一种枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜及其制备方法

摘要

本发明涉及医用材料技术领域，涉及一种枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜及其制备方法，具体的制备过程为：制备氧化海藻酸纤维：用高碘酸钠与海藻酸纤维反应，得氧化海藻酸纤维；将氧化海藻酸纤维放入丙三醇水溶液浸泡，漂洗，烘干，置于干燥无菌离心管中保存；用那他霉素水溶液浸泡氧化海藻酸纤维，在50℃下避光振荡温育36小时，然后用乙醇水溶液和去离子水清洗两遍后，烘干制得；在氧化海藻酸纤维膜表面枝接那他霉素，能够减少那他霉素的眼部刺激性和不适感，延长药物的半衰期，提高药物利用率，提高真菌性角膜炎的治疗效果；制作工艺简单，成本低，产品易于保存，市场前景广阔。

权利要求

1.一种枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜，其特征在于：该纤维膜由氧化海藻酸纤维与那他霉素发生席夫碱反应制得，具体的制备过程如下：(1)制备氧化海藻酸纤维：将海藻酸纤维浸泡在高碘酸钠水溶液中，在30℃‑50℃下避光反应0.5‑1.5小时，得氧化海藻酸纤维；

(2)将氧化海藻酸纤维放入丙三醇水溶液浸泡半小时，以去除未反应的高碘酸钠，然后用灭菌双蒸水漂洗3遍，放入烘箱45℃下烘干，置于干燥无菌离心管中保存；

(3)用质量百分比浓度为3‑8％的那他霉素水溶液浸泡步骤(2 )制得的氧化海藻酸纤维，在50℃下避光振荡温育36小时，取出纤维膜，分别用乙醇水溶液和去离子水清洗两遍后，烘干，得到枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜。

2.根据权利要求1所述的枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜，其特征在于：步骤(1)制备氧化海藻酸纤维的具体步骤为：取海藻酸纤维，用灭菌双蒸水漂洗，去除纤维表面杂质，然后在45℃下烘干至恒重，再放入质量浓度为0.5‑3g/L的高碘酸钠水溶液中浸泡，在40℃下恒温避光搅拌反应0.5‑1.5小时，生成氧化海藻酸纤维。

3.根据权利要求1所述的枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜，其特征在于：步骤(1)的高碘酸钠水溶液为1g/L，反应时间为1小时。

4.根据权利要求1所述的枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜，其特征在于：步骤(3)的那他霉素水溶液质量百分比浓度为5％。

说明书

一种枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜及其制备方法

技术领域：

[0001] 本发明涉及医用材料技术领域，涉及一种枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜及其制备方法，在氧化海藻酸纤维膜表面枝接那他霉素，能够减少那他霉素的眼部刺激性和不
适感，延长药物的半衰期，提高药物利用率，提高真菌性角膜炎的治疗效果。
技术背景：

[0002] 真菌性角膜炎(Fungal keratitis，FK)是致病真菌感染引起的角膜疾病。我国作为以工农业为主要产业的发展中国家，是真菌性角膜炎的高发区，生产活动中角膜外伤尤
其是植物性外伤为真菌性角膜炎的发生提供了机会，再加上角膜接触镜佩戴人群不断扩大
以及抗生素、激素的滥用，近年来真菌性角膜炎发病率明显上升，该病患者多为一线工作的
青壮年劳动力，致盲率高。

