羧酸类药物的β-酮亚砜衍生物及其制备方法和应用

摘要

本发明提供一种羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物及其制备方法和应用，属于有机合成技术领域。以羧酸类药物的酰氯衍生物为原料，在CaC2与TEA的共同存在下，制备该类药物的β‑酮亚砜衍生物，一方面，在CaC2与TEA的共同存在下，所制备的β‑酮亚砜衍生物的产率高达49％～64％，且绿色环保，反应过程温和，操作简单。另一方面，所制备的β‑酮亚砜衍生物中，作为治疗各自适应症的药物，进入人体后，对肠和胃的刺激减少，具有高活性、低毒和高附加值的优点。

权利要求

1.一种羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物在制备治疗肝癌的药物中的应用，其特征在于，所述羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物具有以下通式：

其中，R为 中的一种。

说明书

羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明属于有机合成技术领域，具体涉及一种羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物及其制备方法和应用。

背景技术

[0002] β‑酮亚砜是一般有机合成中重要的原料，尤其是用作药物合成的前体。而且是农药和医药领域的一类重要的活性物质。该类化合物具有广谱生物活性，包括杀虫、杀菌、除草、抗肿瘤、抗病毒等作用，目前已经成为化学界和生物界研究的热点之一。

[0003] 阿司匹林或乙酰水杨酸(ASA)是缓解疼痛，发烧和炎症的最广泛使用的药物；吲哚美辛、萘普生是一种“经典”非甾体类抗炎药(NSAID)，甘草次酸是从甘草的根中提取的五环三萜类，具有抗肿瘤，抗炎，抗溃疡和降血糖特性。这几种药物在实际使用时，羧酸对肠和胃的刺激性均比较大，对人体具有一定的毒害。有证据表明，亚砜化合物或磺酰胺化合物，进入人体后，对肠和胃的刺激都会减少，具有高活性、低毒和高附加值的优点。

[0004] 多年来，已经开发出许多制备β‑酮亚砜的方法。例如，Glen A.Russell等报道称，tDMSO(二甲基亚砜)可以在叔丁醇钾(KO Bu)或氢化钠(NaH)的强碱溶液中，和酯反应，生成β‑酮亚砜。但是，对于高分子酯，尤其是高分子芳香酯，往往难以制备，或者难以制备纯度较高的高分子酯类。

[0005] 再如，Sayed H.R.Abdi等研究发现，在贵金属催化剂(例如钯或钛)存在下，多种氧化剂(例如H2O2、NaClO、H5IO6、PhICl2、CrO3、KMnO4、KHSO5、CH3CO3H等)可以氧化相应的亚砜或砜，形成β‑酮亚砜。然而，这些合成方法中，需要有毒的重金属并且需要贵金属，对环境不利且成本高。

[0006] S.Thea等报道了一种通过酰氯与DMSO反应合成β‑酮亚砜的方法，被证明是获取β‑酮亚砜的最为经济的、绿色的途径之一，且酰氯来源广泛，大部分化合物可制备品质较高的酰氯化合物，这有利于得到大部分化合物的β‑酮亚砜衍生物。然而，报道指出的酰氯与DMSO反应，β‑酮亚砜的收率仅为5％～16％，难以实现量产及工业化生产。

发明内容

[0007] 有鉴于此，本发明提供一种羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物，以解决现有技术中存在的羧酸类药物对人体副作用较大的技术问题。

[0008] 本发明还提供一种羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物的制备方法，以解决现有技术中存在的通过酰氯与DMSO反应合成β‑酮亚砜的过程中，β‑酮亚砜产率过低的技术问题。

[0009] 本发明还提供一种羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物的应用，用于制备预防和/或治疗炎症、恶性肿瘤、高血压、高血糖、高血脂中的至少一种的药物，以降低现有药品对人体的毒害性。

[0010] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

[0011] 一种羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物，具有以下通式：

[0012]

[0013] 其中，R为中的一种。

[0014] 一种如上所述的羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物的制备方法，在CaC2与TEA的共同存在下，R‑COCl与DMSO反应，制得β‑酮亚砜衍生物，反应通式如下式。

[0015]

[0016] 优选地，所述羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物的制备方法还包括以下步骤：首先由R‑COOH制备R‑COCl。

