治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法

摘要

本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及一种治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法。所述的治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法，通过气相色谱法检测，顶空气相分析，以碘甲烷为对照品，以1,4‑二氧六环为稀释液，以外标一点法计算样品中碘甲烷含量。本发明的碘甲烷残留测定方法，解决了治疗癫痫药物氯巴占难溶的技术问题，同时确保了检测过程中碘甲烷的稳定性，碘甲烷的检测限度低，灵敏度高，重复性好，响应高。

权利要求

1.一种治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法，其特征在于：通过气相色谱法检测，顶空气相分析，以碘甲烷为对照品，以1,4‑二氧六环为稀释液，以外标一点法计算样品中碘甲烷含量；

气相条件为：

色谱柱：DB‑624：30m×0.320mm×1.8μm；

进样口温度：110‑130℃；

流速：1.0‑1.5mL/min；

载气：氮气；

分流比：10:1；

检测器温度：290‑300℃；

进样量：1.0mL；

运行时间：20‑25min；

升温程序：40℃保持5‑8min，以50℃/min升温至180℃，保持3‑8min；

定量方法：外标一点法。

2.根据权利要求1所述的治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)准备空白溶液：将稀释液1,4‑二氧六环作为空白溶液；

(2)制备标准溶液：以稀释液1,4‑二氧六环为溶剂，以对照品碘甲烷为溶质，制备浓度

0.185μg/mL的碘甲烷溶液作为标准溶液；

(3)制备样品溶液：以稀释液1,4‑二氧六环为溶剂，制备浓度为5g/L的样品溶液，在

20mL顶空瓶中加入2mL浓度为5g/L的样品溶液，密封，作为样品测试溶液；

(4)检测：在气相色谱仪中顶空进样样品溶液，以外标一点法计算样品中碘甲烷含量。

3.根据权利要求1或2所述的治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法，其特征在于：顶空条件：

炉温：55‑65℃；

定量环：110℃；

传输线：115℃；

平衡时间：30‑35min；

进样时间：1.0min；

GC循环时间：21min。

4.根据权利要求1所述的治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法，其特征在于：色谱柱序列号为USF0376861H或USF372642H。

5.根据权利要求2所述的治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法，其特征在于：制备标准溶液步骤如下：(1)对照品储备液的制备：取碘甲烷约40mg，精密称定，置已有适量溶剂的20mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，即得，浓度2mg/mL；

(2)对照品中间储备液的制备：量取对照品储备液50μL，置100mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，即得，浓度1μg/mL；

(3)100％限度浓度对照品溶液的制备：量取对照品中间储备液3.7mL，置20mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，即得，浓度0.185μg/mL，即标准溶液。

6.根据权利要求2所述的治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法，其特征在于：样品溶液的制备步骤如下：取供试品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，用1,4‑二氧六环振摇后溶解，并稀释至刻度；取上述溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得样品溶液。

说明书

治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法

技术领域

[0001] 本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及一种治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法。

背景技术

[0002] 癫痫是一种表现为反复癫痫发作的慢性脑部疾病，患者的发作形式不一，会突然间毫无缘由的发作，可表现为抽搐、痉挛、昏厥、两眼发直、凝视等临床症状，具有发作性、短暂性、重复性和刻板性的特征。

[0003] 氯巴占(Frisium)是一种治疗癫痫的药物，具有抗焦虑和抗惊厥作用，抗电休克作用的ED50比地西泮小而比苯巴比妥、丙戊酸钠大。氯巴占适用于治疗对其它抗癫痫药无效的难治性癫痫，可单独应用，亦可作为辅助治疗用。对复杂部分性发作继发全身性发作和Lennox‑Gas‑laut综合征效果更佳。

[0004] 在氯巴占的合成中需要用到碘甲烷，碘甲烷对中枢神经系统很敏感，少量越过血脑屏障进入脑干就会出现四肢不稳和幻觉，对人的神经系统有严重损害。因此需要对药品中碘甲烷残留进行检测，但由于氯巴占的溶解性问题以及碘甲烷的不稳定性，导致现有的分析检测方法检测限达不到要求。