[0003] 那他霉素是一种从链霉菌中提取的四烯类抗菌素。其作用机制是通过药物分子与真菌细胞膜的固醇部分结合，形成多烯固醇复合物，改变细胞膜的渗透性，使真菌细胞内的
基本细胞成分流出，而至真菌死亡。临床上使用的那他霉素混悬液可用于治疗真菌性角膜
炎，但那他霉素粒径较大，溶解性较差，并且受泪液分泌的影响，很难达到持续释放的效果。
研究人员一直致力于对那他霉素的给药效果进行改进，例如中国专利CN200810140337.7公
开的一种阳离子黏附型那他霉素纳米滴眼液，包括那他霉素，适量的渗透压调节剂和pH调
节剂，还包括壳聚糖、普朗尼克F‑68和磷脂，其中磷脂在滴眼液中的质量百分比浓度
0.01％‑2％、普朗尼克F‑68在滴眼液中的质量百分比浓度0.1％‑20％、壳聚糖在滴眼液中
的质量百分比浓度0.01‑4％，壳聚糖分子量为5000～300000，脱乙酰度>85％；将那他霉素
普通混悬剂制备成直径在10‑1000nm混悬剂粒，增大药物的溶解度，提高安全性和有效性，
又将普通混悬剂的那他霉素药粒子通过磷脂和壳聚糖进行修饰，使其带正电荷，有助于提
高药物的角膜吸收，增强药效并延长药物作用时间，且壳聚糖具有生物黏附作用，使药物粒
子角膜黏附性增强；但其原料种类多，制备工艺复杂；中国申请专利CN201911030779.0公开
了一种那他霉素聚合物胶束滴眼液，包括一定质量体积比的那他霉素聚合物胶束和磷酸盐
缓冲液，其中那他霉素聚合物胶束中那他霉素所占质量百分含量为10～30％，余量为聚乙
二醇‑聚甲基丙烯酸甘油酯嵌段共聚物；将聚乙二醇‑聚甲基丙烯酸甘油酯嵌段共聚物置于
乙醇中自我组装成交联胶束，包载那他霉素后得到的那他霉素聚合物胶束滴眼液，能够延
长那他霉素的释放时间，减少用药次数，但其治疗效果并未提高。

[0004] 海藻酸是从褐藻类的海带或马尾藻中提取碘和甘露醇之后的副产物，其分子由β‑D‑甘露糖醛酸(β‑D‑mannuronic，M)和α‑L‑古洛糖醛酸(α‑L‑guluronic，G)按(1→4)键连接
而成，是一种天然多糖，具有药物制剂辅料所需的稳定性、溶解性、粘性和安全性。海藻酸纤
维已经在食品工业和医药领域得到了广泛应用。但海藻酸盐本身的降解速率很低，为改善
海藻酸的降解性能，对海藻酸进行氧化，使海藻酸部分糖醛酸单元的羟基转变成醛基，达到
改善海藻酸降解性能的目的；由于醛基的反应活性相对较高，可以偶联活性蛋白、多肽、特
异氨基酸序列等生物活性物质，能够提高材料与细胞的相互作用，因此，有必要寻求设计一
种枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜及其制备方法，利用海藻酸纤维氧化后制得的氧化海
藻酸纤维枝接那他霉素，有效提高那他霉素利用率，减少那他霉素的眼部刺激性和不适感，
提高真菌性角膜炎的治疗效果。
发明内容：

[0005] 本发明针对现有技术存在的缺点，提供一种枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜及其制备方法，在氧化海藻酸纤维膜表面枝接那他霉素，能够用于治疗真菌性角膜炎，减少了
那他霉素的眼部刺激性和不适感，延长了药物的半衰期，提高了药物利用率。

[0006] 为了达到上述目的，本发明提供一种枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜，该纤维膜由氧化海藻酸纤维与那他霉素发生席夫碱反应制得，具体的制备过程如下：

[0007] (1)制备氧化海藻酸纤维：将海藻酸纤维浸泡在高碘酸钠水溶液中，在30℃‑50℃下避光反应0.5‑1.5小时，得氧化海藻酸纤维；

[0008] (2)将氧化海藻酸纤维放入丙三醇水溶液浸泡半小时，以去除未反应的高碘酸钠，然后用灭菌双蒸水漂洗3遍，放入烘箱45℃下烘干，置于干燥无菌离心管中保存；

[0009] (3)用质量百分比浓度为3‑8％的那他霉素水溶液浸泡步骤(3)制得的氧化海藻酸纤维，在50℃下避光振荡温育36小时，取出纤维膜，分别用乙醇水溶液和去离子水清洗两遍
后，烘干，得到枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜。

[0010] 进一步的，步骤(1)制备氧化海藻酸纤维的具体步骤为：取海藻酸纤维，用灭菌双蒸水漂洗，去除纤维表面杂质，然后在45℃下烘干至恒重，再放入质量浓度为0.5‑3g/L的高
碘酸钠水溶液中浸泡，在40℃下恒温避光搅拌反应0.5‑1.5小时，生成氧化海藻酸纤维。

