5HT2A受体拮抗剂及其医疗应用转让专利
申请号 : CN202010068325.9
文献号 : CN113214231B
文献日 : 2022-04-08
发明人 : 邢洪涛
申请人 : 瀚远医药有限公司
摘要 :
权利要求 :
1.3‑(色烷‑6‑基甲基)‑1‑(2,4‑二氟苯甲基)‑1‑(1‑甲基哌啶‑4‑基)脲或其药学可接受的盐。
2.一种药物组合物,其特征在于包含权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐。
3.如权利要求2所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物进一步包含药学上可接受的载体。
4.如权利要求2或3所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物进一步包含第二种治疗剂,所述第二种治疗剂是其他的治疗5HT2A受体活性介导的相关疾病的药物。
5.如权利要求4所述的药物组合物,其特征在于,所述第二种治疗剂选自:苯二氮 类、巴比妥类、水合氯醛、丁螺环酮、吩噻嗪类、硫杂蒽类、丁酰苯类、氯氮平、利哌利酮、杂环类抗抑郁药、选择性5‑HT重摄取抑制剂、单胺氧化酶抑制剂、氯胺酮、米氮平、左旋多巴、溴隐亭、硫丙麦角林、丙炔苯丙胺、金刚烷胺和利血平。
6.如权利要求4所述的药物组合物,其特征在于,所述第二种治疗剂选自三环类抗抑郁药。
7.权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐在制备治疗5HT2A受体活性介导的相关疾病的药物中的应用。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于,所述5HT2A受体活性介导的相关疾病是中枢神经系统疾病。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述中枢神经系统疾病是精神疾病、中枢神经系统退行性疾病、中枢神经系统退行性疾病相关或并发的精神紊乱症状、精神疾病的阴性症状。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于,所述精神疾病是抑郁症、焦虑症、躁狂症、精神分裂症、情感性分裂症、双相精神障碍、失眠、自闭症。
11.如权利要求9所述的应用,其特征在于,所述中枢神经系统退行性疾病是阿尔兹海默症、帕金森病、亨廷顿病、路易小体痴呆症。
12.如权利要求9所述的应用,其特征在于,所述中枢神经系统退行性疾病相关或并发的精神紊乱症状、精神疾病的阴性症状是情感障碍、语言功能减退、幻觉、兴趣缺失。
说明书 :
5HT2A受体拮抗剂及其医疗应用
技术领域
症,精神病,精神分裂症,失眠,自闭症等)及与中枢神经系统退行性疾病(如阿尔兹海默症,
帕金森病,亨廷顿病,路易小体痴呆症等)相关或者并发的精神紊乱症状。
背景技术
学习和记忆、机体体温、血压以及病理状态(如焦虑、躁狂、精神分裂、肥胖、药物成瘾、偏头
痛和高血压)方面发挥着极为重要的作用(Alenina N,et al.,(2009)ProcNatl Acad Sci
USA,106,10332‑10337;Filip M,et al.,(2005)Pharmacol Rep,57,685‑700;Greek AR,
(2006)Br J Pharmacol,147,Suppl 1:S145‑S152)。5‑HT通过其受体发挥作用,根据结构
(氨基酸序列)、生化(信号转导的后受体机制)和药理学差异将5‑HT受体分为7个家族(5‑
HT1~5‑HT7)以及至少15个不同亚型(Barnes NM,et al.,(1999)Neuropharmacology,38,
1083‑1152;Hannon J,et al.,(2008)Behav Brain Res,195,198‑213;Hoyer D,et al.,
(2002)Pharmacol Biochem Behav,71,533‑554;Pauwels PJ.(2003)Tocris Reviews,
No.25)。不同亚型受体的分布、配体偏好以及相关功能各不相同。
GABA、谷氨酸和Ach神经元上表达并起着树突状异质受体的作用(Buhot MC,(1997)Curr
