MoSe2@Fe纳米复合材料荧光-比色双信号检测Fe3+和GSH

摘要

本发明公开了一种基于MoSe2@Fe纳米复合材料的荧光‑比色双信号传感器检测Fe3+和GSH的方法，利用加入Fe3+，Fe3+抑制了MoSe2@Fe的荧光强度，再加入GSH后材料的荧光强度有所恢复，构建MoSe2@Fe纳米复合材料的荧光传感器，通过荧光光度计测定的荧光强度建立标准曲线来检测Fe3+和GSH浓度；利用TMB作为比色使用的氧化还原指示剂，在加入Fe3+后，Fe3+增强纳米复合材料的酶活性，使蓝色加深；接着加入GSH，GSH可以直接还原oxTMB，使得蓝色变浅，从而可视化检测Fe3+和GSH的浓度。本发明具有省时省力，具有检测限低，准确性好，简单快速检测的优点。

权利要求

3+

1.一种基于MoSe2@Fe纳米复合材料的荧光‑比色双信号传感器检测Fe 和GSH的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：基于一锅水热合成的MoSe2@Fe纳米复合材料；

S11：将Fe(NO3)3·9H2O，聚乙二醇6000，钼酸铵，亚硒酸钠和谷胱甘肽溶解在水溶液中以形成均匀溶液；根据一锅水热法将混合物转移到不锈钢高压釜中并在180℃加热12h；冷却至室温后，用0.22μm的膜过滤以除去大颗粒；

S12：滤液用500MWCO透析膜透析48小时；最终，通过冷冻干燥获得了MoSe2@Fe纳米复合材料的棕色粉末，并储存在冰箱中；

步骤2：验证MoSe2@Fe纳米复合材料过氧化酶模拟物的活性，使用TMB作为底物，通过TMB氧化的特征吸收峰确定活性；

只存在H2O2‑TMB时，溶液透明，没有明显吸收峰；在单独的H2O2或TMB作为底物的情况下，加入MoSe2@Fe纳米复合材料，溶液颜色是没有明显变化的；说明MoSe2@Fe纳米复合材料与H2O2不会产生颜色的改变，也不具有氧化酶的模拟活性；

同时加入H2O2和TMB作为反应底物的溶液中，MoSe2@Fe纳米复合材料使得溶液发生肉眼可见的蓝色改变，在652nm处产生了一个很强的紫外吸收峰；可看出MoSe2@Fe纳米复合材料的发射波长为370nm，吸收波长为450nm，并且荧光强度是非常高的；

步骤3：MoSe2@Fe纳米复合材料的酶动力学分析：

将100μL TMB溶液，100μL H2O2溶液和20μLMoSe2@Fe均匀溶液添加到2.78mL乙酸缓冲液中，反应10分钟后，通过UV‑Vis分光光度计记录在652nm处的吸光度，探究温度和pH对酶活性的影响；测得在pH为3.2、温度为45℃时酶活性最优；

在pH为3.2、温度为45℃环境下测量不同浓度TMB的稳定时间来计算MoSe2@Fe的动力学参数；将100μL TMB和20μL MoSe2@Fe添加到2.78mL乙酸缓冲液中，通过记录混合反应溶液在652nm下每5分钟的吸光度值来评估MoSe2@Fe的动力学；通过Michaelis‑Menten方程计算动力学参数：1/V＝(KM/Vmax)(1/[S]+1/KM)，式中[S]表示底物浓度；Vmax为最大反应速率；KM为米氏常数；

步骤4：构建MoSe2@Fe纳米复合材料的荧光传感器，通过荧光光度计测定的荧光强度建3+

立标准曲线来检测Fe 和GSH浓度：

3+

常温下，将不同浓度的Fe 溶液与最佳浓度下的MoSe2@Fe均质溶液等比例混合摇匀，反应10min后，使用荧光分光光度计在370nm激发下检测荧光光谱，在445nm处得到发射光谱；

3+

将一定浓度的Fe 溶液与最佳浓度下的MoSe2@Fe溶液等比例混合摇匀，反应10min后，使用荧光分光光度计在370nm激发下检测荧光光谱，在445nm处得到发射光谱，加入不同浓度的谷胱甘肽溶液，继续反应10min，使用荧光分光光度计在370nm激发下检测荧光光谱，在445nm处得到发射光谱；

