一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品及其制备方法、应用

摘要

本发明公开了一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品及其制备方法、应用，制备方法包括以下步骤：S1、分别获取小鼠LKM‑1抗体的可变区基因序列和小鼠LC‑1抗体的可变区基因序列，分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；S2、在SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之间插入刚性Linker连接，并在一端插入EcoR I酶切位点，另一端序列插入Nco I酶切位点合成全基因序列，如SEQ ID No.3所示；S3、将步骤S2获得的全基因序列引入pFUSE‑hIgG1‑Fc2载体中，制备同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组质粒；S4、将步骤S3获得的重组质粒转染哺乳细胞，获取同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗体。本发明解决了现有LKM‑1、LC‑1抗体质控品成本高、产量少、批间差较大的问题。

权利要求

1.一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、分别获取小鼠LKM‑1抗体的可变区基因序列和小鼠LC‑1抗体的可变区基因序列，分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；

S2、在SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之间插入刚性Linker连接，并在一端插入EcoR I酶切位点，另一端序列插入Nco I酶切位点合成全基因序列，如SEQ ID No.3所示；

S3、将步骤S2获得的全基因序列引入pFUSE‑hIgG1‑Fc2载体中，制备同时含有小鼠LKM‑

1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组质粒；

S4、将步骤S3获得的重组质粒转染哺乳细胞，获取同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗体。

2.根据权利要求1所述的一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品的制备方法，其特征在于，步骤S4中，哺乳细胞为CHO细胞。

3.如权利要求1‑2任一项所述制备方法制备的同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗体。

4.一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品，其特征在于，包括如权利要求1‑2任一项所述制备方法制备的同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗体。

5.根据权利要求4所述的一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品，其特征在于，由含有重组抗体的缓冲液配制而成。

6.如权利要求1‑2任一项所述制备方法在制备同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗体中的应用。

7.如权利要求1‑2任一项所述制备方法在制备LKM‑1试剂盒和LC‑1试剂盒中的应用。

8.一种LKM‑1试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂、M试剂和校准品，所述校准品由如权利要求1‑2任一项所述制备方法制备的同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗体溶于缓冲液中制备而成；M试剂为已偶联LKM‑1抗原的磁微粒溶于缓冲液中制备而成；R1试剂为Tris缓冲液，R2试剂为含有已标记碱性磷酸酶的鼠抗人IgG的缓冲液。

9.一种LC‑1试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂、M试剂和校准品，所述校准品由如权利要求1‑2任一项所述制备方法制备的同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗体溶于缓冲液中制备而成；M试剂为已偶联LC‑1抗原的磁微粒溶于缓冲液中制备而成；R1试剂为Tris缓冲液，R2试剂为含有已标记碱性磷酸酶的鼠抗人IgG的缓冲液。

说明书

一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品及其制备方法、应用

技术领域

[0001] 本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品及其制备方法、应用。

背景技术

[0002] 自身免疫性肝病(AIH)是一种多病因性疾病，病毒、细菌、化学物质诱发遗传敏感个体自身参与炎症性疾病过程，但免疫调节功能的缺陷常常是导致AIH的基本原因。

[0003] 临床分型根据不同的免疫血清学标志，目前主要将AIH分为4型，I型AIH旧称经典型或狼疮型，是本病最常见的类型，约占全部AIH的60％～80％。其特征为：ANA和(或)SMA阳
性，高球蛋白血症，女性发病多见(占7l％)，激素治疗有效，易并发甲状腺炎、溃疡性结肠
炎、类风湿关节炎等肝外自身免疫疾病。

[0004] II型AIH相对少见，多见于欧洲及南美某些国家。血清学抗LKM‑1阳性，高丙种球蛋白血症较少，血清IGA水平可能低下，易合并溶血性贫血、I型糖尿病、皮肤白斑病等。Ⅱ型与
HCV感染有密切关系，分为2个亚型：II a型不伴HCV感染，多为年轻女性，有家族自身免疫性
疾病史，LKM‑1及ALT水平高，LC‑1阳性，糖皮质激素反应好；Ⅱb型伴有HCV感染，以老年男性
患者为主，无家族史，LKM‑l及ALT水平低，使用激素可加重病情。

