一种用于预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板疗效的circRNA检测试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种用于预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板疗效的circRNA检测试剂盒及其应用。所述circRNA检测试剂盒包括检测血小板circFAM13B相对表达量的试剂；所述检测血小板circFAM13B相对表达量的试剂包括circFAM13B扩增引物、反转录反应试剂和荧光定量PCR反应试剂；所述circFAM13B扩增引物由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单链DNA分子组成。本发明提供的试剂盒制备简单、使用方便，可快速准确预测中国患者人群的P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性，为P2Y12受体拮抗剂个体化抗血小板治疗提供表观遗传学参考指标。

权利要求

1.检测血小板circFAM13B表达量的物质在制备预测ACS患者的P2Y12受体拮抗剂抗血小板治疗疗效的产品中的应用；所述P2Y12受体拮抗剂为氯吡格雷或替格瑞洛。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测血小板circFAM13B表达量的物质包括检测血小板circFAM13B相对表达量的试剂和/或仪器。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述检测血小板circFAM13B相对表达量的试剂包括circFAM13B扩增引物、反转录反应试剂和荧光定量PCR反应试剂。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述circFAM13B扩增引物由序列表中序列

2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单链DNA分子组成。

5.circFAM13B作为标记物在制备预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板治疗疗效的产品中的应用；所述P2Y12受体拮抗剂为氯吡格雷或替格瑞洛。

说明书

一种用于预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板疗效的circRNA检测

试剂盒及其应用

技术领域

[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及血小板circFAM13B作为标记物在制备预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板疗效的产品中的应用，特别涉及检测血小板circFAM13B表达量的物质在制备P2Y12受体拮抗剂抗血小板疗效的产品中的应用。

背景技术

[0002] 急性冠状动脉综合征(ACS)是严重危害人类健康的常见心血管疾病之一，尽管过去十年ACS的死亡率已大大降低，且冠心病的年死亡率下降了34.4％，但经历复发事件的患者死亡风险仍较高。P2Y12受体拮抗剂联合阿司匹林抗血小板治疗是目前公认的ACS标准治疗和预防经皮冠脉介入(PCI)术后支架内血栓形成的金标准。研究证实，P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性具有个体差异，造成P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性的个体差异因素包括疾病状态、合并用药及药物剂量，以及药物基因组学因素(CYP2C19基因多态性)。然而，已知的这些因素尚不足以解释血小板反应性的个体差异。因此，如何在临床预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性差异，实现ACS患者个性化的抗血小板药物治疗，一直是心血管临床药理领域研究的热点和亟待解决的难题。为此，有必要探索新的生物标记物弥补药物基因组学研究中基因型、表型和疾病之间关联性的缺失。

[0003] 近年来，对血小板的表观遗传学研究发现，血小板中除了信使RNA(mRNA)外，还含有丰富的非编码RNA，尤其是小RNA(microRNA)和环状RNA(circRNA)。Sanger HL在1976年首次在病毒中发现circRNA。随后，针对circRNA的研究逐渐开展，近年来更是备受关注。研究发现，血小板中富含circRNA，并主要以外显子环化的剪切形式产生并存在。由于circRNA比线性RNA更稳定，且circRNA的闭环末端结构可以保护其免受核酸外切酶的降解，因此其具有作为临床生物标记物的潜力。已有研究发现，circRNA与动脉粥样硬化、心肌梗死、心力衰竭等疾病均有相关性。但是，血小板circRNAs与血小板反应性以及在血小板中的调控机制尚不知晓。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供血小板源性circFAM13B作为标记物在预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板疗效中的应用。

[0005] 为了实现上述目的，本发明首先提供了检测血小板circFAM13B表达量的物质在如下(a1)‑(a4)中任一种中的应用：

[0006] (a1)预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板治疗疗效；

[0007] (a2)制备预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板治疗疗效的产品；

[0008] (a3)预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性；

[0009] (a4)制备预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性的产品。

[0010] 上述应用中，所述P2Y12受体拮抗剂为氯吡格雷或替格瑞洛。

[0011] 上述应用中，所述检测血小板circFAM13B表达量的物质包括检测血小板circFAM13B相对表达量的试剂和/或仪器；

[0012] 所述检测血小板circFAM13B相对表达量的试剂具体包括circFAM13B扩增引物、反转录反应试剂和荧光定量PCR反应试剂。

[0013] 进一步的，所述circFAM13B扩增引物由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单链DNA分子组成。

