一种兼容微流控芯片的数字扫描光片显微成像系统转让专利
申请号 : CN202110613359.6
文献号 : CN113310964B
文献日 : 2022-04-05
发明人 : 费鹏 , 陈晓鹏 , 平峻宇
申请人 : 华中科技大学
摘要 :
权利要求 :
1.一种兼容微流控芯片的数字扫描光片显微成像系统,其特征在于,包括:错层支撑单元、倒置显微镜探测单元、具有微流控芯片夹持件的样品扫描单元、以及数字扫描光片照明单元;
所述倒置显微镜探测单元,包括用于载物的二维平移台和用于收集荧光信号并成像的成像光路;
所述错层支撑单元,包括跨越所述倒置显微镜探测单元二维平移台设置的高位支撑架、以及设置于倒置显微镜一侧的低位支撑架;
所述样品扫描单元,穿过所述错层支撑单元的高位支撑架与所述倒置显微镜探测单元的二维平移台固定,用于固定微流控芯片样品并带动所述微流控芯片样品沿Z轴方向作扫描运动;
所述数字扫描光片照明单元,包括照明物镜、以及数字扫描光片形成元件组;所述照明物镜设置于所述高位支撑架上,处于水缸另一侧;所述数字扫描光片形成元件组设置于低位支撑架上,准直激光通过数字扫描光片形成元件组以及照明物镜形成激光光片,使得光片束腰位于水缸内部。
2.如权利要求1所述的兼容微流控芯片的数字扫描光片显微成像系统,其特征在于,工作时,微流控芯片固定于所述微流控芯片夹持件上,置于水缸中,所述数字扫描光片照明单元形成的照明光片通过水缸透明侧面、以及所述微流控芯片的具有光学平整性的侧面投射在样本上,激发的荧光通过所述微流控芯片的具有光学平整性的下底面、以及水缸透明底面被所述倒置显微镜探测单元收集成像。
3.如权利要求1所述的兼容微流控芯片的数字扫描光片显微成像系统,其特征在于,所述样品扫描单元包括微流控芯片夹持件、以及支撑件;所述微流控芯片夹持件通过支撑件穿过所述错层支撑单元固定于所述倒置显微镜探测单元的二维平移台上,由所述二维平移台带动在水平面内移动。
4.如权利要求3所述的兼容微流控芯片的数字扫描光片显微成像系统,其特征在于,所述样品扫描单元包括Z轴位移台、压电扫描台;
所述Z轴位移台,用于带动微流控芯片夹持件沿Z轴低速移动,使得所述微流控芯片置于所述水缸中;所述压电扫描台,与所述微流控芯片夹持件连接,用于带动微流控芯片夹持件沿Z轴高速移动;所述微流控芯片控制件与微流控芯片通过液压管道相连,所述微流控芯片的侧面以及下底面为光学平整面。
5.如权利要求4所述的兼容微流控芯片的数字扫描光片显微成像系统,其特征在于,所述支撑件包括第一与第二L型转接件,其中第一与第二L型转接件的一边交错平行,另一边相对平行设置,形成匚型支撑件,其中交错平行的两边之间通过Z轴平移台连接,第一L型转接件另一边与所述倒置显微镜探测单元二维平移台固定,所述第二L型转接件的另一边与所述压电扫描台相连,所述压电扫描台与所述微流控芯片夹持件相连。
6.如权利要求4所述的兼容微流控芯片的数字扫描光片显微成像系统,其特征在于,所述微流控芯片夹持件包括竖直且相互平行的夹持臂、与夹持臂顶端固定的平板固定件、以及一对分别与夹持臂两臂底端固定的匚型固定件,所述夹持臂通过平板固定件与所述压电扫描平台连接,通过匚型固定件固定所述微流控芯片。
7.如权利要求1所述的兼容微流控芯片的数字扫描光片显微成像系统,其特征在于,所述样品扫描单元包括微流控芯片控制件;所述微流控芯片控制件与微流控芯片通过液压管道相连,所述微流控芯片的侧面以及下底面为光学平整面。