[0005] Ⅲ型AIH少见，SLA/LP是此型特征性抗体，患者多为女性，其临床表现与I型相似，故有人认为Ⅲ型实为I型变种，对免疫抑制剂反应好。

[0006] lV型AIH又称不明原因性肝炎。约13％的AIH患者采用标准免疫血清学方法测不到自身抗体，但患者有AIH的表现，如高丙种球蛋白血症、HLA抗原表达异常、对激素治疗有效。

[0007] II型AIH以检出抗肝肾微粒体抗体(AnTi‑liver/kidneymiCrosomAlAnTibody，nTi‑LKM)和抗肝细胞溶质抗原I型抗体(AnTi‑liverCyTosolAnTibodyTypel，AnTi—C‑l)为
特征。抗LKM通常出现在无SMA及ANA的II型AIH患者，是II型AIH的标志性抗体。

[0008] 抗LKM‑1抗体是在1973年在自身免疫性面型活动性肝炎患者血清中发现。其靶抗原为P450酶复合物和UDP‑葡萄糖醛酸转移酶。抗体分为三类LKM‑1、LKM‑2以及LKM‑3，在II
型AIH中的抗LKM‑1抗体的主要的靶抗原是细胞色素，研究显示，LKM‑1抗体能够在体外抑制
CYP2D6的酶的活性。抗LKM‑1是II型AIH的标志性抗体，II型AIH患者多为女性伴高免疫球蛋
白血症，病情较重。抗LKM‑1抗体阳性率达到90％，此外，也可见于2％‑10％的慢性丙型病毒
性肝炎患者。检测抗LKM‑1抗体对AIH的诊断、鉴别诊断及预后评估具有重要临床价值。

[0009] 抗LC‑l抗体是于1988年发现的肝脏特异性的自身抗体。亚胺代甲基转移酶一环化脱氨酶(formiminoTrAnsferAseCyClodeAminAse，FTCD)被认为是该抗体的靶抗原，而对LC‑
1抗体靶抗原表位的进一步研究分析表明FT的抗原优势表位可能是引发自身免疫反应最初
的和最重要的因索。抗LC‑1抗体在40岁以上的患者中极其罕见，而在20岁以下的患者中阳
性率较高，但在儿童爆发性AIH患者中常为阴性。研究显示该抗体与II型AIH相关，阳性率为
30％，但可在SMA及ANA阳性的I型AIH和PSC的患者中同时出现，也存在于少数慢性丙型肝炎
患者血清中。出现抗LC‑I抗体的患者通常可伴发其它免疫性疾病、显著的肝细胞炎症、并且
很快进展为肝硬化。该抗体如与LKM‑1抗体同时阳性时，在用间接免疫荧光法检测时易被后
者掩盖。抗LC‑1抗体的效价随疾病的活动性而变动，故可作为判断疾病严重度的一个指标，
也是患者残余肝细胞数量的标志。

[0010] 自免项目LKM‑1、LC‑1化学发光检测试剂盒的的研发、产品质量控制及产业标准化都离不开抗体质控品。目前常规的制备LKM‑1、LC‑1抗体质控品的方式主要是收集自免阳性
血清，这种方式有巨大的缺陷，一是阳性血清不易收集，成本非常高，经常供应量不足；二是
批间差较大，量又少，很难规模化、产业化制备；三是作为常规质控品很难有效保证一致性。

发明内容

[0011] 本发明的目的在于提供一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品及其制备方法，解决现有LKM‑1、LC‑1抗体质控品成本高、产量少、批间差较大的问题。

[0012] 此外，本发明还提供一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品的应用以及包括I型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品的试剂盒。

[0013] 本发明通过下述技术方案实现：

[0014] 一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品的制备方法，包括以下步骤：

[0015] S1、分别获取小鼠LKM‑1抗体的可变区基因序列和小鼠LC‑1抗体的可变区基因序列，分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；

[0016] S2、在SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之间插入刚性Linker连接，并在一端插入EcoR I酶切位点，另一端序列插入Nco I酶切位点合成全基因序列，如SEQ ID No.3所示；

[0017] S3、将步骤S2获得的全基因序列引入pFUSE‑hIgG1‑Fc2载体中，制备同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组质粒；

[0018] S4、将步骤S3获得的重组质粒转染哺乳细胞，获取同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗体。

[0019] 在国内，检测自免项目正处于拓展阶段，各类试剂盒的产品大都处于试剂盒性能还需要优化的阶段，本发明的复合质控品，能有效减小试剂盒质控品的批间差，减少质控血
清的使用。

