一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒和方法

摘要

本发明公开了一种本发明提供的一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其包括预包被液，预包被液具有链霉亲和素和碳纳米管结合体。首先把预包被液加入到包被孔内进行预包被，然后把包被液加入到包被板的孔内；得到包被有抗环瓜氨酸肽抗原‑链霉亲和素‑碳纳米管的包被板；然后加入辣根过氧化物酶羊抗兔I gG试剂；然后加入邻苯二胺显示底物试剂，加入硫酸终止试剂，最后用酶联免疫检测仪记录读数。通过链霉亲和素的引入使得这种预包被液对于包被板的负载作用增强，从而使得其在板体上以更为均匀和分散的方式实现负载从而提高了其在包被板上的结合速率和效果，这样就使得后面的包被步骤的时间缩短，并且也相应地使得灵敏度得到了提高。

权利要求

1.一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于：包括预包被液，所述预包被液具有链霉亲和素和碳纳米管结合体;所述碳纳米管为疏水性碳纳米管，所述疏水性碳纳米管为聚偏氯乙烯复合的碳纳米管; 疏水性碳纳米管和聚偏氯乙烯重量比为1:1；链霉亲和素‑碳纳米管‑聚偏氯乙烯中的链霉亲和素的含量在60%至90%；链霉亲和素‑碳纳米管‑聚偏氯乙烯的结合时间为2至3小时；

还包括抗环瓜氨酸肽抗原包被试剂，所述包被试剂中含有浓度为0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，包被试剂的pH为9.6，蛋白质含量为1μg/ml至10μg/ml；

还包括辣根过氧化物酶羊抗兔IgG试剂、邻苯二胺显示底物试剂、2mol/L的硫酸终止试剂。

2.根据权利要求1所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒的工作方法包括下面的步骤：S1：首先把所述预包被液加入到包被板的孔内进行预包被，37℃下温育1小时；然后把包被试剂加入到包被板的孔内；进行37℃的温育后在4℃下反应5小时至6小时；

S2：将包被板内的液体倒出后加入洗涤试剂，且倒出和洗涤的过程重复三次得到包被有抗环瓜氨酸肽抗原‑链霉亲和素‑碳纳米管的包被板；

S3：把待检测样品放入到所述包被板内，并且设定对照组，在37℃下反应2小时至3小时；

S4：再次通过洗涤试剂重复三次进行倒出和洗涤的过程，然后加入辣根过氧化物酶羊抗兔IgG试剂，在37℃下反应1小时；

S5：再次通过洗涤试剂重复三次进行倒出和洗涤的过程，然后加入邻苯二胺显示底物试剂，于黑暗环境下在37℃下反应15分钟；

S6：加入硫酸终止试剂，最后用酶联免疫检测仪记录读数。

3.根据权利要求2所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒的工作方法包括下面的步骤：S1：把羧基化的碳纳米管颗粒加入到缓冲液中，然后加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基硫代琥珀酰亚胺进行活化；

S2：收集活化后的碳纳米管颗粒并且加入到链霉亲和素中进行混合搅拌，得到链霉亲和素和碳纳米管的结合体；

S3：把链霉亲和素和碳纳米管的结合体在无水乙醇中进行超声分散，然后加入聚偏氯乙烯，再次进行超声分散步骤，相应得到均匀分散的液体；把液体倒出后进行烘干，然后干燥得到粉末，该粉末为链霉亲和素‑碳纳米管‑聚偏氯乙烯的结合体。

说明书

一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒和方法

技术领域

[0001] 本发明具体涉及一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒和方法。

背景技术

[0002] 抗环瓜氨酸肽抗体为一种能够反应合成环化瓜氨酸多肽(CCP)为抗原的生物抗体，这种抗体对于类风湿关节炎这种疾病能够很好地进行特异性指示判断，因此能够作为这种疾病在早期进行检测而进行诊断的重要指标物质之一。在实践的临床中，一般会采用酶联免疫吸附法(ELISA)进行这种抗体的检测。

