一种快速高效获得多花火球花愈伤组织的方法

摘要

本发明公开了一种快速高效获得多花火球花（Scadoxusmultiflorus subsp.multiflorus）愈伤组织的方法，具体如下：攫取3‑4年生多花火球花的球茎，选取侧生地下茎顶端3‑8cm的茎段洗净，去掉顶端茎段0.5‑1cm长的尖端，剩余部分切成0.5‑0.8cm长的小段作为外植体，在愈伤诱导培养基MS+2.4‑D 0.45～0.48 mg/L+NAA0.05～0.08 mg/L中培养，获取愈伤组织。与分株繁殖以及播种繁殖相比，本方法具有不破坏母株、一次产生幼苗多、易于规模化生产等优点，适合大量扩繁。

权利要求

1.一种快速高效获得多花火球花（Scadoxus multiflorus subsp. multiflorus）愈伤组织的方法，其特征在于，攫取3‑4年生多花火球花（Scadoxus multiflorus subsp. multiflorus）的球茎，选取侧生地下茎顶端3‑8cm的茎段洗净，去掉顶端茎段0.5‑1cm长的尖端，剩余部分切成0.5‑0.8cm长的小段作为外植体，在愈伤诱导培养基MS + 2，4‑D 0.45～0.48 mg/L + NAA0.05～0.08 mg/L中暗培养30‑90天，温度20‑25℃，获取愈伤组织。

2.根据权利要求1所述的快速高效获得多花火球花愈伤组织的方法，其特征在于，所述的愈伤诱导培养基为MS + 2，4‑D 0.45 mg/L + NAA0.05 mg/L。

说明书

一种快速高效获得多花火球花愈伤组织的方法

技术领域

[0001] 本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种快速高效获得多花火球花(Scadoxusmultiflorus subsp.multiflorus)愈伤组织的方法。

背景技术

[0002] 多花火球花(Scadoxusmultiflorus subsp.multiflorus)原产于非洲撒哈拉沙漠以南的广大地区，从塞内加尔到索马里，从埃塞俄比亚到南非都有分布。

[0003] 它是一种多年生草本植物，高15‑120cm，具球茎，叶柄可形成高5‑60cm的假茎。叶披针形至倒卵形，锐尖至渐尖或钝圆，叶基渐狭到近心形，叶大小差异很大；先花后叶。花葶
高12‑75cm，假鳞茎和花葶通常有褐红色到暗紫色斑点。总苞片下垂或早枯萎，披针形至线
形，长可达6cm，宽小于1.5cm，无色或略带红色。花序半球形到球形，10‑200朵花。花柄长1‑
6.5cm，花被、花丝和花柱深红色，凋谢时为更粉红的颜色。花被筒圆柱形，长0.4‑2.6cm。花
丝丝状，长1.5‑4.2cm；花药1‑3mm，红色或黄色。浆果直径0.5‑1cm。生长在潮湿的、阴凉的生
境，其原产于地中海型气候的森林、灌丛，以及潮湿低地森林中。生长适温为16～22℃，怕炎
热，畏严寒，冬季室温应保持在5℃以上。极易遭受食叶害虫危害。

[0004] 多花火球花叶形优美，株形俊秀，花色艳丽，花形奇特，先花后叶，是十分优良的盆栽花卉和景观绿化植物。在非洲，种植物用作爱情的魅幻剂，男人在见他们的爱人之前，通
常把它当做一种净化药物，他们相信它会使他们更有魅力。此外，其叶片和球茎都富含有剧
毒的生物碱，球茎可以用来治疗水肿、疥疮、咳嗽等疾病，也可以用来制作鱼毒和箭毒；叶片
则不能为牲畜食用，否则中毒。

[0005] 我国有少量的引种栽培，但是远远满足不了社会生产的实际需求，大量扩繁显得尤为重要。目前，全球对此物种常采用的扩繁方法是播种繁殖和分株(分球)繁殖，但这两种
繁殖方式繁殖数量极为有限，大量采挖野外植株则不可避免，野外种群可能会进入危险的
状态。为了避免野外采挖，以及能满足人们的需求，开发多花火球花(Scadoxusmultiflorus 
subsp.multiflorus)的大规模繁殖方法显得尤为重要。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于提供一种快速高效获得多花火球花(Scadoxusmultiflorus subsp.multiflorus)愈伤组织的方法，该方法以球茎所生的侧生地下茎近顶端的茎段为外
植体，通过筛选的愈伤诱导培养基可以在较短时间获得大量的愈伤组织，使其可以进行大
规模繁殖。