3+ 3+

根据测得的光谱绘制检测Fe 和GSH浓度的荧光光谱图，以及以Fe 和GSH浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标的标准曲线；

3+

相同实验环境下，测量待测样品的荧光强度的变化来量化Fe 和GSH的实际浓度；

步骤5：构建MoSe2@Fe纳米复合材料的比色传感器，测得比色传感器的紫外吸收光谱图和标准曲线：将100μL TMB溶液、100μLH2O2溶液和20μL MoSe2@Fe溶液加入2.78mL醋酸缓冲液中，反3+

应一段时间后，加入不同浓度的Fe ，继续反应5min，紫外可见分光光度计记录在652nm处的吸光度，加入不同浓度的谷胱甘肽溶液，继续反应5min，紫外‑可见分光光度计记录在652nm3+ 3+

处的吸光度；以Fe 浓度为横坐标，吸光度ΔA为纵坐标，得到Fe 标准曲线；以GSH浓度为横坐标，吸光度ΔA为纵坐标，得到GSH标准曲线；

3+

相同实验环境下，测量待测样品在652nm处的吸光度的变化实现对Fe 和GSH的浓度的定量。

说明书

3+

MoSe2@Fe纳米复合材料荧光‑比色双信号检测Fe 和GSH

技术领域

[0001] 本发明属于生物分析检测技术领域，尤其涉及一种基于MoSe2@Fe纳米复合材料的3+
荧光‑ 比色双信号传感器检测Fe 和GSH的方法。

背景技术

[0002] 铁离子(Fe3+)是一个人体不可缺少的微量元素，是血红素和铁硫蛋白的重要组成部分，在酶催化、氧气输送、新陈代谢、转录调控等众多生理活动扮演着重要角色。研究已经证明，人体内的铁离子缺乏或过剩都会导致诸多问题，如贫血、心脏衰竭和组织损伤。高效、3+ 3+
灵敏的检测Fe 的方法可以更迅速地发现生物体内Fe 含量的异常变化，从而有效地诊断
3+
和治疗疾病，在环境和食品检测方面也非常重要。目前为止，Fe 检测方法已经比较成熟，主要有电感耦合等离子质谱法，原子吸收光谱法，电化学法。这些检测方法具有较高的精密度和准确性，但通常需要复杂的操作过程、繁琐的样品处理和昂贵的设备，难以适应快速检测。

[0003] 谷胱甘肽(GSH)由谷氨酸，半胱氨酸(Cys)和甘氨酸组成，是一种重要的细胞内三肽，广泛存在于植物，哺乳动物，真菌和一些原核生物中。GSH作为低分子量生物硫醇能够清除活性氧物质，抗毒素和抗致突变物，在维持细胞系统正常的氧化还原过程方面发挥着至关重要的作用，也是许多细胞功能中非常重要的介质。同时，GSH作为细胞内最丰富的小分子巯基，不仅在细胞的保护和解毒功能中起着举足轻重的作用，而且在许多生物过程中也起着非常重要的调节作用。更为重要的是作为内源性抗氧化剂之一，其异常水平与心血管疾病，肝损伤等密切相关。目前高效液相色谱法，电化学法和等多种分析方法已应用于GSH的测定。然而，这些提出的分析方法都要使用复杂和昂贵的仪器，长时间的样品处理和复杂的反应过程，这些缺点都不利于在实际中的应用。目前虽已报道许多单一化学信号传感器3+
用于检测Fe 和GSH，但两种信号结合的化学传感器模型比单一信号化学传感器检测结果更加可靠、高效，如荧光‑比色、荧光‑磁共振、荧光‑电化学、比色‑光热等化学信号双模传感器
3+
受到诸多报道。因此，开发一种简单、经济及省时的双信号检测Fe 和GSH含量的方法具有重要的意义。

发明内容

[0004] 为解决上述问题，以及构建荧光‑比色双信号传感器，用于检测食品中的Fe3+和3+
GSH。本发明提供一种基于MoSe2@Fe纳米复合材料的荧光‑比色双信号传感器检测Fe 和GSH的方法。