8.如权利要求1所述的兼容微流控芯片的数字扫描光片显微成像系统,其特征在于,所述数字扫描光片形成元件组,包括XY振镜、Z振镜、扫描透镜、套管透镜以及若干用于调整光路走向的反射镜,数字扫描光片形成元件组固定于低位支撑架上。
9.如权利要求1所述的兼容微流控芯片的数字扫描光片显微成像系统,其特征在于,所述高位支撑架包括相互平行且距离可调的两臂。
10.如权利要求1所述的兼容微流控芯片的数字扫描光片显微成像系统,其特征在于,所述低位支撑架为面包板。
说明书 :
一种兼容微流控芯片的数字扫描光片显微成像系统
技术领域
背景技术
的光高不可调节;遇见折射率不均匀的组织容易产生条纹,导致照明不均匀;同时激光光束
被压成片状,荧光激发效率也不够高。
像。有些光片显微镜也兼容微流控芯片,但多以倾斜照明和探测的方式对微流控芯片内的
样品进行成像,这种成像方式受扫描行程的影响,在保持成像的竖直高度不变的情况下,当
视野沿着扫描维度增大时,扫描行程将随之增大,因而无法做到大视野高速三维成像。
发明内容
安装空间,成功结合微流控芯片的夹持、控制、运动元件、以及数字扫描光片形成的元件组,
并使得数字扫描光片照明光路和探测光路正交,由此解决现有技术由于元件安装局促,无
法结合数字扫描光片照明光路和微流控样品的技术问题。
芯片夹持件的样品扫描单元、以及数字扫描光片照明单元;
描运动;
于低位支撑架上,准直激光通过数字扫描光片形成元件组形以及照明物镜形成激光光片,
使得光片束腰位于水缸内部。
光片通过水缸透明侧面、以及所述微流控芯片的具有光学平整性的侧面投射在样本上,激
发的荧光通过所述微流控芯片的具有光学平整性的下底面、以及水缸透明底面被所述倒置
显微镜探测单元收集成像。
支撑单元固定于所述倒置显微镜探测单元的二维平移台上,由所述二维平移台带动在水平
面内移动。
夹持件沿Z轴高速移动;所述微流控芯片控制件与微流控芯片通过液压管道相连,所述微流
控芯片的侧面以及下底面为光学平整面。
形成匚型支撑件,其中交错平行的两边之间通过Z轴平移台连接,第一L型转接件另一边与
所述倒置显微镜探测单元二维平移台固定,所述第二L型转接件的另一边与所述压电扫描
台相连,所述压电扫描台与所述微流控芯片夹持件相连。
夹持臂两臂底端固定的匚型固定件,所述夹持臂通过平板固定件与所述压电扫描平台连
接,通过匚型固定件固定所述微流控芯片。
微流控芯片的侧面以及下底面为光学平整面;
镜,高斯数字扫描光片形成元件组固定于低位支撑架上。
片无条纹、光高可控、能量集中的优势,提高照明的均匀性,提高图像的信噪比、对比度和轴
向分辨能力;也发挥了微流控的操控能力,微流控提高了活体生物的可操作性,可控制性,
提高成像通量。两种技术优势互补,解决了传统光片成像难以用于自由运动活体成像的难
题,实现了普通倒置显微镜下的大视野长时间高时空分辨率的自由运动活体生物三维成
像;尤其是在微流控芯片上采取横向照明的方式,提高三维数据的采集速度;结合以上三点
实现对自由运动活体生物的长时间、大视野、高速、高分辨、高通量的三维成像。
附图说明
控芯片,14为Z轴位移台,15为探测物镜,16为滤色块,17为反射镜,18为套管透镜,19为相
机,20为倒置显微镜,21为第二L型转接件,22为第一L型转接件,23为平板,24为条形连接
件,25为支撑柱,26为数字扫描光片,27为反射镜,28为面板版,29为恒流泵,30为电磁阀,31
为气泵。
具体实施方式