[0014] 所述反转录反应试剂具体可为Thermo First cDNA Synthesis Kit中的试剂。

[0015] 所述荧光定量PCR反应试剂具体可包括2×SG Green qPCR Mix(with ROX)。

[0016] 更进一步的，所述相对表达量为circFAM13B参比内参基因的相对表达量。

[0017] 所述内参基因具体可为GAPDH基因。所述试剂还包括用于扩增GAPDH基因的引物对。

[0018] 所述相对表达量的计算方法具体如下：以待测者cDNA为模板，采用上述引物对进‑△△Ct行实时荧光定量PCR，然后使用2 法计算获得。所述待测者cDNA为从待测者外周血中提取的血小板中获得的cDNA。

[0019] 为了实现上述目的，本发明还提供了一种与P2Y12受体拮抗剂个体化抗血小板治疗相关的circRNA检测试剂盒，该试剂盒可检测与P2Y12受体拮抗剂抗血小板敏感性密切相关的血小板circFAM13B的表达量，用于预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板疗效，进而为P2Y12受体拮抗剂个体化抗血小板治疗提供表观遗传学参考指标。

[0020] 本发明提供的试剂盒包括检测血小板circFAM13B表达量的物质；所述试剂盒的功能为预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板治疗疗效或预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性。

[0021] 上述试剂盒中，所述P2Y12受体拮抗剂为氯吡格雷或替格瑞洛。

[0022] 上述试剂盒中，所述检测血小板circFAM13B表达量的物质包括检测血小板circFAM13B相对表达量的试剂和/或仪器；

[0023] 所述检测血小板circFAM13B相对表达量的试剂具体包括circFAM13B扩增引物、反转录反应试剂和荧光定量PCR反应试剂。

[0024] 进一步的，所述circFAM13B扩增引物由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单链DNA分子组成。

[0025] 所述反转录反应试剂具体可为Thermo First cDNASynthesis Kit中的试剂。

[0026] 所述荧光定量PCR反应试剂具体可包括2×SG Green qPCR Mix(with ROX)。

[0027] 更进一步的，所述相对表达量为circFAM13B参比内参基因的相对表达量。

[0028] 所述内参基因具体可为GAPDH基因。所述试剂还包括用于扩增GAPDH基因的引物对。

[0029] 所述相对表达量的计算方法具体如下：以待测者cDNA为模板，采用上述引物对进‑△△Ct行实时荧光定量PCR，然后使用2 法计算获得。所述待测者cDNA为从待测者外周血中提取的血小板中获得的cDNA。

[0030] 上述试剂盒中，当所述P2Y12受体拮抗剂为氯吡格雷时，所述试剂盒还包含数据处理装置甲；所述数据处理装置甲由数据输入模块甲、数据记录模块甲、数据比较模块甲和结论输出模块甲组成；

[0031] 所述数据输入模块甲用于输入待测者血小板中circFAM13B的相对表达量数值；

[0032] 所述数据记录模块甲用于存储待测者血小板中circFAM13B的相对表达量数值；

[0033] 所述数据比较模块甲用于将待测者血小板中circFAM13B的相对表达量数值和阈值进行比较；

[0034] 所述结论输出模块甲用于显示结论，即如果待测者血小板中circFAM13B的相对表达量大于1.179，则该待测者血小板反应性高；如果待测者血小板中circFAM13B的相对表达量小于0.596，则该待测者血小板反应性低；如果待测者血小板中circFAM13B的相对表达量介于0.596‑1.179之间(包含0.596和1.179)，则该待测者血小板反应性适中；

[0035] 当所述P2Y12受体拮抗剂为替格瑞洛时，所述试剂盒还包含数据处理装置乙；所述数据处理装置乙由数据输入模块乙、数据记录模块乙、数据比较模块乙和结论输出模块乙组成；

