一株鞘氨醇杆菌HP10及其应用

摘要

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株鞘氨醇杆菌HP10及其应用，所述的鞘氨醇杆菌HP10于2021年1月13日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.21618。所述的菌株具有较高的固氮酶活性，可以降解螺螨酯，能够抑制细菌，并分泌吲哚乙酸。可以被用于微生物氮肥，也可以作为土壤残留农药降解剂；能够促进植物的生长，本发明所述的鞘氨醇杆菌HP10对于西北地区种植杂交构树具有重大意义。

权利要求

1.一株鞘氨醇杆菌HP10，所述的鞘氨醇杆菌HP10的拉丁名为Sphingobium abikonense，其特征在于，所述的鞘氨醇杆菌HP10于2021年1月13日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No . 21618。

2.如权利要求1所述的鞘氨醇杆菌HP10在制备生物发酵有机肥中的应用。

3.如权利要求1所述的鞘氨醇杆菌HP10作为土壤残留农药降解剂的应用，其特征在于，所述的土壤残留农药为螺螨酯。

4.如权利要求1所述的鞘氨醇杆菌HP10在制备防治真菌性病原菌的微生物抑菌剂中的应用，其特征在于，所述的真菌性病原菌为腐皮镰孢菌（Fusarium solan）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）的一种或几种。

5.如权利要求1所述的鞘氨醇杆菌HP10在促进植物生长中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的植物为杂交构树。

7.如权利要求1所述的鞘氨醇杆菌HP10在制备土壤改良剂中的应用。

8.一种微生物菌剂，其特征在于，所述的微生物菌剂含有权利要求1所述的鞘氨醇杆菌HP10。

说明书

一株鞘氨醇杆菌HP10及其应用

技术领域

[0001] 本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株鞘氨醇杆菌HP10及其应用。

背景技术

[0002] 构树属桑科构树是多年生落叶乔木，在我国分布广泛，应用历史悠久，具有非常好的开 发利用前景。目前，它的主要经济价值集中在以下3个方面：一是利用树叶作为饲料代替粮 食作物饲养家畜，“以树代粮”成为缓解饲料原料危机和确保食品安全的新途径；二是开发树 皮和枝干作为高档造纸原料；三是采伐植株作为药材。杂交构树是中国科学院植物研究所通 过野生构树资源收集，以核心种质为父本，同属灌木植物小构树为母本，通过现代育种技术 与常规技术相结合进行种间杂交并通过太空搭载诱变筛选出的具有优良性状的新品种。与野 生构树相比具有明显的杂交优势，不仅具有适应性强，耐干旱、耐盐碱、耐瘠薄、抗污染和 病虫害等特点，而且具有生长速度快，产量大，营养价值高等优点。作蛋白质饲料使用，丰 产期每公顷鲜重产量最多可高达150t，茎叶粗蛋白含量为19.2％，优于紫花苜蓿，钙、磷、 锌、铁、锰、铜等微量元素，以及氨基酸和黄酮类等功能活性物质含量丰富，是家畜家禽优 质的木本粗饲料来源。2016年至2020年期间，杂交构树已在内蒙古、河南、贵州、山东、 山西等20多个省(市)进行了大面积的推广种植。但在甘肃等西北干旱与半干旱地区，杂交 构树的生长存在产量低，翌年返青率低等问题，制约了杂交构树组织培养规模化生产的发展， 阻碍了杂交构树在西北干旱与半干旱地区的大面积推广。

[0003] 同时，螨虫是杂交构树组培苗移栽大田后的主要虫害，螺螨酯具有较强的杀螨效果，在 杂交构树红蜘蛛和二斑叶螨防治中广泛使用，但其残留期较长，会造成土壤环境与水体的污 染，对杂交构树的生长、质量安全与畜禽健康也存在潜在危害，严重阻碍需要绿色有机饲料 的畜禽养殖业的发展。