限定本发明。此外,下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之
间未构成冲突就可以相互组合。
速三维成像,更不能高通量成像。然而微流控芯片加载和控制装置复杂,形成数字扫描光片
的光路系统同样具有较为复杂的结构,由于照明光路和探测光路需要正交,这样难以在非
常局促显微镜成像视野内架设微流控芯片加载和控制装置以及形成数字扫描光片的光路。
的样品扫描单元、以及数字扫描光片照明单元;
的侧面进入,扫描行程仅受到微流控芯片的腔室高度的影响,与成像视野无关,加上腔室高
度较低,可进行大视野高速动态成像;
高的稳定性。倒置显微镜的二维平移台用于安装样品扫描单元,实现水平面上的位置调节。
互平行且距离可调的两臂,如图4所示;所述低位支撑架优选为面包板;
轴方向作扫描运动;包括微流控芯片夹持件、微流控芯片控制件、Z轴位移台、压电扫描台、
以及支撑件;所述微流控芯片夹持件通过支撑件穿过所述错层支撑单元固定于所述倒置显
微镜探测单元的二维平移台上,由所述二维平移台带动在水平面内移动;所述Z轴平移台,
用于带动微流控芯片夹持件沿Z轴低速移动,使得所述微流控芯片置于所述水缸中;所述压
电扫描台,与所述微流控芯片夹持件连接,用于带动微流控芯片夹持件沿Z轴高速移动;所
述微流控芯片控制件与微流控芯片通过液压管道相连,所述微流控芯片的侧面以及下底面
为光学平整面;优选所述支撑件包括第一与第二L型转接件,其中第一与第二L型转接件的
一边交错平行,另一边相对平行设置,形成匚型支撑件,其中交错平行的两边之间通过Z轴
平移台连接,第一L型转接件另一边与所述倒置显微镜探测单元二维平移台固定,所述第二
L型转接件的另一边与所述压电扫描台相连,所述压电扫描台与所述微流控芯片夹持件相
连。所述微流控芯片夹持件,如图6所示,包括竖直且相互平行的夹持臂、与夹持臂顶端固定
的平板固定件、以及一对分别与夹持臂两臂底端固定的匚型固定件,所述夹持臂通过平板
固定件与所述压电扫描平台连接,通过匚型固定件固定所述微流控芯片。
支撑架的一侧;照明物镜需要放置在倒置显微镜的二维平移台上方,且不能受该二维平移
台影响,水缸同理。因此该高台单元使得安装照明物镜和水缸变得更加便利,如图2、图3所
示。
形成元件组,包括XY振镜、Z振镜、扫描透镜、套管透镜以及若干用于调整光路走向的反射
镜,高斯数字扫描光片形成元件组固定于低位支撑架上。数字扫描光片形成元件组具备无
条纹、光高可控、能量集中荧光激发效率高的优势,极大提高了普通倒置显微镜的图像信噪
比和轴向分辨能力,然而其组件较多,体积较大,难以与照明物镜集成在同一支撑架上。本
发明优选在显微镜高度一半的位置设置低位支撑架,可以匹配倒置显微镜的探测物镜的高
度。在振镜的摆动下,光束沿一个方向作往返运动,形成光片,可消除条纹以提高了照明的
均匀度。成像的时候,利用倒置显微镜进行探测,探测光路性能优良,同时光片成像提高了
图像的信噪比和轴向分辨率。数字扫描光片照明单元具备无条纹、光高可控、能量集中荧光
激发效率高的优势,极大提高了普通倒置显微镜的图像信噪比和轴向分辨能力。
有光学平整性的侧面投射在样本上,激发的荧光通过所述微流控芯片的具有光学平整性的
下底面、以及水缸透明底面被所述倒置显微镜探测单元收集成像。
成像效果而设置的复杂光学元件、微流控芯片及其控制装置、以及探测光路在空间位置上
非常局促,整体体积较大且照明、成像效果不佳。本发明通过倒置显微镜拓展了探测光路视
