一种匹伐他汀钙中间体有关物质的分析方法转让专利
申请号 : CN201911340030.6
文献号 : CN113092597B
文献日 : 2022-05-31
发明人 : 吴晓桐 , 胡玉敬 , 王冉 , 陆海波
申请人 : 徐州万邦金桥制药有限公司 , 江苏万邦生化医药集团有限责任公司
摘要 :
本发明公开一种匹伐他汀钙中间体有关物质的分析方法，采用高效液相色谱法，通过对检测波长，流动相pH，缓冲盐类型，缓冲盐浓度，流动相比例，柱温和进样量进行筛选，对三苯基溴化膦及6个杂质进行色谱分析，所述方法能有效地洗脱、分离和定量检测三苯基溴化膦中的各杂质，使杂质峰与主峰、杂质与杂质峰之间完全分离，且分析方法专属性强，灵敏度高，在低浓度范围内具有较好的线性曲线，并具有较强的重复性和准确度，不受人员和仪器的影响，稳定可靠。
权利要求 :
1.一种匹伐他汀钙中间体有关物质的分析方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱：Agilent ZORBAXSB‑C18色谱柱；
检测波长：245nm；
柱温：20‑40℃；
进样器温度：10‑20℃；
流动相：pH为7.0‑8.0的醋酸铵缓冲溶液和乙腈，醋酸铵缓冲溶液的浓度为0.01‑
0.08mol/L；醋酸铵缓冲溶液和乙腈的体积比20:80‑30:70；
采用上述色谱条件，使用流动相进行等度洗脱；
其中，匹伐他汀钙中间体为[[2‑环丙基‑4‑(4‑氟苯基)‑3‑喹啉基]甲基]]三苯基溴化膦，相关物质的结构式如下：
2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，色谱柱的长度为150mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm。
3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，醋酸铵缓冲溶液和乙腈的体积比为
25:75。
4.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，流速为0.8‑1.2ml/min。
5.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，进样量为10‑20μl。
说明书 :
一种匹伐他汀钙中间体有关物质的分析方法
技术领域
[0001] 本发明属于化学药物分析方法领域，特别涉及一种匹伐他汀钙中间体有关物质分析方法。
背景技术
[0002] [[2‑环丙基‑4‑(4‑氟苯基)‑3‑喹啉基]甲基]三苯基溴化膦，CAS：154057‑58‑6，其结构式如下：
[0003]
[0004] 分子式：C37H30BrFNP分子量：618.5
[0005] 匹伐他汀钙系日本化学工业株式会社与兴和株式会社共同开发的第三代他汀类药物，于2003年9月在日本上市，2009年3月27日，由北京双鹤药业股份有限公司推出的仿制药匹伐他汀钙片(商品名：冠爽)在我国上市。根据已有的临床试验结果及与国外同类已上市产品的比较可知，匹伐他汀钙是迄今为止最强效的降脂药物[2]，因其用量微小而疗效极好被药学界称为“超级他汀”，现已被列为全球18种销售潜力最大的新药之一，发展前景十分广阔。[[2‑环丙基‑4‑(4‑氟苯基)‑3‑喹啉基]甲基]三苯基溴化膦为目前国际市场上匹伐他汀钙的中间体之一。
[0006] 为保证药品的安全有效，需全面考察药品质量，对药品各步骤的物料进行研究，检测和监控。而[[2‑环丙基‑4‑(4‑氟苯基)‑3‑喹啉基]甲基]三苯基溴化膦为关键中间体物料，故对其有关物质检测方法的色谱条件进行研究具有重要意义。
发明内容
[0007] 基于背景技术存在的技术问题，本发明提出一种三苯基溴化膦有关物质的分析方法，本发明杂质分离度高，检出杂质多，能全面快速，准确有效地监控其质量水平。
[0008] 本发明中名词“匹伐他汀钙中间体”、“三苯基溴化膦”或“[[2‑环丙基‑4‑(4‑氟苯基)‑3‑喹啉基]甲基]三苯基溴化膦”均表示“[[2‑环丙基‑4‑(4‑氟苯基)‑3‑喹啉基]甲基]三苯基溴化膦”。
[0009] 本发明公开了的一种匹伐他汀钙中间体有关物质的分析方法，采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：
