一种针对钛合金内植物表面改性的多方向光功能化仪器及其使用方法转让专利
申请号 : CN202110687484.1
文献号 : CN113413247B
文献日 : 2022-05-20
发明人 : 刘忠军 , 尹川 , 张腾
申请人 : 北京索菲斯医疗器械有限公司
摘要 :
权利要求 :
1.一种对钛合金结构件进行改性的方法,其特征在于,使用至少两种不同波段的紫外线从多个角度同时对所述钛合金结构件进行照射,所述两种不同波段的紫外线选自以下任一:
240±20nm紫外线波段和365±20nm紫外线波段;
270±20nm紫外线波段和365±20nm紫外线波段;
270±20nm紫外线波段和340±20nm紫外线波段;
270±20nm紫外线波段和380±20nm紫外线波段;
所述两种不同波段的紫外线联合使用产生协同效应,使得所述钛合金结构件经照射后表面骨细胞亲和力增加,植入后骨组织再生速度更快。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述钛合金结构件为3D打印制造的多孔钛合金支架。
3.钛合金结构件,其特征在于,经过权利要求1所述的方法进行改性。
4.光功能化仪器,其特征在于,包括:壳体,所述壳体设置有容纳待处理钛合金结构件的腔体;
多个LED紫外线光源,所述紫外线光源设置在所述壳体的内壁,可以对其腔体内的所述待处理钛合金结构件进行均匀的多个方向的光功能化处理,所述LED紫外线光源包括能够发射至少两种不同波段紫外光的LED紫外灯,其中两种不同波段紫外线选自以下任一:
240±20nm紫外线波段和365±20nm紫外线波段;
270±20nm紫外线波段和365±20nm紫外线波段;
270±20nm紫外线波段和340±20nm紫外线波段;
270±20nm紫外线波段和380±20nm紫外线波段;
所述两种不同波段的紫外线联合使用产生协同效应,使得所述钛合金结构件经照射后表面骨细胞亲和力增加,植入后骨组织再生速度更快,工作状态下,所述腔体中240±20nm紫外线波段或者270±20nm紫外线波段的照射能量2
大于2mw/cm ,365±20nm紫外线波段、340±20nm紫外线波段或者380±20nm紫外线波段的2
照射能量大于30mw/cm;
控制面板,所述控制面板用于设置和显示紫外线的波长和处理时间。
5.如权利要求4所述的光功能化仪器,其特征在于,所述控制面板包括控制器和显示器。
6.如权利要求4所述的光功能化仪器,其特征在于,所述两种不同波段紫外光的LED紫外灯间隔排列。
7.如权利要求4所述的光功能化仪器,其特征在于,使用所述光功能化处理的多空钛合金支架的内表面和外表面均具有促成骨效应。
8.钛合金结构件,其特征在于,经过权利要求4至7中任一项所述的光功能化仪器的处理。
说明书 :
一种针对钛合金内植物表面改性的多方向光功能化仪器及其
使用方法
技术领域
背景技术
术。钛合金内植物制作后在环境中暴露,会逐渐失去生物活性,可通过暴露在紫外线下重新
激活生物活性。但是目前仍有多个问题尚未解决,第一,现有的照射处理只能处理结构表
面,对于多空结构内部表面无法处理,第二,现有处理使用高压汞灯,其发射的紫外线波长
固定,光源结构体积大,通常固定使用,只能从一个角度对结构件进行照射,缺乏合适的光
功能化仪器,第三,现有的处理集中在对牙科产品的照射处理,而骨科内植物结构需要在内
部有孔,方便细胞进入其中定植,解决植入后的骨融合问题;第四,3D打印的多孔结构件或
多孔内植物的结构孔复杂,现有技术手段无法照射不规则的内部孔。
发明内容
含有孔,优选地钛合金结构件为3D打印制造的多孔钛合金支架,本发明中,钛合金结构件包
括任何使用钛合金加工而成的产品,钛合金结构件内部含有孔,是指其中可以有任意比例
的空洞,包括但不限于镂空结构或者是3D打印加工而成的结构。本发明中的不同角度是指
以三维坐标系原点为参考,从包括至少两个不同方向的方向进行照射,可选地,照射方向可
以有任意多个,例如3至无穷多;照射可以通过一个或多个光源的移动实现,也可以通过设
置多个不同位置的光源实现。