发明内容

[0005] 本发明要解决的技术问题是提供一种治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法，解决了治疗癫痫药物氯巴占难溶的技术问题，同时确保了检测过程中碘甲烷的稳定性，碘甲烷的检测限度低，灵敏度高，重复性好，响应高。

[0006] 本发明所述的治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法，通过气相色谱法检测，顶空气相分析，以碘甲烷为对照品，以1,4‑二氧六环为稀释液，以外标一点法计算样品中碘甲烷含量。

[0007] 具体地，所述治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定方法，包括以下步骤：

[0008] (1)准备空白溶液：将稀释液1,4‑二氧六环作为空白溶液；

[0009] (2)制备标准溶液：以稀释液1,4‑二氧六环为溶剂，以对照品碘甲烷为溶质，制备浓度0.185μg/mL的碘甲烷溶液作为标准溶液；

[0010] (3)制备样品溶液：以稀释液1,4‑二氧六环为溶剂，制备浓度为5g/L的样品溶液，在20mL顶空瓶中加入2mL浓度为5g/L的样品溶液，密封，作为样品测试溶液；

[0011] (4)检测：在气相色谱仪中顶空进样样品溶液，以外标一点法计算样品中碘甲烷含量。

[0012] 优选地，可按以下方法配制稀释液、空白溶液、标准溶液和样品溶液：

[0013] 稀释液：1,4‑二氧六环。

[0014] 空白溶液：稀释液。

[0015] 标准溶液：

[0016] (1)对照品储备液的制备：取碘甲烷约40mg，精密称定，置已有适量溶剂的20mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，即得。浓度2mg/mL。

[0017] (2)对照品中间储备液的制备：量取对照品储备液50μL，置100mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，即得。浓度1μg/mL。

[0018] (3)对照品溶液的制备(100％限度浓度)：量取对照品中间储备液3.7mL，置20mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，即得。浓度0.185μg/mL。

[0019] 样品溶液：取供试品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，用1,4‑二氧六环振摇后溶解，并稀释至刻度。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封。

[0020] 气相条件为：

[0021] 色谱柱：DB‑624：30m×0.320mm×1.8μm；

[0022] 进样口温度：110‑130℃；

[0023] 流速：1.0‑1.5mL/min；

[0024] 载气：氮气；

[0025] 分流比：10:1；

[0026] 检测器温度：290‑300℃；

[0027] 进样量：1.0mL；

[0028] 运行时间：20‑25min；

[0029] 升温程序：40℃保持5‑8min，以50℃/min升温至180℃，保持3‑8min；

[0030] 顶空条件：炉温：55‑65℃；定量环：110℃；传输线：115℃；平衡时间：30‑35min；进样时间：1.0min；GC循环时间：21min；

[0031] 定量方法：外标一点法。

[0032] 优选地，色谱柱序列号为USF0376861H或USF372642H。

[0033] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

[0034] (1)本发明采用1,4‑二氧六环作为稀释液，与乙醇、甲醇、二氯甲烷、甲苯、N‑甲基吡咯烷酮、N,N‑二甲基甲酰胺等溶剂相比，不仅解决了氯巴占难溶的技术问题，而且碘甲烷在检测条件下不与1,4‑二氧六环发生反应，确保了检测的精度；

