一种单体化合物刺老苞皂苷A及其体外抗氧化作用转让专利
申请号 : CN202110344551.X
文献号 : CN113072610B
文献日 : 2022-01-04
发明人 : 裴凌鹏 , 孙九许 , 燕梦云 , 周文斌
申请人 : 中央民族大学
摘要 :
权利要求 :
1.一种单体化合物刺老苞皂苷A,其特征在于,所述的刺老苞皂苷A的制备方法包括以下步骤:
刺老苞根皮2.0kg以70%乙醇加热回流提取3次,每次加入7L乙醇加热2h,提取物旋转蒸发为400mL浸膏,取200mL浸膏以10%乙醇稀释为2.5L溶液过MCI‑GEL大孔树脂,乙醇‑水按照10%、30%、50%、70%、90%乙醇梯度洗脱,收集各洗脱部分,回收溶剂,低温真空干燥为粉末,得到9份样品,分别为10%乙醇Fr.1‑4、10%乙醇Fr.5‑9、30%乙醇Fr.1‑3、30%‑
50%乙醇Fr.3‑4、50%乙醇Fr.1、50%乙醇Fr.2‑3、70%乙醇Fr.1、70%乙醇Fr.2‑4、90%乙醇Fr.1‑3,通过薄层色谱检测;
取50%乙醇Fr.1部位13.00g,甲醇溶解,用30g硅胶进行拌样,干法装柱,柱体积4L,以CH2Cl2∶MeOH∶H2O=75∶20∶5、70∶22∶5、75∶25∶5、70∶26∶5、65∶25∶5、70∶43∶10的梯度洗脱,依据薄层色谱合并浓缩,得12份样品Fr.F1‑12;取Fr.F4部分190mg,以乙腈∶水=28∶72溶液溶解,过滤,经制备液相制备,流动相比例:乙腈∶水=28∶72,得到刺老苞皂苷A10mg;。所述刺老苞皂苷A的化学结构式为:
。
2.根据权利要求1所述的一种单体化合物刺老苞皂苷A,其特征在于,所述乙腈∶水=28∶72的溶液中,所述水含0.01%甲酸。
3.根据权利要求2所述的一种单体化合物刺老苞皂苷A的体外抗氧化作用,其特征在于,所述刺老苞皂苷A对DPPH自由基有一定的清除能力。
4.根据权利要求2所述的一种单体化合物刺老苞皂苷A的体外抗氧化作用,其特征在于,所述刺老苞皂苷A对·OH诱导DNA氧化损伤有保护作用。
5.根据权利要求2所述的一种单体化合物刺老苞皂苷A的体外抗氧化作用,其特征在于,所述刺老苞皂苷A对H2O2诱导DNA氧化损伤有保护作用。
说明书 :
一种单体化合物刺老苞皂苷A及其体外抗氧化作用
技术领域
背景技术
辛,性平。归肝、肾经,功能滋阴健肾,祛风湿,壮筋骨,散瘀血,消肿毒,可用于风湿痹痛、跌
打损伤、骨折等治疗。
95个、有机酸类1个及甾醇类1个,此外,刺老苞还含有丰富的糖类及微量元素。刺老苞根皮
中总多糖、总黄酮的含量分别为7.33%及0.92%,钙、镁、铯、镓、铜、锌等无机元素含量较
高,尤其是铜、钙、铯元素的含量高过同类中草药10多倍。刺老苞根皮能通过增强细胞活力、
提高超氧化物歧化酶(SOD)活性及细胞膜流动性,降低活性自由氧(ROS)及脂质过氧化物
(LPO)的含量,从而改善H2O2对MC3T3‑E1成骨细胞的氧化损伤。但就其单体化合物体外淬灭不
同来源的自由基的研究较为稀少。
个、挥发油95个、有机酸类1个及甾醇类1个。本专利从刺老苞中分离出一种单体化合物,即
刺老苞皂苷A。
DNA氧化损伤的保护作用进行了首次研究。
发明内容
力、·OH诱导DNA氧化损伤的保护作用以及H2O2诱导DNA氧化损伤的保护作用进行了首次研
究。
醇‑水按照10%、30%、50%、70%、90%乙醇梯度洗脱,收集各洗脱部分,回收溶剂,低温真
空干燥为粉末,得到9份样品,分别为10%乙醇Fr.1‑4、10%乙醇Fr.5‑9、30%乙醇Fr.1‑3、
30%‑50%乙醇Fr.3‑4、50%乙醇Fr.1、50%乙醇Fr.2‑3、70%乙醇Fr.1、70%乙醇Fr.2‑4、
90%乙醇Fr.1‑3,通过薄层色谱检测;
脱,依据薄层色谱合并浓缩,得12份样品Fr.F1‑12;取Fr.F4部分190mg,以乙腈∶水=28∶72
溶液溶解,过滤,经制备液相制备,流动相比例:乙腈∶水=28∶72,得到刺老苞皂苷A10mg
为今后开展地梢瓜相关通过抗氧化或淬灭自由基功能治疗相关疾病(心血管疾病、关节炎、
老年黄斑变性等)的治病作用提供了可靠的实验数据支撑与理论依据。
具体实施方式
实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都
属于本发明保护的范围。
树脂,乙醇‑水(10%、30%、50%、70%、90%乙醇梯度)梯度洗脱,收集各洗脱部分,回收溶
剂,低温真空干燥为粉末。共得到9份样品,分别为10%乙醇Fr.1‑4、10%乙醇Fr.5‑9、30%
乙醇Fr.1‑3、30%‑50%乙醇Fr.3‑4、50%乙醇Fr.1、50%乙醇Fr.2‑3、70%乙醇Fr.1、70%