[0011] 进一步的，步骤(1)的高碘酸钠水溶液为1g/L，反应时间为1小时。

[0012] 进一步的，步骤(3)的那他霉素(NATA)水溶液质量百分比浓度为5％。

[0013] 与现有技术相比，本发明的氧化海藻酸性质类似于人体细胞外基质，组织相容性好，可降解为无毒且不参与代谢的多糖；减少了那他霉素的眼部刺激性和不适感，延长了药
物的半衰期，提高了药物利用率，提高真菌性角膜炎的治疗效果；制作工艺简单，成本低，产
品易于保存，市场前景广阔。
附图说明：

[0014] 图1为本发明涉及的海藻酸纤维膜示意图。

[0015] 图2为本发明涉及的实施例5枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜的扫描电镜结果图。

[0016] 图3为本发明涉及的实施例5枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜的傅里叶红外检测的物理表征图。

[0017] 图4为本发明涉及的实施例6枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜体外细胞毒性实验结果示意图。

[0018] 图5为本发明涉及的实施例7枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜体外抗真菌实验结果示意图。

[0019] 图6为本发明涉及的实施例9枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜在治疗小鼠真菌性角膜炎的应用实验结果示意图。
具体实施方式：

[0020] 下面通过具体实施例并结合附图对本发明作进一步说明。

[0021] 实施例1：

[0022] 本实施例涉及枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜，将氧化海藻酸纤维浸泡在那他霉素水溶液中，氧化海藻酸纤维与那他霉素发生席夫碱反应制得，具体的制备过程如下：

[0023] (1)制备氧化海藻酸纤维：取海藻酸纤维，用灭菌双蒸水漂洗，去除纤维表面杂质，然后在45℃下烘干至恒重，再放入质量浓度为0.5‑3g/L的高碘酸钠水溶液中浸泡，在40℃
下恒温避光搅拌反应0.5‑1.5小时，生成氧化海藻酸(OCA)纤维；

[0024] (2)将氧化海藻酸纤维放入摩尔浓度为0.1mol/L的丙三醇水溶液浸泡半小时，以去除未反应的高碘酸钠，然后用灭菌双蒸水漂洗3遍，放入烘箱45℃下烘干，置于干燥无菌
离心管中保存；

[0025] (3)用质量百分比浓度为3‑8％的那他霉素(NATA)水溶液浸泡步骤(2)制得的OCA纤维，在50℃下避光振荡温育36小时，取出纤维膜，分别用体积百分比浓度为75％的乙醇水
溶液和去离子水清洗两遍后，用烘箱烘干，得到枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜(OCA‑
NATA纤维膜)。

[0026] 本实施例涉及的海藻酸纤维为海藻酸钙纤维。

[0027] 实施例2：

[0028] 本实施例涉及枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜，将氧化海藻酸纤维浸泡在那他霉素水溶液中，氧化海藻酸纤维与那他霉素发生席夫碱反应制得，具体的制备过程如下：

[0029] (1)制备氧化海藻酸纤维：取海藻酸纤维，用灭菌双蒸水漂洗，去除纤维表面杂质，然后在45℃下烘干至恒重，再放入质量浓度为1g/L的高碘酸钠水溶液中浸泡，在40℃下恒
温避光搅拌反应1小时，生成氧化海藻酸(OCA)纤维；

[0030] (2)将氧化海藻酸纤维放入摩尔浓度为0.1mol/L的丙三醇水溶液浸泡半小时去除未反应的高碘酸钠，然后用灭菌双蒸水漂洗3遍，放入烘箱45℃下烘干，置于干燥无菌离心
管中保存；

[0031] (3)用质量百分比浓度为5％的那他霉素(NATA)水溶液浸泡步骤(2)制得的OCA纤维，在50℃下避光振荡温育36小时，取出纤维膜，分别用体积百分比浓度为75％的乙醇水溶
液和去离子水清洗两遍后，用烘箱烘干，得到枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜(OCA‑NATA
纤维膜)。