[0036] 所述数据输入模块乙用于输入待测者血小板中circFAM13B的相对表达量数值；

[0037] 所述数据记录模块乙用于存储待测者血小板中circFAM13B的相对表达量数值；

[0038] 所述数据比较模块乙用于将待测者血小板中circFAM13B的相对表达量数值和阈值进行比较；

[0039] 所述结论输出模块乙用于显示结论，即如果待测者血小板中circFAM13B的相对表达量大于1.636，则该待测者血小板反应性高；如果待测者血小板中circFAM13B的相对表达量小于0.565，则该待测者血小板反应性低；如果待测者血小板中circFAM13B的相对表达量介于0.565‑1.636之间(包含0.565和1.636)，则该待测者血小板反应性适中。

[0040] 所述抗血小板反应性是基于TEG检测手段针对经P2Y12受体拮抗剂治疗的患者血小板受到ADP刺激物激活后的一种反应特性的测量，体现抗栓药对血小板反应性的影响，临床上具有判断P2Y12受体拮抗剂药物抗血小板疗效的价值。

[0041] 在本发明的具体实施例中，

[0042] 当所述P2Y12受体拮抗剂为氯吡格雷时，所述血小板反应性高是指TEG‑ADP抑制率＜50％；所述血小板反应性低是指TEG‑ADP抑制率＞80％；所述血小板反应性适中是指TEG‑ADP抑制率介于50％‑80％之间。

[0043] 当所述P2Y12受体拮抗剂为替格瑞洛时，所述血小板反应性高是指TEG‑ADP抑制率＜60％；所述血小板反应性低是指TEG‑ADP抑制率＞90％；所述血小板反应性适中是指TEG‑ADP抑制率介于60％‑90％之间。

[0044] 所述TEG‑ADP抑制率是指应用血小板功能检测‑血栓弹力图法(TEG)在氯吡格雷或替格瑞洛稳定治疗3日后检测二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板抑制率，具体计算方法记载于文献“Othman M,Kaur H.Thromboelastography(TEG)[J].Methods Mol Biol,2017,1646(533‑43.”中。

[0045] 在实际应用中，某个体使用P2Y12受体拮抗剂氯吡格雷进行抗血小板治疗时，如果血小板中circFAM13B的相对表达量大于1.179，则该个体血小板反应性高、药物抗血小板反应性弱、血栓形成风险高，建议将抗血小板药物增量，或者更换为其他强效抗血小板药物；如果血小板中circFAM13B的相对表达量小于0.596，则该个体血小板反应性低、药物抗血小板反应性强、抗血小板疗效佳；如果血小板中circFAM13B的相对表达量介于0.596‑1.179，则该个体血小板反应性适中、药物抗血小板反应性适中、抗血小板疗效良好，建议继续目前治疗。

[0046] 个体使用P2Y12受体拮抗剂替格瑞洛进行抗血小板治疗时，如果血小板中circFAM13B的相对表达量大于1.636，则该个体血小板反应性高、药物抗血小板反应性弱、血栓形成风险高，建议将抗血小板药物增量，或者更换为其他强效抗血小板药物；如果血小板中circFAM13B的相对表达量小于0.565，则该个体血小板反应性低、药物抗血小板反应性强、抗血小板疗效佳；如果血小板中circFAM13B的相对表达量介于0.565‑1.636，则该个体血小板反应性适中、药物抗血小板反应性适中、抗血小板疗效良好，建议继续目前治疗。

