一种连翘提取物的制备方法

摘要

本发明提供一种连翘提取物的制备方法，包括以下步骤：S1连翘叶处理、S2酶解、S3配制提取溶剂、S4超声辅助提取、S5萃取反洗，本发明的方法对连翘中的连翘酯苷A高效提取，连翘酯苷A含量为5mg/g以上，连翘酯苷A提取转移率77％以上，适合工业化生产。

权利要求

1.一种连翘提取物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、连翘叶处理：将连翘叶清洗，烘干，粉碎，过120～250目筛得干燥的连翘叶粉，备用；

S2、酶解：将S1获得的连翘叶粉在80～120℃下与水混合，所述连翘叶粉和水的质量体积g/mL为1～3:20～50，调节pH值至4‑7，混合均匀后加入复合酶，所述复合酶由质量比为1～3:0.5～2:1～2的果胶酶、鼠李糖苷酶、磷脂酶组成，调节温度为40～50℃下酶解1～3h，干燥，得到连翘酶解物；

S3、配制提取溶剂：将50～60vol％的乙醇、70～90vol％甲酰胺、20～40vol％戊二醇按体积比为0.1～1:1.3～2:1混合，经搅拌速率为400～600rpm下搅拌40～60min，得到提取溶剂；

S4、超声辅助提取：取S2得到的连翘酶解物，加入S3得到提取溶剂，在功率为500～700w下进行两段超声提取，调节pH为2一次提取40～60min，得到连翘粗提液A，将连翘粗提液A再加入上述提取溶剂，调节pH为7二次提取30～50min，得到连翘粗提液B；

S5、萃取反洗：将S4得到的连翘粗提液B，用石油醚萃取40～60s，过滤，取滤液，再用水饱和的正丁醇溶液萃取30～50s，收集萃取液，干燥，得连翘提取物。

2.如权利要求1所述的一种连翘提取物的制备方法，其特征在于：所述S4中连翘酶解物与提取溶剂的质量体积g/mL比为0.5～1:20～40。

3.如权利要求1所述的一种连翘提取物的制备方法，其特征在于：所述S4中连翘粗提液A与提取溶剂的体积比为1～3:9。

4.如权利要求1所述的一种连翘提取物的制备方法，其特征在于：所述S5中连翘粗提液B与石油醚的体积比为1：10～20。

5.如权利要求1所述的一种连翘提取物的制备方法，其特征在于：所述S5中滤液与水饱和的正丁醇溶液的体积比为1：10～20。

说明书

一种连翘提取物的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及植物提取领域，特别涉及一种连翘提取物的制备方法。

背景技术

[0002] 连翘为木犀科(Oleaceae)连翘属(Forsythia Vahl)，其果实可入药，具有清热解毒，散结消肿的功效，含有挥发性成分、苯乙醇苷类、木脂素类、三萜类及酚酸类等成分，主
要为连翘苷、连翘酯苷、异连翘酯苷，挥发油、连翘酚、香豆精、齐墩果酸、皂苷等，主要含有
连翘酯苷A、连翘酯苷F、连翘苷以及连翘脂素等成分，连翘叶是连翘植物叶片，资源丰富，具
有与连翘果实基本相同的化学成分，有的成分含量甚至高于果实；

[0003] 当前，连翘酯苷A的提取分离方法：直接用水提取或水提物再用有机溶剂提取，提取物经硅胶制备薄层析或柱层析分离得到产物。梁文藻等(药物分析杂志，1986，6(5)，263‑
266)从连翘中提取连翘酯苷A产物是采用化学分离方法，然后用制备性薄层板进行纯化，最
后得到纯品，该提取方法效率低、大量使用了有毒有机溶剂；“一种连翘酯苷A制备方法”，公
开号：CN101215302B，该发明精制工艺简单，提取效率高，按连翘酯苷A不同用途对纯度的要
求，纯度可达85～99％，但是提取率只有0.5～2％，远不足以工业化生产。并且上述对连翘
酯苷A的提取是在中性条件下提取，并未从酸性或碱性条件下，将连翘酯苷A提取的更完全。