[0032] 本实施例涉及的海藻酸纤维为海藻酸钙纤维。

[0033] 实施例3：

[0034] 本实施例涉及枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜，将氧化海藻酸纤维浸泡在那他霉素水溶液中制得，氧化海藻酸纤维与那他霉素发生席夫碱反应，具体的制备过程如下：

[0035] (1)制备氧化海藻酸纤维：取纺织好的海藻酸纤维，用灭菌双蒸水漂洗，去除纤维表面杂质，然后在45℃下烘干至恒重，再放入质量浓度为0.5g/L的高碘酸钠水溶液中浸泡，
在40℃下恒温避光搅拌反应0.5小时，生成氧化海藻酸(OCA)纤维；

[0036] (2)将氧化海藻酸纤维放入摩尔浓度为0.1mol/L的丙三醇水溶液浸泡半小时去除未反应的高碘酸钠，然后用灭菌双蒸水漂洗3遍，放入烘箱45℃下烘干，置于干燥无菌离心
管中保存；

[0037] (3)用质量百分比浓度为3％的那他霉素(NATA)水溶液浸泡步骤(2)制得的OCA纤维，在50℃下避光振荡温育36小时，取出纤维膜，分别用体积百分比浓度为75％的乙醇水溶
液和去离子水清洗两遍后，用烘箱烘干，得到枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜(OCA‑NATA
纤维膜)。

[0038] 本实施例涉及的海藻酸纤维为海藻酸钙纤维。

[0039] 实施例4：

[0040] 本实施例涉及枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜，将氧化海藻酸纤维浸泡在那他霉素水溶液中制得，氧化海藻酸纤维与那他霉素发生席夫碱反应，具体的制备过程如下：

[0041] (1)制备氧化海藻酸纤维：取纺织好的海藻酸纤维，用灭菌双蒸水漂洗，去除纤维表面杂质，然后在45℃下烘干至恒重，再放入质量浓度为3g/L的高碘酸钠水溶液中浸泡，在
40℃下恒温避光搅拌反应1.5小时，生成氧化海藻酸(OCA)纤维；

[0042] (2)将氧化海藻酸纤维放入摩尔浓度为0.1mol/L的丙三醇水溶液浸泡半小时去除未反应的高碘酸钠，然后用灭菌双蒸水漂洗3遍，放入烘箱45℃下烘干，置于干燥无菌离心
管中保存；

[0043] (3)用质量百分比浓度为8％的那他霉素(NATA)水溶液浸泡步骤(2)制得的OCA纤维，在50℃下避光振荡温育36小时，取出纤维膜，分别用体积百分比浓度为75％的乙醇水溶
液和去离子水清洗两遍后，用烘箱烘干，得到枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜(OCA‑NATA
纤维膜)。

[0044] 本实施例涉及的海藻酸纤维为海藻酸钙纤维。

[0045] 实施例5：

[0046] 本发明涉及实施例2制备枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜过程中的海藻酸(CA)纤维、氧化海藻酸(OCA)纤维和枝接那他霉素的氧化海藻酸(OCA‑NATA)纤维膜的物理表征，
表征方法包括电镜扫描和傅里叶红外分析。

[0047] 本实施例的扫描电镜检测为了证明那他霉素是枝接到氧化海藻酸纤维上，而不是那他霉素与氧化海藻酸纤维物理混合，本实施例也对那他霉素海藻酸纤维膜(CA‑NATA纤维
膜)进行了电镜扫描。

[0048] 所述那他霉素海藻酸纤维膜的制备方法为：取海藻酸纤维，用灭菌双蒸水漂洗，去除纤维表面杂质，然后在45℃下烘干至恒重，再用浓度为质量百分比浓度为3％‑8％的那他
霉素(NATA)水溶液浸泡海藻酸纤维膜，在50℃下避光振荡温育36小时，取出纤维膜，分别用
体积百分比浓度为75％的乙醇水溶液和去离子水清洗两遍后，用烘箱烘干，得到那他霉素
海藻酸纤维膜(CA‑NATA纤维膜)。