Opin Neurobiol,7,243‑254;Leysen JE,(2004)Curr Drug Targets CNS Neuro Disord,
3,11‑26)。和大多数5‑HT受体一样,5‑HT2A受体为G‑蛋白偶联受体,它通过激活鸟嘌呤核苷
酸结合蛋白(G蛋白)完成信号转导,导致第二信使分子如环腺苷酸(cAMP)、肌醇磷酸酯
(inositol phosphates)以及二酰甘油(diacylglycerol)水平升高或降低。这些第二信使
分子调节多种胞内酶的功能(如激酶和离子通道),最终影响细胞兴奋性和细胞功能。
等)(Fioravanti et al.,(1992)Brain Cogn.18,116‑124;Sinopoli VM,et al.,(2017)
Neurosci Biobehav Rev,80:372‑381)。近年来研究发现,5‑HT2A受体与神经精神疾病的病
理状态密切相关,5‑HT2A受体参与了非典型抗精神病药物如氯氮平、奥氮平、利培酮的分子
作用机制(Gonzalez‑Maeso J,et al.,(2009)Trends Neurosci,32:225‑232;Fribourg M,
et al.,(2011)Cell,147:1011‑1023;Kurita M,et al.,(2012)Nat Neurosci,15:1245‑
1254);5‑HT2A受体拮抗剂对于治疗精神分裂症阴性症状(如情感障碍、语言功能减退等)十
分重要(Blier P,et al.,(2005)JClin Psychiatry 66,Suppl 8,30‑40;Richtand NM,et
al.,(2008)Prog Brain Res,172,141‑153;Meltzer,H.Y.(2013)Annu Rev Med 64,393‑
406);另有研究证实,皮质锥体神经元的5‑HT2A受体调节通路对介导致幻剂引发的信号转
导和行为反应至关重要(Gonzalez‑Maeso J,et al.,(2009)Trends Neurosci,32:225‑
232),提示5‑HT2A受体在治疗多种神经退行性疾病幻觉症状方面的作用。
已很少应用,现行药物更多着眼于“非典型”抗精神病药物(Prim Cre Companion J Clin
Psychiatry.(2007)9(6):444‑54)。但是该第二代抗精神病药物皆有广谱受体活性,这些化
合物作为激动剂、竞争性拮抗剂或反向激动剂等方式调节多种单胺能受体如5‑HT能、多巴
胺能、肾上腺素能、毒蕈碱或组胺能受体,这种广谱调节很有可能是造成镇静异常、运动机
能异常、二型糖尿病等副作用的原因。大多数抗精神病药物都具有多巴胺D2受体拮抗作用,
现已证明与锥体外系副作用相关(Strange PG.(2001)Pharmacol Rev,53(1):119‑33;
Tuppurainen H,et a1.,(2010)Nord J Psychiatry,64(4):233‑8;Sykes DA,et al.,
(2017)Nat Commun,8(1):763)。因此,开发选择性5‑HT2A受体拮抗剂或反向激动剂,尤其是
具有选择性高的,和/或无多巴胺D2受体结合活性等特性,对于推动抗神经精神疾病药物发
展有至关重要的作用,这类化合物在治疗疾病同时能够避免由于无选择性受体相互作用导
致的诸多副作用。
发明内容
克尔规则。
子,所述杂原子选自氮、氧或硫,并包括氮或硫的任何氧化形式和碱性氮的任何季铵化形
式。
所述环为苯环时,取代位置为相对于主链取代位置的邻、间和/或对位,或2,3,4,5或6位(相
对于苯环连接主链位置);所述环为含氮5元或6元环时,取代位置可能为环N位置,或环氮位
置的邻、间或对位,或2,3,4或5位等。
酸和高氯酸等,或者与有机酸如乙酸,草酸,马来酸、酒石酸,柠檬酸,琥珀酸或丙二酸等形
成的盐,或者通过使用诸如离子交换等本领域的其他方法形成的盐。其他药学上可接受的
盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸
盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊丙酸盐、葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙
磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、氢碘酸
盐、2‑羟基乙磺酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲
磺酸盐、2‑萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸
盐、3‑苯基丙酸盐、磷酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰
酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。
疗。
穴状化合物标记的抗IP1单抗和d2标记的IP1。如果化合物表现出EC50≤1μM,认为在以上分
析中测试的化合物具有5HT2A受体抑制活性。本发明优选的化合物具有EC50≤150nM,更优选
的化合物具有EC50≤50nM,最优选化合物具有EC50≤30nM。
5HT2B和/或5HT2C的选择性,降低的心脏毒性,和/或,提高的代谢稳定性。
氢钠、亚硫酸钠、丁羟基茴香醚等。所述pH调节剂例如:盐酸、氢氧化钠、柠檬酸、酒石酸、
Tris、乙酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠等。所述防腐剂例如:对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲
酸乙酯、间甲酚、苯扎氯铵等。所述润滑剂例如:硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉等。所述崩解剂
例如:淀粉、甲基纤维素、黄原胶、交联羧甲基纤维素钠等。
70%。
内、皮下或肌肉内的途径注射给药。所有使用的剂型形式都是药学领域普通技术人员所熟
知的。
储库或储液器。
以单一日剂量施用,每天给药一次、每两天给药一次、每三天给药一次、每四天给药一次,或
者总日剂量以每天两次、三次或四次的分开剂量施用。剂量可以施用一次或多次,施药时间
可以单日至几个月或更长时间。式I化合物、式IA化合物或其药学上可接受的盐,溶剂化物,
或立体异构体的用药量为0.01‑100mg/kg/天,优选为0.1‑10mg/kg/天,例如为0.5mg/kg/
天,1mg/kg/天、2mg/kg/天、5mg/kg/天等等。
立体异构体。
过注射,包括皮下的、真皮内的、肌内的、静脉内的、动脉内的;通过植入储库或储液器。
等);水合氯醛;丁螺环酮;吩噻嗪类(例如:氯丙嗪、硫利达嗪、氟奋乃静等);硫杂蒽类(例
如:替沃噻吨);丁酰苯类(例如:氟哌啶醇);氯氮平;利哌利酮;三环类抗抑郁药(例如:丙咪
嗪、多塞平、去甲替林、阿米替林等);杂环类抗抑郁药(例如:阿莫沙平、马普替林、曲唑酮、
安非他酮、文法拉辛等);选择性5‑HT重摄取抑制剂(例如:氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、西酞
普兰、氟伏沙明等);单胺氧化酶抑制剂(例如:苯乙肼、吗氯贝胺等);氯胺酮;米氮平等。
具体实施方案
丁啶‑3‑基)甲胺得到棕色油状中间体(H001‑057)(500mg,44%产率)。LCMS:[M+1]209.2。
+
1]223.2。
+
1]223.2。
哌啶‑4‑基)甲胺得到棕色油状中间体(H002‑070)(1.5g,75%产率)。LCMS:[M+1]255.3。
温下搅拌1小时。加入冰水(20毫升),用DCM(20mL×2)提取混合物。将有机相用盐水清洗,用
Na2SO4干燥,在真空下过滤和浓缩,得油状产物(45‑1)(80mg,85%的产率)。
醋酸。混合物在室温下搅拌过夜。加入冰水(500m1),用10%(v/v)异丙醇/氯仿(500ml×4)
提取混合物。有机相用Na2SO4干燥,在真空条件下过滤和浓缩,得到无色油状中间体(45‑2)
+
(12.7g,产率65%)。LCMS:[M+1]223.4。
中。生成的混合物在40℃加热约10分钟。在真空下去除溶剂。粗产物高效液相色谱法进行纯
+
化。得到黄色固体compound#45(109mg,产率62%)。LCMS:[M+1]411.9。
+
到白色固体H001‑064(12mg,产率12%)。LCMS:[M+1]398.3。