[0010] 色谱柱：具有较大的二异丁基(SB‑C18)侧链基团键合硅胶为填充剂的色谱柱；
[0011] 流动相：醋酸铵缓冲溶液和乙腈；
[0012] 检测波长：245nm；
[0013] 柱温：20‑40℃；
[0014] 进样器温度10‑20℃；
[0015] 采用上述色谱条件，使用流动相进行等度洗脱；
[0016] 其中，匹伐他汀钙中间体为[[2‑环丙基‑4‑(4‑氟苯基)‑3‑喹啉基]甲基]三苯基溴化膦，相关物质的结构式如下：
[0017]
[0018] 优选地，色谱柱的长度为150mm,直径为4.6mm,填料粒径为5μm。
[0019] 进一步优选地，色谱柱为Agilent ZORBAX SB‑C18色谱柱(150mm*4.6mm，5μm)。
[0020] 不同厂家生产的色谱柱具有不同的型号，本领域技术人员可以根据色谱柱型号进行筛选色谱柱。
[0021] 优选地，醋酸铵缓冲溶液和乙腈的体积比20:80‑30:70，进一步优选为25:75。
[0022] 优选地，醋酸铵缓冲溶液的pH为7.0‑8.0。醋酸铵缓冲溶液的pH的调节方法可以为本领域的常规方法，例如，本发明提供一种优选的调节方法，用三乙胺调节pH为7.0‑8.0。
[0023] 优选地，醋酸铵缓冲溶液的浓度为0.01‑0.08mol/L。
[0024] 优选地，流速为0.8‑1.2ml/min。
[0025] 优选地，进样量为10‑20μl。
[0026] 在一种实施例中，对该分析方法进行专属性试验，使用流动相进行等度洗脱的具体步骤为：分别配制系统适用性溶液，供试混合溶液，匹伐他汀钙中间体对照溶液，匹伐他汀钙中间体供试溶液，杂质定位溶液并进样，并按面积归一化法计算各杂质含量。
[0027] 在一种实施例中，使用流动相进行等度洗脱的具体步骤为：空白流动相进样。
[0028] 在一种实施例中，对该分析方法进行检测限、定量限试验，使用流动相进行等度洗脱的具体步骤为：分别配制三苯基溴化膦及各杂质的检测限溶液和定量限溶液分别进样，并计算检测限度和定量限度。
[0029] 在一种实施例中，对该分析方法进行线性与范围试验，使用流动相进行等度洗脱的具体步骤为：分别配制三苯基溴化膦及各杂质的不同浓度的线性溶液(定量限浓度至限度浓度的120％)分别进样，并计算线性方程和线性范围。在一种实施例中，对该分析方法进行重复性和中间精密度试验，使用流动相进行等度洗脱的具体步骤为：配制重复性溶液和中间精密度溶液分别进样，并计算各自溶液的RSD。
[0030] 在一种实施例中，对该分析方法进行准确度试验，使用流动相进行等度洗脱的具体步骤为：分别配制20％加样回收溶液、50％加样回收溶液和120％加样回收溶液别进样，并计算各自溶液的回收率。
[0031] 在一种实施例中，对该分析方法进行溶液稳定性试验，使用流动相进行等度洗脱的具体步骤为：配制每1ml中约含1mg三苯基溴化膦的供试品溶液，并分别于配制后0、2、4、8、12、24、48h进样，并计算主峰及各杂质峰的含量，并统计杂质个数。
[0032] 本发明人通过对检测波长，流动相pH，缓冲盐类型，缓冲盐浓度，流动相比例，柱温和进样量进行筛选，对三苯基溴化膦及上述其他6个杂质进行色谱分析，确定了本发明色谱分析方法，并对该方法进行了专属性、定量限、检测限、线性、重复性、中间精密度、准确度和溶液稳定性进行验证。最终证明本发明提供的高效液相色谱分析方法，能有效地洗脱、分离和定量检测三苯基溴化膦中的各杂质，使杂质峰与主峰、杂质与杂质峰之间完全分离，且分析方法专属性强，灵敏度高，在低浓度范围内具有较好的线性曲线，并具有较强的重复性和准确度，不受人员和仪器的影响，稳定可靠。
附图说明
[0033] 图1为系统适用性溶液色谱图。
[0034] 图2为供试混合溶液色谱图。
具体实施方式
[0035] 下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。下面实施例未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域的公知手段。未特别注明的试剂，均为本领域常规购买的试剂。
[0036] 实施例1
[0037] 高效液相色谱条件：