[0035] (2)本发明通过选择合适的稀释液、进样口温度和升温程序，确保了检测过程中碘甲烷的稳定性，碘甲烷的检测限度低，灵敏度高，重复性好，响应高。

附图说明

[0036] 图1是实施例1的系统适用性检测图谱，图中由下至上依次为序号1‑6组分的检测图谱；

[0037] 图2是实施例2的专属性检测图谱，图中由上至下依次为序号1‑4组分的检测图谱；

[0038] 图3是实施例3的检测限检测图谱，图中由下至上依次为序号1‑3组分的检测图谱；

[0039] 图4是实施例3的定量限检测图谱，图中由下至上依次为序号1‑6组分的检测图谱；

[0040] 图5是实施例4的线性范围检测图谱，图中由下至上依次为序号1‑6组分的检测图谱；

[0041] 图6是实施例4的线性范围图；

[0042] 图7是实施例5的重复性检测图谱，图中由下至上依次为序号1‑6组分的检测图谱；

[0043] 图8是实施例5的中间精密度检测图谱，图中由下至上依次为序号1‑6组分的检测图谱；

[0044] 图9是实施例6的准确度检测图谱，图中由上至下依次为序号1‑11组分的检测图谱；

[0045] 图10是实施例8中顶空炉温度为58℃的检测图谱；

[0046] 图11是实施例8中顶空炉温度为62℃的检测图谱；

[0047] 图12是实施例8中色谱柱型号为USF372642H的检测图谱；

[0048] 图13是实施例8中流速为1.4mL/min的检测图谱；

[0049] 图14是实施例8中检测器温度为290℃的检测图谱；

[0050] 图15是实施例9的治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留量的检测图谱。

具体实施方式

[0051] 以下结合实施例对本发明做进一步描述。

[0052] 实施例中用到的原料如下：

[0053] 碘甲烷，AR级，厂家：九鼎化学；

[0054] 1,4‑二氧六环，AR级，厂家：麦克林。

[0055] 实施例中用到的仪器如下：

[0056] 气相色谱仪：型号为7890A，厂家为Aglient。

[0057] 如无特别说明，实施例中的检测条件如下：

[0058] 色谱柱：DB‑624：30m×0.320mm×1.8μm；SN：USF0376861H；

[0059] 进样口温度：120℃；

[0060] 流速：1.5mL/min；

[0061] 载气：氮气；

[0062] 分流比：10:1；

[0063] 检测器温度：300℃；

[0064] 进样量：1.0mL；

[0065] 运行时间：22min；

[0066] 升温程序：40℃保持6min，以50℃/min升温至180℃，保持4min；

[0067] 顶空条件：炉温：60℃；定量环：110℃；传输线：115℃；平衡时间：30min；进样时间：1.0min；GC循环时间：21min；

[0068] 定量方法：外标一点法。

[0069] 实施例1

[0070] 系统适用性试验：

[0071] 序列前进行系统适用性考察，空白溶液无干扰峰或干扰满足要求；系统适用性连续重复测定6次。

[0072] (1)可接受标准

[0073] 6次所得的色谱图中碘甲烷峰面积的相对标准偏差RSD％≤15.0％。

[0074] 质量控制溶液中碘甲烷的回收率应在80％～120％。

[0075] (2)溶液配制

[0076] 1)碘甲烷对照品储备液的制备：取碘甲烷约40mg，精密称定，置20mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，即得，浓度为2mg/mL。

[0077] 2)对照品中间储备液的制备：取对照品储备液50μL，精密量取，置100mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，即得，浓度为1μg/mL。

[0078] 3)碘甲烷对照品溶液(100％限度浓度)的制备：取对照品中间储备液3.7mL，精密量取，置20mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，即得，浓度为0.185μg/mL。

[0079] (3)检测图谱如图1所示，结果如表1所示。

[0080] 表1 系统适用性试验结果

[0081]

[0082]

[0083] 实施例2

[0084] 专属性试验：

[0085] (1)可接受标准

[0086] 1)空白溶液中目标峰位置附近无显著干扰峰；若存在干扰峰，则对碘甲烷峰的干扰应≤对照峰面积的5％。

[0087] 2)对各成分出峰位置进行定位，加标溶液中碘甲烷峰与相邻峰分离度应≥1.5。

[0088] (2)溶液配制

[0089] 1)空白溶液：取1,4‑二氧六环2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。

[0090] 2)碘甲烷对照品溶液：取对照品中间储备液3.7mL，精密量取，置20mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。