发明内容

[0004] 鉴于此，本发明提出一种连翘提取物的制备方法，解决对连翘酯苷A提取效率低的问题。

[0005] 本发明的技术方案是这样实现的：一种连翘提取物的制备方法：包括以下步骤：

[0006] S1、连翘叶处理：将连翘叶清洗，烘干，粉碎，过120～250目筛得干燥的连翘叶粉，备用；

[0007] S2、酶解：将S1获得的连翘叶粉在80～120℃下与水混合，所述连翘叶粉和水的质量体积g/mL为1～3:20～50，调节pH值至4‑7，混合均匀后加入复合酶，调节温度为40～50℃
下酶解1～3h，干燥，得到连翘酶解物，在此温度下，使连翘叶中的有效成分溶出；

[0008] S3、配制提取溶剂：将乙醇、甲酰胺、戊二醇混合，经搅拌速率为400～600rpm下搅拌40～60min，有效针对目标成分的提取，得到提取溶剂；

[0009] S4、超声辅助提取：取S2得到的连翘酶解物，加入S3得到提取溶剂，在功率为500～700w下进行两段超声提取，调节pH为2一次提取40～60min，得到连翘粗提液A，将连翘粗提
液A再加入上述提取溶剂，调节pH为7二次提取30～50min，得到连翘粗提液B，分别pH值为2
和7的作用下进行超声提取，调节酶解物与提取溶剂之间的比例，控制超声技术，使在强酸、
强碱的环境下活性较强连翘酯苷A提取更完全，得到连翘酯苷A含量高；

[0010] S5、萃取反洗：将S4得到的连翘粗提液B，用石油醚萃取40～60s，去脂溶性色素，过滤，取滤液，再用水饱和的正丁醇溶液萃取30～50s，除去大部分水溶性杂质，收集萃取液，
干燥，得连翘提取物。

[0011] 进一步的，所述S2中的复合酶由果胶酶、鼠李糖苷酶、磷脂酶组成，复合酶的选择。

[0012] 进一步的，所述S2中的复合酶由质量比为1～3:0.5～2:1～2的果胶酶、鼠李糖苷酶、磷脂酶组成，在此比例下对连翘的酶解起到较好的作用，果胶酶、鼠李糖苷酶能削弱连
翘内壁与外壁之间的连接，磷脂酶去除连翘中其余油脂成分，科学配比更好的酶解，且易于
控制。

[0013] 进一步的，所述S3中的提取溶剂为50～60vol％的乙醇、70～90vol％甲酰胺、20～40vol％戊二醇的混合液。

[0014] 进一步的，所述S3中的提取溶剂的50～60vol％的乙醇、70～90vol％甲酰胺、20～40vol％戊二醇按体积比为0.1～1:1.3～2:1制得的混合液，在此配比下，获得的有效成分
含量更高。

[0015] 进一步的，所述S4中连翘酶解物与提取溶剂的质量体积g/mL比为0.5～1:20～40。

[0016] 进一步的，所述S4中连翘粗提液A与提取溶剂的体积比为1～3:9。

[0017] 进一步的，所述S5中连翘粗提液B与石油醚的体积比g/mL为1：10～20。

[0018] 进一步的，所述S5中滤液与水饱和的正丁醇溶液的体积比g/mL为1：10～20。

[0019] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：

[0020] 本发明的方法对连翘中的连翘酯苷A高效提取，连翘酯苷A含量为5mg/g以上，连翘酯苷A提取转移率77％以上；先将连翘叶酶解，选择果胶酶、鼠李糖苷酶、磷脂酶作为复合
酶，调节温度进行酶解，将连翘叶粉酶解后将连翘叶中的有效成分溶出，有利于对连翘酯苷
A的提取；配制提取溶剂，能针对目标产品进行有效提取，调整最佳配比，获得的有效成分含
量更高；采用不同pH值下进行超声提取，调节酶解物与提取溶剂之间的比例，控制超声技
术，发掘出连翘酯苷A在强酸、强碱的环境下，能将活性较强连翘酯苷A提取更完全，得到连
翘酯苷A含量高，适合工业化生产。

具体实施方式

[0021] 为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。

[0022] 本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

[0023] 本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

[0024] 实施例1

[0025] 一种连翘提取物的制备方法：包括以下步骤：

[0026] S1、连翘叶处理：将连翘叶清洗干净，去除烂叶，烘干，粉碎，过120目筛得干燥的连翘叶粉，备用；取果胶酶1g、鼠李糖苷酶0.5g、磷脂酶1g混合制得复合酶；