[0047] circFAM13B作为标记物在如下(a1)‑(a4)中任一种中的应用也属于本发明的保护范围：

[0048] (a1)预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板治疗疗效；

[0049] (a2)制备预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板治疗疗效的产品；

[0050] (a3)预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性；

[0051] (a4)制备预测P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性的产品。

[0052] 上述任一所述应用或试剂盒中，所述circFAM13B(hsa_circ_0001535)的核苷酸序列如序列表中的序列1所示。

[0053] 本发明以经P2Y12受体拮抗剂(氯吡格雷或替格瑞洛)治疗的ACS患者为研究对象，对丰富表达于血小板中的环状RNA进行筛查，结果发现，血小板环状RNA‑circFAM13B在抗血小板疗效不佳组和疗效理想组的个体中的表达水平存在显著差异，即circFAM13B在病例组(药物反应性欠佳)的个体中的表达量显著高于对照组(药物反应性正常)的个体。随后在P2Y12受体拮抗剂(氯吡格雷或替格瑞洛)抗血小板治疗的ACS患者中进行验证，证实了上述血小板中的circFAM13B的表达水平与ACS患者中P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性密切相关。鉴于此，本发明建立了与P2Y12受体拮抗剂个体化抗血小板治疗相关的circFAM13B检测试剂盒与检测方法。本发明提供的与P2Y12受体拮抗剂个体化抗血小板治疗相关的circFAM13B检测试剂盒制备简单、使用方便；采用该试剂盒能够快速、准确的预测中国患者人群的P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性及疗效。

附图说明

[0054] 图1为circFAM13B与P2Y12受体拮抗剂(图左：氯吡格雷；图右：替格瑞洛)抗血小板反应性的相关性。

具体实施方式

[0055] 以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的试验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

[0056] 下述实施例中的circFAM13B(hsa_circ_0001535)的核苷酸序列如序列表中的序列1所示。

[0057] 实施例1、血小板中的circFAM13B的表达水平与ACS患者中P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性的关联性分析

[0058] 一、实验材料与方法

[0059] 1、病例募集

[0060] 1)经P2Y12受体拮抗剂稳定治疗的ACS患者的连续募集

[0061] 入选标准：连续募集自愿参加并签署人类遗传学检测相关知情同意书，年龄在18周岁以上，经P2Y12受体拮抗剂(氯吡格雷或替格瑞洛)治疗的ACS患者，能够提供外周血并用于血小板RNA提取的患者。为了减少人群分层的影响，所有患者均为中国汉族人，相互间无血缘关系及异族通婚史。病例总计296例，其中氯吡格雷治疗患者159例，替格瑞洛治疗患者137例(病例基线见表1、表2)。

[0062] 排除标准：1.已知有抗血小板药物治疗禁忌症者；2.急、慢性炎症疾病者；3.应用非甾体类抗炎药、阿片类药物者；4.肝肾功能障碍，预期寿命小于1年者；5.近期有出血倾向、潜在出血危险或血液系统疾病者；6.近4周内有深部穿刺及大手术史；7.其它危重疾病者。

[0063] 2)抗血小板反应性不同疗效的病例筛选

[0064] 应用血小板功能检测‑血栓弹力图法(TEG)按照文献“Othman M,Kaur H.Thromboelastography(TEG)[J].Methods Mol Biol,2017,1646(533‑43.”中的方法在氯吡格雷或替格瑞洛稳定治疗3日后检测二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板抑制率，以此检测P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性(基于TEG检测手段针对经P2Y12受体拮抗剂治疗的患者血小板受到ADP刺激物激活后的一种反应特性的测量，体现抗栓药对血小板反应性的影响，临床上具有判断抗栓药物疗效的价值)，并通过严格的临床判断标准进行抗血小板反应性疗效不同的病例筛选，包括病例组(疗效不佳组)和对照组(理想疗效组)。其中，氯吡格雷治疗的ACS患者10例(病例组和对照组各5例)；替格瑞洛治疗的ACS患者12例(病例组和对照组各6例)(病例基线见表1、表2)。血小板反应性大小依据TEG标准衡量，具体标准如下：氯吡格雷治疗的ACS患者中，TEG‑ADP抑制率＞80％为对照组(理想疗效组)，TEG‑ADP抑制率＜50％为病例组(疗效不佳组)；替格瑞洛治疗的ACS患者中，TEG‑ADP抑制率＞90％为对照组(理想疗效组)，TEG‑ADP抑制率＜60％为病例组(疗效不佳组)。

[0065] 表1、氯吡格雷入选患者的基本临床特征

[0066]

[0067]

[0068] 表2、替格瑞洛入选患者的基本临床特征

[0069]