[0091] 3)供试品溶液：取供试品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，用1,4‑二氧六环溶解，并稀释至刻度。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封。

[0092] 4)100％加标溶液：取供试品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，用100％限度的碘甲烷标准溶液溶解，并稀释至刻度。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。

[0093] (3)检测图谱如图2所示，结果如表2所示。

[0094] 表2 专属性试验结果

[0095]

[0096] 实施例3

[0097] 检测限与定量限试验：

[0098] (1)可接受标准

[0099] 定量限溶液(10％限度浓度)连续进样6次，其峰面积RSD％值≤25％，信噪比≥10:1。

[0100] 对检测限溶液连续进样3次，记录每针信噪比，信噪比≥3:1。

[0101] (2)溶液配制

[0102] 1)定量限溶液的制备：量取对照品中间储备液0.37mL，置20mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。

[0103] 2)检测限溶液的制备：取定量限溶液2mL，精密量取，置10mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。

[0104] (3)检测图谱如图3‑4所示，结果如表3‑4所示。

[0105] 表3 检测限试验结果

[0106]

[0107] 表4 定量限精密度试验结果

[0108]

[0109] 实施例4

[0110] 线性范围试验：

[0111] (1)线性范围：待测成分0.0187μg/mL～0.3739μg/mL(相当于限度浓度的10％～200％)。

[0112] (2)可接受标准：在规定的线性范围内，相关系数r≥0.99。

[0113] (3)溶液制备

[0114] 1)碘甲烷对照品储备液的制备：取碘甲烷约40mg，精密称定，置20mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，即得，浓度为2mg/mL。

[0115] 2)对照品中间储备液的制备：取碘甲烷对照品储备液50μL，精密量取，置100mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，即得。

[0116] 3)标准曲线工作溶液的制备：以上述对照品中间储备液，分别制备不少于5个点的线性标准溶液(LOQ，20％，50％，100％，150％，200％)，如表5所示：

[0117] 表5 线性溶液配制表

[0118]

[0119] (4)检测图谱如图5所示，线性范围如图6所示，结果如表6所示。

[0120] 表6 各浓度水平线性结果

[0121]

[0122] 实施例5

[0123] 精密度试验：

[0124] A：重复性试验

[0125] (1)接受标准

[0126] 6份溶液中碘甲烷含量的RSD％≤20.0％。

[0127] (2)溶液配制：

[0128] 制备100％加标样品溶液6份，连续进样6次。配制方法：取供试品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，用100％限度的碘甲烷标准溶液振摇后溶解，并稀释至刻度。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。

[0129] (3)检测图谱如图7所示，结果如表7所示。

[0130] 表7 重复性试验结果

[0131]

[0132] 计算公式：

[0133] B：中间精密度试验

[0134] (1)接受标准

[0135] 1)6份溶液中碘甲烷含量的RSD％≤20.0％。

[0136] 2)12份溶液中碘甲烷含量的RSD％≤25.0％。

[0137] (2)溶液配制

[0138] 在不同的时间，由不同的试验人员制备样品溶液6份，连续进样6次。

[0139] (3)检测图谱如图8所示，结果如表8所示。

[0140] 表8 中间精密度试验结果

[0141]

[0142] 实施例6

[0143] 准确度试验：

[0144] (1)接受标准

[0145] 各浓度平均回收率在80％～120％。

[0146] (2)溶液配制

[0147] 1)空白供试品溶液的制备：取供试品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，用1,4‑二氧六环溶液振摇后溶解，并稀释至刻度。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。同法制备2份。

[0148] 2)加标样品的制备：以碘甲烷的对照品储备液分别制备50％，100％，150％的准确度溶液，即得。

[0149] 准确度试验‑空白：取供试品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，用1,4‑二氧六环溶液溶解，并稀释至刻度。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。同法制备2份。

[0150] 准确度试验‑50％：取供试品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，用50％限度的碘甲烷标准溶液溶解，并稀释至刻度。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。同法制备3份。