[0004] 鞘氨醇杆菌在分类学上属于细菌界(Bacteria)，拟杆菌门(Bacteroidetes)，鞘氨醇杆菌纲 (Sphingobacteria)，鞘氨醇杆菌目(Sphingobacteriales)，鞘氨醇杆菌科(Sphingobacteriaceae)， 鞘氨醇杆菌属(Sphingobium abikonense)，是一类革兰氏阴性非发酵杆状细菌，很少引起人类 感染，它的主要特点是含有大量的细胞膜鞘磷脂。目前的研究发现，鞘氨醇杆菌具有生物脱 硫的作用(参见专利CN106754462B)，催化合成L(+)‑酒石酸或其盐的作用(参见专利 CN110591954B)，亦或者是具有降解西柏三烯‑4,6‑二醇的作用(参见专利CN107058162B) 和降解苯胺的作用(参见专利CN106635904B)。但是，目前并没有任何研究公开，鞘氨醇杆 菌具有固氮的作用，亦没有任何文献公开鞘氨醇杆菌具有降解螺螨酯的作用。

[0005] 针对上述技术问题，发明人意外的从杂交构树的根际土壤中分离得到了一株新的鞘氨醇 杆菌，所述的鞘氨醇杆菌具有固氮，抑制根际土壤中细菌，降解螺螨酯等优势。

发明内容

[0006] 本发明的第一目的是提供一株从杂交构树根际土壤中分离得的鞘氨醇杆菌(Sphingobium abikonense)HP10，所述的菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏 编号为CGMCCNo.21618，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间
2021年1月 13日。

[0007] 本发明的第二目的是提供所述的鞘氨醇杆菌(Sphingobium abikonense)HP10在制备生物 发酵有机肥中的应用。

[0008] 本发明的第三目的是提供所述的鞘氨醇杆菌(Sphingobium abikonense)HP10作为土壤残 留农药降解剂的应用。

[0009] 优选地，所述的土壤残留农药为螺螨酯。

[0010] 本发明的第四目的是提供所述的鞘氨醇杆菌(Sphingobium abikonense)HP10在制备防治 细菌性病原菌和真菌性病原菌的微生物抑菌剂中的应用。

[0011] 优选地，所述的细菌性病原菌为腐皮镰孢菌、尖孢镰刀菌的一种或几种，所述的真菌性 病原菌为茄链格孢菌。

[0012] 本发明的第五目的是提供所述的鞘氨醇杆菌(Sphingobium abikonense)HP10在促进植物 生长中的应用。

[0013] 优选地，所述的植物为杂交构树。

[0014] 本发明的第六目的是提供所述的鞘氨醇杆菌(Sphingobium abikonense)HP10在制备土壤 改良剂中的应用。

[0015] 本发明的第七目的是提供一种微生物菌剂，所述的微生物菌剂含有所述的鞘氨醇杆菌 (Sphingobium abikonense)HP10。

[0016] 本发明的有益效果是：①本发明从杂交构树根际土壤中分离出了一种鞘氨醇杆菌HP10， 保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.21618；②‑1所 述的鞘氨醇杆菌HP10具有较高的固氮酶活性，固氮酶活性为177.5nmol(C2H4)·h ·mL‑1
，可 以作为微生物氮肥施用于杂交构树组培苗的种植；③所述的鞘氨醇杆菌HP10可降解螺螨酯， 作为土壤残留农药降解剂，修复被螺螨酯污染的土壤，提高杂交构树的质量安全性，为畜禽 健康保驾护航；④所述的鞘氨醇杆菌HP10具有抑制腐皮镰孢菌、茄链格孢菌、尖孢镰刀菌 的能力，抑菌率分别为44.44％、45.83％、26.82％，可以作为防治植物性病原菌‑1
的微生物抑菌 剂；⑤所述的鞘氨醇杆菌HP10能够分泌吲哚乙酸，分泌量为2.26μg·mL ，能够促进植物的 生长。综上所述，本发明所述的鞘氨醇杆菌HP10对于西北地区种植杂交构树具有重大意义。

附图说明

[0017] 图1鞘氨醇杆菌HP10菌落照片

[0018] 图2鞘氨醇杆菌HP10拮抗病原微生物的效果

具体实施方式

[0019] 下面结合具体实施实例对本发明进行详细说明，以下实施例有助于本领域的技术人员进 一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。

[0020] 以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

[0021] 以下实施例中所使用的Ashby培养基、LB液体培养基、MSM液体培养基为现有产品。

[0022] 以下实施例中所使用的螺螨酯标准品由北京中科质检生物技术有限公司提供。

[0023] 以下实施例中所用的腐皮镰孢菌Fusarium solan GSICC60605、圆褐固氮菌(Azotobacter chroococcum)GSICC30117，公众可从中国工业微生物菌种保藏管理中心甘肃分中心获得该 菌株，以重复本申请的实验。