[0017] 优选地，包括以下步骤：在惰性气体保护下，向DMSO、CaC2及TEA的混合液中，缓慢滴加R‑COCl，常温下，反应预定时间，得到反应液；反应液依次经淬灭、萃取、洗涤、干燥后，得到β‑酮亚砜衍生物粗品；β‑酮亚砜衍生物粗品经纯化，制备β‑酮亚砜衍生物成品。

[0018] 优选地，R‑COCl与CaC2或NaH的摩尔比是1:(0.2～2)。

[0019] 优选地，R‑COCl与DMSO的摩尔比是1:(2～28)。

[0020] 优选地，CaC2与TEA的摩尔比是1:(0.8～1.5)。

[0021] 优选地，在低温下，向DMSO、CaC2及TEA的混合液中，缓慢滴加R‑COCl。

[0022] 优选地，反应预定时间为0.5h～2h。

[0023] 一种如上所述的羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物在制备预防和/或治疗炎症、恶性肿瘤、高血压、高血糖、高血脂中的至少一种的药物中的应用。

[0024] 由上述技术方案可知，本发明提供了一种羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物及其制备方法和应用，其有益效果是：以羧酸(R‑COOH)类药物的酰氯衍生物(R‑COCl)为原料，在CaC2与TEA的共同存在下，制备该类药物的β‑酮亚砜衍生物，一方面，在CaC2与TEA的共同存在下，所制备的β‑酮亚砜衍生物的产率高达49％～64％，且绿色环保，反应过程温和，操作简单。另一方面，所制备的β‑酮亚砜衍生物中，作为治疗各自适应症的药物，进入人体后，对肠和胃的刺激减少，具有高活性、低毒和高附加值的优点。

附图说明

[0025] 图1为本发明实施例一制备得到的β‑酮亚砜衍生物(A)的1H NMR谱图。

[0026] 图2为本发明实施例一制备得到的β‑酮亚砜衍生物(A)的13C NMR谱图。

[0027] 图3为本发明实施例一制备得到的β‑酮亚砜衍生物(A)的质谱图。

[0028] 图4为本发明实施例六(1)制备得到的β‑酮亚砜衍生物(B)的1H NMR谱图。

[0029] 图5为本发明实施例六(1)制备得到的β‑酮亚砜衍生物(B)的13C NMR谱图。

[0030] 图6为本发明实施例六(1)制备得到的β‑酮亚砜衍生物(B)的质谱图。

[0031] 图7为本发明实施例六(2)制备得到的β‑酮亚砜衍生物(C)的1H NMR谱图。

[0032] 图8为本发明实施例六(2)制备得到的β‑酮亚砜衍生物(C)的13C NMR谱图。

[0033] 图9为本发明实施例六(2)制备得到的β‑酮亚砜衍生物(C)的质谱图。

[0034] 图10为本发明实施例六(3)制备得到的β‑酮亚砜衍生物(D)的1H NMR谱图。

[0035] 图11为本发明实施例六(2)制备得到的β‑酮亚砜衍生物(D)的13C NMR谱图。

[0036] 图12为本发明实施例六(2)制备得到的β‑酮亚砜衍生物(D)的质谱图。

具体实施方式

[0037] 以下结合本发明的附图，对本发明实施例的技术方案以及技术效果做进一步的详细阐述。

[0038] 一具体实施方式中，一种羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物，具有以下通式：

[0039]

[0040] 其中，R为中的一种。

[0041] 也就是说，上述R是基于乙酰水杨酸(阿司匹林)、吲哚美辛、萘普生、Ac‑甘草次酸为前驱体，合成的β‑酮亚砜衍生物。值得说明的是，R基团不仅仅限于上述四种物质，还包括诸如普利类(如依那普利、卡托普利、贝那普利、培哚普利)在内的其他分子结构里包含羧酸基团的药品或者化合物。

[0042] 一种如上所述的羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物的制备方法，在CaC2与TEA的共同存在下，R‑COCl与二甲基亚砜反应，制得β‑酮亚砜衍生物，反应通式如下式。

[0043]

[0044] 进一步地，所述羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物的制备方法还包括以下步骤：首先由R‑COOH制备R‑COCl。即由羧酸类药物制备该药物的酰氯形态，例如，R‑COOH在80℃下，在二氯甲烷(DCM)溶液中，与二氯亚砜(SOCl2)反应生成R‑COCl。

