低，适合大规模工业化生产。
具体实施方式
[0023] 实施例1
[0024] (1)取切段后的细梗香草15Kg，加入300L的50wt％乙醇的水溶液，回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液浓缩至无乙醇后，加水使每1ml混合溶液含有0.25克细梗香草，充分
搅拌，待沉淀完全后碟片离心机6000g离心，收集离心液；
[0025] (2)将步骤(1)收集的离心液通过AB‑8大孔吸附树脂吸附，水洗至洗脱液颜色明显变浅后，加入2.5wt％的氢氧化钠水溶液冲洗，然后40℃保温120小时，水洗至流出液呈中
性，用体积浓度15％的乙醇水溶液洗脱，再用体积浓度50％的乙醇水溶液洗脱，收集体积浓
度50％乙醇水溶液的洗脱液；
[0026] (3)将步骤(2)中体积浓度50％乙醇水溶液的洗脱液回收乙醇后，加入装有C18的反相制备色谱柱中，用甲醇—水(30:70)混合溶剂洗脱分离，收集含有细梗香草皂苷A的分
离液。
[0027] (4)将步骤(3)中含有细梗香草皂苷A的分离液回收溶剂后，用质量分数20％的丙酮水溶液重结晶，得到细梗香草皂苷A晶体209g，纯度98.5％。
[0028] 实施例2
[0029] (1)取切段后的细梗香草20Kg，加入300L的70wt％乙醇的水溶液，回流提取3次，每次1小时，合并提取液浓缩至无乙醇后，加水使每1ml混合溶液含有0.4克细梗香草，充分搅
拌，待沉淀完全后管式离心机15000g离心，收集离心液；
[0030] (2)将步骤(1)收集的离心液通过HPD450大孔吸附树脂吸附，水洗至洗脱液颜色明显变浅后，加入5wt％的氢氧化钠的水溶液冲洗，然后30℃下反应72小时，水洗至中性，用体
积浓度25％乙醇水溶液洗脱，再用体积浓度70％乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度70％乙醇
水溶液的洗脱液；
[0031] (3)将步骤(2)中体积浓度70％乙醇水溶液的洗脱液回收乙醇后，加入装有C18的反相制备色谱柱中，用乙腈—水(25:75)混合溶剂洗脱分离，收集含有细梗香草皂苷A的分
离液。
[0032] (4)将步骤(3)中含有细梗香草皂苷A的分离液回收溶剂后，用质量分数50％的丙酮水溶液重结晶，得到细梗香草皂苷A晶体268g，纯度99.8％。
[0033] 实施例3
[0034] (1)取切段后的细梗香草30Kg，加入400L的85wt％乙醇水溶液，回流提取4次，每次2小时，合并提取液并浓缩至无乙醇后，加水使每1ml混合溶液含有0.5克细梗香草，充分搅
拌，待沉淀完全后管式离心机10000g离心，收集离心液；
[0035] (2)将步骤(1)离心液通过LX1180S大孔吸附树脂吸附，水洗至洗脱液颜色明显变浅后，加入10wt％的氢氧化钠水溶液冲洗，20℃下反应96小时，水洗至中性，用体积浓度
30％乙醇水溶液洗脱，再用体积浓度60％乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度60％乙醇水溶液
的洗脱液；
[0036] (3)将步骤(2)体积浓度60％乙醇水溶液的洗脱液回收乙醇后，加入装有C18的反相制备色谱柱中，用甲醇—水(25:75)混合溶剂梯度洗脱分离，收集含有细梗香草皂苷A的
分离液。
[0037] (4)将步骤(3)中含有细梗香草皂苷A的分离液回收溶剂后，用质量分数70％的丙酮水溶液重结晶，得到细梗香草皂苷A晶体368g，纯度99.92％。
[0038] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，
均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