纳米的紫外线A,并且另一种紫外线为10‑290纳米的紫外线C。
用紫外线C照射15分钟,或者紫外线A与紫外线C依次交替照射1分钟、3分钟、5分钟,照射时
间可以任意选择。
分钟、9分钟、10分钟、11分钟、12分钟、13分钟、14分钟、15分钟,30分钟、60分钟;其中紫外线
A和紫外线C的照射时间可以相同也可以不同。
蛋白吸收、抗菌、防锈中的一个或更多个。
发射紫外线;控制面板,控制面板用于设置和显示紫外线的波长和处理时间。进一步地,所
述壳体具有可以打开的部分,用于将待照射(即处理)的结构件放置其中;控制面板包括控
制器和显示器,控制器用于控制照射的紫外线波长和时间,显示器用于使用者设置和读取
程序的运行情况,显示器可以是触摸屏。
地,紫外线光源可以是led紫外线光源。
270nm的紫外线波段。
的间隔排列设置在壳体内部表面;在本发明的另一些实例中,壳体是圆柱体,紫外线光源按
照一定的间隔排列设置在壳体内部表面。
植物、以及3D打印制造的多孔钛合金支架(假体)等。
光源体积大,无法进行多个光源的密集集成设置;
如提高生物相容性、抗表面老化、增加蛋白吸收、抗菌、防锈中的一个或更多个;
构件的表面结构和各项性能;
有重要意义;可以明显促进骨组织中胶原纤维的形成,这为骨组织与假体表面形成更牢固
的骨结合提供了有力条件。
附图说明
G270、G365、GU 5组的O元素分峰拟合图。
支架共培养7天、14天后GC组、GL组、G270组、G365组、GU组的ALP活性的比较;图9C、SD大鼠骨
髓间充质干细胞与3D打印金属支架共培养电子显微镜观察到的GC组、GL组、G270组、G365
组、GU组的支架共培养孔隙金属表面的细胞附着与胶原纤维;图9D、SD大鼠骨髓间充质干细
胞与3D打印金属支架共培养3天GC组、GL组、G270组、G365组、GU组的F‑Acting细胞骨架显
像;图9E、SD大鼠骨髓间充质干细胞与3D打印金属支架共培养3天后Live‑Dead荧光结果。
百分比);图13C中示出:GC、GL、G270、G365、GU 5组的类骨质和矿化骨百分比;图13D中:i至V
图分别显示了GC、GL、G270、G365、GU 5组的序贯荧光(四环素‑钙黄绿素)的结果。
模式图。
具体实施方式
(Ultra Low ClusterPlate)Corning;48孔超低贴附培养皿,Corning;培养瓶(74Cm ,
2
24Cm),Corning;梯度冻存盒,Nalgene;细胞计数仪,Nucleocounter;酶标仪,Thermo;SD大
鼠骨髓来源间充质干细胞(BMSC);自提基础培养基(BM),Gibco;成骨分化诱导培养基(OM),
CYAGEN,美国;FBS,胎牛血清,Gibco。胰蛋白酶(0.25%),Gibco磷酸盐缓冲液(PBS)Gibco;
DMSO,Sigma‑Aldrich;CCK‑8Dojindo,日本;BCA蛋白浓度定量试剂盒Beyotime;Dapi溶液
Solarbio;Tritc Phalloidin罗丹明标记鬼笔环肽Solarbio;Goldner三色染色液
Solarbio;活、死细胞活力毒性检测试剂盒,keyGen;ALP活性测定试剂盒Beyotime;Triton
X‑100Biotopped;多聚甲醛谷歌生物;二甲苯北京化工厂;TECHNOVIT7200树脂EXAKT,德国;
钙黄绿素Sigma;四环素Sigma;甲苯胺蓝染液谷歌生物;品红国药集团;
电子谱分析仪(XPS)Kratos,UK;能量色散X射线谱仪(EDS)Philips,Netherlands X线衍射
仪(XRD)Focus,Bruker;通用力学测试仪,MTS Inc,USA;电感耦合等离子体原子发射光谱分
析,ICP‑AES;硬组织切磨片机EXAKT,德国;脱水浸透仪EXAKT,德国;光固化包埋仪,EXAKT,
德国;平行载片粘合压片装置,EXAKT,德国;干燥渗透再聚合装置,EXAKT,德国;塑料载玻片
EXAKT,德国;甲基丙烯酸甲酯光聚合树脂EXAKT,德国;TECHNOVIT 7210精密粘合剂EXAKT,