[0049] 本实施例涉及的扫描电镜检测方法及结果分析：在扫描电镜样品台上贴一层导电胶，分别将制作好的海藻酸(CA)纤维膜、氧化海藻酸(OCA)纤维膜、枝接那他霉素的氧化海
藻酸(OCA‑NATA)纤维膜，以及那他霉素海藻酸(CA‑NATA)纤维膜于45℃干燥后，贴在导电胶
表面上，扫描电镜观察并拍照，结果如图2所示。从图2可以看出，与海藻酸纤维膜相比，氧化
海藻酸纤维膜表面光滑，OCA‑NATA纤维膜及CA‑NATA纤维膜表面未见药物颗粒，表明NATA与
CA纤维膜或OCA纤维膜均未发生物理混合；说明本发明枝接那他霉素的氧化海藻酸(OCA‑
NATA)纤维膜的抑菌效果不是那他霉素药物颗粒在纤维中残存导致的抑菌作用。

[0050] 本实施例的傅里叶红外分析检测方法和结果：分别检测那他霉素(NATA)、海藻酸(CA)纤维、氧化海藻酸(OCA)纤维和枝接那他霉素的氧化海藻酸(OCA‑NATA)纤维膜在500‑
‑1
4000cm 范围的红外吸收峰，结果如图3所示。从图3可以看出，与海藻酸纤维相比，氧化海藻
酸纤维在1655cm附近出现新的峰应归属为醛羰基对称振动吸收峰，表明海藻酸纤维被氧化
后邻位羟基生成了醛基；OCA‑NATA纤维的红外光谱中在1655cm未出现吸收峰，而在1632cm
出现了新的峰，表明氧化海藻酸纤维与那他霉素发生了席夫碱反应，生成‑C＝N‑键。

[0051] 实施例6：

[0052] 本实施例涉及实施例2制备的枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜的细胞毒性实验，具体为CCK8细胞增殖‑毒性检测。

[0053] 在96孔板中接种永生化人角膜上皮细胞悬液，将培养板放在培养箱中预培养24小时；将海藻酸(CA)纤维膜、海藻酸那他霉素(CA‑NATA)纤维膜、氧化海藻酸(OCA)纤维膜、枝
接那他霉素的氧化海藻酸(OCA‑NATA)纤维膜分别在10mL细胞培养液中浸泡24小时，然后向
培养板每孔中分别加入浸泡过上述4种纤维膜的培养液0.1mL，每组分别6个孔；剩余孔为对
照组，对照组加入等体积培养液；将培养板在培养箱孵育，向每孔加入10μL的CCK8溶液；将
培养板置于培养箱内孵育1‑4小时；用酶标仪测定在450nm处的吸光度，结果如图4所示。

[0054] 从图4可以看出：浸泡了OCA‑NATA纤维膜培养液处理角膜上皮细胞24小时后，与对照组相比，细胞活性未见明显异常。

[0055] 实施例7：

[0056] 本实施例涉及实施例2和实施例3制备的枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜的体外抗真菌实验，具体步骤为：

[0057] (1)将实施例2制备的枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜(OCA‑NATA纤维膜‑2)、实施例3制备的枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜(OCA‑NATA纤维膜‑3)、CA‑NATA纤维膜、OCA
纤维膜和CA纤维膜用打孔器分别打成直径6mm的圆片；

[0058] (2)制备1×106mmol/l的烟曲霉菌孢子悬浊液，编号为3.0772的标准烟曲霉菌菌株(中国普通微生物菌种保藏中心)，将其接种于沙氏琼脂培养基上，在35℃下孵育5天。用
0.9％的无菌生理盐水清洗培养基，分生孢子悬浮液通过无菌的40μm孔径尼龙网过滤两次
6
后，用磷酸盐缓冲液稀释分生孢子，光学显微镜下计数将孢子浓度稀释为1×10个/ml，4℃
储存；