[0045] 具体地，所述羧酸类药物的β‑酮亚砜衍生物的制备方法包括以下步骤：在惰性气体保护下，向DMSO、CaC2及TEA的混合液中，缓慢滴加R‑COCl，常温下，反应预定时间，得到反应液；反应液依次经淬灭、萃取、洗涤、干燥后，得到β‑酮亚砜衍生物粗品；β‑酮亚砜衍生物粗品经纯化，制备β‑酮亚砜衍生物成品。

[0046] 其中，惰性气体选自N2、氩气、氙气中的一种或多种，优选使用氩气作为保护气体。

[0047] 作为优选，酰氯与CaC2的摩尔比是1:(0.2～2)，最优地，酰氯与CaC2的摩尔比是1:1.2。

[0048] 作为优选，酰氯与DMSO的摩尔比是1:(2～28)，最优地，酰氯与DMSO的摩尔比为1:7。

[0049] 作为优选，CaC2与TEA的摩尔比是1:(0.8～1.5)，最优地，CaC2与TEA的摩尔比是1:1。

[0050] 作为优选，在低温下，例如，将反应容器置于冰水浴中，向DMSO、CaC2及TEA的混合液中，缓慢滴加酰氯。

[0051] 作为优选，反应预定时间为0.5h～2h。

[0052] 作为优选，用饱和氯化铵溶液对反应液进行淬灭，用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥。过滤浓缩得到β‑酮亚砜衍生物粗品。β‑酮亚砜衍生物粗品通过硅胶柱层析分离纯化，制备β‑酮亚砜衍生物成品。

[0053] 在CaC2与TEA的共同存在下，含有羧酸基团的药物的酰氯衍生物与DMSO反应，制得β‑酮亚砜衍生物，β‑酮亚砜衍生物的产率为49％～64％，且绿色环保，反应过程温和，操作简单。

[0054] 所制备的β‑酮亚砜衍生物中，作为治疗各自适应症的药物，进入人体后，对肠和胃的刺激减少，具有高活性、低毒和高附加值的优点。

[0055] 同时，CaC2廉价易得，大幅度降低了β‑酮亚砜衍生物的生产成本。在CaC2存在下，酰氯与DMSO反应，制得β‑酮亚砜衍生物，同时会副产乙炔气体，不仅为CaC2制备乙炔提供了新的反应途径，也为CaC2赋予了新的用途。

[0056] 以下通过具体实施例，进一步说明本发明的技术方案与技术效果。

[0057] 实施例一

[0058] 以乙酰水杨酰氯 为反应原料，探索CaC2对酰氯与DMSO反应的影响。具体如下：

[0059] 设对照组1个，在50mL烧瓶中加入5mL(70mmol)DMSO，编号0，备用。

[0060] 设置CaC2实验组5个，在5个50mL烧瓶中分别加入5mL(70mmol)DMSO，并分别加入2mmol、5mmol、10mmol、12mmol、20mmol的CaC2，编号1‑5，备用。

[0061] 在氩气保护下，冰水浴中，于10分钟之内向编号0‑5的烧瓶中加入1.986g(10mmol)乙酰水杨酰氯，移去冰水浴并在室温下反应0.5小时。反应结束后，用20mL饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥。过滤浓缩得到粗品。粗品通过硅胶柱层析分离纯化，得无色液体。

[0062] 选取上述制备得到的无色液体分别进行核磁共振和质谱分析；其中1H NMR谱、13C NMR谱和质谱图如图1‑3所示。

[0063] 由图1‑3可知：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(d,J＝7.8,1.6Hz,1H),7.56(t,J＝7.8,1.7Hz,1H),7.31(t,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.10(d,J＝8.1,1.2Hz,1H),5.33(s,2H),2.36(s,3H),2.26(s,3H)；

[0064] 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ169.6,164.1,150.7,134.2,131.8,126.1,123.9,122.9,69.0,21.0,15.4；

[0065] HRMS(ESI)calcd for C11H12NaO4S[M+Na]+:263.0349；found:263.0347；

[0066] 因此可以确定制备得到的产物为式1所示的β‑酮亚砜衍生物(A)。

[0067]