[0020] 本发明通过抗体制备的质控品相对简单易得、批间差异小。

[0021] 本发明的关键在于获取小鼠LKM‑1抗体的可变区基因序列和小鼠LC‑1抗体的可变区基因序列，以及小鼠LKM‑1抗体的可变区基因和小鼠LC‑1抗体的可变区基因融合，通过设
计合理的小鼠LKM‑1抗体的可变区基因序列和小鼠LC‑1抗体的可变区基因序列，才能合成
符合要求的全基因序列，进而构建同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组
抗体。

[0022] 进一步地，步骤S1中可变区基因序列的获取过程如下：

[0023] 利用重组抗原LKM‑1和重组抗原LC‑1分别免疫小鼠制备小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体，通过抗体氨基酸序列测序得到小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体的可变区氨基酸序
列，根据哺乳动物密码子偏爱性，合成小鼠LKM‑1抗体的可变区基因序列和小鼠LC‑1抗体的
可变区基因序列。

[0024] 进一步地，小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体的获取过程如下：

[0025] 重组抗原LKM‑1、重组抗原LC‑1通过多次免疫小鼠分别获得可表达小鼠LKM‑1抗体、小鼠LC‑1抗体的脾细胞；提取脾细胞与Sp2/0细胞融合、筛选、验证分别得到可高效表达
LKM‑1和LC‑1单克隆抗体的细胞株；细胞株进一步进行小鼠腹腔注射，抽取腹水纯化得到相
应的单克隆抗体。

[0026] 进一步地，步骤S4中，哺乳细胞为CHO细胞。

[0027] 一种同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗体。

[0028] 一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品，包括同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗体。

[0029] 一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品由含有重组抗体的缓冲液配制而成。

[0030] 同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗体在LKM‑1试剂盒、LC‑1试剂盒中的应用。

[0031] 一种LKM‑1试剂盒，包括R1试剂、R2试剂、M试剂和校准品，所述校准品由如权利要求1‑4任一项所述制备方法制备的同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组
抗体溶于缓冲液中制备而成；M试剂为已偶联LKM‑1抗原的磁微粒溶于缓冲液中制备而成。

[0032] 一种LC‑1试剂盒，包括R1试剂、R2试剂、M试剂和校准品，所述校准品由如权利要求1‑4任一项所述制备方法制备的同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗
体溶于缓冲液中制备而成；M试剂为已偶联LC‑1抗原的磁微粒溶于缓冲液中制备而成。

[0033] 本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：

[0034] 1、本发明制备的复合质控品的基质效应小。

[0035] 2、采用本发明的复合质控品用于试剂盒检测，能够降低用于平行比对的成本，且质控参数可长期使用。

[0036] 3、本发明制备的复合质控品稳定性好，可减少浪费，避免由于质控品的问题导致的假失控。

[0037] 4、采用本发明的复合质控品用于试剂盒检测，能够降低医院检测项目的成本。

[0038] 5、本发明通过抗体制备的质控品相对简单易得、批间差异小。

附图说明

[0039] 此处所说明的附图用来提供对本发明实施例的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本发明实施例的限定。在附图中：

[0040] 图1为pFUSE‑hIgG1‑FC2载体质粒质谱图；

[0041] 图2为蛋白质电泳图。

具体实施方式

[0042] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作
为对本发明的限定。

[0043] 实施例1：

[0044] 一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品的制备方法，包括以下步骤：

[0045] S1、分别获取小鼠LKM‑1抗体的可变区基因序列和小鼠LC‑1抗体的可变区基因序列，分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；

[0046] 可变区基因序列的获取过程如下：

[0047] 重组抗原LKM‑1、重组抗原LC‑1通过多次免疫小鼠分别获得可表达小鼠LKM‑1抗体、小鼠LC‑1抗体的脾细胞；提取脾细胞与Sp2/0细胞融合、筛选、验证分别得到可高效表达
LKM‑1和LC‑1单克隆抗体的细胞株；细胞株进一步进行小鼠腹腔注射，抽取腹水纯化得到相
应的单克隆抗体，通过抗体氨基酸序列测序得到小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体的可变区
氨基酸序列，根据哺乳动物密码子偏爱性，合成小鼠LKM‑1抗体的可变区基因序列和小鼠
LC‑1抗体的可变区基因序列；