[0005] 本发明的MoSe2@Fe纳米复合材料采用以下方法制备：

[0006] 步骤1：将Fe(NO3)3·9H2O，聚乙二醇6000，钼酸铵，亚硒酸钠和谷胱甘肽溶解在水溶液中以形成均匀溶液；根据一锅水热法将混合物转移到不锈钢高压釜中并在180℃加热12h；冷却至室温后，用0.22μm的膜过滤以除去大颗粒。

[0007] 步骤2：滤液用500MWCO透析膜透析48小时；最终，通过冷冻干燥获得了MoSe2@Fe 纳米复合材料的棕色粉末，并储存在冰箱中。

[0008] 本发明的基于MoSe2@Fe纳米复合材料的荧光‑比色双信号传感器检测Fe3+和GSH的方法，包括以下步骤：

[0009] 步骤1：验证MoSe2@Fe纳米复合材料过氧化酶模拟物的活性，使用TMB作为底物，通过TMB氧化的特征吸收峰确定活性。

[0010] 只存在H2O2‑TMB时，溶液透明，没有明显吸收峰；在单独的H2O2或TMB作为底物的情况下，加入MoSe2@Fe纳米复合材料，溶液颜色是没有明显变化的；说明MoSe2@Fe纳米复合材料与H2O2不会产生颜色的改变，也不具有氧化酶的模拟活性。

[0011] 同时加入H2O2和TMB作为反应底物的溶液中，MoSe2@Fe纳米复合材料使得溶液发生肉眼可见的蓝色改变，在652nm处产生了一个很强的紫外吸收峰；可看出MoSe2@Fe纳米复合材料的发射波长为370nm，吸收波长为450nm，并且荧光强度是非常高的。

[0012] 步骤2：MoSe2@Fe纳米复合材料的酶动力学分析。

[0013] 将100μL TMB溶液，100μL H2O2溶液和20μLMoSe2@Fe均匀溶液添加到2.78mL乙酸缓冲液中，反应10分钟后，通过UV‑Vis分光光度计记录在652nm处的吸光度，探究温度和 pH对酶活性的影响；测得在pH为3.2、温度为45℃时酶活性最优。

[0014] 在pH为3.2、温度为45℃环境下测量不同浓度TMB的稳定时间来计算MoSe2@Fe的动力学参数；将100μL TMB和20μL MoSe2@Fe添加到2.78mL乙酸缓冲液中，通过记录混合反应溶液在652nm下每5分钟的吸光度值来评估MoSe2@Fe的动力学；通过Michaelis‑Menten 方程计算动力学参数：1/V＝(KM/Vmax)(1/[S]+1/KM)，式中[S]表示底物浓度；Vmax为最大反应速率；KM为米氏常数。

[0015] 步骤3：构建MoSe2@Fe纳米复合材料的荧光传感器，通过荧光光度计测定的荧光强3+
度建立标准曲线来检测Fe 和GSH浓度。

[0016] 常温下，将不同浓度的Fe3+溶液与最佳浓度下的MoSe2@Fe均质溶液等比例混合摇匀，反应10min后，使用荧光分光光度计在370nm激发下检测荧光光谱，在445nm处得到发射3+
光谱；将一定浓度的Fe 溶液与最佳浓度下的MoSe2@Fe溶液等比例混合摇匀，反应10min 后，使用荧光分光光度计在370nm激发下检测荧光光谱，在445nm处得到发射光谱，加入不同浓度的谷胱甘肽溶液，继续反应10min，使用荧光分光光度计在370nm激发下检测荧光光谱，在445nm处得到发射光谱。

[0017] 根据测得的光谱绘制检测Fe3+和GSH浓度的荧光光谱图，以及以Fe3+和GSH浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标的标准曲线。

[0018] 相同实验环境下，测量待测样品的荧光强度的变化来量化Fe3+和GSH的实际浓度。

[0019] 步骤4：构建MoSe2@Fe纳米复合材料的比色传感器，测得比色传感器的紫外吸收光谱图和标准曲线。

[0020] 将100μL TMB溶液、100μLH2O2溶液和20μL MoSe2@Fe溶液加入2.78mL醋酸缓冲液3+
中，反应一段时间后，加入不同浓度的Fe ，继续反应5min，紫外可见分光光度计记录在652 nm处的吸光度，加入不同浓度的谷胱甘肽溶液，继续反应5min，紫外‑可见分光光度计记录
3+ 3+
在652nm处的吸光度；以Fe 浓度为横坐标，吸光度ΔA为纵坐标，得到Fe 标准曲线；以 GSH浓度为横坐标，吸光度ΔA为纵坐标，得到GSH标准曲线。