[0038] 色谱柱为Agilent ZORBAX SB‑C18色谱柱(150mm*4.6mm，5μm)，采用以三乙胺调节的pH为7.2的0.02mol/L醋酸铵缓冲溶液和乙腈的体积比为25:75为流动相，检测波长245nm，流速1.0ml/min，柱温40℃，进样器温度10℃，进样量10μl，进行等度洗脱。
[0039] 样品配制：
[0040] 匹伐他汀钙中间体对照溶液：称取对照品，用流动相定容至刻度，得每1ml中约含三苯基溴化膦1mg的对照溶液。
[0041] 匹伐他汀钙中间体供试溶液：称取供试品，用流动相定容至刻度，得每1ml中约含三苯基溴化膦1mg的供试溶液。
[0042] 杂质定位溶液：称取各杂质对照品适量，分别制成每1ml中约含1μg的杂质F定位溶液、每1ml中约含5μg的杂质A定位溶液、每1ml中约含5μg的杂质B定位溶液、每1ml中约含5μg的杂质C定位溶液、每1ml中约含5μg的杂质D定位溶液和每1ml中约含5μg的杂质E定位溶液。
[0043] 系统适用性溶液：称取三苯基溴化膦对照品及各杂质对照品适量，制成每1ml中约含三苯基溴化膦对照品1mg、杂质F1μg、杂质A5μg、杂质B 5μg、杂质C 5μg、杂质D 5μg及杂质E 5μg的混合溶液。
[0044] 供试混合溶液：称取三苯基溴化膦供试品及各杂质对照品适量，制成每1ml中约含三苯基溴化膦供试品1mg、杂质F1μg、杂质A5μg、杂质B 5μg、杂质C5μg、杂质D5μg及杂质E 5μg的混合溶液。
[0045] 试验操作：取各杂质定位溶液、系统适用性溶液和供试混合溶液各10μl分别进样，记录色谱图。
[0046] 典型色谱图见图1系统适用性溶液色谱图、图2供试混合溶液色谱图。
[0047] 对本发明通过系统适用性溶液、供试混合溶液、各杂质定位溶液进行专属性验证，结果见表1、表2和图1(出峰顺序依次为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、三苯基溴化膦和杂质F)、图2(出峰顺序依次为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、三苯基溴化膦和杂质F)。
[0048] 表1专属性试验结果1
[0049]
[0050] 表2专属性试验结果2
[0051]
[0052] 由表1和图1可以看出，三苯基溴化膦和各杂质均可有效检出，系统适用性溶液色谱图、供试混合溶液色谱图中，三苯基溴化膦各杂质峰的保留时间(tR)与相应定位溶液色谱图中主峰保留时间(tR)一致；三苯基溴化膦峰的保留时间(tR)与三苯基溴化膦照品溶液主峰保留时间一致。
[0053] 由表2和图2可以看出，系统性溶液图谱中，出峰顺序依次为杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、三苯基溴化膦和杂质A。主峰三苯基溴化膦与杂质A峰之间的分离度大于1.5、杂质与杂质之间的分离度大于1.5。实施例2
[0054] 高效液相色谱条件同实施例1。
[0055] 样品配制：采用空白流动相作为空白溶剂进行检测。
[0056] 试验操作：取空白溶剂10μl进样，记录色谱图。
[0057] 本发明人选用的空白溶剂对本发明进行了研究，流动相色谱图中，主峰三苯基溴化膦、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F出峰位置附近无显著干扰峰。证明空白溶剂对本发明没有干扰。
[0058] 实施例3
[0059] 高效液相色谱条件同实施例1。
[0060] 样品配制：
[0061] 检测限溶液：三苯基溴化膦及各杂质信噪比约为3：1的溶液。
[0062] 定量限溶液：三苯基溴化膦及各杂质信噪比约为10：1的溶液。
[0063] 试验操作：取检测限溶液和定量限溶液各10μl分别进样，记录色谱图。本发明人对三苯基溴化膦及各杂质的检测限、定量限进行验证，结果见表3。
[0064] 表3检测限、定量限试验结果
[0065]
[0066] 上述报告限度是指超出此限度在杂质均应在检测报告中报告，并应报告具体的检测数据。
[0067] 由表3可以看出，本发明主峰三苯基溴化膦的检测灵敏度高，其检测限和定量限均小于报告限度。
[0068] 实施例4
[0069] 高效液相色谱条件同实施例1。
[0070] 样品配制：