[0027] S2、酶解：取连翘叶粉10g在80℃下与200mL水混合，调节pH值至4，混合均匀后加入复合酶，调节温度为40℃下酶解1h，干燥，得到连翘酶解物；

[0028] S3、配制提取溶剂：将50vol％乙醇1mL、70vol％甲酰胺13mL、20vol％戊二醇10mL混合，经搅拌速率为400rpm下搅拌40min，得到提取溶剂；

[0029] S4、超声辅助提取：取S2得到的连翘酶解物5g，加入S3得到提取溶剂200mL，在功率为500w下进行两段超声提取，调节pH为2一次提取40min，得到连翘粗提液A，将连翘粗提液A
再加入提取溶剂，连翘粗提液A与提取溶剂的体积比为1:9，调节pH为7提取30min，得到连翘
粗提液B，

[0030] S5、萃取反洗：取1mL连翘粗提液B，用10mL石油醚萃取40s，过滤，取滤液，再用10mL水饱和的正丁醇溶液萃取30s，收集萃取液，干燥，得连翘提取物。

[0031] 实施例2

[0032] 一种连翘提取物的制备方法：包括以下步骤：

[0033] S1、连翘叶处理：将连翘叶清洗干净，去除烂叶，烘干，粉碎，过250目筛得干燥的连翘叶粉，备用；取果胶酶3g、鼠李糖苷酶2g、磷脂酶2g混合制得复合酶；

[0034] S2、酶解：取连翘叶粉30g在120℃下与500mL水混合，调节pH值至7，混合均匀后加入复合酶，调节温度为50℃下酶解3h，干燥，得到连翘酶解物；

[0035] S3、配制提取溶剂：将60vol％乙醇10mL、90vol％甲酰胺20mL、40vol％戊二醇10mL混合，经搅拌速率为600rpm下搅拌60min，得到提取溶剂；

[0036] S4、超声辅助提取：取S2得到的连翘酶解物10g，加入S3得到提取溶剂400mL，在功率为700w下进行两段超声提取，调节pH为2一次提取60min，得到连翘粗提液A，将连翘粗提
液A再加入提取溶剂，连翘粗提液A与提取溶剂的体积比为3:9，调节pH为7提取50min，得到
连翘粗提液B；

[0037] S5、萃取反洗：取1mL连翘粗提液B，用20mL石油醚萃取60s，过滤，取滤液，再用20mL水饱和的正丁醇溶液萃取50s，收集萃取液，干燥，得连翘提取物。

[0038] 实施例3

[0039] 一种连翘提取物的制备方法：包括以下步骤：

[0040] S1、连翘叶处理：将连翘叶清洗干净，去除烂叶，烘干，粉碎，过200目筛得干燥的连翘叶粉，备用；取果胶酶2g、鼠李糖苷酶1.8g、磷脂酶1.5g混合制得复合酶；

[0041] S2、酶解：取连翘叶粉20g在100℃下与400mL水混合，调节pH值至5，混合均匀后加入复合酶，调节温度为45℃下酶解2h，干燥，得到连翘酶解物；

[0042] S3、配制提取溶剂：将55vol％乙醇7mL、80vol％甲酰胺16mL、30vol％戊二醇10mL混合，经搅拌速率为500rpm下搅拌50min，得到提取溶剂；

[0043] S4、超声辅助提取：取S2得到的连翘酶解物7g，加入S3得到提取溶剂300mL，在功率为600w下进行两段超声提取，调节pH为2一次提取50min，得到连翘粗提液A，将连翘粗提液A
再加入体积分数为55％的提取溶剂，连翘粗提液A与提取溶剂的体积比为2:9，调节pH为7提
取40min，得到连翘粗提液B；

[0044] S5、萃取反洗：取1mL连翘粗提液B，用15mL石油醚萃取50s，过滤，取滤液，再用15mL水饱和的正丁醇溶液萃取40s，收集萃取液，干燥，得连翘提取物。