[0021] 相同实验环境下，测量待测样品在652nm处的吸光度的变化实现对Fe3+和GSH的浓度的定量。

[0022] 本发明的有益技术效果为：

[0023] 本发明首次提供的MoSe2@Fe纳米复合材料合成方法采用一步水热法，反应条件温和、绿色、简便；本发明的MoSe2@Fe纳米复合材料具有稳定光学性能和良好的水溶性；具有荧光发射峰和过氧化物模拟酶双重性质，可作为荧光和比色双信号探针直接检测Fe3+和GSH。

[0024] 本发明提供的MoSe2@Fe荧光和比色法双信号检测Fe3+和GSH的方法与传统检测方法相比，不需要昂贵的仪器和专业培训的人员来进行操作即可检测，同时具有省时省力，具有检测限低，准确性好，简单快速检测的优点。

附图说明

[0025] 图1为MoSe2@Fe纳米复合材料SEM图。

[0026] 图2为MoSe2@Fe纳米复合材料EDS能谱图。

[0027] 图3为MoSe2@Fe‑TMB‑H2O2、MoSe2@Fe‑TMB、MoSe2@Fe‑H2O2、TMB‑H2O2的紫外相对吸收曲线图。

[0028] 图4为MoSe2@Fe荧光激发和发射光谱。

[0029] 图5为Fe3+和GSH对MoSe2@Fe纳米复合材料荧光强度的影响(图中B为MoSe2@Fe)。

[0030] 图6为Fe3+和GSH对MoSe2@Fe纳米复合材料氧化TMB，测定其吸光度的影响(图中 A为MoSe2@Fe+TMB+H2O2)。

[0031] 图7为温度对MoSe2@Fe复合材料的酶动力学的影响。

[0032] 图8为pH值对MoSe2@Fe复合材料的酶动力学的影响。

[0033] 图9为不同浓度H2O2的情况下酶反应速率。

[0034] 图10为不同浓度TMB的情况下酶反应速率。

[0035] 图11为不同浓度H2O2的情况下酶反应速率的双倒数曲线。

[0036] 图12为不同浓度TMB的情况下酶反应速率的双倒数曲线。

[0037] 图13为MoSe2@Fe荧光传感器检测Fe3+的荧光光谱图和标准曲线。

[0038] 图14为MoSe2@Fe荧光传感器检测GSH的荧光光谱图和标准曲线。

[0039] 图15为MoSe2@Fe比色传感器检测Fe3+的紫外吸收光谱图和标准曲线。

[0040] 图16为MoSe2@Fe比色传感器检测GSH的紫外吸收光谱图和标准曲线。

[0041] 图17为MoSe2@Fe纳米复合材料对荧光测定Fe3+的选择性。

[0042] 图18为MoSe2@Fe纳米复合材料对荧光测定GSH的选择性。

[0043] 图19为MoSe2@Fe纳米复合材料对比色测定Fe3+的选择性。

[0044] 图20为MoSe2@Fe纳米复合材料对比色测定GSH的选择性。

具体实施方式

[0045] 下面结合附图和具体实施方法对本发明做进一步详细说明。

[0046] 本发明的MoSe2@Fe纳米复合材料采用以下方法制备：

[0047] 将Fe(NO3)3·9H2O，聚乙二醇6000，钼酸铵，亚硒酸钠和谷胱甘肽溶解在水溶液中以形成均匀溶液；根据一锅水热法将混合物转移到不锈钢高压釜中并在180℃加热12h；冷却至室温后，用0.22μm的膜过滤以除去大颗粒。滤液用500MWCO透析膜透析48小时；最终，通过冷冻干燥获得了MoSe2@Fe纳米复合材料的棕色粉末，并储存在冰箱中。