[0068] 称取上述制备得到β‑酮亚砜衍生物(A)的质量，再将称取质量÷理论产量×100％，得到上述制备方法的产率，见表1。

[0069] 表1方法0‑5制备的β‑酮亚砜衍生物(G)的产率

[0070]

[0071] 由上述实施过程可以看出，通过CaC2参与乙酰水杨酰氯和DMSO制备β‑酮亚砜衍生物(A)，可显著提高β‑酮亚砜衍生物(A)的产率，且随着CaC2的用量的提高，β‑酮亚砜衍生物(A)的产率提高，当乙酰水杨酰氯与CaC2的物质的量的比达到1:1以上时，硝基苯甲酮亚砜的产率不发生明显变化。

[0072] 同时，发明人在实验过程中发现，采用NaH或CaH2或KOtBu作为底物，参与乙酰水杨酰氯和DMSO制备β‑酮亚砜衍生物(A)的过程时，混合物剧烈反应，如果进料速度控制不当，体系将无法控制地喷出反应物料，酿成实验事故。而CaC2参与反应时，反应温和，易于控制。

[0073] 实施例二

[0074] 以乙酰水杨酰氯 为反应原料，探索CaC2和TEA共同作用，对酰氯与DMSO反应的影响。

[0075] 设置TEA实验组5个，在5个50mL烧瓶中分别加入5mL(70mmol)DMSO，然后分别加入12mmol的CaC2，并分别加入2mmol、5mmol、10mmol、12mmol、15mmol的TEA，编号6‑10，备用。

[0076] 在氩气保护下，冰水浴中，于10分钟之内向编号6‑10的烧瓶中加入1.986g(10mmol)乙酰水杨酰氯，移去冰水浴并在室温下反应0.5小时。反应结束后，用20mL饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥。过滤浓缩得到粗品。粗品通过硅胶柱层析分离纯化，得无色液体，即为β‑酮亚砜衍生物(A)。

[0077] 称取上述制备得到β‑酮亚砜衍生物(A)的质量，再将称取质量÷理论产量×100％，得到上述制备方法的产率，见表2。

[0078] 表2方法6‑10制备的β‑酮亚砜衍生物(G)的产率

[0079]

[0080] 由上述过程可以看出，采用TEA(三乙胺)配合CaC2，能够有效提高β‑酮亚砜衍生物(A)的产率。且当CaC2与TEA的摩尔比是1:(0.8～1.5)，β‑酮亚砜衍生物(A)的产率达到最高的64％。

[0081] 实施例三

[0082] 探索不同DMSO加入量对β‑酮亚砜衍生物(A)的产率的影响。

[0083] 在保持对乙酰水杨酰氯(10mmol)、TEA(12mmol)、CaC2(12mmol)的加入量及其他反应条件不变的情况下，改变DMSO加入量，计量产物β‑酮亚砜衍生物(A)的产率。结果表明，DMSO保持过量，既作为反应底物，又作为反应溶剂，其加入量对β‑酮亚砜衍生物(A)的产率影响有限。

[0084] 实施例四

[0085] 探索不同反应停留时间对β‑酮亚砜衍生物(A)的产率的影响。

[0086] 在保持DMSO(70mmol)、乙酰水杨酰氯(10mmol)、TEA(12mmol)、CaC2(12mmol)的加入量及其他反应条件不变的情况下，改变反应停留时间，计量产物β‑酮亚砜衍生物(A)的产率。结果表明，当反应时间超过30min，延长反应停留时间对β‑酮亚砜衍生物(A)的产率影响有限。

[0087] 实施例五

[0088] 探索不同CaC2纯度对β‑酮亚砜衍生物(A)的产率的影响。

[0089] 在保持DMSO(70mmol)、乙酰水杨酰氯(10mmol)、TEA(12mmol)、CaC2(12mmol)的加入量及其他反应条件不变的情况下，分别采用纯度为98％的高纯度CaC2和纯度为75％的工业CaC2参与反应。计量产物β‑酮亚砜衍生物(A)的产率。结果表明，采用纯度为75％的工业CaC2参与反应，相比采用纯度为98％的高纯度CaC2参与反应，β‑酮亚砜衍生物(A)的产率降低约8％～15％，但依然可以保持较高的β‑酮亚砜衍生物(A)的产率。