[0059] (3)取50微升孢子悬浊液滴加到沙氏固体培养皿表面，用涂布器将孢子悬浊液均匀的涂布在培养基表面；

[0060] (4)将5个纤维膜圆片贴于培养基表面，每个纤维膜圆片间距不少于25毫米，纸片中心距培养皿边缘不少于15毫米，平行重复3次；

[0061] (5)将培养皿倒置于37℃培养箱中，24‑48小时后观察纤维膜周围有无抑菌环，并测量抑菌圈的直径，比较抗菌效力，结果如图5所示。

[0062] 从图5可以看出：48小时后，CA‑NATA纤维膜、CA纤维膜及OCA纤维膜无抗真菌活性，OCA‑NATA纤维膜的抑菌环平均直径为14±0.6mm，其中OCA‑NATA纤维膜‑2的抑菌环直径比
OCA‑NATA纤维膜‑3的抑菌环直径大，说明实施例2制得的OCA‑NATA纤维膜较实施例3制得的
OCA‑NATA纤维膜具有较好的抑菌效果。

[0063] 实施例8：

[0064] 本实施例涉及实施例2制备的枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜的稳定性测试：

[0065] 将实施例2中得到的枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜，分别保存在室温和4℃下，分别在1、2、3、4、5、6、7、8和9个月时进行体外抑菌实验。实验步骤参照实施例7。

[0066] 结果显示，在室温保存2个月以内，实施例2中得到的枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜的药量及体外杀菌效力没有明显变化，2个月以后开始逐渐下降；而在4℃保存的枝
接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜在半年内效价没有明显变化，6个月之后开始有下降的趋
势。实施例2中得到的枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜可以长期保存，这就为枝接那他霉
素的氧化海藻酸纤维膜的大量生产保存、运输及广泛应用等提供了有利的条件。

[0067] 实施例9：

[0068] 本实施例为实施例2制备的枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜在治疗小鼠真菌性角膜炎的应用试验。

[0069] 取8周龄C57BL/6健康雌鼠，建立小鼠烟曲霉菌性角膜炎动物模型，均以右眼为实验眼。模型建立成功后，随机分为3组：第一组为单纯真菌感染组(AF)，对小鼠的角膜炎不做
任何处理；第二组为氧化海藻酸纤维膜组(AF+OCA纤维膜)，将AF+OCA纤维膜覆盖于角膜表
面，每日一次，连续7天；第三组为枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜组(AF+OCA‑NATA纤维
膜)，将AF+OCA‑NATA纤维膜覆盖于角膜表面，每日一次，连续7天。根据O’Day标准行角膜溃
疡评分标准，每天于裂隙灯下观察并记录小鼠角膜溃疡的评分情况，实验结果如图6所示。

[0070] 从图6可以看出，枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜组角膜溃疡评分低于单纯真菌感染组和氧化海藻酸纤维膜组，说明枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜能够有效治疗角
膜炎。

[0071] 实施例10：

[0072] 本实施例为实施例2制备的枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜在治疗真菌性角膜炎的应用。

[0073] 采集2019年8月至2020年12月于青岛大学附属医院接受治疗的真菌角膜炎患者19例，其中男性12例，女性7例，年龄为30～61岁，平均(41.25±3.07)岁。

[0074] 所有患者均接受枝接那他霉素的氧化海藻酸纤维膜治疗，每天1次，需连续治疗3周。

[0075] 按照相关标准对患者治疗后临床效果进行评价，治愈：经过治疗后，患者分泌物消失，角膜浸润及水肿情况消退，结膜充血情况消失，真菌培养呈现为阴性，角膜溃疡愈合，经
过共聚焦显微镜检查后未见菌丝；显效：经过治疗后，患者相关检测结果为阴性，各项指标
得到改善，仅存在结膜充血或角膜斑翳情况；有效：经过治疗后，患者相关检查结果呈现阴
性，各项指标中仅有1～2项得到改善。无效：治疗前后各项指标均无变化，或者存在加重情
况。治疗总有效率＝(治愈+显效+有效)/总例数×100％。按照相关标准对患者各项症状进
行评价，每一项症状评分最高为5分，评分越高则代表该症状程度越严重。

[0076] 经过统计后，19例患者接受治疗后，有15例患者治疗效果，其中治愈有6例，显效有4例，有效有5例，无效有4例，治疗有效率为78.9％(15/19)。