[0024] 以下实施例中所用的茄链格孢菌Alternaria solani ACCC37717、尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum ACCC30373，公众可从中国普通微生物菌种保藏管理中心获得该菌株，以重复本 申请的实验。

[0025] 以下实施例所述的“耐盐性试验”是用含不同浓度氯化钠的培养基检测微生物对盐耐受 性的试验。

[0026] 以下实施例所述的“糖发酵试验”是测验微生物具有不同的利用各种碳源的能力，其原 理在于不同微生物具有不同的酶系。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源，但是它们在分解 糖类物质的能力上有很大差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等) 和气体(如氢气、甲烷、二氧化碳等)，有些细菌只产酸不产气。

[0027] 以下实施例所述的“淀粉水解试验”是淀粉这种多糖水解成单糖的试验。微生物对大分 子的淀粉不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞 外酶主要为水解酶，通过水解酶的作用将分子量大的物质降解为较小的化合物，使其能被运 输至细胞内。例如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖。淀粉遇到碘液变蓝。

[0028] 以下实施例所述的“柠檬酸盐利用试验”是有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳 源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。 此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色。不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌， 在该培养基上不生长，培养基不变色。

[0029] 以下实施例所述的“接触酶反应”是指通过计算一个含有接触酶的纸盘，在盛有H2O2 的试管中根据漂浮时间来估计菌数。接触酶与H2O2发生反应放出氧气，样品接触酶阳性细 菌含量越高，放出的氧气越多，纸盘上浮的时间越短；反之，纸盘上浮的时间就越长。接触 酶多数腐败微生物是嗜冷性细菌，多数嗜冷细菌接触酶呈阳性，所以可以用接触酶反应来测 定食品中的嗜冷性细菌。

[0030] 以下实施例所述的“乙炔还原法”是指用气相色谱仪测定固气酶将乙炔还原为乙烯的量， 用以估算固氮酶活性或氮量。固氮酶不仅能催化N2还原成NH3，还能催化乙炔还原为乙烯。乙 炔和N2对固氮酶的亲和力相似，它们的还原过程平行相关。通过气相层析可将乙炔和乙烯分 离，并可灵敏、快速地进行定量测定，由此而间接地推算生物的固氮酶活性。+ ‑ + ‑
反应式N2+6H  +6e→2NH3，3C2H2+6H+6e→3C2H4表明，还原3克分子乙炔相当于还原1克分子氮，故可 由此而推算固氮量。1968年哈戴(R.W.F.Harday)等首先应用乙炔还原法测定生物固氮酶活 性，并由此推算实验室和田间的生物固氮量。固氮酶活性定量计算方法有外标法，面积归一 法、内标法和外加纯样法等。按对不同固氮体系固氮酶活性的测定又分为：①整体植株测定 法，将待测植株移到密闭装置中培养1天后，注入乙炔，定时取样测定还原为乙烯的量。此 法可测定叶片和根部的固氮酶活性。②离体根系或根瘤测定法，从土中取根系片段或根瘤， 离体培育一定时间后注入乙炔测定其固氮酶活性。③原位测定，将金属圆筒插入植株周围土 中，并用塑料袋将整个植株密封，注入乙炔，定期测定乙烯产生量。此法常用以测定水稻根 际联合固氮酶活性。

[0031] 实施例1菌株分离

[0032] 称取土样10g(采自甘肃省兰州市)装入三角瓶，加入100mL无菌水，静置20min后， ‑128℃，转速200r·min ，振荡30min形成混悬液。吸取5mL混悬液加入到100mLAshby液体 培‑1 ‑4 ‑5 ‑6
养基中，28℃，转速180r·min 富集培养72h后，采用常规梯度稀释法，制成10 、10 、 10 、‑7
10 稀释梯度的菌悬液后，吸取0.1mL菌悬液在Ashby培养基平板上进行凃布，每个梯 度重复3次，置于恒温28℃，培养5d～7d。重复上述分离操作3次。待分离的菌落长出后用 平板划线法继续在Ashby培养基平板上纯化菌株。得到一个菌落直径0.5～1mm，菌落颜色为 乳白，菌落不透明，表面褶皱，边缘不规则，后期棕褐的菌株，具体形态如图1所示，将其 命名为HP10，并分离处理进行菌株的鉴定。