[0048] 制备的MoSe2@Fe纳米复合材料具有稳定光学性能和良好的水溶性，通过扫描电子显微镜(SEM)可以看出样品为大小不一的圆球状颗粒，球形表面均匀分布着大量不规则的颗粒物。圆球形颗粒结构为过氧化物模拟酶活性提供了较大的比表面积，增大了与后续反应底物的接触面积(如图1所示)。通过EDS图(图2)可以看出，制备的掺杂样品中除含有77.13％Mo 元素和21.06％Se元素外，还含有1.81％Fe元素。图2中未标注的峰为扫描电镜时喷金操作出现的Au元素峰，在检测灵敏度范围内，除Fe、Mo和Se对应的峰外，样品上没有其他杂质峰，说明Fe元素成功掺杂进合成的复合材料。

[0049] 本发明的基于MoSe2@Fe纳米复合材料的荧光‑比色双信号传感器检测Fe3+和GSH的方法，包括以下步骤：

[0050] 步骤1：验证MoSe2@Fe纳米复合材料过氧化酶模拟物的活性，使用TMB(3,3',5,5'‑四甲基联苯胺)作为底物，通过TMB氧化的特征吸收峰确定活性。

[0051] 图3可以很明显的看出，在单独的H2O2或TMB作为底物的情况下，加入MoSe2@Fe纳米复合材料，溶液颜色是没有明显变化的。这说明MoSe2@Fe纳米复合材料与H2O2不会产生颜色的改变，也不具有氧化酶的模拟活性。而在同时加入H2O2和TMB作为反应底物的溶液中，MoSe2@Fe纳米复合材料可使得溶液发生肉眼可见的蓝色改变，在652nm处产生了一个很强的紫外吸收峰。如图4所示，可以看出MoSe2@Fe纳米复合材料的发射波长为370nm，吸收波长为450nm，并且荧光强度是非常高的。

[0052] 我们利用复合材料本身所具有的荧光特性，在一定的反应条件下加入Fe3+，Fe3+抑制了 MoSe2@Fe的荧光强度，在加入GSH后材料的荧光强度有所恢复，通过检测反应液在最3+
佳激发波长下荧光强度的变化量(ΔA1、ΔA2)，达到量化Fe 和GSH的目的。我们利用3,3',
5,5'‑ 四甲基联苯胺(TMB)作为比色测定系统中广泛使用的氧化还原指示剂。MoSe2@Fe纳米复合材料作为过氧化物模拟酶，该底物在被H2O2氧化时产生蓝色氧化态TMB(ox‑TMB)。在
3+ 3+
加入Fe 后，Fe 增强纳米复合材料的酶活性，使蓝色加深；接着加入GSH，GSH可以直接还原
3+
oxTMB，使得蓝色变浅，从而达到可视化检测Fe 和GSH的目的(如图5、图6所示)。

[0053] 步骤2：MoSe2@Fe纳米复合材料的酶动力学分析。

[0054] 实验发现，发现MoSe2@Fe的类过氧化物酶催化活性取决于pH、温度、H2O2和TMB浓度。研究了温度(30‑60℃)和pH(2.0‑8.0)对酶活性的影响。

[0055] 将100μL TMB溶液，100μL H2O2溶液和20μLMoSe2@Fe均匀溶液添加到2.78mL乙酸缓冲液中，反应10分钟后，通过UV‑Vis分光光度计记录在652nm处的吸光度，探究温度 (30‑60℃)和pH(2.0‑8.0)对酶活性的影响；测得温度影响曲线如图7、pH影响曲线如图 8所示，可以看出，在pH为3.2、温度为45℃时酶活性最优。

[0056] 在pH为3.2、温度为45℃环境下测量不同浓度TMB的稳定时间来计算MoSe2@Fe的动力学参数；将100μL TMB和20μL MoSe2@Fe添加到2.78mL乙酸缓冲液中，通过记录混合反应溶液在652nm下每5分钟的吸光度值来评估MoSe2@Fe的动力学；通过Michaelis‑Menten 方程计算动力学参数：1/V＝(KM/Vmax)(1/[S]+1/KM)，式中[S]表示底物浓度；Vmax为最大反应速率；KM为米氏常数。不同浓度H2O2的情况下反应速率如图9所示，不同浓度TMB的情况下反应速率如图10所示，H2O2和TMB浓度与反应速率的双倒数曲线如图11和图12 所示。

[0057] 在一定浓度范围内，催化反应的初速率与底物的浓度呈米氏曲线模型。在较低浓度范围，反应的初速率与底物的浓度呈线性关系。在较高浓度时，随底物浓度的增加，反应速率增加缓慢，直到反应速率不再增加。利用朗伯比尔定律、米氏曲线双倒数曲线方程，计算出H2O2和TMB的Km值分别为0.209μM、1.182μM。