乙醇Fr.2‑4、90%乙醇Fr.1‑3,通过薄层色谱检测。
∶10梯度洗脱,依据薄层色谱合并浓缩,得12份样品Fr.F1‑12。Fr.F4部分(190mg)以乙腈∶水
(0.01%甲酸)=28∶72溶液溶解,过滤,经制备液相制备,流动相比例:乙腈∶水(0.01%甲
酸)=28∶72,得刺老苞皂苷A(10mg)。
到了一种单体化合物(刺老苞皂苷A),通过对化合物的MS、C‑NMR、H‑NMR、HSQC、HMBC、H‑
1HCOSY等波谱学方法鉴定化合物结构,所得化合物数据未见文献报道,鉴定为新化合物。
子式为C36H58O10(理论值650.4030)。H NMR(表1)显示该化合物有六个甲基信号,分别为δ
0.93(3H,s),1.13(3H,s),1.40(3H,s),1.67(3H,s),2.01(3H,s)和1.26(d,3H,J=6.2Hz),
13
一个烷烃质子信号δ4.89(2H,m),糖质子信号δ3.5‑6.0。C NMR在δ157.18、106.06处显示一
个烯烃碳信号,在δ107.17处显示一个糖端基碳信号。δ157.18和δ106.06是典型的末端双键
1 1
信号。通过H‑ H COZY,质子信号在δ4.97(d,J=7.7Hz),4.04(d,J=8.0Hz),4.19(dd,J=
3.5,6.8Hz),3.97(m)/4.18(m),3.97(m)和4.37(dd,J=5.3,11.5Hz)/4.56(m)有相关性,将
1 13
与氢信号相对应的碳信号通过HSQC相连,确定对应的碳信号。根据文献比较,由该糖H和 C
NMR数据确定为β‑D‑吡喃葡萄糖。在HMBC中,δ4.97(d,J=7.7Hz,glc H‑1’)与δ89.52(C‑3)
有关,因此糖与C‑3相连。通过HMBC确定刺老苞皂苷A上与质子信号相邻的碳信号,它们分别
为与δ89.52(C‑3),17.04(C‑24),40.29(C‑4)相关的δ2.01(s,3H,H‑23);δ0.93(s,3H,H‑25)
与δ61.37(C‑5),38.99(C‑10)有关;δ1.13(s,3H,H‑26)与δ47.17(C‑7),42.71(C‑8)有关;δ
1.67(s,3H,H‑27)与δ40.96(C‑13),42.81(C‑14)有关。δ1.26(d,J=6.2Hz,H‑30)与δ157.18
(C‑20)有关,由于δ,157.18和δ,106.06是末端双键信号。而δ,4.85(d,J=6.2Hz,H‑21)与δ,
106.06(C‑29)相关,因此确定了C‑21信号。δ4.85(d,J=6.2Hz,H‑21)与δ54.43(C‑17)和δ
98.13(C‑28)有关,因此确定了C‑17、21、22和28的信号,他们形成了一个环状结构。刺老苞
皂苷A的苷元是一种苷元,命名为刺老苞苷元(echinocaulisaglycone)。因此,刺老苞皂苷A
的结构为刺老苞苷元‑3‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖(echinocaulisaglycone 3‑O‑β‑D‑
glucopyranoside),该化合物未见文献报道,命名为刺老苞皂苷A(echinocaulisaponin A)
化学结构式为:其中(o)表示与其他峰重叠。
细化工公司;维生素C:日本富士和光纯叶株式会;DNA提取试剂盒(GD3121‑1250preps):
BIOMIGA;酶标仪FlexStation 3:Molecular Devices。
不同浓度的样品溶液100μL、无水乙醇100μL;对照孔中加入DPPH溶液100μL、蒸馏水100μL,
混匀,室温避光静置反应30min,于517nm处测吸光值,以Vc为对照,用半数抑制率IC50表示
抗氧化能力。
0.1985mg/mL。
浓度的样品溶液、40μL TE缓冲溶液,最后加入0.5μL Goldview染料,轻轻摇匀静置反应
5min,以维生素C为对照,测其荧光强度(荧光测定条件为:在激发波长486nm下扫描500~
695nm范围内的荧光光强度)。
紫外灯下照射10min,以维生素C为对照,测其荧光强度(荧光测定条件为:在激发波长486nm
下扫描500~695nm范围内的荧光光强度)。
疾病(心血管疾病、关节炎、老年黄斑变性等)的治病作用提供了可靠的实验数据支撑与理
论依据。
言,由于其与实施例公开的方法相对应,所以描述的比较简单,相关之处参见方法部分说明
即可。
一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明
将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一
致的最宽的范围。