[0033] 实施例2菌株鉴定。

[0034] 从以下三方面对分离纯化得到的菌株进行鉴定。

[0035] 1.形态学鉴定

[0036] 将实施例1分离得到的HP10进行单菌落培养并观察菌落，主要包括菌落的大小、颜色、 透明度、表面状态(是否平坦、凸起、褶皱或凹陷等)和边缘状态(是否整齐、不规则或放 射状等)及后期生长状态。通过生物染色剂染色后进行显微镜镜检。

[0037] 结果表明，分离纯化后得到的菌株HP10菌落：菌落直径0.5～1mm，菌落颜色为乳白， 菌落不透明，表面褶皱，边缘不规则，后期棕褐。镜检结果为革兰氏阴性，短杆状，无芽孢。

[0038] 2.16s rDNA序列同源性分离

[0039] 常规方法培养上述步骤分离纯化得到的菌株HP10，采用细菌基因组DNA提取试剂盒(北 京索莱宝科技有限公司)提取单菌落基因组DNA，送生物工程(上海)股份有限公司16S rDNA 测序，测序结果与NCBI GenBank中的已知序列进行同源性比较后，判定细菌种类，将细菌 划分到属或种。

[0040] 菌株HP10的16s rDNA基因片段1401bp，其序列如下所示：

[0041] CCGGTGCGGGCATGCCTATACATGCAGTCGAACGAGATCTTCGGATCTAGTGGCGCACG GGTGCGTAACGCGTGGGAATCTGCCCTTGGGTTCGGAATAACAGTTGGAAACGACTGCT AATACCGGATGATGACGAAAGTCCAAAGATTTATCGCCCAAGGATRARSSMGYKKAGG WYYRSSTAGKWKKWGSKRKRWWGKSSKWYMARSSYRWCRRYSMYKAKCTRGYYKKM GAGRRKRWKMWSMSMMMMYKGGACTGAGACACGGYCCAGACTCCTACGGGAGGCA GCAGTAGGGAATATTGGACAATGGGGGCAMCCYKRWYCCAGCAATGCCGCGTGAGTGA TGAAGGCSTWRGGGTTGTAAAGCTCYTTTACCCGGGATGATAATGACAGTACCGGGAGA ATAAGCCCCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGGGCTAGCGTTGT TCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGTAGGCGGCGATTTAAGTCAGAGGTGAAAGCC CGGGGCTCAACCCCGGAACTGCCTTTGAGACTGGATTGCTTGAATCCGGGAGAGGTGA GTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAAGAACACCAGTGGCGAA GGCGGCTCACTGGACCGGCATTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGG ATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGATAACTAGCTGCCGGGGCACATGGT GTTTCGGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTTATCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATT AAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCTGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCG AAGCAACGCGCAGAACCTTACCAACGTTTGACATCCTCATCGCGATTTCCAGAGATGGA TTTCTTCAGTTCGGCTGGATGAGTGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCG TGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCTTTAGTTGCCAGCATTT AGTTGGGTACTCTAAAGGAACCGCCGGTGATAAGCCGGAGGAAGGTGGGGRWKRMSK YMAGTCYYMWKRKCCCTTACGCGTKGSTACAACGTGCTACAYRCGWSYWMMRWKGS MGMSWMYMGYGRGSRGMGMYMTCSYSMRRRRRWSCKWMTCTCMRRWWSTCGTCTC AGTTCGGATCGTTCTCTGCAACTCGAGAGCGTGAAGGCGGAATCGCTAGTAATCGCGGA TCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCAGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGG GAGTTGGATTCACTCGAAGGCGTTGAGCTAACCCGCAAGGGAGGCAGGCGACCACAGT GGTTGCTC

[0042] 测定序列后与NCBI数据库中已公开的16s rDNA序列进行在线同源性比较，结果显示 HP10与鞘氨醇杆菌(Sphingobium abikonense)的同源性最高，达到98.70％。