德国;TECHNOVIT 4000黏合剂EXAKT,德国;砂纸EXAKT,德国;防冷却型外径千分尺EXAKT,德
国;荧光显微镜Leica,德国;
柱体,用于细胞实验;(2)直径5mm、高度6mm的圆柱体,用于材料表征、体外力学测试、细胞培
养、植入实验等;(3)采用EBM技术制备直径10mm、厚度1mm的图片片状Ti6A14V材料用于表
征。参见下表1。
Arcam EBM S12(ArcamAB,Sweden)设备进行样品的制备,样品的原材料为:Ti6A14V ELI
Arcam标准粉末,粉粒的直径在45‑100μm之间,采用电子束在真空环境下对粉末开始进行逐
层的熔融打印,层厚0.1mm,成型后,充入氦气后自然冷却至100℃,然后充入空气,并完成打
印过程。
光源发射的紫外线波长通常以某一波长为主,相邻波长为辅,所以仅以峰值对光源进行描
述;
射能量大于30mw/cm ,且均匀性大于80%;从至少两个角度、多个角度、优选全向角度发射
紫外线,实现腔体内紫外线的能量分布较为均匀,最优选的情况下能够实现从所有角度照
射;不同波段的紫外线可以单独照射,亦可以同时照射;
面体内腔尺寸≥3x3x4立方厘米。
图1至图3所示。图1中示出了光功能化仪器的一个实物照片,其内部为六面体内腔,并打开
了舱门,显示出内部和舱门上规则设置的led紫外灯珠,所述的光源排列仅仅是示例性的,
灯珠的间距没有要求,只要能实现目标能量密度即可。
处理时间。壳体具有可以打开的部分,内部用于将待照射的结构件放置其中;控制面板包括
控制器和显示器,控制器用于控制照射的紫外线波长和时间,显示器用于使用者设置和读
取程序的运行情况,一个优选实施例中,显示器是触摸屏,使用者可以进行输入设定。控制
面板可以控制紫外灯的开关和时序,例如在六面体内腔的情况下,可以同时开启两种波长
的紫外灯,也可以单独开启一个波段的紫外灯,或者控制不同波段的紫外灯交替照射;又例
如,可以开启一个面,两个面或更多个面上的紫外灯,而不开启其他面上的紫外灯,还可以
按照需求加上时序控制。
接受270nm、365nm、270nm与365nm双波长照射,照射时间均为15分钟。
烘干,期间操作均使用金属器械,避免接触可能污染,并开始后续处理。
保存,24小时之内进行高压蒸汽灭菌及烘干,期间操作均使用金属器械,避免接触可能污
染,并开始后续处理。
外线同时照射假体15分钟,并进行密封保存,24小时之内进行高压蒸汽灭菌及烘干,期间操
作均使用金属器械,避免接触可能污染,并开始后续处理。
284.8eV进行校正。
80°。
相应的生长培养基。一般的细胞生长培养基为培养基+10%胎牛血清,最后按1%体积分数
加入双抗贮存液(青霉素+链霉素),使青霉素和链霉素的终浓度分别为100U/mL和100U/mL。
骨两端打各打2~3个孔,针筒吸取适量培养基插入一端干骺端,将骨髓中细胞冲至培养皿
中,反复几次,直至股骨及胫骨发白,收集此细胞悬液,用200目金属滤网过滤去除稍大的杂
质,将过滤后细胞悬液收集至离心管中,800r/min,5min离心,弃上清,加人适量α‑MEM培养
基混匀,接种于10cm塑料培养皿中,于37℃,体积分数5%CO2饱和湿度孵育箱中培48‑72小
时(h)后更换培养基,注意动作轻柔,此后每隔3天更换培养基1次,约9~12天后形成多个细
胞集落,长满瓶底约70%~80%后可进行传代培养。
的0.125%浓度的胰蛋白酶覆盖住细胞,在室温下来进行细胞消化,当我们在倒置显微镜下
面观察细胞逐渐变为圆形,接着从培养瓶分离时,我们加入适量的基础培养基来中和胰蛋
白酶,然后轻轻的敲打培养瓶从而使细胞脱离后,接着将细胞悬液在为800转/分钟(rpm)的
条件下来离心5分钟,移出液体后,我们加入适量基础培养基,轻轻的吹打细胞团块重悬细
胞,最后,我们将等量搅拌均匀的细胞悬液来分至培养瓶内部,补充适量的基础培养基后,
再置于培养箱内部培养,培养环境需为温度37℃,二氧化碳浓度为5%,细胞培养到第3~5
代时使用。
释一定的倍数,然后移液枪将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数