色固体H001‑065(70mg,产率34%)。LCMS:[M+1]412.3。
色固体H001‑066(45mg,产率22%)。LCMS:[M+1]412.3。
+
(0.15mmol)得到白色固体H002‑074(28mg,产率42%)。LCMS:[M+1] 444.3。
+
+1]241.3。
1
固体H002‑075(32mg,50%产率)。H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ11.61(s,1H),7.11(td,J
=8.8,8.3,6.1Hz,1H),6.86‑6.75(m,3H),6.73(d,J=2.1Hz,1H),6.66(d,J=8.3Hz,1H),
4.74(s,1H),4.34(s,2H),4.22(s,2H),4.20‑4.09(m,2H),3.59(d,J=11.6Hz,2H),2.87(s,
2H),2.78(s,3H),2.77‑2.63(m,2H),2.13(d,J=13.0Hz,2H),2.03‑1.85(m,4H)。LCMS:[M+
+
1]430.2。
+
(0.6g,产率63%)。LCMS:[M+1]241.3。
+
(0.15mmol)得到白色固体H002‑080(7mg,产率11%)。LCMS:[M+1]430.2。
+
(0.15mmol)得到白色固体H002‑083(9mg,产率13%)。LCMS:[M+1]430.2。
竞争性免疫检测,使用了铽穴状化合物标记的抗IP1单抗和d2标记的IP1。细胞产生的IP1和
试剂盒所提供的标记了d2的IP1竞争抗IP1抗体的抗原结合位点,当铽标记抗IP1抗体与d2
标记的IP1结合后,会发生能量共振转移,从而产生信号,随细胞内IP1产生增多,游离的IP1
与抗体结合增多,信号逐渐减小。
invitrogen,R75807),通过用pFRT//acZeo2转染CHO细胞并选择Zeocin 抗性克隆产生Flp‑
TM TM
In ‑CHO细胞系。Flp‑In ‑CHO细胞系于加有10%FBS(Hyclone)+1×Penicilin‑
Streptomycin(15140‑122,Gibco)的Ham's F‑12K完全培养基(Hyclone)中培养,之后以人
HTR2A基因(Human HTR2A,GeneBank,NM_000621)稳定转染得到Flp‑In‑CHO‑5HT2A细胞。稳
定转染的细胞系培养于加有10%FBS(Hyclone)+1×Penicilin‑Streptomycin+800μg/ml
Hygromycin B(ant‑hg‑5,Invivogen)的Ham's F‑12K完全培养基(Hyclone)中。为验证化合
物活性,Flp‑In‑CHO‑5HT2A稳定细胞系在37℃,5%CO2条件下,于384孔板中培养(7.5K)20
小时。化合物用Ham's F‑12K培养基稀释成不同浓度,与新鲜培养基一同以100μl/孔更换培
养过夜的培养基,细胞用化合物处理30分钟后加入5‑HT在37摄氏度下培养45分钟,之后顺
序加入裂解检测缓冲液、IP1‑d2和IP1‑Ab室温培养1小时后在Envision上读板(HTRF模块)。
ER10058 15
ER10216 8
ER10217 7.5
ER10220 26
ER10223 20
辨荧光)的竞争性免疫检测,使用了铽穴状化合物标记的抗IP1单抗和d2标记的IP1。细胞产
生的IP1和试剂盒所提供的标记了d2的IP1竞争抗IP1抗体的抗原结合位点,当铽标记抗IP1
抗体与d2标记的IP1结合后,会发生能量共振转移,从而产生信号,随细胞内IP1产生增多,
游离的IP1与抗体结合增多,信号逐渐减小。
invitrogen,R75807),通过用pFRT//acZeo2转染CHO细胞并选择Zeocin 抗性克隆产生Flp‑
TM TM
In ‑CHO细胞系。Flp‑In ‑CHO细胞系于加有10%FBS(Gibco)+1×Penicilin‑
Streptomycin(15140122,Gibco)的Ham's F‑12K完全培养基(Hyclone)中培养,之后以人
HTR2B/2CvGv基因(Human HTR2B,GeneBank,NM_000867;Human HTR2C(5‑HT2CvGv),GeneBank,