[0071] 溶液一：分别配制三苯基溴化膦及各杂质限度浓度120％的溶液。
[0072] 溶液二：分别配制三苯基溴化膦及各杂质限度浓度100％的溶液。
[0073] 溶液三：分别配制三苯基溴化膦及各杂质限度浓度60％的溶液。
[0074] 溶液四：分别配制三苯基溴化膦及各杂质限度浓度20％的溶液。
[0075] 溶液五：分别配制三苯基溴化膦及各杂质定量限浓度的溶液。
[0076] 试验操作：分别取三苯基溴化膦及各杂质的五个线性溶液各10μl，分别进样，记录色谱图。
[0077] 本发明人对三苯基溴化膦及各杂质的线性与范围进行验证，结果见表4。
[0078] 表4线性与范围试验结果
[0079] 2峰名称 线性方程 相关系数R 浓度范围(ug/ml)
三苯基溴化膦 y＝37.204x+0.0459 0.9993 0.4‑6.024
杂质A y＝37.200x‑2.3819 0.9995 0.57‑1.2
杂质B y＝65.298x+1.1276 0.9989 0.0357‑5.952
杂质C y＝66.647x‑0.9199 0.9997 0.0176‑6.072
杂质D y＝72.320x‑2.5071 0.9993 0.0358‑5.964
杂质E y＝45.05x‑0.1325 0.9999 0.0233‑6.045
杂质F y＝14.622x‑0.8393 0.9999 0.1814‑6.048
三苯基溴化膦 y＝37.204x+0.0459 0.9993 0.4‑6.024
杂质A y＝37.200x‑2.3819 0.9995 0.57‑1.2
杂质B y＝65.298x+1.1276 0.9989 0.0357‑5.952
杂质C y＝66.647x‑0.9199 0.9997 0.0176‑6.072
杂质D y＝72.320x‑2.5071 0.9993 0.0358‑5.964
杂质E y＝45.05x‑0.1325 0.9999 0.0233‑6.045
杂质F y＝14.622x‑0.8393 0.9999 0.1814‑6.048
[0080] 由表4可以看出，本发明主峰三苯基溴化膦及其杂质在其定量限浓度至限度浓度的120％之间线性关系良好。
[0081] 实施例5
[0082] 高效液相色谱条件同实施例1。
[0083] 样品配制：
[0084] 匹伐他汀钙中间体供试溶液：称取供试品，用流动相定容至刻度，得每1ml中约含三苯基溴化膦1mg的供试溶液。重复性为一个实验员配6份供试溶液；中间精密度为两个实验员分别配6份供试溶液，共12份。
[0085] 试验操作：取供试溶液10μl分别进样，记录色谱图。本发明人对三苯基溴化膦及各杂质的重复性和中间精密度进行验证，结果见表5。
[0086] 表5重复性和中间精密度试验结果
[0087]
[0088]
[0089] 从表4得出主峰及各杂质重复性和中间精密度测得的RSD均符合接受标准。由此可以看出，该发明具有良好的可重复性和中间精密度。
[0090] 实施例6
[0091] 高效液相色谱条件同实施例1。
[0092] 样品配制：称取三苯基溴化膦供试品、各杂质对照品适量，配制限度浓度20％加样回收溶液、限度浓度50％加样回收溶液和限度浓度120％加样回收溶液。
[0093] 试验操作：取20％加样回收溶液、50％加样回收溶液和120％加样回收溶液各10μl分别进样，记录色谱图。本发明人对三苯基溴化膦各杂质的准确度进行验证，结果见表6。
[0094] 表6准确度试验结果
[0095]
[0096] 从表5可以看出各杂质的加标回收率符合可接受标准，说明该发明能够准确稳定的检测各杂质含量。
[0097] 实施例7
[0098] 高效液相色谱条件同实施例1。
[0099] 样品配制：
[0100] 匹伐他汀钙中间体供试溶液：称取供试品，用流动相定容至刻度，得每1ml中约含三苯基溴化膦1mg的供试溶液。
[0101] 试验操作：取供试溶液分别于0、2、4、8、12、24、36、48h各10μl，分别进样，记录色谱图。
[0102] 本发明人对三苯基溴化膦及各杂质的溶液稳定性进行验证。
[0103] 结果表明，供试品溶液放置48h，均未检出更多杂质，48h内稳定。
[0104] 以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。