[0090] 实施例六

[0091] 探索CaC2和TEA共同存在下，不同类型的酰氯与DMSO反应生成对应的β‑酮亚砜衍生物及β‑酮亚砜衍生物的产率。

[0092] (1)、CaC2催化吲哚美辛酰氯与二甲基亚砜反应生成β‑酮亚砜衍生物(B)，反应方程式如式2所示：

[0093]

[0094] 上述β‑酮亚砜衍生物(B)的制备方法如下：在氩气保护下，向50mL烧瓶中加入5mL(70mmol)二甲基亚砜、1.7mL(12mmol)三乙胺和768mg(12mmol)碳化钙，冰水浴下，于10分钟之内加入3.762g(10mmol)吲哚美辛酰氯，移去冰水浴并在室温下反应0.5小时。反应结束后，用20mL饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥。过滤浓缩得到粗品。粗品通过硅胶柱层析分离纯化，得β‑酮亚砜衍生物(B)无色液体2.17g，产率为52％。

[0095] 选取上述制备得到的β‑酮亚砜衍生物(B)分别进行核磁共振和质谱分析；其中1H 13
NMR谱、C NMR谱和质谱图如图4‑6所示；

[0096] 由图4‑6可知：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.65(d,J＝8.2Hz,2H),7.46(d,J＝8.2Hz,2H),6.97(s,1H),6.87(d,J＝9.0Hz,1H),6.67(d,1H),5.15(d,J＝1.1Hz,2H),3.83(s,3H),
3.71(s,2H),2.39(s,3H),2.16(s,3H)；

[0097] 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ170.6,168.3,156.1,139.4,136.1,133.9,131.3,130.9,130.6,129.2,115.0,112.3,111.8,101.3,68.9,55.8,30.5,15.5,13.5；

[0098] HRMS(ESI)calcd for C21H21ClO4S[M+H]+:418.0874；found:418.0874。

[0099] 因此可以确定制备得到的产物为式2所示的β‑酮亚砜衍生物(B)。

[0100] (2)、CaC2催化萘普生酰氯与二甲基亚砜反应生成β‑酮亚砜衍生物(C)，反应方程式如式3所示：

[0101]

[0102] 上述β‑酮亚砜衍生物(C)的制备方法如下：在氩气保护下，向50mL烧瓶中加入5mL(70mmol)二甲基亚砜、1.7mL(12mmol)三乙胺和768mg(12mmol)碳化钙，冰水浴下，于10分钟之内加入2.487g(10mmol)萘普生酰氯，移去冰水浴并在室温下反应0.5小时。反应结束后，用20mL饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥。过滤浓缩得到粗品。粗品通过硅胶柱层析分离纯化，得β‑酮亚砜衍生物(C)无色液体1.62g，产率为56％。

[0103] 选取上述制备得到的β‑酮亚砜衍生物(C)分别进行核磁共振和质谱分析；其中1H 13
NMR谱、C NMR谱和质谱图如图7‑9所示。

[0104] 由图7‑9可知：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.72(s,1H),7.69(d,J＝5.9Hz,2H),7.41(d,J＝8.5,1.8Hz,1H),7.15(d,J＝9.0,2.3Hz,1H),7.12(s,1H),5.13(s,2H),3.92(s,4H),2.07(s,3H),1.60(d,J＝7.1Hz,3H)；

[0105] 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ174.4,157.8,135.5,133.8,129.4,129.0,127.3,126.3,126.1,119.2,105.7,68.5,55.4,45.6,18.5,15.3；

[0106] HRMS(ESI)calcd for C16H18NaO3S[M+Na]+:313.0869；found:313.0862；

[0107] 因此可以确定制备得到的产物为式3所示的β‑酮亚砜衍生物(C)。

[0108] (3)、CaC2催化Ac‑甘草次酸酰氯与二甲基亚砜反应生成β‑酮亚砜衍生物(D)，反应方程式如式4所示：

[0109]