NM_000868)稳定转染得到Flp‑In‑CHO‑5HT2B/2CvGv细胞。稳定转染的细胞系培养于加有
10%FBS(Gibco)+1×Penicilin‑Streptomycin+800μg/ml Hygromycin B(ant‑hg‑5,
Invivogen)的Ham's F‑12K完全培养基(Hyclone)中。为验证化合物活性,Flp‑In‑CHO‑
5HT2B/2CvGv稳定细胞系在37摄氏度,5%CO2条件下,于384孔板中培养(5K,7.5K)20小时。化
合物用Ham's F‑12K培养基稀释成不同浓度,与新鲜培养基一同以100μl/孔更换培养过夜
的培养基,细胞用化合物处理30分钟后加入5‑HT在37摄氏度下培养45分钟,之后顺序加入
裂解检测缓冲液、IP1‑d2和IP1‑Ab室温培养1小时后在Envision上读板(HTRF模块),计算化
合物对细胞5‑HT2B/2CvGv受体的抑制率。
ER10058 199× 19×
ER10217 1000× 28×
胞系完成实验。在心肌中,hERG编码的钾通道介导一种延迟整流钾电流(IKr),Ikr抑制是药
物导致QT间期延长最重要的机制。hERG因其特殊的分子结构,其功能缺失或药物抑制都会
影响心脏动作电位复极过程并会引起QT间期延长,同时可能诱发尖端扭转性室性心动过
速,导致心律失常。
与膜蛋白结合的放射性配体,烘干过滤板后加入闪烁液,并在Microbeta上检测同位素信号
(CPM)。信号越高代表检测化合物与hERG膜蛋白结合能力越弱。
使用PerkinElmer细胞收集器将孵育后的hERG膜蛋白转移至GF/B板(600517,PerkinElmer)
上,使用冲洗缓冲液(20mmol/LHEPES(PH7.4)(Sigma‑H3375);10mmol/L氯化钾(Sigma‑
P9333);1mmol/L氯化镁(Sigma‑449172),4℃保存)清洗5次(4℃,每次0.4mL)。随后将GF/B
板于50℃烘箱内烘烤30min,使GF/B板充分干燥后,底部封板膜(6005199,PerkinElmer)封
闭GF/B板底部,向板子每孔加入50μL闪烁液20(6013621,PerkinElmer)后用顶部封板膜
(6005250,PerkinElmer)封板,Microbeta上读板检测放射性信号。
ER10152 91
ER10058 66
ER10217 53
S9组分等亚细胞成分。这些亚细胞成分是通过一系列的均质化和超速离心的方式从肝脏中
制备出来。
微粒体富含细胞色素P450(CYP)和黄素单加氧酶(FMO)。此外,一些II相酶(如某些苷葡糖苷
酸转移酶UGT亚型和环氧水解酶EH)也在微粒体中存在。微粒体可用于研究UGT的活性,然
而,微粒体膜限制UGT基质和/或辅助因子的进入。通过添加MgCl2以及成孔抗生素(如丙甲
菌素)可以达到最佳UGT活性。这些组件使得微粒体网络中的葡萄糖醛酸产物和辅助因子
UDPGA能够有效转运。个体或组合的供者肝微粒体可用于进行代谢相关研究。组合的供者可
以代表人群平均水平或特定研究因素,如年龄,BMI或特定CYP亚型的限制能力。本研究的目
的是评定化合物在人肝微粒体中的代谢稳定性。
(Sigma,Cat.No.U6751)辅因子。将称量好的NADPH粉末和UDPGA粉末溶解在MgCl2溶液中配
置25mM UGPDA和10mM NADPH的工作液。准备八块96孔板(T0,T5,T10,T20,T30,T60,NFC60,
BLANK),使用Apricot自动液体工作站(PP‑550DS,USA),每孔加入10μL化合物工作液(T0,
T5,T10,T20,T30,T60,NFC60),T0板加入冷乙腈终止液,随后向八块板中加入80μL/孔人肝
微粒体,37度预孵育10分钟。NCF60板加入10μL/孔100mM磷酸钾缓冲液放入37度水浴锅中孵
育计时1小时。其他板在孵育结束后加入10μL/孔NADPH+UDPGA辅因子组合,按照每板设定做
不同时间孵育。孵育结束后加入300μL/孔冷乙腈终止反应,封板震荡10分钟后4000rpm,4度
离心20分钟。取100μL/孔离心上清液加入到已添加300μL/孔HPLC水的新板中,混匀递交LC‑
MS/MS生物分析。
标的峰面积比值×100%。
ER10152 23.6
ER10058 21.6
ER10216 22
ER10217 13
ER10220 22