[0003] 在实际的采用酶联免疫吸附法(ELISA)进行抗环瓜氨酸肽抗体检测的时候，其中一个问题需要特别留意，就是检测的灵敏度不足，容易出现部分阳性样本无法被检测出来的问题，另外就是在进行包被的过程即把抗环瓜氨酸肽抗原包被在聚苯乙烯板体上的时候需要的时间过长，一般需要达到20个小时，这样就明显降低了工作效率。究其原因，这是因为抗原的分子量不足，其与聚苯乙烯载体的结合速率慢且分散性不够，导致在一些位点不能完成结合或者很难结合，因此造成了上述技术问题的存在。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于针对现有技术的不足之处，提供一种提高包被液与聚苯乙烯板结合速率和效果的技术方案。

[0005] 本发明提供的一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其包括预包被液，所述预包被液具有链霉亲和素和碳纳米管结合体。

[0006] 通过链霉亲和素的引入使得这种预包被液对于包被板的负载作用增强，并且通过碳纳米管的复合作用使得其分散性得到加强，从而使得其在板体上以更为均匀和分散的方式实现负载从而提高了其在包被板上的结合速率和效果，这样就使得后面的包被步骤的时间缩短，并且也相应地使得灵敏度得到了提高。

[0007] 一个优选的方案是，所述碳纳米管为疏水性碳纳米管，所述疏水性碳纳米管为聚偏氯乙烯复合的碳纳米管。通过这种疏水性的作用，进一步地提高了碳纳米管与包被板的结合速率和效果，即通过大分子疏水性聚合物的引入之后使得其与包被板的结合速率加快，从而达到了更好的效果。

[0008] 一个优选的方案是，还包括抗环瓜氨酸肽抗原包被试剂，所述包被试剂中含有浓度为0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，包被试剂的pH为9.6，蛋白质含量为1μg/ml至10μg/ml。

[0009] 一个优选的方案是，还包括辣根过氧化物酶羊抗兔IgG试剂、邻苯二胺显示底物试剂、2mol/L的硫酸终止试剂。

[0010] 本发明提供的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒的工作方法，其包括下面的步骤：

[0011] S1：首先把所述预包被液加入到包被孔内进行预包被，37℃下温育1小时；然后把包被液加入到包被板的孔内；进行37℃的温育后在4℃下反应5小时至6小时；

[0012] S2：将包被板内的液体倒出后加入洗涤试剂，且倒出和洗涤的过程重复三次得到包被有抗环瓜氨酸肽抗原‑链霉亲和素‑碳纳米管的包被板；

[0013] S3：把待检测样品放入到所述包被板内，并且设定对照组，在37℃下反应2小时至3小时；

[0014] S4：再次通过洗涤试剂重复三次进行倒出和洗涤的过程，然后加入辣根过氧化物酶羊抗兔IgG试剂，在37℃下反应1小时；

[0015] S5：再次通过洗涤试剂重复三次进行倒出和洗涤的过程，然后加入邻苯二胺显示底物试剂，于黑暗环境下在37℃下反应15分钟；

[0016] S6：加入硫酸终止试剂，最后用酶联免疫检测仪记录读数。

[0017] 本发明提供的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒的工作方法，其包括下面的步骤：

[0018] S1：把羧基化的碳纳米管颗粒加入到缓冲液中，然后加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基硫代琥珀酰亚胺进行活化；

[0019] S2：收集活化后的碳纳米管颗粒并且加入到链霉亲和素中进行混合搅拌，得到链霉亲和素和碳纳米管的结合体；

[0020] S3：把链霉亲和素和碳纳米管的结合体在无水乙醇中进行超声分散，然后加入聚偏氯乙烯，再次进行超声分散步骤，相应得到均匀分散的液体；把液体倒出后进行烘干，然后干燥得到粉末，该粉末为链霉亲和素‑碳纳米管‑聚偏氯乙烯的结合体。

具体实施方式

[0021] 下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

[0022] 第一实施例：

[0023] 本发明提供的一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其包括预包被液，所述预包被液具有链霉亲和素和碳纳米管结合体。

