一种用于农业病害防治的活菌剂及应用

摘要

本发明提供了一种用于农业病害防治的活菌剂及应用，即将枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和黄单胞菌三种菌株按照一定配比进行复配，从而使制备的菌制剂相比于三株菌单独施用具有抗虫和抗真菌活性。本发明将枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和黄单胞菌三种菌株按照一定配比进行复配，从而使制备的菌制剂相比于三株菌单独施用具有抗虫和抗真菌活性。本发明的菌制剂可以有效降低抗生素用量，提高农产品质量，改善农业土壤生态环境。

权利要求

1.一种活菌剂，其特征在于，所述的活菌剂，其一种由枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和产酶溶杆菌组成，其中枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、产酶溶杆菌在活菌剂中的活菌数量比为1:2:1；

其另一种活菌剂由枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌组成；其中枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌在活菌剂中的活菌数量比为1:2:1；

其中枯草芽孢杆菌是编号为ATCC6633或BNCC336389的菌株；巨大芽孢杆菌是是编号为BNCC190686或ATCC14581的菌株；嗜麦芽窄食单胞菌是编号为ATCC13637、ATCC13270的菌株；产酶溶杆菌是编号为ATCC29487、BNCC223409的菌株。

2.如权利要求1所述的活菌剂，其特征在于，所述的活菌剂是分别将枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、产酶溶杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌进行发酵，发酵菌液再进行复配制备的。

3.如权利要求2所述的活菌剂，其特征在于，所述的发酵菌液在进行复配前先静置。

4.如权利要求3的活菌剂，其特征在于，所述的静置时间为2h。

5.权利要求1所述的活菌剂在制备抗虫和/或抗真菌的制品中的应用。

6.一种抗虫和/或抗真菌的制品，其特征在于，所述的制品包含有权利要求1所述的活菌剂。

7.一种植物种抗虫和/或抗真菌的方法，其特征在于，所述的方法，是使用权利要求1所述的活菌剂来进行治理。

说明书

一种用于农业病害防治的活菌剂及应用

技术领域

[0001] 本发明属于益生菌技术领域，具体涉及一种用于农业病害防治的活菌剂及应用。

背景技术

[0002] 随着人们对高质量农业的迫切需求，降低抗生素用量成为共识。与此同时，如何在降低抗生素用量的前提下，消除常见农业病害，提高农作物生长质量就成为需要解决的瓶颈问题。

[0003] 目前农业病虫害愈发严重，例如线虫可寄生于两千多种植物上，且可快速繁殖，棚室一年发生10代左右。近年来线虫病害连年严重发生，病害面积和作物种类都在增加，各种植地区均有报道。在我国线虫发生面积已经超过3000万亩，因根结线虫造成的农业损失已高达近千亿。

[0004] 除此之外，真菌性病害是农作物的另一种能相互传染的侵染性病害，其病原物一般都是寄生物真菌。真菌性病害的种类很多，占全部植物菌类病害的60％以上，真菌性病害在我国属广泛分布病害，不仅在田间产生危害，还由于其潜伏侵染特性，能危害果实，使产量降低、果实失去商品价值，损失巨大。

[0005] 但是，目前能够防治线虫及真菌的药物极度缺乏，严重影响高效农业的发展进程。因此，开发新型的抗虫、抗菌复合功能型生防菌剂，并且将其应用至农业领域的研究十分迫切。

发明内容

[0006] 为解决上述现有技术中存在的瓶颈问题，本发明提供了一种用于农业病害防治的活菌剂及应用，即将枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和黄单胞菌三种菌株按照一定配比进行复配，从而使制备的菌制剂相比于三株菌单独施用具有抗虫和抗真菌活性。

[0007] 本发明首先提供一种活菌剂，其中包含有枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和黄单胞菌；

[0008] 优选地，所述黄单胞为产酶溶杆菌和/或嗜麦芽窄食单胞菌。

[0009] 其中枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和黄单胞菌在菌制剂中的活菌数量比为1:2:1；

[0010] 本发明所提供的活菌剂用于制备抗虫和/或抗真菌的制品；

[0011] 本发明再一个方面还提供一种抗虫和/或抗真菌的制品，所述的制品包含有上述的活菌剂。

[0012] 本发明将枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和黄单胞菌三种菌株按照一定配比进行复配，从而使制备的菌制剂相比于三株菌单独施用具有抗虫和抗真菌活性。本发明的菌制剂可以有效降低抗生素用量，提高农产品质量，改善农业土壤生态环境。

附图说明

[0013] 图1为复合菌剂抗虫与抗菌活性图；

[0014] 图2为复合菌剂中三种菌株的活性对比分析图；

[0015] 图3为复合菌剂的三种菌株不同比例混合的活性对比图；

[0016] 图4为菌剂放置不同时间后的活性分析图；

[0017] 图5为复合菌剂对农作物抗虫效果分析图；

[0018] 图6为复合菌剂的农作物助生长效果分析图。

具体实施方式

[0019] 申请人在研究中发现，黄单胞菌可以分泌多种胞外酶以及各类次生代谢物基因簇，具有潜在的抗菌抗虫活性。但经前期检测，多个基因簇属于沉默/低表达基因，并没有表现出抗菌抗虫活性；需要特定条件激发基因表达。