野上方的空间,结合微流控芯片的三维移动分解,将样本的Z轴运动和成像光路集成在Z轴
上,从而腾挪出更多空间用于照明光路设置,照明光路无需采用斜入射,在水平面上正交入
射,即可与探测光路成正交状态,提升空分辨能力;然而这样的设置出现了在探测光路上方
照明物镜、水缸、以及样本的XY平面运动系统之间的安装冲突,照明物镜需要放置在倒置显
微镜的二维平移台上方,且不能受该二维平移台影响,水缸同理。为了解决这个矛盾,本发
明采用错层支撑单元的高位支撑架安装不能受二维平移台影响的照明物镜和水缸,拓展出
两层安装空间,从而实现在Z轴上集成倒置显微镜探测单元、样品扫描单元,同时高低位的
错层设计,充分利用了倒置显微镜探测单元一侧的空间,提高集成度缩小数字扫描光片照
明单元的体积。
以及数字扫描光片照明单元;
上,即可进行荧光探测。可采用IX70倒置显微镜,双层IX73倒置显微镜,单层IX73倒置显微
镜。
行且距离可调的两臂;所述低位支撑架为面包板。本实施例中采用分体加工的形式,制作两
片铝合金平板23作为两臂,再由水缸10和条形连接件24稳定连接起来,最后通过四根接杆
25将高位支撑于倒置显微镜20的正上方。图4为显微镜上方高台单元的三维结构图。
接一个L型转接件21,L型转接件21上方安装了一个压电扫描台11,两个L型转接件与Z轴位
移台构成支撑件,穿过高位支撑架。微流控芯片夹持件12安装在压电扫描台11的台面上,并
从中间通孔往下延伸,在微流控芯片夹持件12的末端安装有微流控芯片13。微流控芯片夹
持件12的结构如图6所示,该单元用于夹持微流控芯片,并带动微流控芯片进行三维扫描成
像。其中的样品夹持件设计与微流控芯片大小匹配,装载稳定,夹持件上有横向条形围栏,
可避免微流控芯片受导管应力损伤,提高三维扫描的稳定性,使得微流控芯片无需拆卸,可
长期使用。
侧面进行平整处理,呈现出玻璃面的效果。微流控芯片上下层的材料配比可选择反折射率
配比,反折射率配比可抑制横向光片的伪影。正折射率配比表示上层材料的折射率大于下
层材料的折射率,反折射率配比表示上层材料的折射率小于下层材料的折射率。对于倒置
探测的光学系统,采用反折射率配比可以消除浅层伪影,如图9所示。优选芯片内部通入折
射率匹配液。
进行控制。
长期安装在微流控芯片夹持件12上,每次成像仅需操作注射器/恒流泵29和电磁阀30,即可
实现上样下样,非常方便,通量高。可提高生物样本的可操控性,发挥微流控的高通量性能。
镜,高斯数字扫描光片形成元件组固定于低位支撑架上。本实施例中激光有激光器1发出,
经过光纤2到达准指头3,出射为光斑直径1.5mm的平行光。经过反射镜4反射之后到达XY振
镜5,再反射到Z振镜6。经过振镜之后的光束入射到扫描透镜7进行平场扫描,此时束腰为
29um。最后经过由套管透镜8和物镜9组成的缩小系统,光束束腰大小为7.25um。束腰位于水
缸10内部。其中物镜9和水缸10安装在倒置显微镜上方高位支撑架上,其余元器件均安装在
低位支撑架的面包板28上。
间内自由运动。往微流控芯片内通入果蝇幼虫的时间花费不超过1分钟,成像时长任意,果
蝇幼虫的神经元清晰。压电扫描台的行程为60um,相机19的曝光时间为4.5ms,相机19选择
外部边缘触发模式,相机帧率为160fps,扫描步长7.5um。
流控芯片上进行横向光片照明的方式提高了三维成像的采集数据,因此,本发明实现了对
自由运动活体生物的长时间、大视野、高速、高分辨率、高通量的三维成像。
在本发明的保护范围之内。