板之间,静置3min(注意盖片下不要有气泡)最后计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左
4
侧和上方,根据公式计算(细胞数/mL=四大格细胞总数/4×10×稀释倍数/ml)细胞数量,
重复3次,取平均值。根据测定的细胞数量,再加入适量的基础培养基调整细胞浓度至5×
4
10/600μl。
反复回吸和滴加,以便细胞悬液与支架均匀接触,培养至24小时使细胞的进一步贴附。
行一次换液。
养基1次,然后将支架分别移至24孔板内,每孔加入1ml的新鲜基础培养基以及100μlCCK‑8
的试剂,我们将培养板放置于37℃条件下来孵育2h,待反应结束后,每孔吸出100μl加入96
孔板,再使用酶标仪在450nm的波长下来测定吸光度。
孔板内,每孔加入1ml Live/Dead工作液(2μM CalceinAM和8μM PI),室温孵育30min后,吸
出工作液,终止孵育。用PBS对支架清洗2遍(操作过程要轻柔),然后使用激光共聚焦显微镜
观察标记细胞。
孔板内,吸掉培养液,在37℃条件下预热的1×PBS(PH7.4)清洗细胞2次;使用溶于PBS的4%
甲醛溶液进行细胞固定,室温固定10min;室温条件下,用PBS清洗细胞2次,每次10min;取
1ml配置好的TRITC标记鬼笔环肽工作液,室温避光孵育30min;然后用PBS清洗支架3次,每
次5min;使用1ml DAPI溶液(浓度:100nM)对细胞核进行复染10min;最后吸出染色液,用PBS
清洗3遍,终止染色,使用激光共聚焦显微镜观察标记细胞。
(Alkaline phosphatase,ALP)的活性,并且测定细胞的总蛋白含量进行校正。碱性磷酸酶
(ALP)的活性检测:首先我们使用磷酸盐缓冲液(PBS)来清洗待测样品两次,然后用1ml
0.2%Triton X‑100来裂解3D多孔钛合金内置物上的细胞;吸取细胞裂解液来检测ALP的活
性;我们依照实验的说明来配制检测缓冲液、显色底物溶解(para‑nitrophenyl
phosphate,pNPP)以及标准品的工作液,然后稀释标准品(p‑nitrophenol)为0.002μmol;依
照实验的说明我们将每孔分别加入待测的样品,底物溶液、检测缓冲液以及标准品,在37℃
的条件下孵育5min,然后在405nm的波长下读取吸光值,并且计算碱性磷酸酶(ALP)的DEA活
性单位,碱性磷酸酶(ALP)的DEA活性单位来定义为在pH9.8的diethanoamine(DEA)缓冲液
中,37℃的条件下,每分钟的水解pNPP显色底物生成1μmnol p‑nitrophenol所需ALP的量定
义为一个酶活力的单位,也被称作为一个DEA的酶活力单位。
行检测:按照实验说明来配制蛋白的定量工作液(Micro BCAWorikingReagent),并且,我们
将标准品稀释至200μg/ml、20μg/ml、10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml、1μg/ml以及0.5μg/ml,来
建立300μl的反应体系,我们将每孔分别加入150μl的标准品或者待测样品,然后向每孔分
别加入150μl的工作液,搅拌均匀后进行封孔膜密封,在37℃条件下来孵育2小时,然后在
562nm的波长下,再读取吸光值,并用BCA测得的总蛋白含量对于ALP活性行标准化处理。
液清洗支架上剩余的培养基,然后将支架分别移至24孔板内,吸掉培养液,用PBS(PH7.4)清
洗细胞2次;首先,用3%戊二醛在4℃的条件下来固定2h;0.18M的蔗糖冲洗液在4℃条件下
固定2h;1%的锇酸在4℃的条件下固定2小时;接着,梯度乙醇(30%,50%,70%,90%,
100%)脱水3次,每次15min;然后将乙醇异戊脂置换20min;在临界点干燥;对待测样品进行
喷金,采用SEM观察。
缩的测试。测试的样品为直径5mm,高度为6mm的3D打印圆柱金属支架,压缩过程中的形变率