[0020] 将枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和黄单胞菌三种菌株按照一定配比进行复配，从而使制备的菌制剂相比于三株菌单独施用具有抗虫和抗真菌活性。进一步现有发现枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌的分泌产物中可能有刺激黄单胞菌属菌株产生抗虫和抗真菌的物质的作用。

[0021] 其中枯草芽孢杆菌可以选用ATCC6633、BNCC336389；巨大芽孢杆菌选用BNCC190686、ATCC14581；黄单胞菌属菌株选用编号为ATCC13637、ATCC29487、ATCC13270、BNCC223409的菌株。

[0022] 优选地，所述黄单胞包括产酶溶杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌。

[0023] 而且枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和黄单胞菌按照活菌数1:2:1的混合比例，能够更高效的产生多重复合活性。通过对试验田的防病害效果检测，发现本发明的菌剂具有高效防虫防菌效果，虫咬点降低40％‑55％，且助生长效果明显，植株生长率提高20％。

[0024] 下面结合实施例和附图对本发明进行详细的描述。

[0025] 实施例1：制备成分菌发酵液

[0026] (1)将枯草芽孢杆菌接种于LB固体培养基中活化，32℃条件下培养48h，连续转接以得到活性良好的菌株。在本步骤中，枯草芽孢杆菌编号为ATCC6633、BNCC336389；LB培养基的配制：蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl 10g依次溶于1L的蒸馏水中，pH为7.0‑7.3；将菌体接种到200ml LB液体培养基，32℃、200rpm摇床培养1天，获得种子液；将种子液以5％的接种量转接到5L新鲜LB液体培养基中，32℃、200rpm摇床培养2天。

[0027] (2)将巨大芽孢杆菌接种于LB固体培养基中活化，32℃条件下培养48h，连续转接以得到活性良好的菌株。在本步骤中，适用巨大芽孢杆菌为BNCC190686、ATCC14581；LB培养基的配制：蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl 10g依次溶于1L的蒸馏水中，pH为7.0‑7.3；将菌体接种到200ml LB液体培养基，32℃、200rpm摇床培养1天，获得种子液；将种子液以5％的接种量转接到5L新鲜LB液体培养基中，32℃、200rpm摇床培养2天。

[0028] (3)将黄单胞属菌接种于LB固体培养基中活化，30℃条件下培养24‑48h，连续转接以得到活性良好的菌株。在本步骤中，黄单胞菌属菌株编号为ATCC13637、ATCC29487、ATCC13270、BNCC223409。LB培养基的配制：蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl 10g依次溶于1L的蒸馏水中，pH为7.0‑7.3；将菌体接种到200ml LB液体培养基，30℃、220rpm摇床培养1天，获得种子液；将种子液以10％的接种量转接到2L几丁质液体培养基中，30℃、200rpm摇床培养2天。几丁质培养基的配制：几丁质(壳多糖)10g，蒸馏水1L，pH7.0。

[0029] (4)上述菌株分别培养至恒定期前期前停止发酵并静置2小时，进行细胞密度检8
测，并将三种菌液的细胞浓度均调整至2X10cfu/ml，然后按照体积1:2:1的比例进行复配，摇匀。通过比较，复配前进行菌液静置能显著的提高活性效果，推测原因是恒定期的细胞产生多种益生物质，如果持续摇动培养，则细胞会继续分裂，影响益生物质的产生；若如果静置一段时间，则细胞在高密度情况下，产生较多的次级代谢产物等物质。

[0030] 实施例2：复合菌剂的抗虫和抗菌活性

[0031] 由图1和图2可以看出，复合菌剂具有显著的抗虫，抗真菌和抗细菌活性，实验中使用了线虫，5种真菌霉菌，2种革兰氏阳性菌和2种革兰氏阴性菌。

[0032] 由图3所示，进行了不同比例的复配实验，发现当枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和黄单胞菌的比例在1:2:1时，抗虫抗菌的效果最为显著。

[0033] 本发明的菌制剂在放置半年后，仍有一半以上的活力(图4)，这说明菌剂的三株菌不存在相互拮抗的作用，也显示该复配菌剂具有良好的应用前景。

[0034] 由图5显示，复合菌剂的施用使得试验田中的虫咬点显著减少，与未处理的对照组相比，虫损伤降低80％以上。

[0035] 本发明所提供的菌制剂不仅具有抗虫抗病效果，还具有助农作物生长的效果，植物叶子更加饱满，叶面健康(图6)，助生长率达10％‑20％。

[0036] 因此，本发明的菌剂提高了土壤的健康度，使的土壤肥力增强，也进一步提高了农作物的生长效率和作物质量。这一结果也显示本产品为优质高效农业的发展提供助力。