[0048] LKM‑1的单克隆抗体的可变区序列(SEQ ID No.1)，由轻链可变区序列和重链可变区序列通过linker连接而成：

[0049] 轻链可变区序列：

[0050] ATGGCCGGCTTCCCTCTCCTCCTCACCCTCCTCACTCACTGTGCAGGGTCCTGGGCCCAGTCTGTGATGACTCAGCGTGCCTGGGCATATGTGGCCCCCG CCCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACAT
CGGAAGTAAGGTTGTATATATGTACCAGCAACTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTGATAATCAGC
GGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGGTGCCAGTGCGCGGAGTCAGCTCCGG
TCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACA

[0051] 重链可变区序列：

[0052] ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCGATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGTTGTTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTGGTATGTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTT
AGCACTCGATCCAAGAGTGTGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCAGGTATTGGTGATAGTG
GTCATAGCATATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAATTGCACGCGGAG
ACTGCGGTTAAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGACCGGCLC‑1的单克隆抗体的
可变区序列(SEQ ID No.2)，由轻链可变区序列和重链可变区序列通过linker连接而成：

[0053] 轻链可变区序列：

[0054] ATGGCCGGCTTCCCTCTCCTCCTCACCCTCCTCACTCACTGTGCAGGGTCCTGGGCCCAGTCTGTGATGACAAGTGGAATAATGGCGTGTGAACCTGTCGACCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGG
AAGTTGTTAGTTAAAAGTGCGCCAGCAACTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTGATAATCAGCGGC
CCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCAACCCTGGCACACAGTGGCCTCCGGTCC
GAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACA

[0055] 重链可变区序列：

[0056] ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCGATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGTTGTTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTACGGAAGGCCGGTTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAG
CACTATTGCCGCGAGACGAATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCAGGTATTGGTGATAGTGGTC
ATAGCATATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGCGTAGGCGTTATGTC
CACCGTAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGACCGGC

[0057] S2、在SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之间插入刚性Linker连接，并在一端插入EcoR I酶切位点，另一端序列插入Nco I酶切位点合成全基因序列，如SEQ ID No.3所示；

[0058] 柔性Linker氨基酸序列：

[0059] ‑EGKSSGSGSESKSTESKST‑

[0060] 柔性Linker核苷酸序列：

[0061] ‑GAGGTAAAATCATCGGGAAGCGGAAGCGAGTCAAAATCTACTGAATCAAAATCCACT‑

[0062] 刚性Linker氨基酸序列：

[0063] ‑EAAAKEAAAKEAAAKEAAAK‑

[0064] 刚性Linker核苷酸序列：

[0065] ‑GAAGCAGCAGCAAAGGAAGCAGCAGCAAAGGAAGCAGCAGCAAAGGAAGCAGCAGCAAAG‑

[0066] 酶切位点：

[0067] EcoRI：(‑GAATTC‑)

[0068] NcoI：(‑CCATGG‑)

[0069] 全基因序列(SEQ ID No.3)：

[0070] GAATTCATGGCCGGCTTCCCTCTCCTCCTCACCCTCCTCACTCACTGTGCAGGGTCCTGGGCCCAGTCTGTGATGACTCAGCGTGCCTGGGCATATGTGGCCCCCGCCCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAA
CATCGGAAGTAAGGTTGTATATATGTACCAGCAACTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTGATAATC
AGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGGTGCCAGTGCGCGGAGTCAGCTC
CGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACAGAGGTAAAATCATCGGGAAGCGGAAGCGAGTCAAAATCTAC
TGAATCAAAATCCACTATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCGATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAGG
TGCAGTTGTTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTGGTATGTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTC
ACCTTTAGCACTCGATCCAAGAGTGTGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCAGGTATTGGTGA
TAGTGGTCATAGCATATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAATTGCACGC
GGAGACTGCGGTTAAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGACCGGCGAAGCAGCAGCAAAG
GAAGCAGCAGCAAAGGAAGCAGCAGCAAAGGAAGCAGCAGCAAAGATGGCCGGCTTCCCTCTCCTCCTCACCCTCCT
CACTCACTGTGCAGGGTCCTGGGCCCAGTCTGTGATGACAAGTGGAATAATGGCGTGTGAACCTGTCGACCAGAGGG
TCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTTGTTAGTTAAAAGTGCGCCAGCAACTCCCAGGAACG
GCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTGATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGG
CACCTCAGCAACCCTGGCACACAGTGGCCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACAGAGGTAAAAT
CATCGGGAAGCGGAAGCGAGTCAAAATCTACTGAATCAAAATCCACTATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTT
GTGGCGATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGTTGTTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTACGGAAGGCCGGTTC
CCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCACTATTGCCGCGAGACGAATCCGCCAGGCTCCAGGGA
AGGGGCTGGAATGGGTCTCAGGTATTGGTGATAGTGGTCATAGCATATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGCTTC
ACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGCGTAGGCGTTATGTCCACCGTAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATA
TTACTGTGCGACCGGCCCATGG