[0043] 3.生理生化特征分析

[0044] 所述鞘氨醇杆菌HP10的生理生化特征测定结果如下：

[0045] 生长温度：4℃不生长，28℃生长，37℃生长；

[0046] 耐盐性实验：0.5％NaCl生长，3％NaCl生长，5～10％NaCl不生长；

[0047] 糖发酵实验：葡萄糖阳性，D‑木糖阳性，甘露醇阴性，乳糖阳性，纤维素阳性，L‑阿拉 伯糖阳性；

[0048] 水解淀粉实验：阴性；

[0049] 利用柠檬酸盐：阳性；

[0050] 水解酪蛋白：阳性；

[0051] 接触酶反应：阳性；

[0052] 脂肪酶反应：阴性。

[0053] 综上，HP10可在含0.5％‑3％NaCl的培养基上生长，具有耐盐特性，能够利用葡萄糖、 D‑木糖、乳糖、纤维素、L‑阿拉伯糖；能够利用柠檬酸盐；能够水解酪蛋白；并产过氧化氢 酶。

[0054] 鉴于上述形态、16s rDNA序列同源性分析、生理生化特征分析结果，确定实施例1中分 离纯化得到的菌株为细菌域鞘氨醇杆菌，命名为鞘氨醇杆菌(Sphingobium abikonense)HP10， 并于2021年1月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)， 保藏编号为CGMCC No.21618，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，联系电话为： 010‑64807288。

[0055] 以下实施例中，为了更加清楚的显示本发明的技术方案，将鞘氨醇杆菌(Sphingobium abikonense)HP10简写为鞘氨醇杆菌HP10。

[0056] 实施例3鞘氨醇杆菌HP10的固氮酶活性测试

[0057] 对实施例1分离纯化得到的鞘氨醇杆菌HP10进行固氮酶活性测试，采用乙炔还原法， 具体方法如下所述：

[0058] 取一环鞘氨醇杆菌HP10接种于盛有5mL半固体Ashby培养基的血清瓶中，28℃下培养 48h。在无菌台中将血清瓶瓶盖换成橡胶塞，并用无菌注射器抽出1mL气体，然后注入1mL 乙炔，密封，再在28℃下培养36h。用无菌注射器从血清瓶中抽取混合气体0.2ml注入气相 色谱仪，测定乙烯生成量，根据以下公式计算固氮酶活性。

[0059] N＝hxCV/(24.9hst)。其中N为产生乙烯的浓度nmol(C2H4)·h‑1·mL‑1即固氮酶活‑1性，hx为 样品乙烯峰面积值，C为标准乙烯浓度(nmol·ml )，V为培养容器体积(mL)，24.9为常数， hs为标准乙烯峰面积值，t为样品培养时间(h)。以固氮培养基培养对照圆褐固氮菌，以同样 的方法测定其固氮酶活性作为参照。以上实验均设三组重复。

[0060] 结果显示，实施例1中分离纯化得到的鞘氨醇杆菌HP10 CGMCC No.21618的固氮酶‑1 ‑1活 性为177.5nmol(C2H4)·h ·mL ，而圆褐固氮菌的固氮酶活性仅为124.60nmol(C2H4)·‑1 ‑1
h ·mL 。 这一结果表明，本发明的鞘氨醇杆菌HP10具有比传统生物固氮肥料中所使用的菌株圆褐固 氮菌更高的固氮能力，可以用于制备固氮微生物菌剂和生产生物有机肥。

[0061] 实施例4鞘氨醇杆菌HP10对螺螨酯的降解性

[0062] 将鞘氨醇杆菌HP10接种于LB液体培养基中，28℃、180r·min‑1摇床培养至对数期，‑14℃、 10000r·min 离心菌液5min后，用MSM培养基洗涤1次后，充分悬浮至对数期菌数，按‑1
照 5％的接种量分别接入含有50、100、150mg·L 螺螨酯标样的MSM培养基，28℃、180r·‑1
min 摇床培养，每隔24h取培养液2mL加入具塞试管中，添加氯化钠1g和乙酸乙酯2mL，剧烈 震荡5min，静置。取上层溶剂1mL挥干，再用乙腈定容至5mL后，0.45μm滤膜过滤，采用 HPLC(色谱仪型号：安捷伦1260型；色谱柱：预分离柱+Eclipse plus C18，4.6mm×100mm， 3.5μ‑1
m；流动相：乙腈；流速1mL·min ，检测波长250nm，柱温30℃，进样量10μL)检测 螺螨酯含量，按照公式：降解率＝(1﹣C取样时螺螨酯浓度/C初始螺螨酯浓度)×100％，计算培养液中螺 螨酯的降解率，实验结果如表1所示：