为1.8mm/分,每组测试的样品数量为5个,测试数据自动的生成为应力‑应变曲线(Stress‑
strain curve),从而,分析得到的弹性模量(Elastic modulus)、屈服强度(Yield
strength)以及压缩强度(Compression strength)。
通过北京大学医学部的伦理委员会审批(LA2014214通过,动物实验的操作和饲养均符合国
家实验动物的饲养和使用指南。
紫外线光功能化对3D打印多孔钛合金内置物骨整合性能造成的影响,尽管这样,我们根据
兔股骨骼的解剖特点(兔股骨骼的前后径大约为12‑15mm),再将兔股骨的内侧骼所造的骨
缺损大小为5mm,以及模拟极限骨缺损的模型(Critical bone defect)。据文献统计,正常
的兔骨愈合的骨重塑发生于3周至8周,8周时骨重塑已经大部分都完成,从而,在本研究中,
我们观察的时间点选择为植入术后8周,而且为了动态反应的3D打印多孔钛合金植入物植
入术后骨整合的过程,将分别在术后第3周及第7周分别皮下注射钙黄绿素和四环素来标记
不同的时期骨生成的情况。
用尖刀片来刮涂附着的骨膜,并且,定位股骨骼部,我们采用5mm直径的电钻,在生理盐水冷
却下在股骨髁造一个直径为5mm的骨缺损,然后用生理盐水来冲洗局部,再将假体植入骨缺
损的地方,接着采用4#的抗菌薇乔线逐涂层间断缝合肌肉层、筋膜层和皮肤。术后3天再采
用青霉素40万单位肌肉来注射预防感染。
labeling)3周以及7周的骨生成的情况,我们采用试剂的配制和给药时间(如表2),给药前
的试剂采用为0.2μm的过滤器来进行消毒,给药的途径采用为皮下注射的方式,手术后3周
和7周的生成骨分别被标记为绿色和黄色。
0.05,有明显统计学差异。GL、G270、G365与GC组相比,有明显统计学差异(p<0.05);GL、
G270、G365与GU组相比,GU组的接触角最小,有明显统计学差异(p<0.05)。
相对于GL、G270和G365,在GU组,观察到最多的表面微孔形成。
功能化处理组(GL、G270、G365、GU)内表面不同化学元素(C、O、AL、Ti、V)的原子质量百分比,
相对于对照组(GC),光功能化处理过的4组(GL、G270、G365、GU)的碳(元素C)含量减少,且p<
0.05,有明显统计学差异(图6F);GC与GU组有明显统计学差异(p<0.01);且GL、G270、G365与
GU组相比,GU组的碳含量最少,有明显统计学差异(p<0.05);而其他元素如Ti、O、Al|、V均无
明显差异(p>0.05)。
行的单波段照射G365在假体内部形成了相对于GL的显著优势,多角度照射对于假体内部孔
径表面的光功能化有明显益处。
7K、7N)可以得到三个峰:C‑C峰对应结合能为284.82eV,C‑O峰对应结合能为286.41eV,C=O
峰对应结合能为288.41eV。不同样品对应的峰位会略有差异。不同样品中三种化学环境的C
元素的相对比例如表3所示。对O元素的窄扫谱进行分峰拟合(如图7C、7F、7I、7L、7O)可以得
到三个峰:O‑Ti(TiO2)峰对应的结合能为529.99eV,O‑C峰对应的结合能为531.89eV,O=C
峰对应的结合能为532.99eV。不同样品对应的峰位会略有差异。5组样品中三种化学环境的
O元素的相对比例如表4所示。
但是4个光功能化处理组(GL、G270、G365、GU)均发现了更多氧化物的形成(AL2O3)。Ti6AL4V
为主相,代表的衍射峰有2θ=35.921゜,2θ=39.010゜,2θ=41.166゜,2θ=53.921゜,2θ=
64.677゜,2θ=72.030゜,2θ=77.923゜和2θ=79.549゜分别对应于(200)晶面、(002)晶面、
(201)晶面、(202)晶面、(220)晶面、(203)晶面、(222)晶面和(401)晶面。
时间点,细胞增殖率比较差别具有一致性:GU组较GC、GL、G365组有明显升高,且差异有统计
学意义(P<0.01);GU组较G270有明显升高,且差异有统计学意义(P<0.05);GL和G270也存在