[0070] 2、全血血小板及其RNA提取

[0071] 1)血小板提取

[0072] 取存于枸橼酸钠抗凝真空采血管外周血3ml，放置约4小时。在转速100g室温条件下，离心15min，用无RNA酶和无细菌的吸头取上层血浆700μl，即为富血小板血浆，将其移入新的1.5ml EP管中。然后在转速2000g，室温条件下，离心15min，弃上清液，沉淀即为血小板。

[0073] 2)血小板RNA提取

[0074] 采用SG高纯总RNA提取试剂盒(SinoGene，货号为#R1002，China)，按照试剂盒说明书中的操作步骤提取血小板RNA。具体方法如下：将上述步骤1)获得的血小板样本，吹打沉淀使其混匀。样本中加入1ml SG TRIzol裂解液。剧烈震荡，室温静置2‑3分钟。加入200μl氯仿，剧烈涡旋30秒，室温静置5分钟。上述样本4度，12000×g离心15分钟。小心转移上清至一RNase‑free 1.5ml离心管中，加入等体积异丙醇混匀。加入500μl RNA Wash Buffer I至柱子中，4度，12000×g离心30秒。弃滤液。13000×g，4度离心10分钟。弃上清，加入1ml 70％乙醇漂洗沉淀。13000×g，4度离心5分钟。弃70％乙醇，空气晾干RNA。加30μl DEPC处理水溶解RNA。测定浓度(5μl)，剩余反转录cDNA‑80度保存备用。

[0075] 3)DNase I处理(目的：去除基因组DNA)

[0076] 按照表3所示的配方配制反应体系，将配制好的反应体系在如下条件下进行反应：37℃水浴30分钟；65℃水浴10分钟灭活DNase I，得到DNase I处理反应液。

[0077] 表3、反应体系

[0078]RNA 8.3μl(大约1μg)
10×Reaction Buffer with MgCl2 1.2μl
DNase I(Fermentas，货号为EN0521，USA) 2μl
Ribolock 0.5μl
总体积 12μl

[0079] 3、利用荧光定量PCR法检测血小板circFAM13B

[0080] 1)引物的设计与合成

[0081] 引物由信诺金达有限公司设计合成，用于荧光定量PCR反应。

[0082] circFAM13B(hsa_circ_0001535)：

[0083] 上游引物：5′‑CAATGAAGCTATGCAGCAAGA‑3′(序列2)；

[0084] 下游引物：5′‑CAAAAAGGTGCTGTTCCACA‑3′(序列3)。

[0085] GAPDH(内参基因)：

[0086] 上游引物：5′‑GAAGGTGAAGGTCGGAGTC‑3′；

[0087] 下游引物：5′‑GAAGATGGTGATGGGATTTC‑3′。

[0088] 2)反转录

[0089] 应用Thermo First cDNA Synthesis Kit(SinoGene，货号为#Q1010，China)对所提取的血小板RNA(DNase I处理后的RNA)进行反转录，得到cDNA。

[0090] 按照表4所示的配方配制反转录反应体系，混匀，离心。然后将反转录反应体系在如下条件下进行反应：42℃水浴60分钟；85℃水浴10分钟，灭活逆转录酶。

[0091] 表4、反转录反应体系

[0092] DNase I处理反应液 12μlRandom 1μl
5×Reaction Buffer 4μl
RT enzyme 1μl
dNTP(10mM) 2μl
总体积 20μl

[0093] 3)荧光定量PCR

[0094] 以步骤2)获得的cDNA为模板，采用步骤1)设计的引物，应用2×SG Green qPCR Mix(with ROX)(SinoGene，货号为#Q1002，China)分别对circFAM13B和内参GAPDH进行扩‑△△Ct增，分别得到Ct值(cycle threshold)，并通过公式2 计算每例标本的circFAM13B的相对表达量，其中，△△Ct＝△Ct(试验样品)—△Ct(基准样品)；△Ct(试验样品)＝Ct(试验样品，目的基因)—Ct(试验样品，内参基因)；△Ct(基准样品)＝Ct(基准样品，目的基因)—Ct(基准样品，内参基因)；服用氯吡格雷治疗的ACS患者的△Ct(基准样品)＝‑3.543；服用替格瑞洛治疗的ACS患者的△Ct(基准样品)＝‑2.482。具体操作过程见说明书。每个样本重复三次实验。