[0007] 为了实现上述目的，本发明采用了以下技术措施：

[0008] 一种快速高效获得多花火球花(Scadoxusmultiflorus subsp.multiflorus)愈伤组织的方法，包括以下步骤：攫取3‑4年生多花火球花(Scadoxusmultiflorus 
subsp.multiflorus)的球茎，选取侧生地下茎顶端3‑8cm的茎段洗净，去掉顶端茎段0.5‑
1cm长的尖端，剩余部分切成0.5‑0.8cm长的小段作为外植体，在愈伤诱导培养基MS+2.4‑D 
0.45～0.48mg/L+NAA0.05～0.08mg/L中培养，获取愈伤组织。

[0009] 优选地，所述的愈伤诱导培养基为MS+2.4‑D 0.45mg/L+NAA0.05 mg/L。

[0010] 优选地，培养条件为暗培养，温度20‑25℃。

[0011] 与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果：

[0012] 1、不同组织、不同部位的细胞，其脱分化的能力不同，组培效果也千差万别。本发明采用侧生地下茎近顶端的茎段，该组织属于叶原基，其组织分生能力强，脱分化潜力大，
易产生较好的效果。相比较而言，直接采用鳞茎作为外植体，很难得到愈伤组织。

[0013] 2、愈伤诱导培养基的种类和成分，以及各成分的含量，对诱导的效果起着决定性作用，本案例(见表1)采用MS+2.4‑D+NAA作为愈伤诱导培养基，能十分顺利产生愈伤。

[0014] 3、与分株繁殖以及播种繁殖相比，本方法具有不破坏母株、一次产生幼苗多、易于规模化生产等优点，适合大量扩繁。

附图说明

[0015] 图1为多花火球花侧生地下茎的示意图。

[0016] 图2为侧生地下茎近顶端的茎段作为外植体诱导后的愈伤组织。

[0017] 图3为芽的分化，把愈伤组织转入培养基MS+TDZ 0.1mg/L+6‑BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L继续培养，促使愈伤组织向芽分化。

[0018] 图4为芽的伸长，使用MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L的培养基培养芽，使芽向“茎”过度、伸长。

[0019] 图5为根的诱导，地上部分形成之后，将其转入培养基MS+IBA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L，促使根形成。

[0020] 图6为出苗，当完整的根形成后，即可出苗，再使用椰糠和泥潭的混合物(经过高温消毒)作栽培基质炼苗。

具体实施方式

[0021] 攫取3‑4年生多花火球花(Scadoxus multiflorus subsp.multiflorus)成年植株地下部分，选取从母株生长出来但没有冒出地面的分枝(侧生地下茎)，如图1所示。选取分
枝顶端3‑8cm长的茎段，如图1黄色箭头所示，洗净。然后去掉顶端约1cm长的茎段先端，剩下
的部分切成0.5‑0.8cm长的小段，即得到外植体，也就是表1中所述的侧生地下茎。与此同
时，取叶片组织(包括叶尖、叶缘和叶脉)，切成0.5‑0.8cm长的小方块，作为叶的外植体；取
假茎中段，切成0.5‑0.8cm长的小方块，作为假茎的外植体；取根先端1‑3cm，切成0.5‑0.8cm
长的小段，作为根的外植体；剥除已消毒的球茎外层，只留下“芯”的部分，将此部分切成
0.5‑0.8cm长的小方块，作为球茎的外植体。

[0022] 将所取外植体消毒后分别接入方案一、方案二、方案三所述的愈伤诱导培养基，暗培养，温度为20‑25℃，培养30‑90天。结果显示，只有采用侧生地下茎的外植体，在方案一的
培养基(MS+2.4‑D 0.45mg/L+NAA0.05 mg/L)中进行诱导才产生愈伤组织。

[0023] 将侧生地下茎作为外植体诱导的愈伤组织在不同的培养基进行芽的分化培养、芽伸长培养、根诱导培养，如表2所示。愈伤组织产生后，在接下来的组培步骤都能产生良好反
应，最终都能得到幼苗。

[0024] 所以，最终确定侧生地下茎近顶端的茎段是唯一有效的外植体，愈伤诱导培养基MS+2.4‑D 0.45mg/L+NAA0.05 mg/L是最优的培养基。

[0025] 表1.不同外植体产生愈伤组织情况

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[0028] 表2.不同配方成苗情况

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[0030] 附注：

[0031] 1、6BA：6‑苄基氨基嘌呤；

[0032] 2、IBA：吲哚乙酸；

[0033] 3、TDZ：噻重氮苯基脲；

[0034] 4、NAA：萘乙酸。