[0024] 通过链霉亲和素的引入使得这种包被液对于包被板的负载作用增强，并且通过碳纳米管的复合作用使得其分散性得到加强，从而使得其在包被板体上以更为均匀和分散的方式实现负载从而提高了其在包被板上的结合速率和效果，这样就使得后面的包被步骤的时间缩短，并且也相应地使得灵敏度得到了提高。

[0025] 还包括抗环瓜氨酸肽抗原包被试剂，所述包被试剂中含有浓度为0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，包被试剂的pH为9.6，蛋白质含量为1μg/ml至10μg/ml。

[0026] 还包括辣根过氧化物酶羊抗兔IgG试剂、邻苯二胺显示底物试剂、2mol/L的硫酸终止试剂。

[0027] 本发明提供的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒的工作方法，其包括下面的步骤：

[0028] S1：首先把所述预包被液加入到包被孔内进行预包被，37℃下温育1小时；然后把包被液加入到包被板的孔内；进行37℃的温育后在4℃下反应5小时至6小时；

[0029] S2：将包被板内的液体倒出后加入洗涤试剂，且倒出和洗涤的过程重复三次得到包被有抗环瓜氨酸肽抗原‑链霉亲和素‑碳纳米管的包被板；

[0030] S3：把待检测样品放入到所述包被板内，并且设定对照组，在37℃下反应2小时至3小时；

[0031] S4：再次通过洗涤试剂重复三次进行倒出和洗涤的过程，然后加入辣根过氧化物酶羊抗兔IgG试剂，在37℃下反应1小时；

[0032] S5：再次通过洗涤试剂重复三次进行倒出和洗涤的过程，然后加入邻苯二胺显示底物试剂，于黑暗环境下在37℃下反应15分钟；

[0033] S6：加入硫酸终止试剂，最后用酶联免疫检测仪记录读数。

[0034] 第二实施例：

[0035] 优选地，本实施例的所述碳纳米管为疏水性碳纳米管，所述疏水性碳纳米管为聚偏氯乙烯复合的碳纳米管。通过这种疏水性的作用，进一步地提高了碳纳米管与包被板的结合速率和效果，即通过大分子疏水性聚合物的引入之后使得其与包被板的结合速率加快，从而达到了更好的效果。

[0036] 本发明提供的环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒的工作方法，其包括下面的步骤：

[0037] S1：把羧基化的碳纳米管颗粒加入到缓冲液中，然后加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基硫代琥珀酰亚胺进行活化；

[0038] S2：收集活化后的碳纳米管颗粒并且加入到链霉亲和素中进行混合搅拌，得到链霉亲和素和碳纳米管的结合体；

[0039] S3：把链霉亲和素和碳纳米管的结合体在无水乙醇中进行超声分散，然后加入聚偏氯乙烯，再次进行超声分散步骤，相应得到均匀分散的液体；把液体倒出后进行烘干，然后干燥得到粉末，该粉末为链霉亲和素‑碳纳米管‑聚偏氯乙烯的结合体。

[0040] 表1不同类型的预包被液对于包被板的整体结合时间的性能测试

[0041]组别 结合时间
链霉亲和素 16‑18小时
链霉亲和素‑碳纳米管 6‑7小时
链霉亲和素‑碳纳米管‑聚偏氯乙烯 2‑3小时

[0042] 上述组别用到的预包被液不同，而其它具体的测试流程均相同，结合时间包括了预包被时间和包被时间的总和。在结合时间的测试中，对于同一组别分别给予不同的结合时间，然后再统计各自的阳性检测率，当逐渐提高结合时间后对于检测效率没有发生明显变化的时候就记录该结合时间。另外，链霉亲和素的诊断敏感度为38％，链霉亲和素‑碳纳米管的诊断敏感度在45％，链霉亲和素‑碳纳米管‑聚偏氯乙烯则在60％以上。三者的诊断特异性均在90％以上而没有明显差别。碳纳米管和聚偏氯乙烯重量比优选为1:1。链霉亲和素‑碳纳米管‑聚偏氯乙烯中的链霉亲和素的含量在60％至90％。

[0043] 显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。