[0063] 表1培养液中螺螨酯的降解率

[0064]

[0065] 以上结果表明，鞘氨醇杆菌HP10对螺螨酯具有明显的降解作用，当螺螨酯浓度为‑1100 mg·L 时，鞘氨醇杆菌HP10在72h时对螺螨酯的降解率为56.38％，降解效率最高。综上， 鞘氨醇杆菌HP10可作为土壤改良剂降解土壤中残留的螺螨酯。

[0066] 实施例5鞘氨醇杆菌HP10对茄链格孢菌(Alternaria solani)、腐皮镰孢菌(Fusarium solan)、 尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的抑制作用测试

[0067] 采用滤纸条法测定鞘氨醇杆菌HP10对茄链格孢菌(Alternaria solani)、腐皮镰孢菌 (Fusarium solan)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的抑制作用。用LB液体培养基培养 鞘氨醇杆菌HP10，待菌液浓度达到OD600＝1时，取菌液备用。分别在PDA培养基平板中央 接种直径为7mm的茄链格孢菌(Alternaria solani)、腐皮镰孢菌(Fusarium solan)、尖孢镰 刀菌(Fusarium oxysporum)菌丝块，分别进行如下三种处理：

[0068] a对照：无处理；

[0069] b无菌水滤纸条对照：距菌丝块两侧1.5cm位置放置用无菌水浸湿的滤纸条；

[0070] c拮抗试验：距菌丝块两侧1.5cm位置放置浸湿固氮菌待测菌液的滤纸条，28℃培养7d， 观察抑菌效果。

[0071] 待无菌水滤纸条对照铺满整个平板时，垂直滤纸条方向测量对照与处理的菌落直径，计 算抑制率。

[0072] 抑制率＝(无菌水滤纸条对照菌落直径‑处理c菌落直径)/无菌水滤纸条对照菌落直径 ×100％。

[0073] 实验结果如图2所示，鞘氨醇杆菌HP10对茄链格孢菌(Alternaria solani)、腐皮镰孢菌  (Fusarium solan)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的抑制率为44.44％、45.83％、26.82％， 可以作为微生物抑菌剂使用。

[0074] 实施例6鞘氨醇杆菌HP10分泌吲哚乙酸能力的测定

[0075] 将分离纯化后的鞘氨醇杆菌HP10接种于含有L‑色氨酸(100mg/L)的LB液体培养‑1 ‑1基， 28℃，180r·min 摇床培养菌悬液的OD600nm＝1时，4℃，10000r·min 离心10min，取上清 液加入等体积Salkowski(50mL35％HClO4+1mL0.5M FeCl3)比色液，避光静置30min，测 定其OD530nm的值。计算菌浓度OD600nm值为1时，单位体积发酵液中吲哚乙酸的含量。标 准曲线的绘制采用分析纯的吲哚乙酸梯度稀释制备。

[0076] 结果显示，鞘氨醇杆菌HP10菌悬液中IAA的分泌量为2.26μg·mL‑1，具有促进植物生长 的能力。

[0077] 综上所述，本发明从杂交构树根际土壤中分离出了一种鞘氨醇杆菌HP10，保藏于中国普 通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.21618；所述的鞘氨醇杆‑1 ‑1菌 HP10具有较高的固氮酶活性，固氮酶活性为177.5nmol(C2H4)·h ·mL ，可以作为微生物氮 肥施用于杂交构树组培苗的种植；所述的鞘氨醇杆菌HP10可降解螺螨酯，作为土壤残留农 药降解剂，修复被螺螨酯污染的土壤，提高杂交构树的质量安全性，为畜禽健康保驾护航； 所述的鞘氨醇杆菌HP10具有抑制腐皮镰孢菌、茄链格孢菌、尖孢镰刀菌的能力，抑菌率分 别为44.44％、45.83％、26.82％，可以作为防治细菌性病原菌的微生物抑菌剂；所述‑1
的鞘氨醇 杆菌HP10能够分泌吲哚乙酸，分泌量为2.26μg·mL ，能够促进植物的生长，本发明所述的 鞘氨醇杆菌HP10对于西北地区种植杂交构树具有重大意义。