一种适合工厂化栽培的香菇菌种及其分子鉴定方法

摘要

本发明公开了一株香菇菌种‘农香152’，属于香菇属(Lentinus edodes)，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。由于本发明所提供的‘农香152’菌种具有出菇早，无需转色即可出菇，菌柄上下等粗，无绒毛。菇体单生，出菇整齐，数量多，生物转化率高，一潮出菇集中等优良香菇菌种的品质特点。改良了其亲本‘SK11’菇体颜色和生物学转化率（产量），出菇周期比对照品种“农香2号”早7天，无需转色即可出菇。并具有亲本‘SK11’产量集中，栽培周期短等的优点，综合性状优良，由于一潮出菇集中，尤其适合工厂化栽培，具有良好的推广前景。

权利要求

1.一种香菇（Lentinula edodes）菌株‘农香152’，其特征在于，该菌株的分类命名为：香菇（Lentinula edodes）农香152，已于2020年6月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.20204。

说明书

一种适合工厂化栽培的香菇菌种及其分子鉴定方法

技术领域

[0001] 本发明属于香菇领域，具体涉及一种适合工厂化栽培的香菇菌种农香152及其分子鉴定方法。

背景技术

[0002] 香菇[Lentinus edodes (Berk.)sing] 隶属于伞菌亚门、伞菌纲、伞菌亚纲、伞菌目、光茸菌科、香菇属，是市场常见食用真菌。香菇应市场要求分为干菇和鲜菇两种方式销
售。一般食用的部位主要为香菇的菇盖，鲜香菇可脱水制成干香菇，便于运输保存，干鲜香
菇在中国菜中广泛使用，是一宗重要的南北货。目前含水量低、菇盖厚度适中、开伞度适中、
菇腿短、菇型好等成为鲜香菇市场的主要趋势。现有的香菇主要栽培品种中，工厂化栽培的
品种‘SK11’，产量集中在前三潮菇，采用大口径（折径20cm）短袋栽培，每袋装干料600g，三
潮菇平均单袋产量360g左右，生物学转化率60%左右，栽培周期90天～100天。随着市场的发
展，国内生产企业香菇的后备品种不足的问题日益凸显，选育品质优、产量高、商品性佳、市
场前景好的优良品种显得尤为重要。

发明内容

[0003] 本发明的目的在于解决现有生产中使用的香菇品种可食率低、菇柄占比高，朵形差、第一潮产量低、菇盖颜色深等的技术问题，从而提供一株可食率高，菇柄短小、朵形好、
菇盖颜色浅、第一潮产量高的香菇菌种。、

[0004] 本发明的香菇（Lentinula edodes）农香152，已于2020年6月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.20204。

[0005] ‘农香152’菌种在菌丝洁白稀疏，PDA平皿上长势慢。子实体菌盖呈浅褐色圆形，周围有少量鳞片；菌褶为白色，排列方式为波状；菌柄上下等粗，无绒毛。菇体单生，出菇整齐，
数量多。菇盖颜色浅适合作为鲜菇进行生产销售。

[0006] ‘农香152’由多个亲本进行多轮杂交组配后筛选而出，在筛选试验中‘农香152’编号为‘Le0152’，其亲本是‘SK11’。‘SK11’是日本用于工厂化栽培的品种，产量集中在前三潮
菇，采用大口径（折径20cm）短袋栽培，每袋装干料600g，三潮菇平均单袋产量360g左右，生
物学转化率60%左右，栽培周期90天～100天。栽培试验表明，‘Le0152’中低温出菇型品种，
出菇早，无需转色即可出菇，菌柄上下等粗，无绒毛。菇体单生，出菇整齐，数量多，生物转化
率高，一潮出菇集中，尤其适合工厂化栽培。‘Le0152’改良了其亲本‘SK11’菇体颜色和生物
学转化率（产量），出菇周期比对照品种“农香2号”早7天，且无需转色即可出菇。并具有亲本
‘SK11’产量集中，栽培周期短等的优点，综合性状优良，且由于一潮出菇集中，尤其适合工
厂化栽培，定名为‘农香152’（图1）。