明显统计学差异(P<0.05),说明双波段紫外线处理相对于单波段处理具有显著优势。而在
Live‑Dead荧光测试中(图9E),可以直观看到G270、G365、GU组相对GC和GL组在3D打印金属
支架表面的活细胞数目更多,证明本发明仪器和方法提供了更加均匀的多角度照射,比现
有的汞灯照射效果好。
组相对于G365也具备更高的碱性磷酸酶活性,差异具备统计学意义(P<0.05);GL与G270组
相对,有明显统计学差异(P<0.01);而G270与GU组无明显统计学差异(P>0.05)。
用全方位照射的光功能化组(G270、G365、GU)细胞在3D打印支架内部的附着更多。
量的胶原纤维附着(图10)。
均没有明显统计学差异(p>0.05);应力应变曲线(图11D)5组也基本一致。
脱出等。
12F,GU的骨体积分数(骨长入率BIR),GC组、GL组、G270组、G365组、GU组分别为(43.33±
5.08)%、(61.03±3.44)%、(74.44±1.90)%、(66.16±1.52)%、(75.53±1.40)%,GC与
光功能化处理组(GL、G270、G365、GU)、GL与GU、G365和GU之间有明显统计学差异(P<0.05)。
相比于汞灯照射,本发明的仪器的单波段照射实现了更好的效果,双波段紫外线比单波段
紫外线照射效果显著更好。
入,新生骨组织与钛合金支架紧密结合,并且矿化形成骨质,如图13A。
0.01);G270与GU无明显统计学差异(P>0.05);G365与GU组有明显统计学差异(P<0.05),如
图13B。
<0.01);G270与GU有明显统计学差异(P<0.05);G365与GU组有明显统计学差异(P<0.01),如
图13B。
计学差异(P<0.01);G270与GU无明显统计学差异(P>0.05);G365与GU组有明显统计学差异
(P<0.05),如图13C。
计学差异(P<0.01);G270与GU无明显统计学差异(P>0.05);G365与GU组有明显统计学差异
(P<0.05),如图13C。
见。而GC和GL组的呈现更多的是8周的成骨。
391.2±16.7、301.7±10.2、450.5±18.5;GC、GL、G365相比GU组有明显统计学差异(P<
0.01);G270与GU组有明显统计学差异(P<0.05);GL与G270组有明显统计学差异(P<0.01);
如图14B,轴向推出力与位移曲线显示,G270和GU组相对于GC、GL、G365组,为了产生相同的
位移,假体需要更大的推出力。
相对于单独波段处理的显著效果;本发明的光功能化仪器能够通过多个紫外线光源实现对
钛合金表面的均匀处理,效果远超现有的汞灯;光功能化仪器内单波段多角度的紫外线光
源和均匀的功率可以对内部有孔的结构实现外部和内部光功能化处理,效果远超现有的汞
灯。
钟;第二组,使用365nm紫外线波段照射处理30分钟;第三组,使用270nm紫外线波段和365nm
紫外线波段依次交替照射1分钟,一共持续照射30分钟;第四组,使用270nm紫外线波段和
365nm紫外线波段依次交替照射5分钟一共持续照射30分钟;第五组,使用270nm紫外线波段
和365nm紫外线波段同时照射15分钟;第六组,使用270nm紫外线波段照射处理60分钟;第二
组,使用365nm紫外线波段照射处理60分钟;
第一组之间几乎没有差别,第七组和第二之间几乎没有差别,实验数据未示出。
结合单波段15分钟处理结果,对比处理30分钟和60分钟的假体,发现15分钟之后,单一波段
的处理已经基本不再继续产生影响,假体的表面形态基本不再变化。
20nm紫外线波段同时照射15分钟;第2组,使用240±20nm紫外线波段和365±20nm紫外线同
时照射15分钟;第3组,使用270±20nm紫外线波段和365±20nm紫外线波段同时照射15分
钟;第4组,使用270±20nm紫外线波段和340±20nm紫外线波段同时照射15分钟;第5组,使
用270±20nm紫外线波段和380±20nm紫外线波段同时照射15分钟;
之内,则本发明也意图包含这些改动和变型在内。