[0095] 按照表5所示的配方配制荧光定量PCR的反应体系(15μl体系)，混合均匀，离心，分到8联排管或者96孔PCR板里，每个样品每个基因3个PCR平行反应。PCR反应条件如表6所示。

[0096] 表5、荧光定量PCR的反应体系

[0097] 2×SG Green qPCR Mix 7.5μl正向引物(10μM) 0.25μl
反向引物(10μM) 0.25μl
cDNA 1μl
无菌无酶水 6μl
总体积 15μl

[0098] 表6、PCR反应条件

[0099]

[0100] 通过Sanger测序技术对步骤3)获得的PCR扩增产物进行检测。测序结果如序列表中的序列4所示，其包含了测序所用的T载体以及连接到T载体上的待测目的基因序列，通过与序列1比对发现测得的目的基因序列与由circFAM13B引物扩增后理论上应得到的PCR产物序列完全一致，证实了血小板源性circFAM13B为环状RNA，circFAM13B引物可以特异性识别并扩增circFAM13B。

[0101] 二、血小板circFAM13B表达水平与P2Y12受体拮抗剂抗血小板反应性的相关性分析

[0102] 利用两独立样本均数T检验或Mann‑Whitney U检验分析P2Y12受体拮抗剂病例组/对照组病例中血小板circFAM13B的表达差异，p<0.05为有意义。

[0103] 结果如图1所示，结果表明：血小板中circFAM13B的相对表达量在病例组均显著高于对照组(氯吡格雷：病例组:1.179±0.232；对照组:0.596±0.331，P＝0.020。替格瑞洛：病例组:1.636±1.105；对照组:0.565±0.263，P＝0.025)。对于服用P2Y12受体拮抗剂抗血小板治疗的ACS患者而言，血小板中circFAM13B的相对表达量高于1.179(氯吡格雷)或
1.636(替格瑞洛)，预示着P2Y12受体拮抗剂血小板反应性高，药物抗血小板反应性弱，血栓形成风险高，此时在结合患者缺血风险相关临床因素和药物代谢酶CYP2C19基因变异等因素的情况下，应该考虑将抗血小板药物增量，或者更换为其他强效抗血小板药物。
circFAM13B的相对表达量低于0.596(氯吡格雷)或0.565(替格瑞洛)，预示着P2Y12受体拮抗剂血小板反应性低，药物抗血小板反应性强，抗血小板疗效佳。circFAM13B的相对表达量介于0.596‑1.179(氯吡格雷)或0.565‑1.636(替格瑞洛)，则该个体血小板反应性适中、药物抗血小板反应性适中、抗血小板疗效良好，建议继续目前治疗。

[0104] 在实际应用中，个体使用P2Y12受体拮抗剂氯吡格雷进行抗血小板治疗时，如果血小板中circFAM13B的相对表达量大于1.179，则该个体血小板反应性高、药物抗血小板反应性弱、血栓形成风险高，建议将抗血小板药物增量，或者更换为其他强效抗血小板药物；如果circFAM13B的相对表达量小于0.596，则该个体血小板反应性低、药物抗血小板反应性强、抗血小板疗效佳；如果血小板中circFAM13B的相对表达量介于0.596‑1.179，则该个体血小板反应性适中、药物抗血小板反应性适中、抗血小板疗效良好，建议继续目前治疗。

[0105] 个体使用P2Y12受体拮抗剂替格瑞洛进行抗栓血小板治疗时，如果血小板中circFAM13B的相对表达量大于1.636，则该个体血小板反应性高、药物抗血小板反应性弱、血栓形成风险高，建议将抗血小板药物增量，或者更换为其他强效抗血小板药物；如果circFAM13B的相对表达量小于0.565，则该个体血小板反应性低、药物抗血小板反应性强、抗血小板疗效佳；如果血小板中circFAM13B的相对表达量介于0.565‑1.636，则该个体血小板反应性适中、药物抗血小板反应性适中、抗血小板疗效良好，建议继续目前治疗。

[0106] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。