[0007] 菌株的拮抗反应，‘农香152’与其亲本菌株‘SK11’及对照品种“农香2号”的菌株的拮抗反应结果表明，3个供试香菇菌株彼此之间交界处菌丝均有较为明显的拮抗线，进一步
推定待检菌株香菇‘农香152’是不同于亲本和对照菌株的新品种。

[0008] 本发明的香菇菌种采用ISSR和SRAP多态性分析差异片段。以ISSR引物和SRAP引物，对农香152、SK11和农香2号进行扩增，从图3中可以得到，ISSR和SRAP多态性分析结果表
明，农香152既具有与其亲本‘SK11’相同的条带，也具有与其亲本不同的条带，表明该杂交
种是亲本多孢自交后遗传物质发生了重新组合得到的，它和农香2号则有明显的不同，表明
农香152和农香2号是不同的菌株。DNA分子鉴定结果表明这三个菌株具有特异性，是不同的
品种。

[0009] 本发明的有益效果在于：本发明所提供的‘农香152’子实体发育温度12‑14℃。而目前主栽品种的子实体发育最适出菇温度在12℃ 20℃之间。根据子实体发育温度，‘农香
~
152’属于中低温品种。目前主栽品种的中低温品种通常都是种植时间长出菇晚，而‘农香
152’接种到采收时间比省认定品种农香2号还要短7天，耐低温且出菇早采收时间早，无需
转色即可出菇；且其具备菌柄上下等粗，无绒毛，菇体单生，出菇整齐，数量多，生物转化率
高等优良香菇菌种的品质特点。‘农香152’在生产性试验中平均一潮产量达340g/袋，是对
照品种“农香2号”的3.7倍（差异极显著），菇盖颜色浅一潮出菇集中，尤其适合作为鲜菇工
厂化生产销售。

附图说明

[0010] 图1‘农香152’的菌丝图片和标准出菇图片；

[0011] 图2‘农香152’与‘SK11’和‘农香2号’拮抗试验；

[0012] 图3农香152菌株ISSR鉴定电泳图；

[0013] 其中M为5000 bp Marker；CK为不加模板的阴性对照；1为农香152；2为SK11；3为农香2号；

[0014] 图4农香152菌株SRAP鉴定电泳图；

[0015] 其中M为5000 bp Marker；CK为不加模板的阴性对照；1为农香152；2为SK11；3为农香2号。

具体实施方式

[0016] 实施例1：选用主栽的香菇‘SK11’做亲本，获得杂交菌株99个，其中有82个有锁状联合，最后筛选出24长势较好且有锁状联合的杂交菌株进行初筛出菇实验，经过初筛和复
筛，发现产量同时高于对照和亲本菌株的杂交子只有1个，即Le0152。该菌株在后熟期结束
时，菌袋表面起瘤，随后就有大量的原基形成，原基多、出菇快，但菇体较小。该杂交菌株定
名为‘农香152’。

[0017] 以拮抗反应法对‘农香152’菌株与其亲本和对照菌株进行差异对比。

[0018] 检测依据：依据中华人民共和国农业行业标准《NY/T 1845‑2010 食用菌菌种区别性鉴定拮抗反应》进行待检样品的接种、培养和观察。

[0019] 检测材料：香菇菌株3个，其中待检菌株为‘农香152’，对峙菌株2株分别为亲本‘SK11’和对照菌株‘农香2号’。

[0020] 检验方法：严格按照无菌操作，用Φ8 mm 打孔器分别打取活化后适龄菌种菌落边缘作接种块，两接种块间隔10 mm，菌丝朝上。在25℃的温度下，通风、避光培养至接种块菌
丝接触后，继续培养5‑7 d。

[0021] 结果与分析：在灯下或自然光下，观察培养物表面两菌株交界处菌丝反应，结果如图所示(图2)。

[0022] 检测结论：从图2的拮抗结果可看出，‘农香152’、‘SK11’与‘农香2号’之间均存在较明显的拮抗，‘农香152’和‘SK11’菌丝偏稀疏，两者之间菌丝形态无明显区别。