[0151] 准确度试验‑100％：取供试品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，用100％限度的碘甲烷标准溶液溶解，并稀释至刻度。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。同法制备3份。

[0152] 准确度试验‑150％：取供试品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，用150％限度的碘甲烷标准溶液溶解，并稀释至刻度。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。同法制备3份。

[0153] (3)检测图谱如图9所示，结果如表9所示。

[0154] 表9 准确度试验结果

[0155]

[0156] 实施例7

[0157] 溶液稳定性试验：

[0158] (1)接受标准

[0159] 将100％限度的碘甲烷对照溶液以及100％加标样品溶液在室温分别放置一定时长后进样检测，碘甲烷含量与0小时比较变化≤20.0％。

[0160] (2)溶液配制：

[0161] 1)碘甲烷对照溶液的制备(100％限度浓度)：取对照品中间储备液3.7mL，精密量取，置20mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。

[0162] 2)100％加标样品的制备：取供试品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，用100％限度的碘甲烷标准溶液振摇后溶解，并稀释至刻度。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。

[0163] (3)检验结果如表10所示：

[0164] 表10 对照品溶液稳定性试验结果

[0165] 时间 碘甲烷含量(μg/mL)24h标准溶液 0.181(系统适用性计算得)
0h标准溶液 0.187(系统适用性计算得)
变化率％ ‑3.2
试验结果 碘甲烷含量变化率<20.0％，符合接受标准。

[0166] 表11 100％加标样品溶液稳定性试验结果

[0167]时间 碘甲烷含量(μg/mL)
24h100％加标样品溶液 0.187(系统适用性计算得)
0h100％加标样品溶液 0.222(系统适用性计算得)
变化率％ ‑18.7
试验结果 碘甲烷含量变化率<20.0％，符合接受标准。

[0168] 实施例8

[0169] 方法耐用性试验：

[0170] (1)可接受标准：

[0171] 测定条件改变，检测结果的差值应满足要求(相对偏差≤20％)，待测组分的与相邻峰的分离度应≥1.5，则耐用性良好。

[0172] (2)溶液配制：

[0173] 1)对照品溶液配制：取对照品中间储备液3.7mL，精密量取，置20mL量瓶中，用1,4‑二氧六环稀释至刻度，摇匀，取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。

[0174] 2)样品溶液配制：取供试品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，用100％限度的碘甲烷标准溶液振摇后溶解，并稀释至刻度。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。

[0175] (3)测定条件改变：

[0176] 1)改变顶空炉温，其他条件不变。

[0177] 2)改变色谱柱(同品牌、同规格、不同序列号)，其他条件不变。色谱柱1序列号：USF0376861H，色谱柱2序列号：USF372642H。

[0178] 3)改变流速为1.4mL/min，其他条件不变。(根据具体情况待定)

[0179] 4)改变检测器温度为290℃，其他条件不变。(根据具体情况待定)

[0180] (4)检测图谱如图10‑14所示，其中测定条件均为改变的检测图谱如图7序号6所示，结果如表12所示。

[0181] 表12 测定条件改变试验结果

[0182]

[0183]

[0184] 实施例9

[0185] 样品测定：

[0186] 供试品制备：取供试品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，用1，4‑二氧六环溶液振摇后溶解，并稀释至刻度。取溶液2mL，精密量取，置20mL顶空瓶中，密封，即得。

[0187] 样品检测：采用沃特世Empower3工作站进行数据采集、数据处理，测试样品浓度计算，如无特殊，均采用自动积分处理。进样顺序如表13所示。

[0188] 表13 典型进样序列表

[0189]样品名 进样针数
空白溶液 1～2
对照品溶液 6
空白溶液 1
样品溶液 1
对照品溶液 1

[0190] 样品检测图谱如图15所示，样品检测结果如表14所示，其中：

[0191]

[0192] 计算按外标一点法，以系统适用性试验溶液峰面积计算，RSD％≤15％。

[0193] 表14 治疗癫痫药物粗品中碘甲烷残留测定结果

[0194]

[0195]