[0045] 实施例4

[0046] 本实施例与实施例3的区别在于，S2中的复合酶由质量比为4:0.3:3的果胶酶、鼠李糖苷酶、磷脂酶组成。

[0047] 实施例5

[0048] 本实施例与实施例3的区别在于，S2中的复合酶由2g果胶酶、1.8gβ‑葡萄糖苷酶、1.5g纤维素酶组成。

[0049] 实施例6

[0050] 本实施例与实施例3的区别在于，S3中的提取溶剂为乙醇12mL、甲酰胺23mL、戊二醇5mL。

[0051] 实施例7

[0052] 本实施例与实施例3的区别在于，S4中取3g连翘酶解物与500mL提取溶剂超声。

[0053] 对比例1

[0054] 本对比例与实施例3的区别在于，S2步骤中未将连翘叶粉酶解。

[0055] 对比例2

[0056] 本对比例与实施例3的区别在于，S3步骤中的提取溶剂为乙醇。

[0057] 对比例3

[0058] 本对比例与实施例3的区别在于，S4步骤中使用一段超声，调节pH为2提取50min。

[0059] 一、连翘提取物中连翘酯苷A的含量测定

[0060] 1.仪器与试药

[0061] Agilent1100高效液相色谱仪，包括G1310A单元泵、G1313A自动进样器、G1314A VWD检测器、CO‑201柱温箱、安捷伦色谱工作站；AB204‑N型电子分析天平(METTLER 
TOLEDO)。

[0062] 连翘酯苷A对照品(批号111810‑201405，购自中国食品药品检定研究院，含量以94.1％计)。

[0063] 供试品为本发明的实施例1～7和对比例1～3制得的连翘提取物；

[0064] 甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为娃哈哈纯净水。

[0065] 2.含量测定方法

[0066] 照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。

[0067] 色谱条件与系统适用性试验 采用Dikma Diamonsil‑C18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；甲醇‑0.05％磷酸水溶液(34∶66)为流动相；检测波长为330nm；体积流量1.0ml/min；
柱温30℃；进样量10μl。

[0068] 对照品溶液的制备 取连翘酯苷A对照品，精密称定12.32mg(纯度以94.1％计)，加甲醇溶解制成连翘酯苷A对照品储备溶液(0.4637mg/ml)。精密吸取连翘酯苷A对照品储备
溶液1.0ml，置10ml量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

[0069] 供试品溶液的制备 取本品实施例1～7和对比例1～3的连翘提取物，分为10组，每组三组平行试验，研细，取约0.7g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，密
塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45
μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

[0070] 测得连翘酯苷A含量后计算出提取率和提取转移率

[0071] 连翘酯苷A提取转移率的计算公式如下：

[0072] 提取转移率＝连翘酯苷A含量/连翘提取物含量×100％

[0073] 3.实验结果

[0074]  连翘酯苷A含量(mg/g) 连翘酯苷A提取转移率％
实施例1 5.63 80.42
实施例2 5.72 81.85
实施例3 5.80 82.86
实施例4 5.61 80.26
实施例5 5.57 79.68
实施例6 5.41 77.33
实施例7 5.47 78.26
对比例1 4.86 69.54
对比例2 4.52 64.58
对比例3 4.57 65.37

[0075] 由上表结果可知，本发明的方法获得连翘酯苷A的含量较高，连翘酯苷A提取转移率也比较高，说明本发明方法对连翘中的连翘酯苷A有效提取，实施例1～7和对比例1比较，
将连翘叶粉酶解后将连翘叶中的有效成分溶出，有利于对连翘酯苷A的提取，与对比例2比
较，在提取过程中，配制一定比例的提取溶剂，有效针对目标成分的提取，与对比例3比较，
调节不同pH值使用两段超声提取，得出在强酸、强碱的条件下，能将活性较强连翘酯苷A提
取更完全；

[0076] 实施例1～3和实施例4、5比较，复合酶的选择和比例对连翘的酶解起到较好的作用，果胶酶、鼠李糖苷酶能削弱连翘内壁与外壁之间的连接，磷脂酶去除连翘中其余油脂成
分，科学配比更好的酶解，且易于控制；与实施例6比较，提取溶剂的配比能针对目标产品进
行有效提取，调整最佳配比，获得的有效成分含量更高，与实施例7比较，酶解物与提取溶剂
之间的比例更为重要，在合适的配比内，控制超声技术，使连翘酯苷A含量更高，连翘酯苷A
的提取转移率达到80％以上。

[0077] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。