[0023] 实施例2：依据中华人民共和国农业行业标准《NY/T 1730‑2009 食用菌菌种真实性鉴定 ISSR法》，对本菌株进行与其亲本的DNA差异对比。

[0024] 检测材料：香菇菌株3个，其中待检菌株为‘农香152’，对照菌株2株分别为‘SK11’和‘农香2号’。

[0025] 检验方法：ISSR试验引物序列（表1）主要参考文献《中国黑木耳主要栽培菌株ISSR指纹分析及SCAR标记》、《黑龙江地区野生黑木耳菌种的ISSR指纹分析》、《黑木耳栽培菌株
的ISSR分析》，引物由擎科生物技术有限公司合成。

[0026] 待检菌株菌丝体活化，培养，基因组DNA提取，质量检测，PCR扩增及电泳检测均按照中华人民共和国农业行业标准《NY/T 1730‑2009 食用菌菌种真实性鉴定 ISSR法》。

[0027] 菌种真实性鉴定所用引物如下

[0028] 表1 ISSR引物

[0029]

[0030] 表2 SRAP引物

[0031]

[0032] 结果与分析：从图3和图4中可以得到，ISSR和SRAP多态性分析结果表明，农香152既具有与其亲本‘SK11’相同的条带，也具有与其亲本不同的条带，表明该杂交种是亲本多
孢自交后遗传物质发生了重新组合得到的，它和农香2号则有明显的不同，表明农香152和
农香2号是不同的菌株。DNA分子鉴定结果表明这三个菌株具有特异性，是不同的品种。

[0033] 检测结论：ISSR和SRAP多态性分析结果表明，农香152和亲本‘SK11’、农香2号是不同的菌株。DNA分子鉴定结果表明这三个菌株具有特异性，是不同的品种。

[0034] 实施例3：‘农香152’共进行了多次稳产性试验，结果表明，‘农香152’具备工厂化栽培的要求，产量高于对照农香2号。

[0035] 稳产性试验参试菌株：省认定品种农香2号。

[0036] 试验地点：国家品种改良中心福建分中心（福建尤溪）。

[0037] 试验安排：菌种统一制作，试验点按照当地生产管理方式进行栽培管理。

[0038] 试验结果：试验发现，‘农香152’菌丝在 PDA 中，菌丝洁白稀疏，长势慢，最适生长温度为 22‑25 ℃。

[0039] 栽培发现：(1) 接种到采收的时间，“农香152”比省认定品种农香2号短7天、比亲本‘SK11’短2天；(2) 第一潮菇鲜菇产量，“农香152”是省认定品种农香2号的3.7倍，比亲本
提高62.8%；(3) “农香152”、‘SK11’和“农香2号”的盖柄比分别为1.46、1.62和1.24，说明
“农香152”可食率最高（柄短）；(4) “农香152”、‘SK11’和“农香2号”的单朵重分别为9.6g、
27.5g和19.1g，说明“农香152”菇小，更适合生产鲜香菇；(5) 菇盖颜色，“农香2号”最深、
“农香152”最浅。根据目前鲜菇（保鲜菇）市场的情况，浅色香菇畅销，“农香152”适合鲜菇销
售要求（表3）。

[0040] 稳产性试验菌株产量结果统计：

[0041] 表3杂交子批次试验结果

[0042]

[0043] 注：第一批次试验中，亲本’SK11’（Le0623）未做栽培试验，杂交子Le0152分为两个小批次，1‑1为直接出菇，1‑2为冷刺激出菇。

[0044] 试验菌株产量统计学分析：经产量统计学分析，栽培试验结果表明，第一潮菇鲜菇产量，‘农香152’是省认定品种农香2号的3.7倍，比亲本提高62.8%；（差异极显著）。‘农香
152’的菇体小，颜色浅，菇型好，菇柄短，耐储存，为市场所需要的优质鲜香菇品质。