[0058] 步骤3：构建MoSe2@Fe纳米复合材料的荧光传感器，通过荧光光度计测定的荧光强3+
度建立标准曲线来检测Fe 和GSH浓度。

[0059] 常温下，将不同浓度的Fe3+溶液与最佳浓度下的MoSe2@Fe均质溶液等比例混合摇匀，反应10min后，使用荧光分光光度计在370nm激发下检测荧光光谱，在445nm处得到发射3+
光谱；将一定浓度的Fe 溶液与最佳浓度下的MoSe2@Fe溶液等比例混合摇匀，反应10min 后，使用荧光分光光度计在370nm激发下检测荧光光谱，在445nm处得到发射光谱，加入不同浓度的谷胱甘肽溶液，继续反应10min，使用荧光分光光度计在370nm激发下检测荧光光谱，在445nm处得到发射光谱。

[0060] 根据测得的光谱绘制检测Fe3+的荧光光谱图，以及以Fe3+浓度为横坐标，荧光强度3+
为纵坐标的标准曲线(如图13所示)，可以看出，荧光强度的变化与Fe 浓度在40至300μM之间呈线性关系。根据测得的光谱绘制检测GSH浓度的荧光光谱图，以及以GSH浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标的标准曲线(如图14所示)，可以看出，不同浓度GSH的添加能使得在
445nm处的荧光产生恢复，增强其荧光强度。荧光强度的变化与GSH浓度在15至50μM 之间呈线性关系。

[0061] 相同实验环境下，测量待测样品的荧光强度的变化来量化Fe3+和GSH的实际浓度。

[0062] 步骤4：构建MoSe2@Fe纳米复合材料的比色传感器，测得比色传感器的紫外吸收光谱图和标准曲线。

[0063] 将100μL TMB溶液、100μLH2O2溶液和20μL MoSe2@Fe溶液加入2.78mL醋酸缓冲液3+
中，反应一段时间后，加入不同浓度的Fe ，继续反应5min，紫外可见分光光度计记录在652 nm处的吸光度，加入不同浓度的谷胱甘肽溶液，继续反应5min，紫外‑可见分光光度计记录
3+ 3+
在652nm处的吸光度；以Fe 浓度为横坐标，吸光度ΔA为纵坐标，得到Fe 标准曲线(如图15
3+
所示)；可以从图中看出，所述吸光度的变化与Fe 浓度在0至13.3μM之间呈线性关系。以GSH浓度为横坐标，吸光度ΔA为纵坐标，得到GSH标准曲线(如图16所示)。随着GSH 浓度升高，溶液颜色变化由深蓝色至无色，表明GSH可明显抑制GSH的催化活性。吸光度的变化(ΔA 
652nm)与GSH浓度在0至33.3μM之间呈线性关系。

[0064] 相同实验环境下，测量待测样品在652nm处的吸光度的变化实现对Fe3+和GSH的浓度的定量。

[0065] 选择性是衡量新的检测方法是否实际检测应用的重要参数之一。为了评估选择3+ 2+ 2+ 2+ +
性，通过监测吸光度和荧光强度的变化，对该方法中检测Fe 时选用了Cu 、Sn 、Zn 、K 、
2+ 2+ 2+ + 2+ +
Mg 、 Mn 、Ca 、Na 、Pb 、Ag 等金属阳离子，检测GSH时选用了Arg、Met、Cys、Glu、Asn、 Ser、Gln、His、Lys等常见氨基酸，研究了不同干扰物的响应。

[0066] 在最佳反应条件下，测量了Fe3+的吸光度和荧光强度的变化，同时提供了其他金属2+ 2+ 2+ + 2+ 2+ 2+ + 2+ +
阳离子(包括Cu ，Sn ，Zn ，K ，Mg ，Mn ，Ca ，Na ，Pb ，Ag等)，测得结果如图17 和图19所示。

[0067] 添加了几种熟悉的氨基酸作为对照组(包括Arg，Met，Cys，Glu，Asn，Ser，Gln，His， Lys等)，以测定相同条件下相同参数的变化，同时确定谷胱甘肽的吸光度和荧光强度的变化。测得结果如图18和图20所示。