[0071] S3、将步骤S2获得的全基因序列引入pFUSE‑hIgG1‑Fc2载体中，pFUSE‑hIgG1‑Fc2载体如图1所示，制备同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组质粒；

[0072] S4、将步骤S3获得的重组质粒通过Lipo 3000试剂转染CHO细胞中，通过Zeo筛选体系获得单克隆细胞株，大量培养细胞，收集细胞培养物，10000rpm、15min条件下离心取细胞
上清，即获取同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗体。

[0073] 对本实施例制备的重组抗体进行纯化和鉴定：

[0074] 1)、将实施例1中获取的细胞上清用Protein A亲和柱纯化。利用Gly‑HCl进行梯度洗脱，去除杂蛋白，结果如图2所示，得到含针对LKM‑1和LC‑1的单克隆抗体的两种可变区融
合的人源化IgG；

[0075] 图2

[0076] 2)、使用抗肝细胞溶质抗原1型(LC‑1)抗体IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光法)试剂盒测试验证纯化后的人IgG效价，通过计算软件计算得到该抗体IgG的浓度约为
215424RU/mL；

[0077] 3)、使用抗肝肾微粒体1型(LKM‑1)抗体IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光法)试剂盒测试验证纯化后的人IgG效价，通过计算软件计算得到该抗体IgG的浓度约为223654RU/
mL。

[0078] 因此：成功表达的抗体经验证可作为抗肝细胞溶质抗原1型(LC‑1)抗体IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光法)、抗肝肾微粒体1型(LKM‑1)抗体IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光
法)2个试剂盒的质控品使用。可作为后续LKM‑1、LC‑1试剂盒产品研发及优化的备选原料。

[0079] 实施例1：

[0080] 使用LKM‑1和LC‑1两种试剂盒测试II型自免肝(LKM‑1、LC‑1)复合质控血清的效价及稳定性验证：

[0081] 一种抗肝肾微粒体1型(LKM‑1)抗体IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光法)试剂盒主要成分如下表1所示：

[0082] 表1

[0083]

[0084] 一种抗肝细胞溶质抗原1型(LC‑1)抗体IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光法)试剂盒主要成分如下表2所示：

[0085] 表2

[0086]

[0087] 1)效价：将复合质控按1/100、1/1000、1/10000、1/100000稀释梯度小样，使用LKM‑1、LC‑1试剂盒测试，根据计算软件反算出复合质控原液浓度，结果如表3所示：

[0088] 表3

[0089]

[0090] 备注：试剂盒的线性范围在2‑400RU/mL，根据稀释比例回算，反算原液效价在200000‑240000RU/mL。

[0091] 2)稳定性：将母液用0.01MPBS(含有1‰BSA、2％甘油及1‰ProClin‑300)稀释成低中高三个浓度，分别置于4℃30天、37℃7天，与初测值进行比较，数据如表4所示：

[0092] 表4

[0093]

[0094] 从实验结果可以得出：2‑8℃保存30天和37℃热破坏7天，浓度的保留率都在90％以上，稳定性较好。

[0095] 综上，本发明的复合质控血清表达与应用，可以减小试剂盒的批间差。同时，降低成本，方便操作，一个质控品可以检测2个项目，质控品方便管理。利用SA的级联放大作用，
增强抗体的检测灵敏度；利用磁微粒化学发光法进行试剂盒的开发，检测时间短，60分钟内
出160个测试结果，重复性好，全自动操作。

[0096] 以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明
的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含
在本发明的保护范围之内。