[0110] 上述β述酮亚砜衍生物(D)的制备方法如下：在氩气保护下，向50mL烧瓶中加入20mL(280mmol)二甲基亚砜、2.8mL(20mmol)三乙胺和768mg(12mmol)碳化钙，冰水浴下，于
10分钟之内加入1.406g(10mmol)Ac‑甘草次酸酰氯，移去冰水浴并在30℃下反应2小时。反应结束后，用20mL饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥。过滤浓缩得到粗品。粗品通过硅胶柱层析分离纯化，得β‑酮亚砜衍生物(D)白色固体2.85g，产率为49％。

[0111] 选取上述制备得到的β‑酮亚砜衍生物(D)分别进行核磁共振和质谱分析；其中1H 13
NMR谱、C NMR谱和质谱图如图10‑12所示。

[0112] 由图10‑12可知：1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ5.67(s,1H),5.25–5.10(m,2H),4.51(dd,J＝11.6,4.8Hz,1H),2.79(dt,J＝13.6,3.7Hz,1H),2.36(s,1H),2.26(s,3H),
2.19–2.11(m,1H),2.05(s,3H),2.03–1.98(m,2H),1.94(dt,J＝13.7,3.3Hz,1H),1.83(td,J＝13.5,4.5Hz,1H),1.64(dddd,J＝29.6,16.1,9.2,3.4Hz,5H),1.41(dd,J＝8.3,3.4Hz,
2H),1.38(s,1H),1.36(s,3H),1.17(d,J＝5.6Hz,6H),1.13(s,3H),1.07–0.98(m,1H),0.88(s,7H),0.81(s,4H)；

[0113] 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ200.21,176.18,169.29,128.71,80.75,77.48,77.37,77.16,76.84,68.38,61.87,55.16,48.40,45.54,44.22,43.34,41.17,38.94,38.19,
37.72,37.08,32.85,31.99,31.24,28.65,28.28,28.19,26.55,23.71,23.48,18.83,
17.52,16.83,16.56,15.86；

[0114] HRMS(ESI)calcd for C34H53O5S[M+H]+:573.3609；found:573.3594；

[0115] 因此可以确定制备得到的产物为式4所示的β‑酮亚砜衍生物(D)。

[0116] 以下通过具体生物化学实验，进一步说明本发明的技术效果。

[0117] 本实验为不同浓度的β‑酮亚砜衍生物A及β‑酮亚砜衍生物D对人肝癌细胞HepG2和人肾正常细胞HEK‑293T在48h的体外抑制活性研究，以阿司匹林、甘草次酸、长春新碱(VCR)作为对照组。

[0118] 实验方法：取对数生长期，生长状态良好的待测细胞(人肝癌细胞HepG2和人肾正4
常细胞HEK‑293T)，用1640完全培养基调整密度到5×10个/mL，悬浊液接种到96孔培养板中，每孔100μL，于37℃过夜培养(在细胞孔周围孔内加入100μL无菌PBS)；

[0119] 待细胞贴壁生长良好24h后，吸收旧的培养液，向各个培养孔中加入10μL不同浓度的β‑酮亚砜衍生物A、β‑酮亚砜衍生物D、阿司匹林、甘草次酸、长春新碱(VCR)，每个浓度设3个平行重复孔，同时设等体积二甲基亚砜(DMSO)溶剂的和不含药物培养基的空白对照孔，及于37℃，5％CO2的培养箱内继续培养。

[0120] 将待测物质培养48h后，弃去上清液，并利用倒置显微镜观察细胞形态；然后，每孔加10μL(2mg/mL in PBS)MTT，继续培养4h后，吸出孔内培养上清液，每孔加入150μL二甲基亚砜,震荡10min使蓝紫色结晶物溶解充分后，于波长568nm处用酶标仪测定每孔样品的吸光度值(A)，取平均值。

[0121] 实验结果如表1、2、3所示：

[0122] 表1 48小时HepG2细胞抑制率

[0123]

[0124] 表2 48小时HEK‑293T细胞抑制率

[0125]

[0126] 表3细胞毒性活性

[0127]

[0128] 由表1、2、3可以看出，对于本发明制备得到的β‑酮亚砜衍生物A和β‑酮亚砜衍生物D，其表现出优秀的对肝癌细胞HepG2的细胞抑制率，和/或较小的细胞毒性，能够被应用于治疗肝癌或制备治疗肝癌及其他肿瘤的药物。

[0129] 以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。